FISH 法染色体诊断病种介绍(一)
FISH检测：助力精准医疗发展
FISH检测：助力精准医疗发展FISH检测，即荧光原位杂交技术，是一种分子生物学检测方法。
它通过使用特定的荧光探针，检测基因、染色体异常以及基因表达水平。
在精准医疗领域，FISH检测为医生提供了强大的工具，帮助他们做出更准确的诊断和治疗决策。
在肿瘤精准医疗中，FISH检测发挥着重要作用。
例如，在非小细胞肺癌中，ALK基因重排是一种常见的分子遗传学改变。
通过FISH检测，医生可以准确地判断ALK基因是否存在重排，从而选择合适的靶向药物治疗。
一项研究表明，使用FISH检测筛选出ALK阳性的非小细胞肺癌患者，接受靶向药物治疗后的无进展生存期显著延长。
另一个例子是乳腺癌患者中的HER2基因扩增。
FISH检测可以帮助医生判断HER2基因是否扩增，从而选择是否使用HER2靶向药物治疗。
研究显示，HER2阳性的乳腺癌患者使用HER2靶向药物治疗后，无进展生存期和总生存期均显著改善。
除了在肿瘤精准医疗中的应用，FISH检测还在遗传性疾病诊断中发挥重要作用。
例如，囊性纤维化是一种常见的遗传性疾病，其发病机制与CFTR基因突变有关。
通过FISH检测，医生可以准确地判断CFTR基因是否存在突变，从而为患者提供合适的治疗方案。
然而，FISH检测在精准医疗中的应用也面临一些挑战。
例如，检测成本较高、操作复杂，且需要专业的技术人员。
FISH检测的标准化和质量控制也是亟待解决的问题。
尽管如此，随着技术的不断发展，FISH检测在精准医疗中的应用将越来越广泛。
FISH检测作为一项重要的分子生物学检测技术，在精准医疗中发挥着重要作用。
通过实际案例可以看出，FISH检测为医生提供了准确的诊断和治疗信息，从而提高了患者的生存率和生活质量。
面对挑战，我们期待未来能有更多的研究和创新，以推动FISH检测在精准医疗中的应用。
重点和难点解析：FISH检测技术在精准医疗中的应用及其价值。
FISH检测作为一种分子生物学检测方法，可以提供关于基因、染色体异常以及基因表达水平的精确信息。
血液肿瘤FISH检测判读建议（一）：基因融合
血液肿瘤FISH检测判读建议（一）：基因融合导读：血液肿瘤诊断需要综合形态学、免疫学、遗传学和分子生物学等检测技术，FISH（荧光原位杂交技术）作为一项很重要的遗传学检测技术，在血液肿瘤的诊断中有很大的作用，得到了NCCN等国内外各大血液肿瘤诊疗指南的认可和建议。
FISH可用于血液肿瘤相关的基因融合、断裂、缺失、扩增以及染色体整体数量异常的检测，本材料主要跟大家分享血液肿瘤FISH检测的判读。
血液肿瘤可能会出现某些基因融合（可能原因有基因断裂后互相易位融合、染色体倒位等），如CML（慢性粒细胞白血病）可能出现BCR/ABL等基因融合，CLL（慢性淋巴细胞白血病）可能出现BCL2/IGH等基因融合，AML（急性粒细胞白血病）可能出现AML1/ETO，PML/RARA，CBFB/MYH11等基因融合，ALL（急性淋巴细胞白血病）可能出现ETV6（TEL）/AML、E2A/PBX1、BCR/ABLL等基因融合，MM（多发性骨髓瘤）可能出现CCND1/IGH、MAF/IGH、CCND3/IGH等基因融合等等。
这基因的融合，FISH检测探针为一个基因标记绿色，另外一个基因标记红色。
以BCR/ABL （DF）融合基因检测探针（用于BCR/ABL基因融合的检测，含GSP BCR和GSP ABL两个探针，BCR标记绿色，ABL标记红色）为例。
BCR/ABL（DF）融合基因检测探针（判读可类推其余双色双融合探针）①探针设计：ABL基因标记红色，BCR基因标记绿色②正常信号细胞：2O2G典型异常（阳性）信号细胞：1红1绿2融合，可能出现n红m 绿k融合（n、m和k均≥1）的阳性信号情况※示意图标出的大小红绿信号点是理论上的，实际情况不一定能如此明显观察到。
