欧前胡素和异欧前胡素舒张血管作用及其机制的比较
HPLC法测定天麻头痛片中欧前胡素和异欧前胡素的含量
HPLC法测定天麻头痛片中欧前胡素和异欧前胡素的含量目的：建立天麻头痛片中欧前胡素和异欧前胡素的含量测定方法。
方法：采用高效液相色谱仪，waters Symmetry C18色谱柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-乙腈-水为梯度洗脱；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；检测波长：250nm。
结果：欧前胡素在 1.424～71.2μg/ml的范围内线性关系良好，加样回收率为102.9%，RSD为1.45%；异欧前胡素在1.337～66.85μg/ml的范围内线性关系良好，加样回收率为102.5%，RSD为1.85%。
结论：所建立的方法可以用来检测天麻头痛片中欧前胡素和异欧前胡素的含量。
标签：高效液相色谱；天麻头痛片；欧前胡素；异欧前胡素天麻头痛片具有养血祛风、散寒止痛的功效，临床用于治疗头痛、血虚头痛，血瘀头痛。
方中天麻为君药，治一切头风；白芷祛风散寒、通窍止痛，为臣药。
2010版《中国药典》[1]测定了天麻头痛片中天麻素的含量，但对白芷中起止痛作用的香豆素类成分含量未曾测定。
欧前胡素和异欧前胡素是白芷的香豆素类的代表性成分[2]，本文采用HPLC测定天麻头痛片中欧前胡素和异欧前胡素的含量，为完善天麻头痛片的质量控制提供了快速准确地测定方法。
1 仪器与材料1.1 实验仪器Waterse 2695高效液相色谱仪（美国waters公司）；MSA225-000-DU型电子天平（德国赛多利斯公司）。
1.2 试剂与样品欧前胡素（批号：110827-201109，中国食品药品检定研究院）；异欧前胡素（批号：110826-201214，中国食品药品检定研究院）；甲醇、乙腈（色谱纯，J.T.BAKER）；超纯水为Molecular纯水机制备；天麻头痛片（批号：121203，辽宁中医学院制药有限公司；批号：130401，沈阳东新药业有限公司）。
2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Waters Symmetry C18柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：乙腈∶甲醇∶水；检测波长：250 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：25℃。
heinigo草药药理数据0231呋喃香豆素类化合物
heinigo草药药理数据0231呋喃香豆素类化合物1、香柑内酯（bergapten）:蛇床子，石椒草，水芹菜，桑叶，山麻黄，羌活，前胡，牛尾独活，牛奶树（叶），南瓜七，欧当归，蒙古山萝卜（地上部分），狼毒F，新疆藁本，小茴香，黑藁本，花椒，胡荽（就是香菜叶），旱芹，旱前胡，云防风，薜荔，白芷，白云花根，滨海前胡，北细辛，短茎独活，独活，滇白芷，大活，大巢菜，东当归，防风，福参，佛手柑，长春七，臭草，朝鲜当归，枸橘核（少量），拐芹，走马芹，枳实，枳壳2、花椒毒素（xanthotoxin/xan-thotoxin）：云防风，防风，软毛独活，大活，大巢菜，东当归，长春七，臭草，臭山羊叶，朝鲜当归，补骨脂，白鲜皮（地上部分），白芷，白独活，白云花根，北细辛，杏叶沙参根，山麻黄，旱芹，牛尾独活，小茴香，3、异欧前胡素（异欧芹属素乙/白芷甲素）：白芷，独活，臭草，声明：本数据来自于我对自己搜集的上万种草药的现代医学药理数据的搜索查询。
数据来源自《中国药典》《全国中草药汇编》《中药大辞典》《中华本草》四部现代医学药理著作。
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说明1：呋喃香豆素类化合物为光活性物质。
