2000 竹叶中黄酮提取方法的研究 许钢 分析化学研究简报
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关于竹叶中总黄酮提取工艺研究 2012-12-24 【编者按】：医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。
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关于竹叶中总黄酮提取工艺研究 【摘要】目的用正交试验法优选淡竹叶中总黄酮的提取工艺。
方法以20 g原药材的总黄酮提取量为评价指标,选择乙醇用量(倍)、提取时间(h)、提取次数(次)为考察因素,采用正交试验法L9(34)确定醇提取淡竹叶中总黄酮的最佳工艺。
结果最佳提取工艺条件为75%乙醇18倍量提取1.0 h,共提取1次,乙醇用量为显著影响因素。
结论首次进行了淡竹叶总黄酮正交提取工艺的研究,结果比较可靠。
【关键词】淡竹叶;总黄酮;正交试验 Abstract：Objective To study the optimum ethanol extraction process of total flavonoids in Lophatherun gracile Brongn. Methods The extraction of total flavonoids was choosen as the assessment index. Ethanol volumn extracting time and times were the studing factors. The optimum ethanol extraction process was selected with the orthogonal design. Results The optimum ethanol extracting process conditions were as follows：adding 18 fold of 75% ethanol, extracting for 1.0 h and one in all. Ethanol dosage was the predominant influencing factor. Conclusion This optimum extradion process of total flavonoids in Lophatherum gracle Brongn is reliable. Key words：Lophatherum gracile Brongn;total flavonoids;orthogonal design 淡竹叶为禾本科多年生草本植物淡竹叶(Lophatherum gracile Brongn.)的干燥茎叶,主产于河南、安徽、江苏、浙江、福建、广东、广西等地。
竹叶黄酮的提取工艺研究
竹叶又称为淡竹叶，属单子叶植物中的禾本科，竹亚科，其形态各异，多数为杆茎直立，但也有少数蔓生或攀生。
竹叶在我国具有非常悠久的食用和药用历史[1]。
据《本草纲目》记载，竹叶性冷，无毒，主治口疮目痛，明目利九窍，治不睡，止消渴，解酒毒，发汗，疗中风暗哑[2]。
又据古代药典《本草求真》记载：竹叶具有“凉心缓脾。
清痰止渴，为治上焦风邪烦热，咳逆顺促，呕秽吐血，一切中风惊痫”等症。
现代研究表明，竹叶中含有大量的黄酮类化合物和具有生物活性的多糖等有效成分，此外竹叶中的酚酸类化合物、蒽醌类化合物、萜类内酯、生物碱等都具有较强的抑菌杀菌作用。
由此可看出竹叶具有很高的应用价值。
