免疫组织化学及其在病理诊断中的应用共118页
免疫组化检查在病理诊断中的应用及其意义
免疫组化检查在病理诊断中得应用及其意义免疫组化就是利用抗原与抗体特异性结合得原理,通过化学反应使标记抗体得显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽与蛋白质),对其进行定位、定性及定量得研究,称为免疫组织化学。
免疫组化实验中常用得抗体为单克隆抗体与多克隆抗体。
实验所用主要为组织标本与细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片与组织芯片)与冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片与细胞涂片。
其中石蜡切片就是制作组织标本最常用、最基本得方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定得影响,但可进行抗原修复,就是免疫组化中首选得组织标本制作方法。
石蜡切片标本均用甲醛固定,使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇,同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。
所以要求在进行IHC染色时,需要先进行抗原修复或暴露,即将固定时分子之间所形成得交联破坏,而恢复抗原得原有空间形态。
常用得抗原修复方法有微波修复法,高压加热法,酶消化法,水煮加热法等,常用得修复液就是pH6、0得0、01 mol/L得柠檬酸盐缓冲液。
免疫组化常用得染色方法根据标记物得不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲与组织化学法,后者就是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础得检测方法。
这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平得定位,其中生物素——抗生物素染色法最常用。
一、病理外检中常用抗体标记上皮类标记AE1/AE3最常用,胞浆阳性着色,细丝状,与低、中分子量角蛋白反应,肝细胞为阴性,而胆管细胞阳性,用于确定肿瘤为上皮源性;CAM5、2胞浆阳性着色,细丝状,包含CK8 与CK18,主要染色神经内分泌细胞与腺上皮,正常鳞状上皮阴性,用于染小细胞癌、胸腺瘤与梭形细胞癌、肝细胞癌:AE1/AE3 CAM5、2 (+),用于乳腺外得Paget’s病;CK34BE胞浆阳性着色,鳞状上皮与鳞状细胞癌阳性,用于染前列腺得基底层细胞,鉴别浸润癌,染涎腺肿瘤得肌上皮,用于染Mallory小体;EMA细胞膜/细胞浆阳性着色,上皮标记得替代品,浆细胞阳性,很好得内对照,用于染滑膜肉瘤、大细胞分化不良性淋巴瘤、L&H 富于淋巴细胞得结节状何杰金、脑膜瘤EMA(+)AE1/AE3(–)、浆细胞瘤;CK7与CK20胞浆阳性着色,两者联合应用可鉴别很多种癌得原发部位,CK7 常常在胃肠道得癌为阴性,CK20 只有胃肠道癌与Merkel 细胞癌阳性。
【精编】免疫组化在肿瘤病理诊断中的应用
人工智能
通过机器学习算法对免疫 组化图像进行自动识别和 分析，减少人为误差。
未来发展方向与前景
标准化和规范化
制定统一的免疫组化操作指南和标准，提高诊断的一致性和可靠 性。
临床转化应用
加强免疫组化技术在临床实践中的应用，提高肿瘤诊断和治疗水 平。
多学科合作
加强病理学、肿瘤学、免疫学等多学科合作，共同推动免疫组化 技术的发展和应用。
乳腺癌免疫组化诊断
总结词
乳腺癌免疫组化诊断是利用免疫组织化学技术对乳腺癌进行诊断的方法。
详细描述
通过检测乳腺癌组织中特定抗原的表达，有助于确定肿瘤的分子分型，预测患者的预后和指导治疗。常见的乳腺 癌免疫组化指标包括雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人类表皮生长因子受体2（HER2）等。
肺癌免疫组化诊断
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案例分析
乳腺癌免疫组化诊断案例
总结词
乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，免疫组化在 乳腺癌的诊断中具有重要作用。
详细描述
通过免疫组化技术，可以检测乳腺癌组织中 雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和 人表皮生长因子受体2（HER2）的表达情况 。这些标志物的表达状态对于乳腺癌的分类 、预后评估和指导治疗具有重要意义。例如 ，ER和PR阳性提示患者可能对内分泌治疗 敏感，而HER2阳性则提示患者可能从靶向 治疗中受益。
总结词
肺癌免疫组化诊断是利用免疫组织化学技术对肺癌进行诊断的方法。
详细描述
通过对肺癌组织中特定抗原的表达进行检测，有助于肺癌的分类、分期和预后评估。常 见的肺癌免疫组化指标包括细胞角蛋白（CK）、甲状腺转录因子1（TTF-1）等。
结直肠癌免疫组化诊断
总结词
