植物多糖分离纯化
植物多糖提取与纯化方法的步骤与技巧
植物多糖提取与纯化方法的步骤与技巧植物多糖是一类具有广泛生物活性的天然产物，具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、免疫调节等多种药理作用。
因此，植物多糖的提取与纯化方法备受关注。
本文将介绍植物多糖提取与纯化的步骤与技巧，以帮助读者更好地了解和应用这些方法。
首先，植物多糖的提取需要选择适当的溶剂。
常用的提取溶剂包括水、醇类和酸碱溶液。
水是最常用的提取溶剂，因为植物多糖多为水溶性。
但有些植物多糖在水中溶解度较低，此时可以选择醇类溶剂如乙醇、丙醇等。
酸碱溶液的选择要根据不同的植物多糖来确定，一般来说，酸性条件有利于提取酸性多糖，碱性条件有利于提取碱性多糖。
其次，植物多糖的提取需要注意样品的准备。
样品的选择要根据植物多糖的来源来确定，可以是植物的根、茎、叶、果实等部位。
样品在提取前需要经过粉碎处理，以增加提取效果。
此外，样品的质量也会影响提取效果，因此要选择新鲜、干燥、无霉变的样品。
接下来是植物多糖的提取步骤。
一般而言，提取步骤包括浸提、过滤、浓缩和沉淀等。
浸提是将样品与提取溶剂接触一段时间，使植物多糖溶解到溶剂中。
过滤是将提取液中的固体颗粒去除，以获得澄清的提取液。
浓缩是将澄清的提取液进行浓缩，以减少体积。
沉淀是通过加入沉淀剂使植物多糖从溶液中沉淀出来，然后通过离心等方法将沉淀物收集。
在提取过程中，还需要注意一些技巧。
首先是浸提时间的控制，过短的浸提时间可能导致多糖未能充分溶解，过长的浸提时间可能导致多糖的降解。
因此，需要根据不同的植物多糖来确定合适的浸提时间。
其次是提取溶剂的选择和用量，溶剂的选择要根据植物多糖的特性来确定，用量要适量，既能保证提取效果又能节约溶剂。
此外，还可以采用超声波辅助提取、微波辅助提取等方法来提高提取效率。
提取完成后，还需要对提取液进行纯化。
纯化的目的是去除杂质，提高植物多糖的纯度。
常用的纯化方法包括醇沉、蛋白酶处理、离子交换层析、凝胶过滤层析等。
醇沉是将提取液中的植物多糖用醇类溶剂沉淀出来，然后通过离心等方法将沉淀物收集。
植物多糖提取、分离纯化及鉴定方法的研究进展
植物多糖提取、分离纯化及鉴定方法的研究进展陈红1杨许花1查勇2宋礼3高丹丹1*（1西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州730124；2日照市产品质量监督检验所，山东日照276800；3甘南牦牛乳研究院，甘肃合作747000）摘要：植物多糖又称植物多聚糖，是广泛存在于生物体中的一种物质，具有抗肿瘤、提高免疫、抗病毒等生物活性，现已广泛运用于食品、保健品和医药等行业。
多糖的生物活性与其组成、结构有关，植物多糖分离纯化和结构鉴定是多糖生物活性研究和应用前提。
该文主要综述了近年来植物多糖的提取、分离纯化及鉴定的方法，以期为植物多糖的研究提供参考。
关键词：植物多糖；提取；分离纯化；结构中图分类号TS255.1文献标识码A文章编号1007-7731（2021）22-0032-04 Research Progress in Extraction,Purification and Identification of Plant PolysaccharidesCHEN Hong1et al.（1College of Life Science and Engineering,Northwest Minzu University,Lanzhou730124,China）Abstract：Plant polysaccharide,also known as plant polysaccharide,is a kind of substance widely existing in biolog⁃ical organism，it have a variety of biological activities,anti-tumor,immune,antiviral,and other functions,are widely used in food,health products and pharmaceutical industries.The bioactivity of polysaccharides is related to the com⁃position and structure of polysaccharides.Therefore,the isolation,purification and structure identification of plant polysaccharides are