在人体内的新陈代谢过程中，会产生大量超氧自由基和羟基自由基等活性氧自由基，而人体内也有一套内源性SOD–Px能清除这些活性氧化自由基，使之低于一定的水平，而不至于造成生物膜脂质被氧化。
生物膜脂质的氧化分解会导致皮肤弹性降低，细胞膜的通透屏障发生改变[3]。
黄酮及其甙类化合物广泛存在于自然界，是许多中草药的有效成分之一。
大量的研究表明，黄酮素SOD和GSH–Px ，既有清除人体内活性氧化自由基以防止生物膜脂质被的作用，因此，具有改善心血管系统功能，改善脑组自由基氧化的作用，亦有类似于VE织营养和脑神经系统功能等重要的生理功能和抗癌、防衰老、防止血管硬化、预防老年性痴呆的药理作用。
在这些基础上，浙江大学生物系统工程和食品科学学院研制成功具有世界领先水平的黄酮类产品——竹康宁胶囊以及片剂型产品，被卫生部批准为国产保健品[4]。
研究表明竹叶黄酮以C–糖甙黄酮为主，因此具有结构稳定，亲水性强，能深入病灶部位等特点，工艺品质优良，故适宜于各种剂型的开发。
本文对竹叶中的有效成分黄酮的提取工艺进行了研究，找出了最优的提取条件，并对传统的黄酮测定方法进行了改进和黄酮水溶液的稳定性作了检查，以期为竹叶黄酮工业化生产及对竹资源的深入利用提供实验依据。
1器材1.1 材料毛竹叶（07年3月摘自成都大学校园内）芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）无水乙醇（C2H5OH ，分析纯，成都科龙化工试剂厂）亚硝酸钠（NaNO2，分析纯，吉林省军区化工厂）硝酸铝（Al(NO3)3 ,分析纯，重庆申渝化学试剂厂）氢氧化钠（NaOH ，分析纯，伊嘉利工贸有限公司（中国上海））1.2 仪器可见分光光度计（7200型，尤尼科（上海）仪器有限公司）离心沉淀机（800型，上海手术器械十厂）电子天平（BS110S型，北京赛多利斯天平有限公司）恒温水浴锅（上海科析实验仪器厂）旋转蒸发仪电热保温干燥箱（重庆实验仪器厂）2原理及方法2.1原理2.1.1 竹叶选取：我国竹种资源丰富，现有竹林面积为700万hm2，其中毛竹林就有300万hm2，是我国分布最广，面积最大，用途最多的竹种，在竹业生产中占有重要的地位[5]。
竹叶中黄酮提取分离及抗氧化活性研究
竹叶中黄酮提取分离及抗氧化活性研究摘要：采用体积分数95%的乙醇浸提与超声波相结合的方法提取竹叶黄酮，并通过邻苯三酚自氧化法和Fenton反应测定其抗氧化性能。
结果表明，竹叶黄酮的提取率为5.30%，粗提物中黄酮的含量为13.90%。
0.2 mL 1 mg/mL竹叶黄酮对超氧阴离子自由基（O2-·）的清除率为17.39%；0.7 mL 1 mg/mL竹叶黄酮对羟基自由基（·OH）的清除率为58.20%，表明竹叶黄酮有优良的抗氧化活性。
关键词：竹叶；总黄酮；提取；抗氧化Extraction of Flavonoids from Bamboo Leaves and Their Antioxidant ActivityAbstract：Total flavonoids were extracted from bamboo leaves by 95% ethanol as solvent and ultrasonic. The oxidation activity of flavonoids in bamboo leaf was determined by the methods of pyrogallol autoxidation and Fenton reaction. The results showed that the extraction