第一章 植物组织培养实验室的构建和操作技术
植物组织培养技术1-任务一 植物组织培养实验室的构建
任务一、植物组织培养实验室的构建
主要内容
任务一、植物组织培养实验室的构建 任务二、培养基及其配制 任务三、植物组织培养快繁 任务四、植物脱毒技术
任务五、常见园林植物的脱毒与快速繁殖
《植物组织培养技术》教学课件
任务一 植物组织培养实验室（车间）的构建
子任务一 实验室的设计与要求 子任务二 主要仪器设备和器皿用具
《植物组织培养技术》教学课件
子任务一 实验室的设计与要求
❖ 5、辅助实验室 ❖ (2)生化分析实验室 ❖ 以培养细胞产物为主要目的实验室，应建立相应的分析化验实验室，随时
对培养物成分进行取样检查。以大型次生代谢物生产为主要目的组织培养， 还需要有效分离实验室。
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和培养物的转移； ❖ 组织培养的核心工作在此完成。 ❖ 要求：干爽安静、清洁明亮，宜小不宜大。 ❖ 设备：无菌操作室安装有紫外灯和空调，工作台和搁架，还有超净工作台
和整套灭菌接种仪器、药品等。
一般新建实验室的无菌室在使用之前应进行灭菌处 理，处理方法是甲醛和高锰酸钾熏蒸，并需定期灭 菌处理，还可用紫外线照射1-2h/周，或每次使用前 照射10-30min。
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子任务一 实验室的设计与要求
❖ （三）基本组成
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任务一 植物组织培养实验室（车间）的构建
《植物组织培养技术》教学课件
1植物组织培养实验室的构建
1植物组织培养实验室的构建引言：植物组织培养实验室是一个能够提供最优化环境以促进植物生长和繁殖的重要设施。
它是一个多功能的实验室，包含各种设备和材料，可用于植物无菌培养、植物细胞和组织培养、诱导和快速繁殖、遗传转化、基因工程等研究。
本文将详细介绍植物组织培养实验室构建所需的关键要素和步骤。
一、基础设施的建设：1.实验室环境：植物组织培养实验室应建在相对封闭、无尘、无菌的环境中，以确保无菌培养的成功。
2.实验室空间：实验室应有足够的空间容纳各种植物培养设备和工作台，同时设有储藏室存放培养基和试剂等物品。
3.空气处理系统：安装空气净化系统，通过合适的过滤器去除空气中的微生物和颗粒，保持实验室的无菌环境。
4.温度和湿度控制：安装温度和湿度控制设备，保持恒定的温湿度条件有利于植物生长和繁殖。
通常，实验室温度控制在20-25°C，湿度控制在60-70%之间。
二、常用设备及仪器的配置：1.生物安全柜：生物安全柜是进行无菌操作和暴露于植物组织培养物的标准操作。
实验室需要配置一台II级生物安全柜，以确保实验者和培养物的安全。
2.恒温培养箱：用于提供恒定的温度和湿度条件。
可根据需要配置多台，同时实验最佳温度选择可依研究对象的特殊要求进行调整。
3.高效洁净工作台：用于进行植物材料的取样和处理，确保操作时的无菌性。
根据需要可配置多台。
4.无菌操作台：用于进行植物组织培养物的分离和培养，保持培养物的无菌状态。
5.显微镜：用于观测植物细胞组织的结构和形态，进行植物培养过程的监测和操作。
6.高速离心机：用于沉淀植物细胞和组织，在分离和培养过程中常常需要进行细胞分离和培养基的制备。
7.培养箱：用于保存培养基和试剂等物品，保持其干燥和无菌状态。
三、试剂和培养基的准备：1.培养基种类：根据研究目的和需要，准备不同种类的培养基，包括无菌试管培养基、无菌培养碟、液体培养基等，以适应不同组织培养和繁殖的需求。
2.培养基配方：根据研究需求和组织培养的目的，准备不同种类的培养基配方，包括基本培养基、选择培养基、植物生长调节剂的添加等。
植物生物技术 第一章 植物组织培养实验室的构建与无菌操作技术
第一章
本章主要内容
第一节、植物组织培养实验室建设 第二节、培养基配制 第三节、植物组织培养离体操作技术
第一章
本章教学目的与要求
了解植物组织培养实验室的基本设置 掌握培养基的选择及配制方法 掌握基本的无菌操作技术
第一章
第一节 植物组织培养室建设
低速离心，使用80~100g的离心力即可，太大有时可能引起细胞 的损伤。因此配置4000rpm的国产台式离心机，离心速度 1000rpm即可。
第一节
（三）培养设备
第一节
1. 空调 作用：控制培养温度 2. 加湿器和去湿机 作用：控制培养室内湿度状况
3. 定时器 作用：控制光照时间 4. 培养架 作用：盛放培养物
元素 作用：提供植物生长所需营养元素
第二节
（三）有机营养成分---糖类
最常用的碳源是蔗糖和葡萄糖 使用浓度为2%－5% 作为植物生长发育所需的营养物质 调节培养基中的渗透压
第二节
（三）有机营养成分---维生素
硫胺素（VB1）一般认为是一种必需的成分 吡哆醇（VB6），烟酸（VB3），泛酸钙（VB5）和肌醇也都能显著
第二节
