食用菌实验-母种原种扩大培养
食用菌原种的筛选与扩繁实验报告
食用菌原种的筛选与扩繁实验报告
一、实验目的
1、了解食用菌的基础知识。
2、掌握食用菌培养基的配置原理。
3、通过平菇、香菇、金针菇的栽培实验，掌握食用菌代料栽培的一般方法和栽培管理技术。
4、学习和掌握食用菌的组织分离法
二、实验内容
1、代料栽培培养基的制备
2、培养基的灭菌3.接种
三、实验原理（食用菌的组织分离法
食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。
利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。
四、实验材料
1、原种制作实验材料
（1）食用菌：香菇、平菇。
（2）培养基：PDA培养基斜面。
（3）仪器或其他用具：75%酒精棉球、接种针记号笔等。
2、食用菌的组织分离（1）试剂：棉籽壳、麸皮、蔗糖、CaCO3
四、注意事项
1、在整个操作过程中都要注意无菌操作，一切用具都要消毒。
2、要等刀片冷却后再切取组织块。
3、栽培种在培养过程中，应经常检查，污染袋要及时检查出处理掉。
经过30至40天的培养，菌丝长满袋后即可使用。
若菌袋内长出原基，说明菌种已经老化。
若有黄、绿、黑等杂色斑点或连成片时，说明菌种已经污染，不可使用。
食用菌实验1
5、质量检验
对分离、引进或转管扩大的菌种，应经过质量 鉴定，选优去劣，方可使用。 检验方法： ①外观鉴定
优良菌种：菌丝浓白、粗壮、富有弹性，则生命 力强。
老化菌种：菌种已收缩、干燥或菌丝体自溶产生 了大量红褐色液体，说明生活力弱，不可使用。
②显微镜检验 挑取少许菌丝于载玻片上，加蒸馏水1滴，盖 上盖玻片，观察菌丝形态是否为培育的菌种。 ③菌丝生长速度 将其接种到适宜斜面培养基上，在适温下培 养。凡菌丝生长较快、整齐、浓密而健壮的就 是优良母种。 ④出菇试验 进行子实体产量和品质评比。 经以上检验，通过综合评比，选出菌丝生长速 度较快，子实体生长健壮、品质好、产量高的 母种，即可供生产上使用。
营养物质→调节pH（用HCl或NaOH）→分装试管→
塞上棉塞→捆扎→灭菌（高压蒸气灭菌15-30min）→ 制成斜面→检查灭菌效果（即28~30℃培养2~3d）
（3） 作业
（1）每人制5支试管斜面。
（2）什么叫食用菌菌种？它又有哪些类型？ （3）食用菌菌种生产常用的设备和用具有哪些？ （4）写出食用菌的制种程序。 （5）常用的消毒药品有哪些？
茶树菇 Agrocybe aegerita
鸡腿菇
鸡腿菇
Coprinus comatus
担子菌纲食用菌
真姬菇
担子菌纲食用菌
虎掌菌：Sarcodon imbricatus
猪苓菌：Grifola umbellata
别名：猪苓花、猪灵芝。 特征：子实体丛生，肉质，味道鲜美，地下部分的菌核即是中药材的 猪苓，菌核不规则、块状，棕黑色至黑色。 药用功效：猪苓及猪苓多糖对肝炎、肺癌、食管癌、白血病、乳腺癌 及淋巴肉瘤有显著的治疗效果。
杏鲍菇：Pleurotu seryngii
食用菌原种筛选与扩繁实验原理
食用菌原种筛选与扩繁实验原理食用菌原种筛选与扩繁实验原理「篇一」食用菌制种与栽培教案实验一食用菌形态结构的观察一、实验目的认识和掌握常见的栽培的食用菌形态特征二、实验原理常见的栽培的食用菌主要是担子亚门层菌纲和腹纲的一些种类，它们由双核菌丝分化形成子实体，子实体是有性孢子着生的器官，其孢子外生在担子上，并聚集成一层子实层，但它们的子实体形状因种类不同而有很大差别，是认识食用菌类别的主要标志。
三、实验器材1、新鲜的食用菌，浸、干制标本。
2、解剖刀。
四、实验方法识别香菇、双孢蘑菇、平菇、猴头、口蘑、木耳、竹荪、草菇、银耳、金针菇等形态特征。
取平菇、香菇，首先观察其子实体的组成部分及其形态特征。
再用解剖刀纵切子实体观察其菇盖组成。