yield of flavonoids from bamboo leaf was 5.30%，and the content of flavonoids in the crude extract was 13.90%. The clearance rate of O2-· by 0.2 mL 1 mg/mL bamboo leaf flavonoids was 17.39%；while the clearance rate of ·OH by 0.7 mL 1 mg/mL bamboo beaf flavonoids was 58.20%，it showed that flavonoids in bamboo leaf had good antioxidant activity.Key words：bamboo leaf；total flavonoids；extraction；antioxidant activity竹叶在中国有着悠久的食用和药用历史，其性淡、寒、味甘、微涩，具有清热利尿、明目解毒、止血、免疫调节、抗氧化、抗艾滋病和抑制肿瘤等功效，且无毒无害，可作为绿色食品进行开发。
竹叶黄酮的提取、检测、分离、抗氧化活性及构-效关系的研究
摘要
竹叶黄酮是我国新开发的一种植物类黄酮制剂，由于其具有优良的抗自由基、 抗氧化、抗衰老、及保护心血管等方面的生物学功效，目前已受到国内外市场的 广泛关注。为了全面考察竹叶黄酮的性质，本论文采用天然的刚竹属毛竹叶为原 料，对竹叶黄酮的提取、含量检测、分离纯化、抗氧化活性及构-效关系等方面作 了较系统的研究，主要研究内容和实验结果如下：
II
英文摘要
the antioxidant activity-structure relationship of flavonoids. From the above series experiments, it was proved that the bamboo leaves
flavonoids was a excellent flavonoids prepration. The research provided important theoretical and pratical guidances for exploiting and using of bamboo resource. Key words: bamboo leaves flavonoids, extraction, enrichment, antioxidant,
近年来，自由基生命科学的进展，使具有强抗氧化和清除自由基作用的类黄 酮受到空前的重视。二十世纪 80 年代以来，有研究报导[4-5]从竹叶中提取食品防腐 剂、杀菌剂和叶绿素等；90 年代以来，人们开始关注竹叶中黄酮类化合物的存在 及其生物学活性[6-9]。1998 年，我国研究人员在借鉴国内外植物黄酮提取方面的各 种专利技术的基础上，结合竹叶中黄酮类化合物存在的特点，创造了经济、适用、 独特的提取工艺，获得了国家发明专利，并率先在浙江实现了产业化生产，至此， 竹叶黄酮提取物正式面世。同年，(淡)竹叶被卫生部正式批准列入了“药食两用的 天然植物名单”[10]。1999 年竹叶黄酮获国家级新产品证书，其衍生产品---竹康宁 胶囊获卫生部保健食品批文，竹叶啤酒和竹叶饮料等也纷纷上市[11]。
竹叶中总黄酮的纯化工艺研究
ｃ ｌ ｍｎ ａ ｓ ｒ ｔ ｎ ｍｅｈ ｄ ｕ ｅ ｕ ｆ ａｉ ｎ ｔｃ ｎ ｑ ｅ ｏ ａ ｏ ｅ ｒ ｍ ａ ｏ ｅ ｖ ｓ ｉ ｓｍｐ ｅ ｗ ｔ ｉｈ ｙｅ ｄ ａ ｄ ｏｕ ｂ ｏ ｐ ｉ ｔｏ ｓ ｄ ｉ ｐ ｒ ｃ ｔ ｅ ｈ ｉｕ ｆｆ ｖ ｎ ｓ ｆ ｏ ｎ ｉ ｉ ｏ ｌ ｏ ｂ ｍｂ ｌａ ｅ ｓ ｉ ｌ ｈ ｈ ｇ ｉｌ ｎ ｉ