结直肠癌免疫组化诊断是利用免疫组织 化学技术对结直肠癌进行诊断的方法。
免疫组织化学在乳腺病理中的应用共识
一、概述乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，在世界范围内造成了许多妇女的生命威胁。
乳腺癌的发生和发展与免疫系统紧密相关，因此免疫组织化学在乳腺病理学中的应用显得尤为重要。
在乳腺病理学中，免疫组织化学可以用于鉴定生物标志物、评估肿瘤的分子亚型、判断预后以及指导靶向治疗等方面。
目前，关于免疫组织化学在乳腺病理学中的应用尚没有达成一致的共识，本文旨在探讨免疫组织化学在乳腺病理学中的应用的共识，并提出相应的建议。
二、免疫组织化学在乳腺病理学中的应用概况1. 乳腺癌标志物的鉴定免疫组织化学可以用于鉴定乳腺癌的生物标志物，如雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人表皮生长因子受体2（HER2）、Ki-67等。
这对于确定乳腺癌的分子亚型、指导临床治疗具有重要意义。
2. 评估肿瘤的分子亚型免疫组织化学可以帮助鉴定乳腺癌的分子亚型，如激素受体阳性/HER2阴性型、三阴性型等。
不同分子亚型的乳腺癌具有不同的生物学行为和预后，因此对肿瘤分子亚型的准确评估对于指导临床治疗至关重要。
3. 判断乳腺癌的预后免疫组织化学可以评估乳腺癌的预后因素，如Ki-67的表达水平与预后的相关性。
通过免疫组织化学检测，可以及时发现高危患者，为临床预后评估和治疗提供参考依据。
4. 指导靶向治疗免疫组织化学可以帮助评估乳腺癌患者对于靶向治疗的应答情况，如HER2阳性患者对于Trastuzumab治疗的应答情况。
这有助于个体化治疗方案的制定和优化治疗效果。
三、免疫组织化学在乳腺病理学中的应用存在的问题和挑战1. 方法标准尚不一致目前，关于乳腺病理免疫组织化学检测的方法标准尚不一致，不同的实验室和医院可能采用不同的操作流程和标准，这可能会影响检测结果的准确性和可比性。
2. 生物标志物的解释存在争议针对乳腺癌生物标志物的解释存在争议，如在ER和PR的阳性定义标准、HER2的表达标准等方面。
这导致了不同实验室和医院对于生物标志物的诊断结果存在差异，这对于临床诊断和治疗带来了一定困扰。
免疫组化在临床诊断中的应用
免疫组化在临床诊断中的应用在临床病理诊断中，免疫组织化学（IHe）是一种很重要的技术和手段，从20世纪70年代开始，免疫组化技术就应用于病理诊断，对于诊断肿瘤、肿瘤分类、判断预后产生了巨大的影响，同时也扩展了人们对于各种疾病及肿瘤形成过程的认识，提高了病理诊断与研究水平。
但是，随着免疫组化的广泛应用，发现免疫组化技术存在一些局限性。
深入研究免疫组化原理和技术，必须熟悉各种抗体真阳性反应部位，实现实验室间免疫组化标准化，使免疫组化在病理诊断中发挥最大的辅助作用。
在病理诊断中，随着各种抗体新的用途不断被发现及越来越多的新型抗体的出现，免疫组化在肿瘤诊断及鉴别诊断、分类、预后判断等方面产生了重大的影响。
由于免疫组化技术也存在一些局限性，因此，深入研究免疫组化原理和技术，并努力实现规范化的操作，才能充分发挥免疫组化在病理的诊断及鉴别诊断、判断预后、指导临床治疗中的作用。
1.免疫组化技术观察组织切片中抗原的数量及其在组织中的分布情况，对抗原进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学，由于抗原与抗体特异性结合，因此通过免疫组化使标记抗体的显色剂（酶、荧光素、同位素、金属离子等等）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质）。
IHC所用标本主要为两大类:组织标本和细胞标本，其中制作组织标本最常用、最基本的方法是石蜡切片。
石蜡切片对于组织形态保存好，有利于各种染色对照观察，而且能长期保存；石蜡切片中使用的甲醛固定剂对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。
2.免疫组化技术在临床诊断中的作用目前免疫组化技术应用于临床主要有以下几个方面：2.1肿瘤良恶性的判断对于反应性增生还是肿瘤性增生，可用免疫球蛋白（Ig）的轻链抗体检测B淋巴细胞增生的单克隆或多克隆性来区别。
在滤泡反应性增生时，滤泡反应中心的细胞不表达细胞凋亡蛋白（bc1-2）,be1-2阴性；而在滤泡性淋巴瘤中，由于90%以上肿瘤性滤泡细胞有bc1-2的高表达，bc1-2阳性。
免疫组化技术-免疫组化在肿瘤病理诊断中的应用
• 5.腺管型 主要见于腺癌和具有腺癌样结
构的胚胎性肿瘤。上皮标记物多为胞浆 表达。胃肠低分化腺癌中有时HE很难鉴 别腺样结构，但用癌胚抗原、上皮膜抗 原或结肠癌相关抗原则容易显示出来。
• 6.腔缘型 阳性颗粒主要位于腺癌腔缘的
微绒毛处，沿腺管腔缘表面内衬一薄层 黄色颗粒，基底部多为阴性。结肠癌相 关抗原在胃肠腺癌、胆囊腺癌、乳腺癌 中常表现为这种类型；卵巢癌相关抗原 在卵巢浆液性腺癌亦是如此；肿瘤相关 粘液抗原在许多腺癌中也显示腔缘阳性。
片液中。
（五）某些抗体不着色 1.需要消化而没有消化。 2.封闭内源酶时使抗体活性下降。 3.切片在裱片或干燥时过热。 4.抗体过度稀释，一抗浓度小于二抗。 5.抗体过期或频繁冻融.