菌肉的颜色、质地、菌褶形状和着生情况(离生、延生、直生、弯生)。
再观察其菌柄的组成，菌柄的质地，中空或中实。
五、作业绘制香菇子实体形态及纵剖面简图，并注明各部位名称。
实验二食用菌母种培养基的制备与灭菌一、实验目的1、掌握食用菌母种培养基的配制方法。
2、熟练掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。
二、基本原理培养基是按照食用菌生长发育所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。
其中含有碳源、氮源、矿质元素、生长因子和水分等物质。
由于食用菌在生长发育过程中，还必须在适宜的酸碱条件下，才能表现最大的生活力。
因此，对不同种类食用菌还须将培养基调节到一定的PH值范围。
食用菌的培养基可分为母种培养基、原种培养基和栽培种培养基。
对于母种培养基一般多采用固体培养基，因此需在培养基中加入一定量的凝固剂。
三、实验器材马铃薯(去皮)200g，琼脂16-18g，葡萄糖20g，大试管、棉塞、灭菌锅、漏斗、铁架台、胶管。
四、实验步骤1、选好马铃薯洗净去皮(挖去芽眼)，切成薄片，取200g放在铝锅中，加水1000mL，煮沸20分钟，双层纱布过滤，取滤液并补足水至1000mL，加琼脂，小火加热，玻璃棒搅拌至琼脂全部溶解，再加入葡萄糖使其溶化。
食 用 菌 制 种 技 术 1
食用菌制种技术 1食用菌制种前言食用菌生产所用的菌种，是提供繁殖而分级制作的菌丝体培养物，相当于高等植物的种子。
在自然界中，食用菌繁衍后代依靠孢子，孢子在适宜的环境下，萌发成菌丝体。
菌丝体生长繁衍达到生理成熟后，在适宜的环境下，就可形成子实体。
在人工栽培食用菌时，孢子虽然是它的种子，但人们至今都不用孢子直接播种，而是用孢子或子实体组织萌发而成的纯菌丝体作为播种材料。
因此，通常所指的菌种，实际上是经过人工培养并进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。
制种是食用菌生产最重要的环节。
常言道：“有收无收在于种，收多收少在于管”，可见菌种在生产中的重要性。
在食用菌生产过程中，菌种好坏，直接影响食用菌的产量和质量。
因此，培育优良菌种，是提高食用菌生产水平的重要环节。
人工培养的菌种，根据菌种培养的不同阶段，可分为母种、原种和栽培种三类。
一般把从自然界中，首次通过孢子分离或组织分离而得到的纯菌丝体称为母种，或称一级种。
它是菌种类型的原始种。
原始母种通过移接(转管)成数支试管(斜面)种，这些移接的试管种，亦可称为母种。
把母种移接到木屑、谷粒、棉籽壳、粪草等瓶(袋)培养基上培养而成的菌种称为原种，或称二级种。
它是母种和栽培种之间的过渡种。
把原种扩接到相同或类似的材料上，进行培养直接用于生产的菌种称栽培种，或称三级种。
制作菌种的具体操作工艺流程见图4—1。
原种和栽培种，均能直接用于生产。
栽培种不能再扩大繁殖栽培种(银耳菌种例外)，否则会导致生活能力下降。
分离母种培养基制备→高压灭菌→接种→筛选提纯→原始种→中试后确定母种↓↓—————转管扩接←保贮↓原种培养基制备→高压或常压灭菌→接种→培养→原种∣↓栽培种培养基制备→常压或高压灭菌→接种→培养→栽培种图4-1 制种工艺流程图食用菌的菌种生产，基本上是按菌种分离→母种扩大培养→原种培养→栽培种培养的程序进行。
菌种通过三级扩大，菌种数量大为增加，同时菌丝也从初生菌丝发育到次生菌丝，使菌丝更加粗状，分解基质的能力也增强。
实验室平菇栽培法实验报告
实验报告实验名称实验室平菇栽培法班组姓名学号日期成绩教师签名一、实验目的1.掌握平菇基本栽培方法及其原理。
2.掌握平菇栽培中器械和培养基的灭菌方法及原理，如高压蒸汽灭菌法、干热灭菌、灼烧灭菌和紫外灯灭菌法等。