光敏活性以花椒毒素为最强，香柑内酯次之，异欧前胡素乙较弱。
1、5-甲氧基补骨脂素是补骨脂素衍生物，属于线性呋喃香豆素，俗称香柑内酯、佛手苷内酯。
本品对皮肤有光学活性，有杀灭软体动物作用，有对抗肝素的抗凝血作用和止血作用，并具有抗微生物活性。
临床上用于治疗牛皮癣，亦用于制革业。
现代药理实验研究表明，它对肿瘤、细胞增生也有一定的抑制活性，是一种潜在的抗肿瘤药物的中间体，同时它也是合成复杂天然产物的重要中间体。
LC—MS研究白芷中香豆素成分对多烯紫杉醇药代动力学的影响
LC—MS研究白芷中香豆素成分对多烯紫杉醇药代动力学的影响建立测定大鼠血浆中多烯紫杉醇LC-MS方法，并分别研究白芷中3个香豆素成分（欧前胡素、异欧前胡素及氧化前胡素）对多烯紫杉醇药代动力学的影响。
以紫杉醇为内标，血浆样品经甲醇沉淀蛋白，LC-MS测定，方法经特异性、线性范围、准确度、精密度、稳定性等确证适合用于血浆中多烯紫杉醇的测定。
试验采用每组6只大鼠，分别口服灌胃给予多烯紫杉醇（50 mg·kg-1）组、氧化前胡素（8 mg·kg-1）配伍多烯紫杉醇（50 mg·kg-1）组；欧前胡素（15 mg·kg-1）配伍多烯紫杉醇（50 mg·kg-1）组、异欧前胡素（15 mg·kg-1）配伍多烯紫杉醇（50 mg·kg-1）组。
LC-MS测定给药后血浆中多烯紫杉醇浓度，绘制血药浓度-时间曲线，并用DAS 2.0软件计算相关药代动力学参数。
结果显示多烯紫杉醇与3个香豆素成分配伍前后其药代动力学参数有了明显的变化。
血药浓度-时间曲线下面积（AUC）显著性增加，药峰浓度（Cmax）显著提高。
表明白芷香豆素类化合物能促进多烯紫杉醇的口服生物利用度，三者对多烯紫杉醇口服生物利用度的影响作用氧化前胡素最强、异欧前胡素次之、欧前胡素最弱。
标签：多烯紫杉醇；欧前胡素；异欧前胡素；氧化前胡素；药代动力学[Abstract] The study was aimed to establish a liquid chromatography-tandem mass spectrometric method for the determination of the docetaxel concentration in rat plasma，and study the effect of coumarin constituents （imperatorin，isoimperatorin and oxypeucedanin）in Angelica dahurica on pharmacokinetics of docetaxel.Plasma was precipitated with acetonitrile and determined by LC-MS method with Paclitaxel as an internal standard. The specificity，linearity，range，accuracy，precision and stability of the method were suitable for the determination of docetaxel in plasma.Six sprague-dawley rats in each group received intragastric administration of docetaxel （50 mg·kg-1），oxypeucedanin （8 mg·kg-1）combined with docetaxel （50 mg·kg-1），imperatorin （15 mg·kg-1）combined with docetaxel （50 mg·kg-1），and isoimperatorin（15 mg·kg-1）combined with docetaxel （50 mg·kg-1）.Their drug plasma concentration was