the premise of their bioactivity research and application.This paper reviews the methods of ex⁃traction,purification and identification of plant polysaccharides in recent years,in order to provide theoretical basis for the study of plant polysaccharides.Key words：Plant polysaccharidde;Extraction;Separation and purification;Construction植物多糖又称植物多聚糖，是广泛存在于生物体中的一种物质，它是一类由醛糖或酮糖经糖苷键连接而成的天然高分子聚合物，是生物体内重要的大分子物质，是维持正常生命活动的基本物质之一。
植物多糖的分离纯化
植物多糖的分离纯化一、植物多糖的提取1 溶剂提取法1．1 水提法水对植物组织的穿透力强，提取效率高，在生产上使用安全、经济。
用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。
一般植物多糖提取采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物；或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，沉淀提纯多糖；但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同，它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离；还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离；其中，以乙醇沉淀最为普遍。
但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。
此时为破坏细胞壁,增加多糖的溶出，有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。
1．2酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势，目前报道的并不多。
而且即使有优势，在操作上还应严格控制酸度，因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
采用的稀碱多位为0．1mol／L氢氧化钠、氢氧化钾，为防止多糖降解，常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。
同样，碱提优势也是因多糖类的不同而异。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
另外，稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析，浓缩与醇析而获得多糖沉淀。
1．4 生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
1．5 超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
多糖的提取和纯化
多糖的提取和纯化目前，真菌多糖的提取可从子实体和采用深层培养发酵液的菌丝中分离获得，但以从子实体中提取多糖为主。
首先是将子实体粉碎，加入甲醇或乙醇乙醚1:1混合液，水浴加热搅拌1一3小时除去表面脂肪。
其次是用残渣提取多糖，常用的方法有不同温度下的水提法、稀酸提法、冷热稀碱提法。
水提法采用的较多，适合于提取水溶性多糖。
稀酸提取法适用于提取酸溶性多糖、时间宜短，温度不超过50℃，以防止糖昔键断裂。
稀碱法适合于提取碱溶性糖。
然后除去小分子杂质，常采用透析法，将多糖提取液置于半透膜透析袋中，逆向流水透析1一3天。
第四步是沉淀多糖。
大部分多糖在有机溶剂中的溶解度极小，所以可用有机溶剂来沉淀。
常用4一5倍低级醇、丙酮，一般在pH=7.0左右沉淀多糖，制得粗多糖。
最后是除去蛋白质。
除去多糖中的蛋白质常用的方法是三氯醋酸法。
得到的溶液基本上是没有蛋白质与小分子杂质的多糖混合物或单一多糖。
多糖的纯化是将多糖混合物分离为单一的多糖。
纯化方法很多，主要纯化方法有:(l)分步沉淀法根据不同多糖在不同浓度的低级醇或酮中具有不同溶解度的性质，逐次按比例由小而大加入这些醇或酮分步沉淀。