3.了解食用菌母种扩大繁殖生产的基本原理,掌握斜面母种的接种和培养方法。
4.掌握平菇栽培中原种、栽培种培养基的制备方法。
5.培养学生自行设计出菇的方案。
二、基本原理1.平菇是木质腐生菌，生长发育所需各种营养物质均从木屑、棉籽壳、稻草等培养料中获得。
平菇生长周期短，从播种到第一批采收一般为30天到40天，栽培方法简便，成功率高。
本实验在实验室条件下，用袋装方法出菇。
2.食用菌生产中，培养基、器皿及接种工具的消毒灭菌，是防止杂菌污染，提高食用菌产量的关键措施，灭菌和消毒法主要有物理方法（高温灭菌和紫外线灭菌）、化学灭菌法。
干热灭菌是在保持恒温的电烘箱中进行的,适用于各种耐热的玻璃器皿、棉塞、滤纸、以及不能与蒸汽充分接触的液体的灭菌.一般在160摄氏度持续—2小时,就可达到灭菌的目的.灼烧灭菌可直接在酒精灯外火焰灼烧灭菌,酒精灯所用的酒精浓度要在百分之95以上.紫外灯灭菌是接种室(箱)最常用的方法之一,每次在使用前开灯20—30分钟.紫外线可导致细胞内核酸和酶发生变化而使细胞死亡,还可使空气中氧气产生臭氧,臭氧也具有杀菌作用.因其透射力差只适用于空气及物体表面的灭菌,有效距离为—2米,以米内为最好.3.食用菌母种培养基和分离菌种时用斜面培养基，适用于一般食用菌的母种分离与培养用的培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基（即PDA培养基），配成后用加压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。
4.食用菌菌种生产一般按母种——原种——栽培种进行。
母种数量少，要进行试管移接扩大培养才能进行生产。
5.原种由母种繁殖而成，由原种扩大培养成栽培种。
原种和栽培种生产一般包括配料——装瓶（袋）——灭菌——接种——培养等流程。
一般用瓶装或塑料袋装，灭菌压力和时间相应延长。
食用菌的制种(母种的分离和培养)
食用菌的制种（母种的分离和培养）()---食用菌菌种质量的优劣，直接影响到栽培的成败和产量的高低，只有优良的菌种，才能获得优质高产的食用菌。
因此食用菌的制种，是生产中一项极其重要的工艺。
食用菌的菌种按培养阶段和来源的不同，可分母种、原种和栽培种三种。
从食用菌的孢子分离培养或从组织分离培养、基内菌丝分离培养所得到的第一代菌丝体，称为母种。
从母种扩大培养的菌丝体，称为原种。
从原种扩大培养直接用于生产上播种的菌丝体；称为栽培种。
一、母种的分离和培养（一）母种培养基的配制1.母种培养基的种类母种是菌种生产的关键，要求纯度高，不能混生杂菌，同时母种的菌丝体较为纤细，分解培养料的能力较弱。
因此，母种菌丝体需要培养在营养丰富，易被吸收，表面光滑易于鉴别有无杂菌感染的琼脂培养基上。
适合母种菌丝生长的琼脂培养基种类很多，常用的有下列几种：（1）马铃薯——葡萄糖——琼脂培养基马铃薯（去皮） 200克琼脂 20克葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升（2）麦芽汁——葡萄糖——琼脂培养基干麦芽 250克琼脂 15～20克葡萄糖（或蔗糖） 10克水 1000毫升（3）胡萝卜——葡萄糖——琼脂培养基胡萝卜 100克琼脂 20克葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升（4）蘑菇汁——葡萄糖一一琼脂培养基（适用于蘑菇）鲜蘑菇 250克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升（5）蛋白胨——葡萄糖——琼脂培养基蛋白胨 2克葡萄糖 20克磷酸氢二钾 2克维生素B1（硫胺素） 0.5毫克磷酸二氢钾 0.5克琼脂 18克硫酸镁 0.5克水l000毫升2.母种培养基的制法兹以最常用的马铃薯——葡萄糖——琼脂培养基的制法为例介绍如下：先将马铃薯去皮，洗涤，切成小块，加水1000毫升，煮沸15～20 分钟，取双层纱布过滤，取其滤液，加入琼脂和葡萄糖（或蔗糖），用文火加热使其溶化，最后补足水分，使其容量仍为1000毫升。