determined by LC-MS with Paclitaxel as an internal standard to draw plasma concentration-time curve，and the phamacokinetic parameters were calculated by DAS 2.0. The results showed that the phamacokinetic parameters of docetaxel all had notable changes when combined with imperatorin，isoimperatorin，and oxypeucedanin，respectively. The phamacokinetic parameters AUC and Cmax were significantly increased，indicating that coumarin constituents in Angelica dahurica could promote the oral bioavailability of docetaxel，and their effects were in the following order：oxypeucedanin>isoimperatorin>imperatorin.[Key words] docetaxel；imperatorin；isoimperatorin；oxypeucedanin；phamacokinetic白芷為我国大宗常用中药材品种之一，其收载于2015年版《中国药典》一部[1]，具有祛风散寒、燥湿排脓、止痛等功效[2]，其活性组份主要为白芷香豆素和挥发油，前期研究结果表明白芷香豆素可促进配伍对药活性成分如葛根素、黄苓苷等的肠道转运[3-4]，同时发现白芷香豆素有规律的促进P-gp介导的药物的肠道转运，而且对P-gp的表达具有一定的抑制作用[5]。
HPLC法同时测定川芎茶调散中欧前胡素和异欧前胡素的含量
HPLC法同时测定川芎茶调散中欧前胡素和异欧前胡素的含量代磊【摘要】目的建立HPLC法同时测定川芎茶调散中欧前胡素和异欧前胡素的含量.方法Hypersil ODS2(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;流动相:甲醇-水(62:38),流速:1.0 mL·min-1;检测波长254 nm;进样量为20 μL.结果欧前胡素在1.064～31.92 mg·L-1 的范围内呈良好的线性关系(r=0.999 7);异欧前胡素在1.090～32.70 mg·L-1 的范围内呈良好的线性关系(r=0.999 3).欧前胡素的平均加样回收率为99.5%(n=9),RSD=0.64%;异欧前胡素的平均加样回收率为100.0%(n=9),RSD=1.65%.结论该方法操作简便、准确、稳定,适用于川芎茶调散中欧前胡素和异欧前胡素的含量测定.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2013(017)009【总页数】2页(P1502-1503)【关键词】HPLC;川芎茶调散;欧前胡素和异欧前胡素【作者】代磊【作者单位】安徽省淮北市食品药品检验所,安徽,淮北,235000【正文语种】中文川芎茶调散主要由川芎、白芷、羌活、细辛、防风、荆芥、薄荷、甘草八味中药粉碎，过筛，混匀，即得。
具有疏风止痛的功效，临床用于外感风邪所致的头痛或有恶寒、发热、鼻塞［1］。
该制剂收载在《中国药典》2010年版一部，白芷是该制剂的主要成分之一，标准中未对方中白芷的主要成分欧前胡素和异欧前胡素进行含量测定，也无对二者同时测定的相关报道。
本文采用高效液相色谱法同时测定川芎茶调散中欧前胡素和异欧前胡素的含量，方法操作简便、准确、稳定，适用于川芎茶调散的质量控制。
