一、非洲猪瘟现场快速检测实验操作规程
非洲猪瘟常态化采样监测实施方案
非洲猪瘟常态化采样监测实施方案为进一步强化非洲猪瘟常态化防控，继续做好全省非洲猪瘟主动监测，按照农业农村部要求，结合我省实际情况，制定本方案。
一、指导思想贯彻落实党中央、国务院关于非洲猪瘟常态化防控的决策部署，适应当前非洲猪瘟防控新形势新要求，有效预防、控制和扑灭非洲猪瘟疫情，切实维护养猪业稳定健康发展，保障猪肉产品供给安全。
二、工作目标落实属地管理责任制，充分发挥各级动物疫病预防控制机构在非洲猪瘟防控工作中的重要作用，持续巩固非洲猪瘟防控工作取得的成效，进一步扩大监测覆盖面，针对重点区域和场点，主动开展非洲猪瘟采样监测工作，生猪调出大县、规模养殖场和高风险区域做到全覆盖监测。
三、主要工作（一）监测范围全省生猪养殖场（户）、生猪屠宰场、生猪无害化处理厂、备案运输车辆等。
（二）监测对象- 1 -猪、野猪及相关环境。
（三）监测时间2021年全年。
（四）监测内容1.养殖环节省疫控中心每年对年出栏5000头以上、2000-5000头、500-2000头的规模猪场，分别按照10%、5%、2%的比例开展飞行监测。
市级疫控中心每半年对辖区内年出栏2000头以上的规模猪场进行1次全覆盖采样监测。
县级疫控中心每半年对辖区内年出栏500-2000头的规模猪场进行1次全覆盖采样监测。
2.屠宰环节省疫控中心每半年对跨省销售生猪产品和年屠宰10万头以上的屠宰企业以及生猪屠宰、加工一体化企业组织一次全覆盖抽样监测，对年屠宰10万头以下的屠宰企业按10%比例组织一次抽样监测。
市级疫控中心每半年对辖区内年屠宰5-10万头和本市区屠宰企业至少开展1次全覆盖抽样监测。
县（市、区）级疫控中心确保每季度对辖区内所有屠宰企业至少开展1次全覆盖监测。
- 2 -3.运输和无害化处理环节市级疫控中心每半年对运输车辆监测数量不少于辖区内备案数量的20%。
县级疫控中心每季度对辖区内无害化处理厂和备案运输车辆进行1次全覆盖采样监测。
4.异常死亡生猪风险监测各地要结合非洲猪瘟监测和日常监测工作，对养殖场、屠宰场、无害化处理厂等场点异常死亡的生猪进行临床诊断和实验室检测，特别要进行非洲猪瘟核酸检测，发现阳性样品，迅速开展溯源并按规定采取措施。
生猪屠宰厂非洲猪瘟病毒PCR检测技术浅析
为规范生猪屠宰环节非洲猪瘟检测工作，降低非洲猪瘟病毒扩散风险、切断非洲猪瘟传播途径，确保生猪产品质量安全，结合屠宰厂实际，现就屠宰环节非洲猪瘟PCR检测技术和注意事项浅析如下：一、适用范围适用猪脾脏、淋巴结、扁桃体、血液等组织和血粉中非洲猪瘟病毒核酸的检测。
二、仪器与用具分析天平、高速台式离心机、冰盒、荧光PCR仪及配套反应管、组织研磨器、振荡器、冰箱、可调移液器（2μL、20μL、200μL、1000μL）及吸头、1.5mL离心管（无核酸酶）、非洲猪瘟检测PCR试剂盒（按厂家说明使用）、防护用品等。
三、操作步骤1、样品采集及运输采集淋巴结、脾脏、扁桃体、血液或血粉等材料。
样品应在冷藏条件下尽快运输至实验室，避免反复冻融。
采样时应穿戴个人生物安全防护用品，实施现场消毒和废弃物处理。
活猪大多采用全血或血清检测，对同一来源的生猪最多100头为1份混合血样。
病死猪多采取组织样品检测。
2、样品处理检测前样品应在二级生物安全柜中处理。
处理后的样品应置于60℃条件下灭活30分钟。