趁热分装于试管中，装量约为试管长度的1/5左右，装管时要注意不使培养基沾污试管壁和试管口。
母种培养基的制作及试管菌种的扩制
一、实验目的
1. 了解食用菌母种培养基的配方 2. 熟练掌握母种培养基（PDA）的配制方法 3. 熟练掌握培养基的消毒灭菌技术。 4. 掌握试管菌种的扩制技术
母种培养基配方
1.马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：马铃薯（去 皮）200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL，pH 自然。
(三）高压灭菌
121℃高压灭菌30min后摆斜面。
(四）母种接种及试管菌种的扩制
1．将已灭菌的斜面培养基瓶移入事先消毒过 的超净工作台内，同时放入酒精灯、酒精棉 、接种铲等，紫外灭菌20～30min。
2.将母种管、用具及手进行酒精消毒。
3.按无菌操作方法进行接种，用接种铲取菌 种一块放入斜面培养基上，并使菌丝紧贴在 培养基上，塞上试管塞，贴上标签，注明菌 种名称和接种日期。
4.将称好的琼脂加入马铃薯汁中，在电炉上 用文火煮，直至琼脂完全融化（边煮边搅拌 ），再用四层湿纱布（需用热水浸湿后拧干 ）过滤。最后加入葡萄糖等可溶物，搅匀。
5.调节pH值：培养基的酸碱度是影响菌丝生长 的重要因素，因此培养基配好后应根据菌种对 pH值的要求进行调节。马铃薯蔗糖琼脂培养基 配好后，pH值一般为中性，所以不必调节。
4.放入28℃生化培养箱中培养。
注意事项：
PH调节时，应该注意的是培养基的酸碱度在 灭菌前不宜调至pH6.0以下，否则灭菌后培养 基不凝固。有些菇类的培养基要求在pH6.0以 下的，要待灭菌后在无菌条件下滴加盐酸或 乳酸等进行调节。
四、作业
1.试述母种培养基的配制过程。 2.简述培养基分装的要点。
铃薯综合培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g， 琼脂20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，维生B1 10mg，水1000ml。
菌种扩大培养的一般流程
菌种扩大培养的一般流程菌种扩大培养是微生物学中的重要实验技术，用于大规模生产菌种或菌株，以满足不同领域的研究和应用需求。
本文将介绍菌种扩大培养的一般流程。
一、菌种的保存与激活菌种的保存是保证后续扩大培养的重要步骤。
常见的保存方式包括冷冻保存和冻干保存。
在开始扩大培养之前，需要将保存的菌种进行激活，使其恢复生长活力。
二、菌种的预培养为了保证扩大培养的成功，需要进行菌种的预培养。
首先，从保存的菌种中挑取一部分菌落，接种到适宜的培养基上，进行预培养。
预培养的时间一般为16-24小时，使菌种处于快速生长期，为后续扩大培养做好准备。
三、选择合适的培养基菌种的扩大培养需要选择合适的培养基。
不同的菌株对培养基的要求有所不同，一般包括碳源、氮源、无机盐等。
根据菌株的需求，选择适当的培养基，以提供充足的营养物质，促进菌种的快速繁殖。
四、扩大培养的条件控制菌种的扩大培养需要控制一系列的条件，包括温度、pH值、氧气供应等。
一般情况下，细菌的培养温度为37℃，真菌的培养温度为25℃。
同时，要根据菌种的特性，调节培养基的pH值，以提供最适宜的环境。
对于需氧生长的菌种，需要提供充足的氧气供应。
五、菌种的扩大培养策略菌种的扩大培养可以采用不同的策略，包括液体培养和固体培养。
液体培养适用于大规模生产菌液，可以采用摇瓶培养或发酵罐培养。
固体培养适用于大规模生产菌落，可以采用平板培养或培养瓶内的固体培养。