此法适用于分离各种溶解度相差较大的多糖。
(2)盐析法根据不同多糖在不同浓度盐中具有不同溶解度而分离。
纯度鉴定和分子量测定多糖纯度标准不能用通常化合物纯度标准来衡量，因为我们所说的多糖纯品实质上是一定分子量范围内的均一组成。
因此，测得的分子量一般为平均分子量。
过去常用粘度法、蒸气压渗透计法、沉降法、超速离心法、光散射法等测定高分子化合物分子量的方法测定真菌多糖的分子量，但由于这些方法测定起来比较麻烦，且误差较大，现多数已不采用。
目前实验室常用的方法为凝胶过滤法和高压液相色谱法，对于分子量小于1百万的多糖用高压液相法为最好。
1.2.1发酵、提取取香菇465菌株斜面菌种接人摇瓶培养基中振荡培养，逐级扩大培养至10O0L，25℃下通气培养72h，压滤，得香菇深层培养菌丝体。
多糖的提纯化技术
多糖的提纯化技术
溶剂提取法
(1) 水提法：以水为溶剂，可采用热水浸提或冷水浸提（植物多糖多采用热水浸提，可直接或离心去除杂质），由于多糖不溶于乙醇，可通过沉淀将多糖提纯出来。
水提法的确缺点在于温度高、耗时长、提取率低。
(2) 酸提法：有些含酸性基团的多糖在酸性条件下不易溶解，可用盐酸或乙酸处理后，再用乙醇或不溶性络合物将多糖沉淀出来。
酸提法容易破坏多糖的空间结构，一般较少使用。
(3) 碱提法：一些含有糖醛酸的多糖和酸性多糖在碱性条件下都比较稳定，可提高多糖的提取率，一般用硼氢化钠或硼氢化钾作为溶剂。
碱提法的不足之处在于某些多糖在碱性较强时会降解，而且容易影响成品的色泽和风味。
植物活性多糖的分离纯化与鉴定
植物活性多糖的分离纯化 与鉴定
一实验目的 1.学习植物活性多糖的理化性质及其生 1.学习植物活性多糖的理化性质及其生 物学功能。 物学功能。 2.掌握制备活性多糖的原理。 2.掌握制备活性多糖的原理。 掌握制备活性多糖的原理 3.掌握制备活性多糖的操作技术 3.掌握制备活性多糖的操作技术。 掌握制备活性多糖的操作技术
ห้องสมุดไป่ตู้
一、实验原理 多糖的分离纯化是指多糖研究中获取研究对象 的过程。一般这一过程包括分离、 的过程。一般这一过程包括分离、纯化和纯度鉴 定3 步。 多糖提取：一般多糖提取以水溶液为主，加入酸、 多糖提取：一般多糖提取以水溶液为主，加入酸、 碱、盐或酶等物质，以达到更好的提取效果。然 盐或酶等物质，以达到更好的提取效果。 后加入乙醇、季胺盐等阳离子表面活性剂， 后加入乙醇、季胺盐等阳离子表面活性剂，沉淀 多糖， 多糖，干燥得粗多糖 。水对植物组织的穿透力 强，提取效率高，在生产上使用安全、经济。用 提取效率高，在生产上使用安全、经济。 水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取， 水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取， 也可以用冷水浸提。 也可以用冷水浸提。
四、实验步骤 （一）多糖的提取 1.除去脂溶性杂质：称取剪碎的枸杞子100g， 1.除去脂溶性杂质：称取剪碎的枸杞子100g，经 除去脂溶性杂质 100g 石油醚（60~90℃）500mL回流脱脂二次 每次2h 回流脱脂二次， 2h， 石油醚（60~90℃）500mL回流脱脂二次，每次2h， 回收石油醚。再用80%乙醚500mL浸泡过夜， 回收石油醚。再用80%乙醚500mL浸泡过夜，回流 80%乙醚500mL浸泡过夜 提取二次，每次2h。 提取二次，每次2h。 2h 2.水提法称取植物，倒入2.4L水中，搅拌均匀， 2.水提法称取植物，倒入2.4L水中，搅拌均匀， 水提法称取植物 2.4L水中 放入70℃水浴锅中水浴6h，并不断搅拌进行水解， 放入70℃水浴锅中水浴6h，并不断搅拌进行水解， 70℃水浴锅中水浴6h 冷却至室温
多糖的提取和纯化
多糖的提取和纯化Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT多糖的提取和纯化→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。
原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1：1的乙醇乙醚混合液，水浴加热搅拌或回流1－3小时，脱脂后过滤得到的残渣一般用水作溶剂（也有用氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1％醋酸和1％苯酚或－1M氢氧化钠作为提取溶剂）提取多糖。
温度控制在90－100℃，搅拌4－6小时，反复提取2－3次。
得到的多糖提取液大多较粘稠，可进行吸滤。