血液样品：用EDTA抗凝采血管采集血液，充分混匀，编号或用不加抗凝剂血管采集后静置2-4小时分离出血清或按8000转/秒离心2分钟取血清。
组织样品：用无菌工具取淋巴结、脾脏、扁桃体约2g，加入10mLPBS或生理盐水，在组织匀浆器中充分研磨后将研磨液转入1.5mL离心管中编号备用。
血粉样品：取血粉约2g，加入10mLPBS或生理盐水混合均匀，编号备用。
3、样品保存处理好的待检样品在2℃～8℃条件下保存一般不超过24小时，如需长期保存，应放置于-70℃以下冰箱，切忌反复冻融。
4、病毒DNA的提取①待检样品总份数用n表示，取n个1.5mL灭菌离心管，每管按顺序编号。
②每管加入样本处理液A30?L。
③每管分别加入处理好的待检样品3?L，充分混匀，在室温18-25℃下处理5分钟，旋涡振荡30秒。
④每管再加入样本处理液B30?L，振荡混匀离心后待检。
猪非洲猪瘟防控操作规程
猪非洲猪瘟防控操作规程
《猪非洲猪瘟防控操作规程》
一、加强畜禽流行病监测
1. 对疫情高发地区进行定期监测，并及时报告病例。
2. 对疫情病例进行溯源调查，查找病源和传播途径。
二、严格实施生物安全防护措施
1. 对养殖场进行严格的进出检疫，确保病源不外流。
2. 定期进行场地和设备的消毒，保持清洁卫生。
3. 确保饲料、饮水和环境不受污染，加强动物健康管理。
三、有效的疫苗防治
1. 对猪群进行定期疫苗接种，提高疫苗免疫效果。
2. 对发现感染病例的猪群进行隔离处理，避免疫情扩散。
四、加强疫情宣传和教育
1. 对养殖户和相关工作人员进行猪非洲猪瘟知识培训，提高防控意识。
2. 对社会公众进行宣传，提高对猪非洲猪瘟的认识和防范能力。
五、做好疫情监测和溯源工作
1. 建立健全的疫情监测和报告体系，确保疫情及时发现和报告。
2. 积极开展疫情溯源工作，查清疫情传播途径，及时采取控制措施。
六、加强政府监管和支持
1. 政府加强对猪非洲猪瘟防控的政策支持和监管力度。
2. 对疫情高发地区开展帮扶工作，提高养殖户防控能力。
以上操作规程是《猪非洲猪瘟防控操作规程》的要点，希望可以为养殖户和相关工作人员提供参考，有效防控猪非洲猪瘟的扩散。
非洲猪瘟抗原检测原理
非洲猪瘟抗原检测原理非洲猪瘟抗原检测简介非洲猪瘟是一种高传染性病毒病，由非洲猪瘟病毒引起，猪是其唯一的宿主。
该病毒传染力强，致死率高，严重威胁着猪的生产。
因此需要进行非洲猪瘟抗原检测，以便及时防控。
检测原理非洲猪瘟抗原检测采用的是免疫学方法。
病毒感染后，体内会产生相应的抗体和抗原。
通过检测血清中抗原的含量，可以判断猪是否受到非洲猪瘟病毒的感染。
常见的检测方法有酶联免疫吸附测定法和荧光抗体法。
酶联免疫吸附测定法酶联免疫吸附测定法又称ELISA方法，是一种常用的非洲猪瘟抗原检测方法。
该方法利用特异性抗体将血清中的非洲猪瘟病毒抗原与检测板表面的抗原结合，并通过酶底物反应来检测抗原的含量。
具体操作方法为：将样品加入检测板中，与检测板上的抗原结合；洗去未结合的样品；加入特异性抗体，结合血清中的非洲猪瘟病毒抗原；洗去未结合的抗体；加入标记酶，与特异性抗体结合；洗去未结合的标记酶；加入底物，经酶催化反应后可形成颜色，并通过检测光密度来计算抗原的含量。
荧光抗体法荧光抗体法采用荧光标记的成熟抗体与非洲猪瘟病毒抗原结合，经过检测器检测荧光光强度的变化，来判断抗原的含量。
该方法具有敏感性高、快速、简便等特点。