对于1红1绿1融合的异常信号，因可能是空间构象（信号单纯重叠）导致，所以一般单独计数，且阳性阈值明显高于其他异常情况。
③阈值设定：随机选取10 例以上的人外周血细胞或骨髓细胞，按照样本处理要求进行处理，制备阴性阈值参考片。
染色体FISH杂交
综述：FISH杂交技术和r-DNA
染色体FISH杂交
荧光原位杂交（FISH）是以荧光标记取代同位素标记而形成的一种原位杂交方法。
探针首先与某种标记分子（如生物素或高地辛等）结合，杂交后通过免疫细胞化学过程连接上荧光染料，在荧光显微镜下观察，这种方法具有高度特异性，有与放射性探针同样甚至更高的分辨率。
目前中期染色体FISH的最大分辨率为几个Mb，若用前中期染色体，分辨率可达1Kb，人体染色体的DNA线性长度平均为5cm，经多级螺旋化和折叠形成的中期染色体长度大为缩短，因此原位杂交对对高度螺旋化的中期和前中期染色体不能得到分辨率的制图。
要获得高分辨率可通过两种方式：一是通过延长前中期染色体，人为拉长DNA的纤维。
即在载玻片上的一端用清洁剂溶解的细胞，倾斜载玻片，是溶剂中的DNA沿玻片流下，可使分辨率达到1Kb到几个Kb；二是通过培养细胞的同步化，是大量细胞处于有丝分裂前期来获得高分辨率，如将间期核用于杂交提高分辨率。
间期FISH技术能对间隔只有50Kb的探针排序，新近应用的精卵系统能使FISH技术的分辨率达到不小于50Kb的范围FISH技术是一种重要的非放射性原位杂交技术，它的基本原理：如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶细胞与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变形—退火—复性，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。
将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛，可利用报告分子与荧光素。
FISH简介
荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization, 简称FISH)由于其直观, 快速, 敏感性高和方便灵活越来越得到广泛应用, 尤其是在血液学领域中. 因为白血病标本比较容易取得和制备, 不同类型的白血病又往往有其特异的染色体异常, FISH在白血病诊断, 治疗监测, 预后估计和微小残留病检测等诸方面都正成为不可缺少的重要手段.FISH的基本原理很简单, 就是标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补的DNA(玻片上的标本)退火杂交, 通过观察荧光信号在染色体上的位置来反映相应基因的情况.FISH探针按标记方法可分为直接标记和间接标记: 用生物素(biotin)或地高辛(digoxingenin)标记称为间接标记, 杂交后需要通过免疫荧光抗体检测方能看到荧光信号, 因而步骤较多, 操作麻烦, 其优点是在信号较弱或较小时可经抗原抗体反应扩大; 直接用荧光素标记DNA的方法称为直接标记. 由于直接标记的探针杂交后可马上观察到荧光信号, 省去了烦琐的免疫荧光反应, 不再需要购买荧光抗体, 也由于近年来荧光互的亮度和抗淬灭性的不断改进和提高, 直接标记的荧光探针越来越成为首选, 采用多种不同颜色的荧光, 方便在同一标本上同时检测多钟异常. 其荧光强度和信号大小都易于在普通荧光显微镜下观察, 操作过程中也不需要严格避光, 使FISH过程变得简便而易于操作. FISH并不能取代传统的白血病MCI诊断, 但它却能使MIC分型更为准确和深入. , MIC即细胞形态学(M), 免疫学和细胞遗传学(C), 三者结合对白血病进行分型诊断, 对不同类型的白血病采用不同治疗方案手段. 随着人们对白血病的不断认识, 仅进行MIC分型不够全面, 还要加上对白血病的分子(M)诊断, 成为MICM分型. FISH就是连接细胞遗传学和分子生物学的桥梁.FISH流程仪器设备1、医用微波炉；2、水浴锅；3、OLYMPUS BX51荧光显微镜；4、OLYMPUS DP11数字显微照相机。