1 仪器及试药1.1 仪器 Waters e2695 HPLC色谱系统;Empower Waters工作站;Waters 2489 UV/visible Detector检测器;超声波处理器(济宁奥波超声电气有限公司);Mettler AE-240电子分析天平。
上清丸中欧前胡素和异欧前胡素含量的同时测定
清热散风ꎬ解毒通便之功效ꎮ 常用于头晕耳鸣ꎬ目赤ꎬ鼻流黄
ＷＳ３￣Ｂ￣１８７８￣９５ꎬ收载大蜜丸和水丸两种剂型ꎬ标准仅通过显
微鉴别对其中七味药材进行定性鉴别ꎬ没有含量测定项ꎬ对药
品的质量控制和评价存在局限ꎮ 白芷为该制剂的重要一味药
材ꎬ其标准收载与中国药典 ２０１５ 年版一部
〔２〕
ꎬ标准中采用薄
层色谱鉴别欧前胡素和异欧前胡素ꎬ含量测定只测定欧前胡
用乙腈￣含 ０ １％ 磷酸的水溶液组成梯度洗脱系统ꎬ作为流动相洗脱ꎻ检测波长和流速分别设为 ３００ｎｍ 与 １ｍＬｍｉｎ － １ ꎮ 结果 欧前胡素和异欧
前胡素分别在 ４ ３９ ~ ４３８ ７６μｇ 和 ４ ５３ ~ ４５２ ８７μｇ 范围内 呈良好的线性关系ꎬ 相 关 系 数 ｒ 均 为 ０ ９９９９ ( ｎ ＝ ６ ) ꎬ 平 均 回 收 率 分 别 １２７￣２０１００８ꎬ含量以 ９９ ４％ 计) ꎮ 上清丸样品均为市场
企业生产ꎮ
２ 方法与结果
２ １ 色 谱 分 离 测 定 条 件 在 Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＧＥＭＩＮＩ￣ＮＸ Ｃ１８
(５μｍꎬ４ ６ × ２５０ｍｍ) 色谱柱上分离测定ꎻ以乙腈为流动相 Ａꎬ
以含 ０ １％ 磷酸的水溶液为流动相 Ｂꎬ按下表中的规定进行梯
上清丸由菊花、白芷、大黄等十二味药材组成 〔１〕 ꎮ 具有
素( 批号:１１０８２６￣２００７１２ꎬ含量以 ９９ ９％ 计) 、异欧前胡素( 批
涕ꎬ口舌生疮ꎬ 牙 龈 肿 痛ꎬ 大 便 秘 结ꎮ 上 清 丸 现 行 标 准 〔１〕 为
抽得样品ꎬ１０ 批大蜜丸和 １０ 批水丸分别由 １０ 个省区的 １７ 家
海峡药学 ２０１９ 年 第 ３１ 卷 第 １２ 期
上清丸中欧前胡素和异欧前胡素含量的同时测定
欧前胡素和异欧前胡素的薄层色谱
欧前胡素和异欧前胡素的薄层色谱在分析化学领域，薄层色谱是一种常用的化学分离技术，其原理是利用物质在固定相和流动相作用下的不同迁移率，实现对物质的分离和检测。
而欧前胡素和异欧前胡素作为一种天然化合物，在药理学和药物分析方面备受关注。
本文将围绕欧前胡素和异欧前胡素的薄层色谱进行深入探讨，并对其理论和应用进行全面评估。
一、欧前胡素和异欧前胡素的概述1. 欧前胡素欧前胡素，又称为川前胡素，是一种黄酮类化合物，广泛存在于中草药川芎中。
其化学结构为7-羟基-6-甲氧基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种药理活性。
2. 异欧前胡素异欧前胡素是一种次黄酮类化合物，与欧前胡素在结构上有所不同。
它也存在于中草药川芎中，具有类似的药理活性，但在某些方面可能表现出不同的生物活性。
二、欧前胡素和异欧前胡素的薄层色谱分析1. 分析方法薄层色谱是通过将样品施加在薄层色谱板上，利用不同物质在固定相和流动相作用下的迁移率差异，达到对物质的分离和检测的方法。
对于欧前胡素和异欧前胡素的分析，常用的薄层色谱固定相包括硅胶、纸基、或者聚硼酸酯，流动相常用的是乙酸乙酯-乙醇-醋酸-水等。
2. 应用价值欧前胡素和异欧前胡素作为中草药川芎中的活性成分，在药物分析和质量控制中具有重要意义。
通过薄层色谱的分析方法，可以对药材中的欧前胡素和异欧前胡素进行定性和定量分析，为药物研发和药理活性研究提供重要依据。
三、个人观点和理解从理论和应用角度来看，欧前胡素和异欧前胡素的薄层色谱分析是一项具有挑战性和前景广阔的研究领域。
在未来的研究中，我们可以进一步探索不同固定相和流动相条件下的色谱分析方法，以获得更准确和可靠的分析结果。