（六）内源性酶活性： H2O2 -甲醇封闭不恰当。 （七）脱片 1.切片无粘附试剂。 2.切片不干净。 3.冰冻切片：组织在贴片前已经充分固定。 （八）核轮廓模糊 1.切片已干燥（特别是冰冻切片）。 2.苏木素染液欠佳。
（二）部分区域背景着色 1.切片部分区域干燥。 2.显色反应物在封片介质中是可溶的，造成弥散。 （三）部分区域不着色 1.脱蜡不完全。 2.切片部分区域干燥。
（四）各种孵育结果所有抗体均不着色 1.H2O2终浓度不够或存放过久失效。 2.稀释液中有错误的正常血清（如猪抗兔酶
标抗体稀释液中有正常兔血清）。 3.显色反应物溶于脱水的酒精、二甲苯或封
4.免疫组化与HE切片诊断应以HE切片 诊断为准 当免疫组化诊断结果与HE切 片诊断不一致时，应再结合临床资料、X 线等影像学及实验室结果综合分析，不 能用免疫组化检查结果推翻HE切片诊断。
二、引起假阴性和假阳性结果的原因
1.假阴性结果的原因主要是： （1）抗体已失活或浓度不当或抗体本身达不到应有的敏感度； （2）由于组织自溶，抗原扩散而导致抗原消失，特别在长期
免疫组化技术在病理诊断和研究中的应用PPT课件
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PAP法是过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)复合物， 包括辣根过氧化物酶抗体，及辣根过氧化物酶抗原 组成的可溶性复合物为五环状结构，3个分子辣根过 氧化物酶和二个抗体分子组成，极为稳定，比免疫 荧光法敏感100-1000倍，比酶桥法敏感20倍，其原理 是特异性初级抗体（一抗）的Fab段与组织抗原结合， 二抗（桥抗）在一抗与PAP复合物之间形成分子桥联， 此时一抗与PAP中的免疫球蛋必须是同一种属，以使 得衍生自其它种属的二抗，对一抗分子PAP中的FC段 及稳定成份都具有特异性。
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1966年NakaNe和Averameas等建立了免疫酶标技术， 1970年seerNberger等人发展了一种过氧化物酶抗过氧化 物酶(PAP)技术，1975年Kohler和MilsteiN建立了杂交瘤制 备单克隆抗体技术，这些对于外科病理的发展是一个 重大的技术里程碑。随着辣根过氧化物酶代替荧光素 异硫氰酸盐，作为初级抗体的标记物，一种全新的信 号分子得到了应用，在辣根过氧化物酶中加入显色的 底物进行染色，产生一种能被普遍光镜所观察的稳定 显色反应。酶免疫组化法对于病理学家诊断肿瘤、对 其分类、判断预后产生了巨大的影响，同时也扩展了 人们对于各种疾病与肿瘤形成过程的认识，提高了病 理诊断与研究水平。
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免疫酶学技术还包括碱性磷酸酶-抗碱性磷酸 酶(APA-AP)系统[2] 及葡萄糖氧化酶─抗葡萄糖氧化 酶（GAG)系统等，这些技术与PAP技术相似，只 不过是将碱性磷酸酶或葡萄糖氧化酶代替辣根过 氧化物酶而已，据称这两种技术可以减少背景染 色的干扰，因为相应的内源性酶在组织中分布有 限，尤其是APA -AP技术更适用于血液标本染色。
免疫组织化学检测在乳腺病理诊断中的价值
免疫组织化学检测在乳腺病理诊断中的价值1. 免疫组织化学检测在乳腺癌诊断中的应用乳腺癌是乳腺组织恶性病变的一种，具有高度异质性和侵袭性。