其中IBA和NAA广泛用于生根，并能与细胞分裂素互作促进茎的增殖 2，4-D对于愈伤组织的诱导和生长非常有效
2，4-D+KT
IBA+KT
第二节 （四）植物生长调节剂—细胞分裂素
细胞分裂素影响植物细胞分裂、顶端优势的变化和茎的分化等 常用的细胞分裂素有：BAP（苄氨基嘌呤）、6—BA（苄基腺膘呤）、2—
第二节
一、培养基的构成
（一）水分
类型：蒸馏水 作用：构成培养基的主要成分
植物组织培养实验室构建
植物组织培养实验室构建概述植物组织培养实验室是进行植物细胞培养、愈伤组织培养、植物遗传转化等实验的重要场所。
建立一个高效的植物组织培养实验室对于开展植物生物技术研究至关重要。
本文将介绍植物组织培养实验室的构建步骤及相关设备和操作流程。
步骤1. 确定实验室位置植物组织培养实验室应设置在通风良好、光线充足的环境中，并且远离其他实验室以避免交叉污染。
实验室的位置选择也应考虑到未来扩建或改造的可能性。
2. 设计实验室布局实验室布局应合理，设备摆放应符合操作流程，同时要考虑实验室的通风、安全和卫生条件。
实验台、培养室、设备间等区域的划分要清晰明了。
3. 购置必要设备植物组织培养实验室需要配备必要的设备，包括无菌工作台、培养箱、显微镜、离心机、恒温培养箱等。
设备的选择应考虑实验需求和预算。
4. 保障实验室安全实验室安全是第一位的，必须确保实验室的电路、水源等设备安全可靠，设备操作人员应接受相关安全培训，并且定期进行检查和维护。
5. 制定实验操作规程建立完善的实验操作规程是保证实验结果准确可靠的关键。
制定实验操作规程时应考虑到每个操作步骤的细节，包括消毒步骤、培养条件控制等。
6. 建立实验室管理制度建立实验室管理制度有利于实验室的日常管理和运行。
管理制度包括实验室卫生、设备维护、实验记录等方面，确保实验室的正常运转。
操作流程1.准备工作–检查实验室设备是否正常运转。
–准备培养基、试剂和实验器具。
2.植物组织采集–从健康植物中采集需要的组织。
–进行消毒处理。
3.组织培养–将组织放入无菌条件下的培养基中进行培养。
–控制培养条件，如温度、光照等。
4.植物遗传转化–遗传工程操作，将外源基因导入植物组织中。
–过筛、筛选转化株。
5.结果分析–观察转化效果，记录实验数据。
–分析实验结果，撰写实验报告。
结论建立一个高效的植物组织培养实验室需要全面考虑实验室的位置选择、布局设计、设备购置等方面。
制定操作规程、建立管理制度是保证实验室运行的基础。
植物组织培养实验室的构建和操
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3） 消毒间
配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细 菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择 应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实 验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的 实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。 生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。
如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成 一个准备间，要求是设备的安装和排列要合理、房 间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、防滑。
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2）培养基配制间
面积60平方米左右，配备的主要仪器设 备有 ：冰箱、天平、微波炉、pH计、培养 基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电 炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管 、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱 以体积180-200L为宜，用于储存培养基母 液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、 及保存植物材料。天平应有不同感量。
PHS-802中文台式酸度计
通用型或经济型酸度计43
（三）观察分析仪器设备
显微镜 类型： 倒置显微镜 普通显微镜 荧光显微镜 电子显微镜 体视显微镜
第一章 组培的基本条件及一般技术
一、实验室设置及仪器设备
实验室是进行组培研究的主要场所 ，应能满足清洗、培养基制备、储 藏、无菌操作、培养、鉴定等多方 面的工作。