还可以结合质谱和核磁共振等技术，深入探讨欧前胡素和异欧前胡素的结构和生物活性，为药物研究和临床应用提供更多可能性。
欧前胡素和异欧前胡素的薄层色谱分析是一个复杂而有价值的研究领域。
通过对其理论和应用的全面评估，我们可以更好地理解这一分析方法在药物分析和中药质量控制中的作用，为相关领域的进一步研究和应用提供科学依据。
异欧前胡素结构式
异欧前胡素结构式
异欧前胡素（Heterophyllous saponin）是一种天然存在的化合物，具有许多重要的药理活性。
它被广泛应用于中药领域，被认为具有抗肿瘤、降血脂、抗炎和抗菌等多种功效。
在这篇文章中，我们将深入探讨异欧前胡素的结构式以及它的药理作用。
异欧前胡素的结构式可以用化学式C28H30O13来表示。
它是一种二萜皂苷，由一个二萜骨架和一个糖基组成。
该化合物的结构包含了苯丙素和柚皮素的衍生物，这使得它具有特殊的化学性质和药理活性。
异欧前胡素最显著的特点是它的抗肿瘤活性。
研究表明，异欧前胡素能够通过多种机制抑制肿瘤细胞的生长和扩散。
首先，它可以抑制肿瘤细胞的增殖，导致细胞周期停滞和凋亡。
其次，异欧前胡素还可以抑制肿瘤细胞的侵袭和转移，从而阻止肿瘤的扩散。
此外，它还具有抗血管生成的作用，可以抑制肿瘤血管的形成，使肿瘤细胞缺乏氧气和营养物质供应，从而抑制肿瘤的生长。
除了抗肿瘤活性，异欧前胡素还具有降血脂、抗炎和抗菌等多种药理作用。
研究表明，该化合物能够降低血清中的胆固醇和甘油三酯水平，从而降低患者的血脂。
此外，异欧前胡素还可以减轻炎症反应，抑制炎症介质的释放，从而减轻炎症症状。
另外，它还对多种细菌具有抑制作用，可以用于治疗多种感染性疾病。
异欧前胡素是一种具有重要药理活性的化合物。
它具有抗肿瘤、降血脂、抗炎和抗菌等多种功效。
然而，我们需要进一步的研究来揭示其作用机制，并且开发更多的应用领域。
希望通过我们的努力，能够更好地利用异欧前胡素的药理作用，为人类的健康做出更大的贡献。
文献-高效液相色谱_串联质谱法测定化妆品中的欧前胡素和异欧前胡素
Parent io n （ m /z） 271． 2
271． 1
Pro duct io n （ m /z） 203． 1* 147． 1 203． 1* 147． 1
CE /V
17 43 17 43
* quantitative io n．
2 结果与讨论
2． 1 色谱条件的优化 欧前胡素和异欧前胡素属呋喃香豆素类化合
0. 999） ； 方法定量限（ LOQ） 为 0. 50 m g / kg。在 0. 50 ～ 10. 0 m g / kg 内，欧前胡素和异欧前胡素的回收率范围分别
为 82. 2% ～ 105% 和 80. 0% ～ 103%，相对标准偏差分别为 2. 7% ～ 4. 9% 和 1. 8% ～ 4. 6%。该方法能够满足化妆品中
表 1 欧前胡素和异欧前胡素的多反应监测条件 Table 1 HPLC-MS / MS MRM conditions for imperatorin and isoimperatorin
Compound Im perato rin
t R / m in 2． 2
Iso im perato rin 2． 9
1 实验部分
1． 1 仪器、试剂与材料 日本岛津公司液相色谱（ UFLC LC20A） ； 美国
AB Sciex 公 司 三 重 串 联 四 极 杆 质 谱 联 用 仪 （ API Qtrap 4000） ，配有电喷雾离子源 （ ESI） ； 水浴超声 波发生装置（ 德国，SW30H） ； 低温离心机（ 德国 Sigm a 3-16PK） ； 高速离心机（ 德国 Sigm a 1-14） ； 涡旋 振荡 器 （ 德 国 IKA MS3 basic，） ； 电 子 天 平 （ 德 国 Sarto rius，精确至 0. 001 g） 。