Ｌ ＩＷｅ －ｕ Ｅ ｎｈ ｉ，Ｌ Ｕ ｉｎ ， Ｉ ｉ Ｉ Ｑ ａ ｇ Ｌ Ｕ Ｌ
（ ｏｔｅｎＭｅ ｉ ｌ ｎｖｒ ｔ，Ｃ ｌ ｇ ｆ Ｃ Ｓｕｈ ｒ ｄｃ ｉｅｓｙ ｏ ｅｅｏ Ｍ，Ｇ ａ ｇｈｕ５ ０ １ ） ａＵ ｉ ｌ Ｔ ｕｎ ｚｏ １５ ５
Ａｂ ｔａ ｔ ｏ ｏ ｔ ｚ ｈ ｕ ｆ ａｉ ｎ ｔ ｃ ｎ ｑ ｅ ｏ ａ ｏ ｅ ｒ ｍ ａ ｏ ｅ ｖ ｓ ｂ ｏ ａｉ ｇ ｔｅ ｄ ｆ ｒ ｎ ｘｒ ｃｉｎ ｓ ｒ ｃ ：Ｔ ｐ ｉ ｅ ｔ ｅ ｐ ｒ ｃ ｔ ｅ ｈ ｉ ｕ ｆｆ ｖ ｎ ｓ ｆ ｍｉ ｉ ｉ ｏ ｌ ｏ ｂ ｍｂ ｏ ｌ ａ ｅ ｙ ｃ ｍｐ ｒｎ ｈ ｉ ｅｅ ｔ ｅ ｔａ ｔ ｏ
关键 词 ：竹 叶 ；黄酮 ；异荭草苷 ；紫外分光光度法 ；高效液相色谱法 ；聚酰胺柱分离法 中图分类 号 ：Ｔ ２ ２ １ Ｓ０ ． 文献标 识码 ：Ａ 文章编号 ：１０ ０６—２ １ （０ １ ６— １９— ４ ５ ３ ２ １ ）０ ０ ０ ０
Ｓ ｕ ｙ ｏ ｕ ｉｃ ｔ ｎ ｔ ｃ ｎｑ ｅ ｏ ｌｖ ｎ ｓ ｆ ｍ ａ ｏ ａ ｅ ｔ ｄ ｆｐ ｒ ｉａ ｉ ｅ ｈ ｉｕ ｆ ａ ｏ ｅ ｒ ｆ ｏ ｆ ０ ｂ ｍｂ ｏ ｌ ｖ ｓ ｅ
ｐ ｒ ｙ ｔｈ ｓｎ ｏｌ ｔ ｎ ａ ｄ Ｃ ｅ ｕ ｅ ｎ ｌｒ ｅ—ｓ ａ ｅ ｐ ｏ ｕ ｔ ｎ ｕ ｔ ．Ｉ ａ ｏ ｐ ｌ ｉ ｎ ａ ｂ ｓ ｄ ｉ ａｇ ｉ ｕｏ ｎ ｃ ｌ ｒ ｄ ｃｉ ． ｏ
竹叶黄酮提取工艺的研究
ｌ 材 料 与 方 法
处测定 吸光度 值 Ａ 。然 后 以芦 丁作 为 标 样 ， 定 时 测 最大 吸收波 长为 ５ ０ｎ 工作 曲线 方程 为 ：（ ｇ ｍ ） １ ｍ， Ｙｍ ／ １
０ ７３ ９ ＋０ ０ ０ １９４ Ａ 为 吸 光 度 值 ， ２＝ ． ９ Ａ ． ０ ８ ， Ｒ
全性 Ｌ Ｊ ２ 。最新 研究 表 明 ， 叶 黄 酮还 具 有 明 显 的 竹
１３ １ 黄 嗣 的测定 移 取 ５ Ｉ 提 取液 于 ２ ｌ比 ．． ｌ ｎ ５Ｉ Ｔ １ 色管 中 ， 浓度 ３ ％ 乙醇 １ ｌ０ ７ｍ ａ Ｏ 溶 液 加 ０ ０ｍ ， ． ｌ Ｎ ２ Ｎ 摇匀 ， 放置 ５ｍ ｎ 加 ０ ７ｍ ＩＮ ３ ｉ后 ． ｌ （ ０ ） 液摇匀 ， Ａ 溶 放 置 ６ｍ ｎ后加 入 浓度 １ｍ ｌＬＮ Ｏ ｉ ｏ ａ Ｈ溶 液混 匀 ， 浓 ／ 用
１ １ 实验 材 料 ．
慈竹竹 叶采 自湖南 益 阳 ， 净 后 自然 晾 干 ， 洗 在
＝
０，９ ， 算 出总 黄 酮 量 ， 到 总 黄 酮 提 取 率 【 ９ ８８ 计 得 。
６ ０℃烘箱 中烘干 １ ， 碎后 过 ４ ０ｈ 粉 ０目筛备 用 。 １ ２ 试 剂 与 仪 器 ．
竹叶 黄 酮 具 有 抗 活 性 氧 自由基 能 力 和类 Ｓ Ｄ Ｏ
竹叶总黄酮的提取和测定
竹叶总黄酮的提取和测定实验目的：1.了解总黄酮类化合物的一般制备实验原理及方法2.掌握总黄酮类化合物的制备方法和测定方法3.培养验证和解决某一实际问题的能力和创新意识实验原理：1．竹叶中含有大量总黄酮化合物，竹叶中黄酮类物质的相对极性决定了竹叶中含有的大量黄酮类物质可用较大极性的溶剂（乙醇）提取。
材料和用品：1. 药品竹叶、芦丁标准品、75%乙醇﹑70%乙醇、60%乙醇、5%亚硝酸钠、10%的硝酸铝溶液、l mol/ L 氢氧化钠溶液2 仪器粉碎机、60目筛、恒温水浴锅、真空干燥箱、紫外—分光光度计、50ml容量瓶、10ml容量瓶、电子天平、滤纸、漏斗、烧杯、量筒、玻璃棒方法与步骤：1总黄酮提取⑴将竹叶干燥粉碎过60目筛。