第一章 组培的基本条件及一般技术
1.构成与配置
准备室
缓冲室 基本实验室 无菌操作室
实验室 组成
培养室
细胞生物学实验室 辅助实验室 温 室
第一章植组物培组的基织本培条件养及一般技术
▪ 第一章 植物组织培养实验室的构建 和操作技术
第一章 组培的基本条件及一般技术
第一节 实验室及主要设备
第一章 组培的基本条件及一般技术
2第一章__组织培养实验室及操作技术
第一章组织培养实验室及操作技术第一节实验室设置及基本技术组织培养实验室必须满足三个基本的需要，即：实验准备，包括培养基配制、洗涤与灭菌等；无菌操作；控制培养。
一．实验室组成1、准备室准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。
要求宽敞明亮，通风条件好。
2、缓冲室缓冲室的功能主要是工作人员进行工作服装、口罩拖鞋等的更换，也是其他实验室电力控制器的安装场所，需安装紫外灯进行灭菌。
3、无菌操作室接种室的功能是进行无菌操作。
要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无菌。
房间一般不宜过大，其规模根据实验需要而定。
接种室除了出入口和通气口外，应行密闭。
4、培养室培养室的功能是对离体材料进行控制培养。
其首要要求是要能控制光照和温度，其次为防止微生物感染，培养室应保持干燥和清洁。
主要设备应有培养架子、灯光、通风设施、边台等。
另还应具有空调机、除湿机、温度湿度计、换气扇等。
5、驯化室通常在温室的基础上营建，要求清洁无菌，配有空调机、加湿器、恒温恒湿控制仪等。
6、温室内配置有温度控制装置、通风装置、光照调节装置、杀菌杀虫工具等。
7、细胞学实验室其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。
要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。
8、生化分析室在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。
组织培养实验室布局的总体要求是：便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察。
二．基本设备配制基本设备：冰箱、天平、酸度计、纯水器、电炉、培养基分装器、搅拌器。
灭菌设备：蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。
无菌操作设备：净化工作台、接种箱。
光温控制设备：时间程序控制器、空调及温度感应器。
细胞培养设备：培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、摇床等。
细胞学鉴定设备：光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜。
三．培养器皿及实验用具玻璃器皿新型材料器皿金属材质用具四．洗涤技术玻璃器皿洗涤：新购置的玻璃器皿，常有游离碱性物质，使用前，先用1%稀盐酸浸泡过夜（12h），然后用洗衣粉洗涤，清水冲洗，晾干备用。
第一章 植物组织培养实验室的构建和操作技术
实用文档
2）培养基配制间
面积60平方米左右，配备的主要仪器 设备有 ：冰箱、天平、微波炉、pH计、培 养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、 电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液 管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰 箱以体积180-200L为宜，用于储存培养基 母液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷 、及保存植物材料。天平应有不同感量。
生化分析实验室
基本实验室布局平面图
搁 水槽 架
搁 4.0 架 m
电 炉
门
实 验 台
准备室
4.5m
冰箱
无菌台
药
品
及 无菌台 仪
器 柜
无菌室
缓冲室
搁
拉 窗
培养架
培养架
架 培养室
培
培
养
养
架
架
3.0m
3.5m
实用文档
A Glimpse of Plant Tissue Culture
实用文档
第一章 组培的基本条件及一般技术
3.酸度计
陈列于制备室中 作用：测定培养基及酶制剂的pH值
PHS-802中文台式酸度实计用文档
通用型或经济型酸度计
第一章植组物培组的基织本培条件养及一般技术
▪ 第一章 植物组织培养实验室的构建和 操作技术
第一章 组培的基本条件及一般技术
第一节 实验室及主要设备
第一章 组培的基本条件及一般技术
主要内容
植物组织培养的设计原则 组培室的组成及其功能 无菌操作设备 常用工具 常用仪器设备
第一章 组培的基本条件及一般技术
第一章 组培的基本条件及一般技术
