3_大豆苷元磺酸钠对H_2O_2诱导大鼠心肌成纤维细胞衰老的影响_李洪亮

并且PLGC是胃黏膜从良性病变到恶性病变转化过程的一个重要阶段，其意义在于有恶变及正常逆转的双向可能性。

我们通过临床研究发现，化浊解毒和胃能调节免疫机能，使异常细胞逆转为正常细胞，可抗感染杀灭幽门螺杆菌，消除导致胃癌的病原体，影响PLGC 相关蛋白表达，达到截断逆转PLGC的目的。

方中以白英、连翘、公英为君［6］，清热解毒、消肿散结，《本草正义》中谓连翘“能散结而泄化络脉之热”；薏苡仁当归、郁金为臣，《药品化义》指出：“薏米，味甘气和，清中浊品，能健脾阴，大益肠胃”；郁金行气解郁、凉血破瘀；当归，补血活血、祛瘀通络。

浊毒之邪胶结致病，留着于胃久则入血伤络成瘀，故以当归郁金为臣，活血和血，以润胃肠；柴胡、枳实、八月札、冬凌草、白花蛇舌草为佐药，疏肝行气，清热解毒，消肿散结；莪术、藤梨根、三七粉、灵芝为使，活血散瘀定痛，扶正固本达到既病防变之效。

全方化浊、解毒、活血、扶正，可使浊得以去，毒得以解，瘀血消散．新血得生，浊毒清而阴液复，通过分层用药，多靶点用药，而达到“截断”“逆转”肠上皮化生和异型增生之功。

现代药理研究表明，蒲公英的多糖部分有抗肿瘤作用H1；三七粉、郁金具有调收稿日期：2010－09－13基金项目：国家自然科学基金资助项目（30560173）作者简介：李洪亮（1983－），男，江西赣州人，讲师，硕士，研究方向：心血管药理学。

节免疫的功能；莪术有抗肿瘤、抗血栓形成作用；冬凌草甲素有抗肿瘤作用，可增加机体免疫功能。

诸药合用，可调节免疫机能，使异常细胞逆转为正常细胞，可调节相关癌基因和抑癌基因的表达，促使PLGC的细胞发生凋亡，并使胃黏膜腺体恢复正常，增强胃黏膜的免疫力，阻断PLGC的发展，促进IM及的Dys的康复。

实验研究表明，英连金化浊解毒方（大、中、小剂量）组中CD44V6表达得到明显下调，与模型组有显著性差异，说明英连金化浊解毒方能明显缓解大鼠症状，改善大鼠胃黏膜组织病理情况，并且可能通过抑制CD44V6基因蛋白的表达，而达到治疗PLGC的目的。

参考文献［1］Erkma G，Gerasimov G，Troshina，et al．Deregulated alternative spli－cing of CD44mRNA transcripts in neoplastic and nonneoplastic lesionof the human thyroid［J］．CancerRes，1995，55（20）：4594－4598．［2］陆岽．CD44V6和MMP－9在胃癌及癌前病变组织中表达［J］．胃肠病和肝病学杂志，2005，14（6）：597－600．［3］李春颖，陈玉龙，吴欣爱．胃癌前病变及胃癌组织中CD44V6的表达［J］．河南医科大学学报，2001，36（6）：718－720．［4］刘启泉，李佃贵，张纨，等．慢性胃炎从浊毒论治［J］．北京中医药大学学报，2010，33（3）：153－155．［5］米建强，张朝晖，沈铭昌．胃癌及癌前病变组织中CD44V6表达的意义［J］．世界华人消化杂志，2000，8（2）：156－158．［6］唐丽明，高世全，施伟东．善胃Ⅱ号方对大鼠胃癌前病变的抑制作用及其机制研究［J］．时珍国医国药，2010，21（6）：1453－1455．3'－大豆苷元磺酸钠对H2O2诱导大鼠心肌成纤维细胞衰老的影响李洪亮，张道英，曾靖（赣南医学院药学院，江西赣州341000）摘要：目的：观察氧化应激对心肌成纤维细胞（CFb）衰老的影响以及3'－大豆苷元磺酸钠（DSS）的干预作用，初步探讨3'－大豆苷元磺酸钠抗心脏老化过程中心肌纤维化的机制。

方法：差速贴壁法培养SD乳鼠心肌成纤维细胞，MTT法检测细胞增殖能力，硝酸还原酶法检测细胞上清液NO含量，采用免疫细胞化学染色检测心肌成纤维细胞的－平滑肌肌动蛋白（－SMA）表达，用吖啶橙荧光染色检测细胞的衰老。