⑵称取50g竹叶粉三份，分别加入体积分数75%的乙醇500ml、1000ml、1500ml.⑶ 70℃水浴提取1.5h后过滤取滤液。
⑷将三份滤液混合后水浴蒸发浓缩（温度不宜过高）待乙醇蒸发完后，将浓缩液置于真空干燥箱中干燥成疏松固体，粉碎得终产物。
⑸称量计算产率。
2总黄酮的测定⑴标准液的配制精确称取芦丁标准品10mg,置于50ml容量瓶中，加60%乙醇适量，水浴微热使溶，放冷，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀即得0.2g/L的标准溶液。
⑵标准曲线制作精密吸取标准液0.0﹑1.0﹑2.0﹑3.0﹑4.0﹑5.0ml,分别置于10ml容量瓶中，各加60%乙醇溶液使成7ml，精密加入5%亚硝酸钠0.3ml，摇匀，放置6min,精密加入10%的硝酸铝溶液0.3ml，摇匀, 放置10 min, 加入l mol/ L 氢氧化钠溶液2 mL. 分别用60%乙醇稀释至刻度, 摇匀,放置10 min ，在510 nm 处测吸光度,⑶样品溶液配制称取1.5g样品，置于50ml容量瓶中，加60%乙醇适量，水浴微热使溶，放冷，用60%乙醇稀释至刻度。
⑷样品溶液测定精密吸取1.0ml样品液，置于10ml容量瓶中，各加60%乙醇溶液使成7ml，精密加入5%亚硝酸钠0.3ml，摇匀，放置6min,精密加入10%的硝酸铝溶液0.3ml，摇匀, 放置10 min, 加入l mol/ L 氢氧化钠溶液2 mL. 分别用60%乙醇稀释至刻度, 摇匀,放置10 min ，在510 nm 处测吸光度, 测三次取平均值。
竹叶黄酮的提取方法
竹叶黄酮的提取方法竹叶黄酮是从竹叶中提取的一种主要黄酮类化合物，具有多种药理活性和保健功效。
竹叶黄酮的提取方法一般可分为溶剂提取法、超声波辅助提取法和微波辅助提取法等。
下面将对这些提取方法进行详细的介绍。
1. 溶剂提取法：溶剂提取法是最常用的竹叶黄酮提取方法之一。
首先将竹叶破碎成粉末，并根据需要进行干燥处理。
然后将竹叶粉末与适量的有机溶剂（如乙醇、甲醇、乙酸乙酯等）进行浸泡，使竹叶中的黄酮化合物溶解在有机溶剂中。
接下来使用搅拌器辅助搅拌，提高溶剂中黄酮的溶解度。
最后，使用离心机对溶液进行离心分离，将溶液中的杂质去除，从而得到竹叶黄酮的溶液。
2. 超声波辅助提取法：超声波辅助提取法利用超声波的机械效应和热效应来提高竹叶黄酮的提取效率。
首先将竹叶破碎成细小颗粒，并加入适量的溶剂。
然后通过超声波设备对竹叶和溶剂进行处理，超声波波动将加速溶剂中黄酮的释放和扩散。
超声波的热效应可以加速溶剂的挥发，使黄酮更易于溶解在溶剂中。
最后，利用离心机对溶液进行分离，得到竹叶黄酮的提取液。
3. 微波辅助提取法：微波辅助提取法利用微波的加热效应和非热效应来加速竹叶黄酮的溶解和扩散。
首先将竹叶破碎成细小颗粒，并加入适量的溶剂。
然后将竹叶和溶剂放入微波辅助提取仪器中，通过微波的辐射加热，使溶剂中的黄酮化合物溶解。
此外，微波还可以通过破坏细胞壁和改变黄酮的分子结构，加快竹叶黄酮的释放和扩散。
最后，使用离心机对提取液进行分离，得到竹叶黄酮的溶液。
总结来说，竹叶黄酮的提取方法有溶剂提取法、超声波辅助提取法和微波辅助提取法等。
不同的提取方法在提取效率和工艺复杂度等方面存在差异，具体选择方法需根据实际情况进行抉择。
同时，为了保证提取得到的竹叶黄酮的质量和纯度，还需进行后续的分离、纯化和检测工作。