一、实验室设置及仪器设备
实验室是进行组培研究的主要场所 ，应能满足清洗、培养基制备、储 藏、无菌操作、培养、鉴定等多方 面的工作。
1 植物组织培养实验室的构建
医用手提式灭菌锅
不锈钢立式灭菌锅
3、超净工作台
陈列于操作室（接种室）内
类型：垂直式和水平式
作用：无菌操作
（二）药品贮存和配制仪器设备
1、冰箱
作用：低温保存材料，存 放药品、培养基母液、激 素、酶制剂。
2、天平
陈列于制备室中
作用：称取大量元素、微 量元素、酶制剂
3、酸度计
注意！ 实际应用中要通过试验筛选。
基本培养基对西洋杜鹃增殖的影响
三、培养基的配制
（一）培养基母液的配制
1.基本培养基母液 类型：四液式（钙盐最后加入）、三液式、 五液式（钙盐和铁盐单独配制）。 成分：大量元素、微量元素、铁盐、 有机成 分。 贮藏：2~4冰箱内贮藏。 倍数：10X、100X。 标记：名称、配制倍数、日期等。
取容器（搪瓷缸），加入1/3~2/3左右的蒸馏水，加热至沸腾； 称取定量的琼脂和蔗糖加入上述煮沸的水中并不断搅拌， 直到完全溶解。 用移液管量取所需量的母液加入一只干净的烧杯中， 待琼脂完全溶解后加入 用NaOH或稀HCl调节pH值 高压灭菌，（121℃，15 min~20min） 冷却，取出，备用
植物组织培养材料移到田间前，通常 先移到温室进行练苗，待生根成活后， 再移到大田。
二、仪器和设备
（一）无菌操作设备 １、烘箱：
作用：干燥洗后的器皿
高温干热灭菌 测定培养物的干重时烘干培 养材料。
2、灭菌锅
类型：普通医用消毒锅 大的高压灭菌锅
作用：培养基、水和各种用具的消毒
（四）培养设备 1.空调
作用：控制培养温度
2.加湿器和去湿机
控制培养室内湿度状况
3.定时器
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接种器械等。
无菌室（一）
无菌室（二）
（4）培养室
为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养 室的房间不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上排气 扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。天花板 和内墙最好用塑料钢板装修，地面用水磨石或瓷砖铺设 ，一般要分两间，一为光照培养室，一为暗培养室。培
2．辅助实验室
（1）鉴定室
细胞学鉴定室 其功能是对培养材料进行细胞学鉴定 和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器 不受潮湿和灰尘污染。应配置各种显微镜、照相系 统等。 生化分析室 在以培养细胞产物为主要目的的实验室 中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养 物的有效成分随时进行取样检查。 离心机、酶联免 疫检测仪、天平、PCR仪等。
• 实验室的大小应取决于工作的目的和规模 • 按组织培养流程来设计，避免某些环节倒
排，引起日后工作混乱 • 利用一定的设备、器材和特殊的实验室结
构设计，达到严格无菌的条件
一、实验室设置及仪器设备
实验室是进行组培研究的主要场所 ，应能满足清洗、培养基制备、储 藏、无菌操作、培养、鉴定等多方 面的工作。
（3） 无菌操作室
无菌操作室主要用于实验材料的接种操作，所以又叫 接种室。通常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于 准备工作，还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与 接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无 菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设 有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操 作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进入
3.5m
A Glimpse of Plant Tissue Culture
（1）准备室
• 所需器具的清洗、干燥和保存 • 培养基的配制和灭菌 • 生理生化测定等
组织培养准备实验室
1）洗涤间
根据工作量的大小决定其大小，一般面 积控制在30-50m2。在实验室的一侧设置 专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。中 央实验台还应配置2个水槽，用于清洗小型 玻璃器皿。如果工作量大，可以购置一台 洗瓶机。准备1-2个洗液缸，专门用于洗涤 对洁净度要求很高的玻璃器皿。此外还应 配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗 器等。地面应耐湿并排水良好。