也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上清液混合（得到的多糖若为碱性则需要中和）。
然后浓缩，再加入2－5倍低级醇（甲醇或乙醇）沉淀多糖；也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。
然后依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤。
将洗干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥（若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时，可直接冷冻干燥）。
干燥后可得粉末状的粗多糖。
微波辅助提取法：其原理为利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度，使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物质从基体或体系中分离出来，进入到介电常数小，微波吸收能力较差的萃取剂中[14]。
由于微波能极大加速细胞壁的破裂，因而应用于中草药中有效成分的提取能极大加快提取速度，增加提取产率。
而且由于其选择性好，提取后基体能保持良好的性状，提取液也较一般的提取方法澄清[15]。
聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较，发现微波辅助提取法所需时间最短（10min），多糖的提取率最高（％）。
超声辅助法：其原理是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外超声波的次级效应，如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，利于提取[16]。
多糖的提取分离方法
1.多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理。
动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，释放多糖。
植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在提取前，应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。
1．1溶剂法1．1．1水提醇沉法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。
多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。
用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70 %左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5 h，多糖的质量分数和得率均较高。
影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。
1．1．2酸提法为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂，且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。
因此酸提法也存在一定的不足之处。
1．1．3碱提法多糖在碱性溶液中稳定，碱有利于酸性多糖的浸出，可提高多糖的收率，缩短提取时间，但提取液中含有其它杂质，使粘度过大，过滤困难，且浸提液有较浓的碱味，溶液颜色呈黄色，这样会影响成品的风味和色泽。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
食品分离技术作业姓名_______________ 院系_______________ 专业班级_______________ 学号_______________ 时间___年___月___日摘要本文简要地介绍了植物多糖提取的两种方法：溶液提取法和部分沉淀法，对于影响多糖提取的不同因子选取不同方法；从多个方面介绍了多糖提取后的分离、纯化方法，及其分离纯化原理和主要步骤，并在最后对分离方法的可行性做出评价。
关键词：植物多糖分离纯化溶剂提取法部分沉淀法植物多糖的分离纯化一、多糖的物化性质A.分子结构：多糖在溶液状态下有着高级结构，代表活性状态。
不同植物提取的多糖，一级结构上有很太差异，采用酸解、色谱、质谱、红外光谱、核磁共振等手段，可以确定单糖的组成及取代基团。