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欧前胡素（ｉｍｐｅｒａｔｏｒｉｎ）和异欧前胡素（ｉｓｏｉｍｐｅｍｔｏｒｉｎ）属于６，７．呋喃香豆素类。近年来，人 们对欧前胡素和异欧前胡素关注较多的是它的舒张血管作用，据报道，欧前胡素引起血管舒张的机 制是抑制了电压依赖性钙通道和受体调节的钙离子的流入和释放１１Ｊ。本实验基于上述研究，通过离 体血管实验对欧前胡素和异欧前胡素舒张血管作用进行初步比较，运用细胞膜色谱技术和分子对接 研究进一步探索欧前胡素和异欧前胡素的舒张血管作用机制。 １．材料和方法 １．１动物雄性ＳＤ大鼠（体重２００－３００９，交大医学院实验动物中心提供）
着竞争剂尼群地平浓度的增加而减小．并逐渐趋丁平衡，由此进一步的分子对接研究中两者与尼群
地平都是停靠在电压依赖性Ｌ犁钙通道活性部位ａ－Ｉｃ型砸基上：结论：两者可能作用在Ｌ一型钙离
子通道的二氢毗啶位点，活性部位可能是Ｌ．型钙离子通道的ａ－ＩＣ型血管作用；作用机制 Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆｌｍｐｅｒａｔｏｒｉｎ ａｎｄ Ｉｓｏｉｍｐｅｍｔｏｒｉｎ Ｖａｓｏｄｉｌａｆｉｏｎ
２３９
第二届中国西部药物分析学术研讨会 方法４ ｏＣ状态下获得大鼠血管平滑肌细胞膜【３Ｊ。
２０１０年１０月・西安
１．５３膜固定相的制备真空状态下将细胞膜悬液加入装有大孔硅胶粉末的具支试管中，与高温 活化后的硅胶０．０５ ｇ混悬５ ｍｉｎ。用５ ｍＭ 下装填血管平滑肌细胞膜色谱柱（１０
ｍｍ ｐＨ ７．４
ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ．Ｓｔｕｄｙ ａｎｄ
ｍｅｍｂｒａＴｌｅ
ｖｍｓｏｄｉｌａｔｏｒ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ卸ｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｒ目Ⅱ№：Ｔｈｅ
ｅ肚ｃｔ
ａｎｄ
第二届中国西部药物分析学术研讨会
ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ
ｏｎ
２０１０年１０月・西安
ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｉｍｐｅｒａｔｏｒｉｎ Ｉｓｏｉｍｐｅｍｔｏｒｉｎ ａｎｄ ｎｉｔｒｅｎｄｉｐｉｎｅ ｗｅｒｅ
第一届中国Ｍ部药物分析学术研ｔ｛会
２０１０年１０月・西安
矿，，矿矿矿’ ＲＯ～…■■………………“
３．结论
岫至｜ｔｌＩＢｉｌＩＵＵｌＩＨＩ。
或誓矿矿，
欧前胡素和异欧前胡素舒张血管作用及其机制的比较
周楠，贺建宁，张杰，贺怀贞，贺浪冲 西安交通大学医学院陕西西安７１００６
３土１
本实验表明，用ＨＰＬＣ法测定不同时间注射用青霉素钠、注射用头孢唑林钠在分别与１０％、２０％
７．９９ｊ＝０．０８．Ｂｏｔｈ
ａ
ｏｆ ｎｉｔｒｅｎｄｉｐｉｎｅ ｗｈｉｃｈ ｉＳ
ａｎｄ
ｔｅｎｄｓ
ｔｏ
ｂａｌａｎｃｅ
ｇｒａｄｕａｌｌｙ．Ｔｈｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄ
Ｉｍｐｅｒａｔｏｒｉｎ．Ｉｓｏｉｍｐｅｍｔｏｒｉｎ
ａｎｄ
ｎｉｔｒｅｎｄｉｐｉｎｅ ｗｅｒｅ ｂｕｉｌｔ
ａｎｄ
ｄｏｃｋｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｅ ｓｉｔｅ ｏｆ ｖｏｌｔａｇｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｌ—ｔｙｐｅ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ ｑ－１ Ｃ
和３０％脂肪乳配伍后的含嚣．其测定结果不受脂肪乳的影响．方法简便．同收翠高。实验结果表明， 注射青霉索钠、注射用头孢唑林钠在分别与１０％、２０％和３０％脂肪乳配伍后，在２４ ｈ内两种药物的外 观性状、ｐＨ值及含量均无明显改变．可以配伍使用。