结果：在H2O2刺激下，心肌成纤维细胞增殖率降低，－SMA免疫化学染色出现明显强阳性，与正常组比较有显著性差异（P＜0.01），NO含量与正常组比较明显降低（P＜0.01），3'－大豆苷元磺酸钠3种浓度均具有延缓H2O2诱导的以上效应，与H2O2刺激组比较有显著性差异（P＜0.05；P＜0.01）。

结论：3'－大豆苷元磺酸钠通过抑制氧化应激加速心肌成纤维细胞的衰老，恢复心肌成纤维细胞正常增殖能力，其作用机制可能是通过影响NO系统以及受体机制来抑制心肌成纤维细胞表型转化，这也可能是3'－大豆苷元磺酸钠抗心肌肥厚的机制之一。

关键词：3'－大豆苷元磺酸钠；氧化应激；衰老；心肌成纤维细胞中图分类号：R－33文献标识码：B文章编号：1000－1719（2011）06－1229－03The Effect of3'－daidzein Sulfonate Sodium on Cardiac Fibroblast Senescence of Rat Induced by H2O2LI Hong-liang，ZHANG Dao-ying，ZENG Jing（Gan Nan University Pharmacy Department，Ganzhou341000，Jiangxi，China）Abstract：Objective：Observation of oxidative stress on cardiac fibroblasts（CFb）senescence and the intervention of3'－daidzein sulfonate sodium（DSS）．To explore the mechanism of3'－daidzein sulfonate sodium on Anti－aging process of myocar-dial fibrosis in the heart．Methods：Cultured cardiac fibroblasts of SD neonatal rat by differential attachment method，detected cell proliferation by MTT method and NO content of cell supernatant by nitrate reductase method．Detected the expression of－smooth muscle actin（α－SMA）of cardiac fibroblasts by immunocytochemical staining method and cell senescence using acridine orangestaining．Results：In H2O2stimulated the proliferation rate of cardiac fibroblast decreased，α－SMA immunohistochemical stainingshowed strong positive．Compared with the normal group there was significant difference（P＜0.01）．NO content was significantly lower than the normal group（P＜0.01）．3concentrations of3'－daidzein sulfonate sodium were more than delaying effects whichwere induced by H2O2．There were significant difference compared with H2O2stimulated groups（P＜0.05；P＜0.01）．Conclu-sion：3'－daidzein sulfonate sodium accelerated aging cardiac fibroblasts by inhibiting the oxidative stress and restore the normal proliferation of cardiac fibroblasts．Its mechanism may inhibit the cardiac fibroblasts phenotype through influencing the NO system and the receptor mechanism．It may also be one of the mechanisms of3'－daidzein sulfonate sodium against cardiac hypertrophy．Key words：3'－daidzein sulfonate sodium；Oxidative stress；Senescence；Cardiac fibroblasts心脏老化的过程中心肌纤维化发生的几率逐渐增加。

心肌纤维化是以心脏间质心肌成纤维细胞（CFb）过度增殖和胶原过度沉积及异常分布为特征的心脏间质重构［1］。

3'－大豆苷元磺酸钠（3'－daidzein sulfon-ate sodium，DSS）是大豆苷元进行结构修饰和改性新合成的强水溶性新化合物。

研究发现大豆苷元具有抗心律失常、局部麻醉、影响心房肌电生理特性、心肌缺血再灌注损伤的保护、抗氧化等作用［2］。

最近研究发现3'－大豆苷元磺酸钠能有效减轻异丙肾上腺素所致大鼠心肌肥厚，心肌肥厚是以心肌细胞体积增大、心肌成纤维细胞表型转化和蛋白含量增多为主要特征的代偿反应，是对各种心血管刺激因子的适应反应。

本文主要针对3'－大豆苷元磺酸钠对CFb衰老的影响进行研究，现将研究结果报道如下。

1材料与仪器1.1药品和试剂3'－大豆苷元磺酸钠由沈阳药科大学植化教研室提供，纯度为98%；MTT为美国Sig-ma公司产品；胎牛血清为海克隆生化制品公司产品，批号NRJ0021；胰蛋白酶为美国Sigma公司产品；α－SMA抗体、S－P试剂盒为上海长岛生物技术开发有限公司产品；NO试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。

SD乳鼠30只，1 3日龄，雌雄兼用，由赣南医学院实验动物中心提供。

1.2仪器荧光倒置显微镜（Olympus CK40，日本）；CO2培养箱（Heraeus，德国）；酶标仪（Thermo354，美国）。

2方法2.1细胞培养与分组心肌成纤维细胞（CFb）的原代培养采用差速贴壁法进行。