根据具体情况选择合适的培养策略，以满足菌种扩大培养的需求。
六、菌种的收获与保存扩大培养结束后，需要收获菌液或菌落，并进行保存。
对于菌液，可以通过离心分离菌体，得到菌体沉淀，并进行冷冻保存。
对于菌落，可以进行冷冻保存或进行冻干保存。
保存菌种的目的是为了后续的实验和应用。
总结起来，菌种扩大培养的一般流程包括菌种的保存与激活、菌种的预培养、选择合适的培养基、扩大培养的条件控制、菌种的扩大培养策略，以及菌种的收获与保存。
通过合理控制每个环节，可以有效地扩大培养菌种，满足科研和实际应用的需求。
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实验五母种、原种接种扩大培养（板书用）一、实验目的熟悉母种、原种接种操作技能。
二、实验材料和用具接种箱或超净工作台，恒温培养箱，接种钩（针），酒精灯，镊子、、火柴，记号笔，记录本，75％酒精及棉球、95％酒精，母种试管斜面，灭菌好的原种培养基。
三、实验步骤与方法1.无菌测定灭菌后的培养基，随机抽出数支斜面试管培养基，置25—28℃的温箱中培养3天，培养基表面仍光滑，无杂菌出现，证明灭菌彻底，即可供接种使用。
2.接种操作过程无菌操作要点：①无菌箱在启用前先灭菌，将待接种的斜面试管、酒精灯、火柴、接种针等放入箱内，紫外线照射半小时以上。
超净工作台则要先灭菌20分钟。
②双手洗净。
打开工作灯，将双手伸入接种箱内，点燃酒精灯。
用75%酒精的棉球擦拭双手，擦拭方向由前向后。
③左手平托两支试管，拇指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待转接母种的斜面试管，两支试管的斜面都应朝上。
右手持接种钩，将接种钩的顶端烧红，并将整条接种柄在火焰上过几次灭菌。
④将两支试管的管口部分靠近火焰，用右手同时夹住两个棉塞。
拔掉两支试管的棉塞，并立即以火焰灼烧管口，并适当转动。
操作过程在不离酒精灯火焰一寸远处进行。
⑤用冷却的接种钩，在长满菌丝的斜面挖取少许菌丝及培养基，然后轻轻抽出试管。
迅速伸进待接试管中，将种块置于培养基的中部，盖好塞子。
接种过程中，应注意保持试管与桌面平行，不要远离酒精的火焰，周而复始。
一支母种可扩接20—25支试管。
贴上标签（或用记号笔），注明菌种或菌株名称及日期。
⑥原种接种：3．菌种培养接好种的试管和原种，放在25℃条件下培养，每隔2-3天检查一次。
遇有杂菌的试管要及时选出，以免污染其他试管。
7～10天后菌丝就可长满试管。
原种30天左右长满。
作业：归纳原种和试管种的接种全过程。
实验五母种接种扩大培养一、实验目的通过对接种箱常规消毒、斜面试管培养基母种(即一级种)接种和培养，基本熟悉母种接种操作技能。
二、实验材料和用具接种箱或超净工作台，电热恒温培养箱，接种钩，接种针，酒精灯，搪瓷杯，高锰酸钾，福尔马林，母种试管(18×180mm)，火柴，记号笔，钢笔，标签，工作记录本，250毫升磨口瓶，75％酒精及棉球、95％酒精，升汞。
斜面培养基，斜面母种。
四、实验步骤与方法1．无菌测定灭菌后的培养基，随机抽出数支斜面试管培养基，置25—28℃的温箱中培养3天，培养基表面仍光滑，无杂菌出现，证明灭菌彻底，即可供接种使用。
2．接种操作过程无菌操作要点：①无菌箱在启用前先灭菌，将待接种的斜面试管、酒精灯、火柴、接种针等放入箱内，紫外线照射半小时以上。
超净工作台则要先起动20分钟(或按说明书操作)。
②双手洗净。
打开工作灯，将双手伸入接种箱内，点燃酒精灯。
用75%酒精的棉球擦拭双手，擦拭方向由前向后。
③左手平托两支试管，拇指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待转接母种的斜面试管，两支试管的斜面都应朝上。