B.溶解性：难溶于冷水，在热水或碱液中可溶。
不溶于丙酮、乙醇、正丁酵、乙醚、醋酸乙酯等有机溶剂C.热稳定性：热不稳定，当温度大于4O℃时，分解加快。
D.酸碱稳定性：pH小于5时开始降解，小于3时有20％降解；大于7时氧化加快。
E.化学性质：与硫酸蒽酮、硫酸苯酚反应阳性，常用于定量分析；可与部分有机、无机离子络合，如与十六烷基三溴化铵(CTAB)、氢氧化钡等结合沉淀F.二、植物多糖的提取多糖不同的植物中，有着不同的含量和贮存位置，因此针对不同的植物有着不同的分离方法。
图1:不同植物中多糖的提取方法A.溶剂提取法a)水提法水对植物组织的穿透力强，提取效率高，在生产上使用安全、经济。
用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。
一般植物多糖提取采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物；或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，沉淀提纯多糖；但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同，它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离；还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离；其中，以乙醇沉淀最为普遍。
但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。
此时为破坏细胞壁,增加多糖的溶出，有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。
图2：加水比对多糖提取的影响[1]b)酸碱提法[2]有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势，目前报道的并不多。
而且即使有优势，在操作上还应严格控制酸度，因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
采用的稀碱多位为0．1mol／L氢氧化钠、氢氧化钾，为防止多糖降解，常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。
同样，碱提优势也是因多糖类的不同而异。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
另外，稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析，浓缩与醇析而获得多糖沉淀。
图3：热碱提取多糖结果[3]c)生物酶提取法[4]酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
B.部分沉淀法a)金属盐沉淀法提取液中加入中性醋酸铅可沉淀去除大部分酸性、酚性的杂质（如有机酸、氨基酸、蛋白质、树脂酸、黄酮、蒽醌、鞣质等），包括酸性多糖。
而用碱式醋酸铅对多糖的沉淀就更为完全。
除去杂质后的母液用H2S脱盐后，单糖、低聚糖和水溶性较大的中性苷类仍保留在滤液中。
铅盐沉淀法除去杂质比较完全，母液脱铅后可用于单糖和低聚糖的定量，也可用铜盐沉淀法提取多糖。
b)季铵盐沉淀法季铵类氢氧化物是一类乳化剂，可与酸性糖形成不溶性沉淀，常用于分离酸性多糖。
季铵氢氧化物与中性多糖不生成沉淀，但当调高PH，使某些OH基解离，或加硼酸缓冲液增高糖的酸度，中性糖也能被沉淀。
利用季铵氢氧化物在酸性、中性、微碱性、碱性中分级沉淀可以分离多糖。
c)甲醇分级沉淀法常用的分级沉淀法是在混合多糖的浓水溶液中（常在PH=7时），逐步加入乙醇，收集不同醇浓度下析出的沉淀。
一般各次沉淀需经反复溶解后，再醇析，直到测得的物理常数恒定，最常用的是旋光度测定和电泳检查。
用分级沉淀法得到的多糖，常杂有较多的蛋白质，必须予以去除。
一般选择那些使蛋白质沉淀而使多糖不沉淀的试剂来处理，如酚、三氯乙酸、鞣酸等。
但必须处理时间短，温度低，避免多糖降解。
三、多糖提取物的分离纯化在多糖提取物中，常会有无机盐、蛋白质、色素及小分子物质等杂质，必须分别除去．一般是先脱除非多糖组分，再对多糖组分进行分级．A.除蛋白蛋白的分离方法较多，如Sevag[5]法、三氯乙酸沉淀法、ZnS04沉淀法、酶法等。
Sevag法为实验常用法，谚法以正丁醇与氯仿按4：l混合，再行革取。
蛋白酶除蛋白是目前认为较好方法，将蛋白水解，再透析除去。