参考文献（略）
攮蔓目的：对欧前胡素和异欧前胡素舒张血管作用进行比较井探讨其作用机制；方法：通过
ｏｎ
ｓｕｂｕｎｉｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｂｏｔｈ ａｃｔ
ｔｈｅ ｄｉｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ ｓｉｔｅ ｏｆ Ｌ－ｔｙｐｅ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ，ｔｈｅ ａｃｔｉｖｅ ｓｉｔｅ ｍａｙ
ｂｅ ｔｈｅ（ｔ－Ｉ Ｃ ｓｕｂｕｎｉｔ ｏｆ Ｌ—ｔｙｐｅ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｉｍｐｅｒａｔｏｒｉｎ；Ｉｓｏｉｍｐｅｍｔｏｒｉｎ；Ｖａｓｏｄｉｌａｔｏｒ ｅｆｆｅｃｔ；Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
０撕ｅｃｔｉｖｅ：Ｓｔｕｄｙ∞ｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｃｏｍｐａｒｅ
ｅｘｐｌｏｒｅ
ｅｏｍｐ”ｅ
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ｖａｓｏｄｉｌａｔｏｒ
ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
ｏｆ
ｌｍｐｅｍｔｏｒｉｎ
ａｎｄ
ｔｈｅ ｖａｓｏｄｉｌａｔｏｒ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆｔｈｅｍ ｌｈｒｏｕｇｈ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｖａｓｃｕｌ盯 ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｄｏｃｋｉｎｇ ｏｆ Ｉｍｐｅｒａｔｏｄｎ卸ｄ Ｉｓｏｉｍｐｅｍｔｏｒｉｎ ｍａｘｉｍｕｍ ｕｓｉｎｇ ｃｅＯ ｐＥＣ∞ｏｆ
１．２药品与试剂尼群地平、欧前胡素和异欧前胡素对照药品购自中国药品生物制品检定所；
甲醇为色谱纯（美国Ｈｏｎｅｙｗｅｌｌ公司）；Ｋｒｅｂｓ液（组成（ｇ／Ｌ）：６．９５４ＮａＣＩ，０．３４３
３，０．１８７ Ｎａｉｌ２Ｐ０４＂２Ｈ２０，Ｏ．１６６ ＣａＣｌ２，０．２４４ ＫＣＩ，１．２６０ＮａＨＣＯ－
Ｍ：ｇＣｌ２・６Ｈ２０，１．０９０葡萄糖，ＰＨ＝７．２￣７．４）；二甲基亚
砜（ＤＭＳＯ，ＳＩＧＭＡ．Ｉｎｃ）；其它试剂为分析纯；实验用水为超纯水。 １．３仪器Ｓｈｉｍａｄｚｕ ２０Ａ高效液相色谱仪（包括ＤＧＵ．２０Ａ３在线脱气机、ＣＴＯ．２０Ａ柱温箱、 ＳＩＬ．２０Ａ自动进样器、ＬＣ．２０ＡＤ二元高压梯度泵、ＳＰＤ．２０Ａ二极管阵列检测器）；ＬＣｓｏｌｕｔｉｏｎ色谱 工作站（日本岛津公司）；ＨＣ．３０１８Ｒ型低温冷冻高速离心机（合肥科大创新股份有限公司）；ＲＰＬ．ＺＤＩＯ 型装柱机（大连日普利科技仪器有限公司）；ＤＭＴ血管张力测量系统（Ｄａｎｉｓｈ ＭｙｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＡＩＳ
１．５细胞膜色谱研究
１．５．１样品制备精确称量一定量的对照药品，用甲醇溶解，分别配制浓度为２．０ ｍｇ・ｍＬ－１的储备
液，置于４０Ｃ保存；实验前用流动相分别稀释成５０嵋・ｍＬｌ的对照药品溶液，供测试。 １．５．２血管平滑肌细胞膜的制备健康ＳＤ大鼠购自西安交通大学医学院动物中心，重约２５０
ｇ。
断颈处死后，迅速取出胸主动脉，置于预冷的生理盐水中洗尽血污。在显微镜下，剥去附着在胸主 动脉上的脂肪及外膜，并用钝针头破坏内膜，保留白色中膜，即得到血管平滑肌组织【２１。按照文献