FISH检测基因异常的原理及结果判读
FISH检测基因异常的原理及结果判读FISH（Fluorescence In Situ Hybridization）是一种用于检测基因或染色体异常的分子遗传学技术。
它利用DNA或RNA探针与待测细胞中特定序列的互补配对，通过荧光显微镜观察和分析，可以提供关于基因或染色体结构和数量的信息。
FISH的原理FISH的原理基于互补配对原则和荧光探针技术。
首先，选择一个特定的DNA或RNA探针，该探针具有与待测细胞中一些特定序列互补的序列。
这个探针可以是单链DNA或RNA分子，也可以是由DNA或RNA分子构成的染色体或基因库。
然后，将探针标记上荧光染料。
常用的标记方法包括直接标记（直接将荧光染料与探针反应）和间接标记（使用一些中间物质，例如生物素-亲和素结合体系统或抗原-抗体结合体系来标记探针）。
接下来，将标记后的探针与待测细胞样品的DNA或RNA进行杂交。
杂交的条件会因实验目的和探针性质不同而有所变化，通常在适当的温度下进行。
最后，使用荧光显微镜来观察和分析待测细胞中的荧光信号。
荧光信号的形状、数量和位置可以提供有关待测基因或染色体的结构和数量的信息。
FISH的结果判读FISH的结果基于荧光信号的形状、数量和位置进行判读。
根据待测细胞中的荧光信号情况，可以得出以下几种结果：1.正常结果：如果待测细胞中的荧光信号与已知的正常特征相符，那么可以确定基因或染色体的结构和数量是正常的。
2.异常结果：如果待测细胞中的荧光信号与已知的异常特征相符，那么可以确定基因或染色体存在其中一种异常。
例如，荧光信号的形状缺失、数量增加或位置改变等都可能说明基因或染色体存在缺失、复制或重排的异常。
3.无结果：有时，无法得到明确的结果。
可能是由于实验条件不合适，荧光信号过弱或过强，或者细胞的特定位置缺乏目标序列等原因。
在这种情况下，可能需要重新进行实验或使用其他技术来进一步分析。
需要注意的是，FISH是一种定位性技术，它只能提供有关特定基因或染色体的信息。
分子病理fish技术
分子病理fish技术
分子病理FISH技术是一种重要的分子生物学技术，其通过荧光染色技术检测染色体的异常及其染色体上特定序列的分布情况，从而为疾病的分子诊断提供有力的支持。
FISH技术的原理是利用DNA探针与样本的靶DNA序列的高度互补性结合，形成荧光标记的探针-靶DNA杂交体，在荧光显微镜下进行检测。
根据探针的不同种类和荧光染色物的不同组合，可以检测到染色体的不同缺失、增多、重排和散在分布等染色体异常，也可以对某些特定基因的扩增、突变、融合等变异进行检测。
FISH技术的应用范围非常广泛，涉及到多种疾病的分子诊断和预后评估。
例如，在肿瘤的分子诊断中，FISH技术可以同时检测多种基因的扩增、融合或重排，如HER2、BCL2、BCL6等，在血液病学中，FISH技术可以用来检测染色体异常及其亚克隆性，如慢性髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤等。
FISH技术还可以应用于基因组、转录组和蛋白质组的分析。
在基因组水平，FISH技术可以用来确定基因组的大小和组织结构等；在转录组水平，FISH技术可以进行定量分析和空间分布的研究；在蛋白质组水平，FISH技术可以用来研究细胞核和染色体的空间分布和相互作用。
除了以上应用，FISH技术还可以用于辅助生殖医学，如评估胚胎染色体异常和性染色体异常等。
此外，FISH技术还可以用于动植物的基因组研究，如基因定位、染色体序列组装等。