3） 消毒间
配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细 菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择 应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实 验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的 实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。
生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。 如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成
1.构成与配置
准备室
缓冲室 基本实验室 无菌操作室
实验室 组成
培养室
细胞生物学实验室 辅助实验室 温 室
生化分析实验室
基本实验室布局平面图
搁 水槽 架
搁 4.0 架 m
电 炉
门
实 验 台
准备室
4.5m
冰箱 无菌台
药 品 及 无菌台 仪
器 无菌室
柜
缓冲室
搁
拉 窗Biblioteka 培养架培养架架 培养室
培
培
养
养
架
架
3.0m
一个准备间，要求是设备的安装和排列要合理、房 间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、防滑。
（2）缓冲室（注意门的朝向）
• 工作人员在此换上工作服、拖鞋，戴上口 罩
• 功能 减少人体从外界带入的尘埃等污染物。
• 要求 缓冲间需3-5平方米，应保持清洁无菌； 有清洁的实验用拖鞋、已灭菌过的工作服 ； 1-2盏紫外灯定时照射，对衣物及空间进 行灭菌。
植物组织培养
• 第一章 植物组织培养实验室的构建 和操作技术
第一节 实验室及主要设备
主要内容
植物组织培养的设计原则 组培室的组成及其功能 无菌操作设备 常用工具 常用仪器设备
组织培养实验室布局的总体要求
便于隔离 便于操作 便于灭菌 便于观察
实验室设计原则：保证无菌操作，达到工
作方便，防止污染。
3.定时器
• 控制光照时间
4.培养架
• 盛放培养物
5.摇床和旋转床
• 进行液体培养时用以改善气体状况
小型臭氧发生器
不锈钢蒸馏水器（单蒸水）
三、玻璃器皿及用具
（2）温室
为试管苗提供满足生长的适宜环境条件。
二、仪器和设备
（一）无菌操作设备
１.烘箱：
作用：干燥洗后的器皿
•
高温干热灭菌
•
测定培养物的干重时烘干培
•
养材料。
2.灭菌锅
• 类型：普通医用消毒锅
•
大的高压灭菌锅
• 作用：培养基、水和各种用具的消毒
医用手提式灭菌锅
不锈钢立式灭菌锅
3.超净工作台
• 陈列于操作室（接种室）内 • 类型：垂直式和水平式 • 作用：无菌操作
（二）药品贮存和配制仪器设备
1.冰箱 • 作用：低温保存材料，存
放药品、培养基母液、激 素、酶制剂。
2.天平
• 陈列于制备室中 • 作用：称取大量元素、微量
元素、酶制剂
3.酸度计
• 陈列于制备室中 • 作用：测定培养基及酶制剂的pH值
PHS-802中文台式酸度计
通用型或经济型酸度计
（三）观察分析仪器设备
• 显微镜 • 类型： • 倒置显微镜 • 普通显微镜 • 荧光显微镜 • 电子显微镜 • 体视显微镜
原生质体观察 染色体和叶片气孔观察 细胞活力观察 病毒检测、细胞器变化 形态分化的实体观察
（四）培养设备
1.空调 • 作用：控制培养温度 2.加湿器和去湿机 • 控制培养室内湿度状况
2）培养基配制间
面积60平方米左右，配备的主要仪器设 备有 ：冰箱、天平、微波炉、pH计、培养 基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电 炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管 、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱 以体积180-200L为宜，用于储存培养基母 液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、
及保存植物材料。天平应有不同感量。
养室外应有一预备间或走廊。 培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、 生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W，固定 在培养架的侧面或搁板的下面，每层有两支日光灯，距
离在20cm，光照强度为2000-3000lx。
培养室
• 植物组织培养材料移到田间前，通 常先移到温室进行练苗，待生根成活后， 再移到大田。