５
１０
ｃ／ｍｏｌＬ＂１（ｘｌｎ
第二届中国西部药物分析学术研讨会
图３ ３种化§物在ｍ菅平滑肌细胞膜也谱模型
２０１０年１０月－西安
中的保留
＾．欧前胡素，Ｂ．尼＃№平，Ｃ一异欧前胡素；自胞 膜色谱柱ｌ
０
０…２
凹４欧前胡索和异欧前削素的脚拟台曲线
细胞聪色谱柱１０ｌ｜ｌｒｎ×２
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图ｌ
欧前胡素（ＩⅧ）、异欧前胡素
图２欧前胡素（ＩＭＰ）、异欧前胡素 （ＩＳＯ）和尼群地平舒张大鼠脑基底动 脉的量效曲线
（ＩＳＯ）和尼群地平舒张大鼠肠系膜动 脉的量效曲线
２．２细胞膜色谱
＾
Ｏ
ｘ
ＰＢＳ溶液洗涤五次后，放置过夜。在２．０×ｌＯ Ｐａ的压力
ｎｌＭ ｐＨ ７．４磷
７
２．０ ｍｍ，Ｉ．Ｄ．）。
１．５．４细胞膜色谱条件流速０．２ ｍＬ・ｍｉｎ～，柱温３７ ｏＣ，进样量５此。流动相为５
胡素３１１
ａｍ。
酸盐缓冲液或三蒸水。３种化合物的紫外检测波长分别为尼群地平２３７ ａｍ，欧前胡素３０１ ａｍ，异欧前 １．５．５置换实验将一定量的钙离子通道拮抗剂尼群地平配置在流动相中，并按浓度由低到高通 过血管平滑肌细胞膜色谱柱，将欧前胡素和异欧前胡素分别进样，以两者保留因子∥对尼群地平浓 度ｃ（ｍｏｌＬ－１）作图，即可得到竞争和置换方面的信息。 １．６分子对接研究１４１利用ＳＹＢＹＬ ７．０软件模拟欧前胡素，异欧前胡素，尼群地平与电压依赖 Ｌ．型钙通道的ａ一１Ｃ亚单位（ＰＤＢ ＩＤ：３Ｇ４３）的结合方式进行分子对接研究。用ＳＹＢＹ／素描模板对基 板进行构造，并用鲍威尔准则的分子力学方法，并按收敛法则设置在Ｏ．０５千卡／（Ａ摩尔）进行优化， 并用Ｇａｓｔｅｉｇｅｒ－ＨＯｃｋｅｌ方法进行分配。用Ｓｙｂｙｌ／ＦｌｅｘＸ模板进行对接研究，在ａ．１Ｃ亚基距ＩＲＥＳＳＡ Ａ的残余物被认为是活性中心。在程序中隐含的其他参数保持默认的对接。 ２．结果 ２．１离体血管舒张作用 欧前胡素、异欧前胡素和尼群地平均能舒张大鼠肠系膜动脉和脑基底动脉。对肠系膜动脉，欧 前胡素的最大舒张率（Ｅｍａｘ）和ｐＥＣ５０为９７．３＋１．１％和５．６３士－０．２２；异欧前胡素的Ｅｍａｘ和ｐＥＣ５０为 ９５．７＋０．９％和５．５４士０．１７：尼群地平的Ｅｍａｘ和ｐＥＣ５０为９８．３＋１．４％和８．４３ｉ－０．１４（图１）；对脑基底动脉， 欧前胡素的Ｅｍａｘ和ｐＥＣ５０为５９．６＋３．９％和５．２６：Ｌ－０．１５；异欧前胡素的Ｅｍａｘ和ｐＥＣ５０为６３．７士１４．４％和 ４．９３＋０．２６；尼群地平的Ｅｍａｘ和ｐＥＣ５０８５．０士３．６％和７．９９ａ：０．０８，（图２）。
６１０Ｍ）：
Ｉｎｃ．
１．４欧前胡素和异欧前胡素对离体血管舒张作用的比较将大鼠断颈处死后，取出肠系膜动脉
及脑基底动脉，在预冷的Ｋｒｅｂｓ液中，制成长３ ｒｎｌｎ的血管环标本。血管环标本用细钢丝与ＤＭＴ血 管张力测量系统相连，并连接电脑以记录血管张力的变化。血管环标本平衡于用９５％氧气５％二氧 化碳混合气体饱和的Ｋｒｅｂｓ液中，保持温度在３７℃。调零至血管张力不再有较大变化。调零后，给 予３ ｍＮ预张力，３０ ｍｉｎ内调节预张力至稳定。之后，让血管环标本在３７℃、混合气体饱和的Ｋｒｅｂｓ 液中平衡９０～１２０ ｍｉｎ（其间每隔２０ ｍｉｎ换一次Ｋｒｅｂｓ液）。 平衡时间结束后，将浴槽中的Ｋｒｅｂｓ液定容到６ ｍＬ，用３×１０由ｍｏｌ／Ｌ的ＮＥ使血管收缩。待获 得稳定的收缩反应后，向浴槽中分别依次加入欧前胡素、异欧前胡素的浓度梯度溶液，使浴槽中浓 度依次达到ｌｘｌ０‘一，３ｘ１０４，ｌｘｌ０击，３ｘ１０击，ｌｘｌ０～，３ｘ１０一，ｌｘｌ０‘４ ｍｏｌ／Ｌ，记录血管张力变化。对 照组加入相应浓度梯度的Ｎｉｔｒｅｎｄｉｐｉｎｅ。以血管的舒张率（％）对药物浓度的对数（１０９ ｃ）作图，即 可得到欧前胡素和异欧前胡素的血管效应曲线。