总的来说，FISH技术在现代医学和生命科学中的应用范围非常广泛，可以为疾病的分子诊断、基因组学研究和辅助生殖医学等领域提供有力的支持。
未来，随着技术的不断发展和完善，FISH技术将会在越来越多的领域得到应用，为人类的健康和生命科学的发展贡献更大的力量。
FISH的基本原理及应用
FISH的基本原理及应用1. 引言FISH（Fluorescence In Situ Hybridization）是一种基于分子生物学技术的方法，用于检测染色体或细胞核酸序列的存在和位置。
本文将介绍FISH的基本原理和其在生命科学研究、临床诊断和基因组学等领域的应用。
2. FISH的基本原理FISH的基本原理是将一系列标记有荧光染料或放射性同位素的DNA或RNA探针与待测样品中的互补序列发生靶向杂交反应，从而实现对目标序列的检测和定位。
3. FISH的步骤FISH一般包括以下步骤：•取样：从样品中获取细胞或组织。
•固定：使用适当的方法固定细胞或组织，以保持其形态和结构。
•裂解：通过使用酶解等方法，将细胞或组织中的核酸释放出来。
•杂交：将标记有荧光染料的DNA或RNA探针与待测样品中的互补序列进行杂交，形成稳定的杂交复合体。
•洗涤：通过洗涤的步骤，去除未发生杂交的探针。
•显微镜观察：使用荧光显微镜等设备观察杂交信号，并记录图像。
4. FISH的应用领域FISH在多个领域中广泛应用，下面将重点介绍其在以下几个方面的应用。
4.1 生命科学研究FISH在生命科学研究中发挥重要作用，它可以帮助科学家研究染色体的结构和功能，揭示基因组的复杂性和变异性。
通过对细胞核酸序列的定位，FISH可以帮助研究者探索基因型与表型之间的关系，从而理解基因的功能和表达调控机制。
4.2 临床诊断FISH在临床诊断中应用广泛，尤其在肿瘤诊断中具有重要意义。
通过对肿瘤细胞进行FISH检测，可以鉴定染色体异常和基因突变，帮助确定诊断和预后评估。
例如，FISH可以用于检测BCR-ABL融合基因，在慢性髓系白血病的诊断和治疗方案制定中起到重要作用。
4.3 遗传学研究FISH在遗传学研究中也被广泛应用。
通过FISH技术，可以对染色体进行直接观察，从而帮助研究者了解染色体结构异常和数目异常对个体遗传特征的影响。
此外，FISH还可以帮助研究者进行染色体定位测序，从而进一步揭示基因组的组织和结构。
FISH检测在临床上的应用
FISH检测在临床上的应用FISH检测在临床上的应用一、简介- FISH（Fluorescence in situ hybridization）即原位荧光杂交技术，是一种用于研究基因组和染色体结构的分子生物学技术。
- FISH检测在临床应用中可以提供重要的染色体遗传学信息，用于诊断和监测某些疾病。
二、FISH检测的原理- FISH技术基于荧光标记的核酸探针与细胞或组织标本中的特定DNA序列发生互补杂交，通过荧光显微镜观察以检测特定基因组或染色体的异常。
- FISH检测可以提供高度准确的定量和定位信息，特别适用于检测具有微小或亚显性突变的染色体异常。
三、临床应用领域1、适用于癌症诊断和分型- FISH检测可以检测染色体上的特定基因重排，从而辅助癌症的诊断、分型和治疗方案的选择。
- 例如，FISH检测可以用于检测BCR-ABL融合基因以确认慢性髓性白血病的诊断。
2、适用于先天性遗传病的筛选和诊断- FISH检测可用于检测染色体异常，如唐氏综合征（21三体综合征）、爱德华氏综合征（18三体综合征）和智商障碍相关的染色体异常，用于婴儿和先天性遗传病的筛选和诊断。
3、适用于遗传性肿瘤相关基因的检测- FISH检测可以用于检测和定位遗传性肿瘤相关基因的异常，如BRCA1和BRCA2基因异常与乳腺癌和卵巢癌的遗传风险相关。
4、适用于感染性疾病的诊断和追踪- FISH检测可以用于检测和定位细菌、和寄生虫等感染性病原体的核酸序列，辅助感染性疾病的诊断和追踪。