B.脱色植物多糖提取物中含有酚类化合物而使其颜色较深，可用吸附剂(纤维素、硅藻土、活性炭等)、离子交换柱(DEAE一纤维素)、氧化剂(H2O2)等脱除。
活性炭比表面积大，吸附能力强，在进行当归多糖的提取时只向多糖液中加入了0．1％左右的活性炭，煮沸后滤过即完成了脱色操作。
此法成本低廉，适合工业化生产。
C.除小分子杂质小分子杂质如低聚寡糖的残留往往影响多糖的生物活性，需要进一步脱除，提高纯度。
传统的方法是透析法，该法操作简单、技术成熟，但周期长，往往需要2一3天，常温下操作有可能造成多糖的霉变，必要时需加入少量防腐剂或需在低温条件下进行。
随着膜分离技术的发展，纤维滤器透析法已经发展起来了，它利用不同孔径的膜使大小不同的分子分级，这种方式可缩短生产周期，而且条件温和，无疑是多糖脱除杂质的一条新途径。
D.多糖的分级纯化采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．a)按溶解性不同分离a.1分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．a.2盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。
常用的盐析剂有氯化钠、氯化钾、硫酸铵等，其中以硫酸铵最佳。
b)柱层析法b.1凝胶柱层析法[6]凝胶柱层析法常用的凝胶有葡聚糖凝胶(Sephadex)和琼脂糖凝胶(Sepharose)，以不同浓度的盐溶液和缓冲溶液作为洗脱剂，从而使不同大小的多糖分子得到分离纯化，但不适宜粘多糖的分离。
图4： 100kDa 以上酸性糖过凝胶柱层析色谱图[7]b.2纤维素阴离子交换剂柱层析法纤维素阴离子交换剂柱层析法常用的交换剂为DEAE一纤维素和ECTEOLA一纤维素，分类硼砂型和碱型两种，洗脱剂可用不同浓度碱溶液、硼砂溶液、盐溶液，其优点可吸附杂质、纯化多糖，并适用于分离各种酸性、中性多糖和粘多糖。
如百合多糖、北沙参多糖、太子参多糖等。
b.3活性炭柱层析法活性炭吸附量大、效率高，是分离水溶性物质的常用吸附剂。
柱层析时活性炭中常拌入等量的硅藻土作稀释剂，以增加溶液的流速。
糖溶液上柱后先用水洗脱无机盐、单糖等再依次增加乙醇浓度进行洗脱。
四、多糖的纯度鉴定经过分级纯化的多糖在测定结构前须进行纯度鉴定．而且多糖的纯度不能用通常化合物的纯度标准来衡量，因为即便是多糖纯品，其微观也并不均一，仅代表相似链长的多糖分子的平均分布，通常所谓的多糖纯品也只是一定相对分子质量范围的多糖的均一组分．目前常用于多糖纯度的鉴定方法有：高效液相、凝胶层析法、电泳法、色谱法、旋光度法[8]等．五、疑点难点多糖制备过程中蛋白质的脱除是目前分离纯化多糖的难点[9]。
Sevag法需要消耗大量的有机溶剂，且操作烦琐；三氟三氯乙烷的沸点较低(bp56℃)易挥发，不宜大量应用；三氯乙酸可引起多糖的降解，从而影响其生理活性；酶价格昂贵，不适合工业化生产。
可以借鉴其它蛋白质脱除的方法，例如用天然澄清剂能简化提取工艺，提高多糖纯度。
脱色也是多糖提取纯化过程中面临的一个难题。
活性炭会吸附多糖而造成多糖的损失；H2O2氧化脱色容易引起有些多糖的降解六、多糖的应用展望我国对多糖的研究起步较晚，但近年来的工作取得了较大的进展，愈来愈多的多糖被发现．并证实它们具有复杂、广泛的生物活性和功能．随着对多糖生物活性的深入研究，多糖的生物活性机理，功效因子会更加明确，它的应用领域也将会更加拓宽．然而，由于多糖本身结构比较复杂，种类繁多，其结构测定和分离纯化有很大的难度；有些多糖在天然植物中的含鼍低且不易分离及多糖的药理作用与诸多凶素有关，给多糖的研究和应用带来许多的挑战，这需要相关行业的人士共同应对．参考文献：[1]罗立新姚汝华少奇多糖的分离与纯化(华南理工大学生物工程系，广州510641)[2]刘兴杰，刘传琳，任虹，等．海葵等四种动物粘多糖碱提取的比较研究D]．烟台大学学报，2001，14(4)：264—268．[3]罗立新姚汝华少奇多糖的分离与纯化(华南理工大学生物工程系，广州510641)[4] 杨云,谢新年,孟江,等酶法提取多糖的研究食品科学, 2003, 24 (10) : 931[5] T．Miyazaki，M．Nishijima，Carbohydr．Res．，1982，109：290—299[6]方积年．药学通报，1984，19(1O)：46—49[7]罗立新姚汝华少奇多糖的分离与纯化(华南理工大学生物工程系，广州510641)[8] 张惟杰1复合多糖生化研究技术上海:上海科学技术出版社, 1987: 1211[9] 叶姜瑜,谈峰多糖的纯化及组分分析1西南师范大学学报, 2002, 27 (6) : 94529491。