右手持接种钩，将接种钩的顶端烧红，并将整条接种柄在火焰上过几次灭菌。
④将两支试管的管口部分靠近火焰，用右手同时夹住两个棉塞。
拔掉两支试管的棉塞，并立即以火焰灼烧管口，并适当转动。
经瞬时灼烧后大部分杂菌可被杀死，即使有少数未死者，也被加热固定，不致脱落。
操作过程在不离酒精灯火焰一寸远处进行。
⑤用冷却的接种钩，将已长满菌丝培养基划成1平方厘米的方块，钩住接种块，或用接种环轻轻接触菌苔，挖取少许菌丝及培养基，然后轻轻抽出试管。
注意不要使菌苔碰到管壁，取出时，不可使环通过火焰。
悬空，迅速伸进待接试管中，将种块置于培养基的中部，在斜面中部触一下，使菌块落在培养基上，注意环要平放，不要划破培养基，也不要使菌苔沾到管壁上。
⑥抽出接种环，将两支试管口同时在火焰上灼烧灭菌，烧灼棉塞，分别塞好棉塞。
注意不要用试管口去迎棉塞，以免试管在运动时纳入空气造成污染。
接种过程中，应注意保持试管与桌面平行，不要远离酒精的火焰，周而复始。
一支母种可扩接20—25支试管。
接种完毕之后，必须马上贴上标签（或用记号笔），注明菌种或菌株名称及日期，以防混淆。
母种标签大小为3．5×2cm，原种为4×3cm。
均应贴在正面偏上位置，不要影响对菌种的观察。
3．菌种培养接好种的试管，放在26--27℃条件下培养，每隔2天检查一次。
遇有杂菌的试管要及时选出，以免污染其他试管。
7～10天后菌丝就可长满试管。
菌丝长满试管后要及时取出，放在常温下3～5天，就可作为接种试管母种或制作原种之用。
不立即使用的试管母种，放在4℃左右的条件下存放，每隔半年转管一次，可长期保存。
实验五原种接种与扩大培养•一、实验目的•通过对接种常规消毒、原种（二级种）接种和扩大培养，基本掌握原种接种操作技能。
并培养学生定期检查菌丝生长情况的观察能力和鉴别杂菌污染的形征识别能力。
•二、实验材料和用具•接种箱，接种钩，酒精灯，镊子，75％酒精棉球，高锰酸钾，火柴，标签，搪瓷杯，钢笔，塑料绳或皮筋，试管母种。
••三、实验步骤与方法．•1．接种操作过程•(1)无菌检查：接种以前首先检查菌种内或棉塞上有无霉孢子菌落及杂菌侵入所形成的拮抗线、湿斑。
有明显杂菌侵染或可疑的菌种，培养基开始干缩或在瓶壁上有大量黄褐色分泌物的菌种，培养基内菌丝生长稀疏或大多是细线状菌索的菌种，没有菌种标签的可疑菌种，均不能用于接种。
•(2)原种接种法：接种要求在无菌室内进行无菌操作。
接种时要求动作快而准确，以减少污染。
取斜面母种，用75％的酒精棉球擦拭外壁，拔去棉塞，在酒精灯火焰上灼烧管口。
用右手持接种锄(扒)，灼烧，放在试管内侧冷却，然后切取2．5平方厘米大小斜面菌种一块，通过酒精的火焰上方，送入菌种瓶内，固定在接种孔上。
注意试管口与瓶口都不离火焰一寸远。
菌种块用培养料盖一下更好。
每支斜面试管母种可接种3—5瓶原种。
•接种后，用酒精灯火焰烧灼瓶口、棉塞，然后将棉塞塞到瓶口上。
通过瓶壁观察，种块是否移动，若菌种块在接种穴内脱落或掉到接种穴内，应予调整或补接。
最后盖上聚丙烯或牛皮纸，结上塑料绳，即完成了接种过程。
立即盖好原种瓶，封好口。
•2．原种恒温培养•接种后的原种瓶，全部移放在23—25℃的培养室或恒温箱内培养。
培养期间应经常检查有无杂菌污染，如发现黄、绿、桔红、黑色杂菌时，要及时捡出清理。
尤其是塑料袋菌种，检查工作应自始至终进行。
培养室切忌阳光直射，但也不要完全黑暗，要有一定的散射光。
经过25～30天，待菌丝长满瓶底就可取作种子用。
生长好的原种菌丝洁白、粗壮、纯净，即可用来繁殖扩大栽培种。
•五、作业思考题•1．在接种过程中，如发现棉塞已湿，立即更换灭过菌的棉塞，为什么?•2．何谓倒置培养?倒置培养的优点是什么?请具体说明。