四、技术要点和注意事项1、样本处理- 对于固定的细胞或组织标本，需要进行脱脂、脱水等预处理步骤。
- 不同类型的标本可能需要不同的处理方法，如骨髓涂片、组织切片等。
- 样本处理过程中需注意保持核酸完整性和避免污染。
2、探针设计与标记- 根据要检测的目标基因或染色体序列设计特异性的核酸探针。
- 核酸探针需要选择适当的荧光染料进行标记，以便在荧光显微镜中观察到。
- 标记的探针需要存储在适当的条件下，以保持标记稳定性和活性。
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医生检查申请方法
6生长发育问题新生儿至青
春期
（腭裂、胃食道反流、呕吐导致的）喂养困难、生长激素缺乏；生长发育落
后于同龄正常儿童。
注：1.典型病人具有前4条表现；2.学龄期儿童、青少年、成人患者可能合并5、6两条表现；
3.最常见的是先心病加上后5条表现的一条或多条；
4.以免疫缺陷和低钙血症为突出表现的应考虑到DiGeorge综合征的可能；
FISH法染色体诊断病种介绍（一）
22q11微缺失综合征
概述：22q11微缺失综合征（22q11 deletion syndrome，22q11DS）是指由人类染色体22q11.21-22q11.23
区域杂合性缺失引起的一类临床症候群，包括DiGeorge综合征、腭心面综合征、椎干异常面容综合征，Cayler
以FISH检查为金标准，可以有效地检出大部分缺失。对临床疑似患者和有相关
不良孕产史的父母进行FISH检测，有利于提供遗传咨询和提供临床决策依据。
22q11微缺失综合征病人的临床表现
主要症状和体征发病年龄临床表现
1先天性心脏病产前、新生
儿期
有法洛氏四联症（TOF）、室间隔缺损（VSD）、先天性主动脉弓离断B型（IAA
type B）、肺动脉狭窄、闭锁（PA/PS）以及共同动脉干（TA）或其它心脏流
出道畸形者。
2颜面异常、腭裂新生儿至成
年患者
头部：小颌、长脸、上颌垂直过长、颊部平坦、下颌后移、面部不对称等
耳：双耳低位、耳畸形、小耳廓、耳廓异常折叠、耳轮肥厚、中耳炎等
眼：眼距宽、睑裂狭小、视神经乳头变小、视网膜血管扭曲、视网膜缺损、
身免疫病，细胞性免疫不全
4甲状旁腺机能低
下，低甲状旁腺素
血症
1年内的新
生儿
出现惊厥、喉痉挛、手足抽搐等低钙血症表现
5认知和精神异常儿童、青春
期至成年
（青春期或成年患者）书写、计算、理解困难或学习能力缺失，注意力缺陷
或注意力高度缺陷，智商通常在70-90左右（认知异常）；精神分裂症（主
要为妄想型精神分裂症）、注意缺陷多动障碍、强制性障碍、心境障碍等
白内障等
鼻：球状鼻、方鼻尖、宽鼻梁、鼻翼发育不全、鼻孔狭窄、鼻孔前倾、鼻
后孔闭锁、长人中、短人中、慢性鼻窦炎、慢性化脓性中耳炎。
口腔：U型嘴、鱼形嘴、小口畸形、上唇较薄等
腭：腭裂、悬雍垂裂、高腭弓、腭帆缩短、粘膜下腭裂等
3先天性胸腺不发
育或发育不全
新生儿期反复肺炎、鼻窦炎、中耳炎、鹅口疮等细菌、病毒、真菌、原虫的感染和自
其他的原因有基因突变、染色体易位、其他染色体异
常等，占5%。目前已在缺失区发现30多个基因，其
中研究较多的基因有TBX1、CRKOL、Ufd1L、HIRA、CRKL、COMT、PRODH、ZDHHC8
等；TBX1与心脏圆锥动脉干畸形、颅面畸形、胸腺、甲状旁腺发育不良等表型
密切相关。
诊断：临床诊断主要依靠临床表现及相关的实验室和影像学检查；遗传学诊断
心面综合征和Opitz综合征等数个具有相同遗传学基础的临床综合征，
遗传特点：90-95%的患者为新ห้องสมุดไป่ตู้病例，仅5-10%的患者由父母遗传且为常染色体
显性遗传，因此在患病的父母其子女有50%可能患病，而且子女的临床表现通常较
其父母重。
分子遗传学：最常见的原因是患者一条22号染色体
的q11.2区段发生微缺失，占全部患者的95%左右；