免疫组织化学检测可以通过检测肿瘤标志物在肿瘤细胞中的表达情况，帮助确定肿瘤类型、分级和分子亚型，对乳腺癌的诊断和治疗具有重要的指导意义。
通过检测雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人类表皮生长因子受体2（HER2）的表达情况，可以帮助确定患者的内分泌治疗和靶向治疗的方案，从而提高治疗的有效性和预后。
乳腺病理诊断中，往往需要鉴别良恶性肿瘤，尤其对于一些较难鉴别的病例，免疫组织化学检测可以通过检测不同标记物的表达情况，帮助鉴别良恶性肿瘤。
在乳腺纤维瘤和纤维腺瘤的鉴别诊断中，通过检测细胞角蛋白、平滑肌肌动蛋白、骨架蛋白等标记物的表达情况，可以帮助鉴别病变的来源和性质，对指导患者的治疗具有重要的意义。
乳腺癌是一种具有高度异质性的疾病，对患者的预后影响因素也非常复杂。
免疫组织化学检测可以通过检测肿瘤相关标记物在肿瘤细胞中的表达情况，帮助评估患者的预后。
通过检测Ki-67（肿瘤细胞增殖指数）、P53（抑癌基因突变）等标记物的表达情况，可以帮助评估患者的预后情况，指导患者的治疗和随访。
乳腺癌分子靶向治疗是目前乳腺癌治疗的重要手段，但是对于患者的分子亚型和靶向分子的表达情况要求较高。
免疫组织化学检测可以通过检测HER2、PD-L1等靶向分子的表达情况，帮助确定患者的分子亚型和靶向治疗方案，提高治疗的有效性和减少不必要的治疗。
免疫组织化学检测在乳腺病理诊断中发挥了重要的作用，但也面临一些挑战。
免疫组织化学检测的标记物选择、试剂的品质、操作的标准化等，都对检测结果产生影响。
未来，随着生物技术的不断发展和进步，我们有望开发出更加有效的标记物和检测方法，提高免疫组织化学检测的准确性和可靠性。
免疫组织化学在诊断中的应用潘华雄
表达，但在 DCIS 通常阴性 ER 在良性病变中通常呈局灶性阳性表达，而在 低度DCIS 呈弥漫强阳性表达，提示为克隆（肿 瘤）性过程
四、原位癌或浸润性癌?
在腺管周围有基底或肌上皮细胞的器官，
此问题已能够解决，如乳腺、前列腺、涎 腺 在原位病变中，仍然有完整的基底或肌上 皮细胞围绕，虽然有时拉长或稀疏了，而 浸润性病变周围缺乏这些细胞
乳腺的原位癌或浸润性癌?
Actin、calponin 或 p63能清晰地显示乳 腺肌上皮细胞
硬化性腺病与小管癌的鉴别
小叶癌化的导管内癌/硬化性腺病还是真正的浸
润性癌?
下列情况除外： (1) 腺样囊性癌有丰富的肌上皮/基底细胞围绕 (2) 微腺管腺病是一种良性病变，缺乏肌上皮细胞
前列腺原位癌还是浸润性癌?
在某些淋巴瘤中，免疫组化标记可以提供
预后信息
高Ki67表达与套细胞淋巴瘤的不良预后有关 间变性大细胞淋巴瘤：ALK+者预后好于ALK-
者 慢性淋巴细胞白血病： ZAP-70是与不良预后 有关的非突变Ig 基因的替代标记物
原发性系统性 ALCL的总体生存率
(Falini et al, 1999)
浆膜腔积液或活检：异常细胞 是癌细胞还是反应性间皮细胞?
浆膜腔积液或活检中的一些异常细胞很难确定
是癌细胞还是反应性间皮细胞 免疫组织化学的应用：
TTF-1：肺癌表达阳性
BerEP4 或 MOC-31：阳性倾向为癌 Calretinin：阳性倾向为间皮细胞
侵袭过程的证据
主要适用于滤泡性淋巴瘤和反应性滤泡增
达） MOC-31 TTF-1（肺源性腺癌）
六、肿瘤的预后判断：预后因子