•3．一般来说，原种满瓶经过多少天最适用于扩大培养栽培种?栽培种满瓶后多少天最适用于播种?•4．你怎样鉴别菌种质量的优劣?•5．你用什么办法保藏原种?在10℃以下低温下，原种保藏时间一般是多少?在室温下保藏原种时间一般是多少?实验五母种接种扩大培养•一、实验目的•通过对接种箱常规消毒、斜面试管培养基母种(即一级种)接种和培养，基本熟悉母种接种操作技能。
••二、实验材料和用具•接种箱或超净工作台，电热恒温培养箱，接种钩，接种针，酒精灯，搪瓷杯，高锰酸钾，福尔马林，母种试管(18×180mm)，火柴，记号笔，钢笔，标签，工作记录本，250毫升磨口瓶，75％酒精及棉球、95％酒精，升汞。
•斜面培养基，斜面母种。
••三、实验步骤与方法•1．无菌测定•灭菌后的培养基，随机抽出数支斜面试管培养基，置25—28℃的温箱中培养3天，培养基表面仍光滑，无杂菌出现，证明灭菌彻底，即可供接种使用。
•2．接种操作过程•无菌操作要点：•①无菌箱在启用前先灭菌，将待接种的斜面试管、酒精灯、火柴、接种针等放入箱内，紫外线照射半小时以上。
超净工作台则要先起动20分钟(或按说明书操作)。
•②双手洗净。
打开工作灯，将双手伸入接种箱内，点燃酒精灯。
用75%酒精的棉球擦拭双手，擦拭方向由前向后。
•③左手平托两支试管，拇指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待转接母种的斜面试管，两支试管的斜面都应朝上。
右手持接种钩，将接种钩的顶端烧红，并将整条接种柄在火焰上过几次灭菌。
•④将两支试管的管口部分靠近火焰，用右手同时夹住两个棉塞。
拔掉两支试管的棉塞，并立即以火焰灼烧管口，并适当转动。
经瞬时灼烧后大部分杂菌可被杀死，即使有少数未死者，也被加热固定，不致脱落。
操作过程在不离酒精灯火焰一寸远处进行。
•⑤用冷却的接种钩，将已长满菌丝培养基划成1平方厘米的方块，钩住接种块，或用接种环轻轻接触菌苔，挖取少许菌丝及培养基，然后轻轻抽出试管。
注意不要使菌苔碰到管壁，取出时，不可使环通过火焰。
悬空，迅速伸进待接试管中，将种块置于培养基的中部，在斜面中部触一下，使菌块落在培养基上，注意环要平放，不要划破培养基，也不要使菌苔沾到管壁上。
•⑥抽出接种环，将两支试管口同时在火焰上灼烧灭菌，烧灼棉塞，分别塞好棉塞。
注意不要用试管口去迎棉塞，以免试管在运动时纳入空气造成污染。
•接种过程中，应注意保持试管与桌面平行，不要远离酒精的火焰，周而复始。
一支母种可扩接20—25支试管。
•接种完毕之后，必须马上贴上标签（或用记号笔），注明菌种或菌株名称及日期，以防混淆。
母种标签大小为3．5×2cm，原种为4×3cm。
均应贴在正面偏上位置，不要影响对菌种的观察。
•3．菌种培养•接好种的试管，放在26--27℃条件下培养，每隔2天检查一次。
遇有杂菌的试管要及时选出，以免污染其他试管。
7～10天后菌丝就可长满试管。
菌丝长满试管后要及时取出，放在常温下3～5天，就可作为接种试管母种或制作原种之用。
不立即使用的试管母种，放在4℃左右的条件下存放，每隔两个月就转管一次，可长期保存。
•四、母种菌丝外观优劣鉴别•1．母种杂菌检查：保藏的母种在接种前应进行认真地检查是否有污染现象，斜面上有明显绿、黄、黑色等菌落，说明遭受霉菌污染；管口内的棉塞，由于吸潮生霉，只要轻微的振动，分生孢子很容易溅落到已经长好的斜面上，在低温保藏条件下受到抑制，很难发现。
将斜面放在向光处，从基背面观察，在气生菌丝下面有黄褐色圆形或不定型斑块，是混有细菌的表现。
已污染杂菌的母种不能用于扩大培养。
•2．常见母种菌丝的生长形态和培养特征•①香菇母种：菌丝洁白、细短、絮状、浓密均匀，整齐地生长，部分菌丝沿试管壁伸延，不产生色素。
一般12—14天可长满试管斜面。
•②木耳母种：菌丝白色，粗壮均匀，整齐致密，齐头生长，其中黑木耳可分泌褐色素，毛木耳可分泌紫褐色素。
一般10天可长满试管斜面。
•③平菇母种：菌丝洁白、浓密、粗壮、丰满，长势均一，爬试管壁力很强，不产生色素。