具体操作方法为：将荧光标记的成熟抗体加入样品中，与非洲猪瘟病毒抗原结合；通过荧光显微镜观察荧光光强度的变化或将样品放入荧光检测器中检测荧光信号的强度，从而判断抗原的存在与否。
总结非洲猪瘟抗原检测是一项非常重要的工作，在防控非洲猪瘟病毒扩散方面起到了重要的作用。
通过ELISA和荧光抗体法等方法，可以较为准确地检测出猪体内的非洲猪瘟病毒抗原，为猪的健康保驾护航。
注意事项在进行非洲猪瘟抗原检测时，需要注意以下几点：1.采集样本时需要采用无菌技术，避免外界细菌或病毒的污染。
2.检测前需要对检验仪器进行校准，确保测试结果的准确性和可靠性。
3.检测过程中需要注意安全防护措施，避免感染或交叉感染。
4.需要遵循操作规程，按照要求进行操作，防止误差和不必要的困扰。
非洲猪瘟的检测方法及防控措施
河南农业2023年第25期性、高度接触性传染病（如猪瘟、高致病性蓝耳病、猪丹毒等）相似，仅靠临床症状和肉眼观察很难判断其是不是非洲猪瘟，只能依赖于实验室检测手段去诊断。
目前，实验室检测的方法主要有酶联免疫吸附实验（ELISA）、聚合酶链式反应（PCR）和实时荧光定量PCR 等。
ELISA 利用抗原抗体特异性结合的特性去定量检测病猪体内ASFV 抗体，该方法简单快速，且相较于PCR 而言成本较低，但是对于尚未产生抗体便死亡的急性病例来说，就需要采用其他的检测方法来判断其是否感染ASFV。
PCR 原理针对非洲猪瘟病毒保守区域设计引物，对采集的血液或组织病料等相关物质进行 DNA 提取，并进行 PCR 反应，可对其进行快速准确诊断，但相对于小检测结果更加敏三、非洲猪瘟的防控措施世界各国都在深入研究 ASFV 疫苗和抗ASFV 的药ASFV 的疫苗和抗ASFV 我国和其他发生非洲猪瘟疫情的国家可以借鉴其诊断方法，对现有猪场进行血清学检测。
二是各及时修改、部分环节和场点的环境阳性率较高，清洗、消毒，严格控制进入场区的生猪、人员、物资、车辆等。
五是推进非洲猪瘟等重大动物疫病分区防控，强化调运、屠宰和检疫监管，不断提升各环节生物安全防护水平和区域综合防疫能力。
四、结论根除非洲猪瘟不仅需要政府的快速果断处理手段，还需要民间团体、执业兽医、乡村兽医及广大养殖户的广泛参与和协作。
目前，我国非洲猪瘟疫情依然是间断式散发，而非集中大规模暴发，要有打攻坚战的准备，要严格执行防控非洲猪瘟的法律法规和措施，只有运用综合的防控措施才能打赢非洲猪瘟的歼灭战。
我国有防控重大动物疫病的成功经验，相信一定会在这场非洲猪瘟歼灭战中取胜。
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生猪屠宰检疫过程中非洲猪瘟的检疫技术
生猪屠宰检疫过程中非洲猪瘟的检疫技术非洲猪瘟（African Swine Fever，简称ASF）是一种由非洲猪瘟病毒引起的严重烈性疾病，目前在全球范围内广泛流行，对养猪业造成了巨大的经济损失。
为了防范和控制ASF的传播，各国在猪屠宰检疫过程中采取了一系列的检疫技术。
在猪屠宰检疫过程中，需要对猪只进行严格的体检，以筛查患病或疑似患病的猪只。
体检时，检疫人员需要细致观察猪只的一般状况、行动、姿势和呼吸等情况，并通过触诊、听诊等方法进行进一步检查。
还需要检查猪只的肌体情况，包括皮肤颜色、整洁程度、毛发光泽以及腹泻、结伴等症状的存在。
在屠宰检疫过程中，需要进行病理学检查，以明确和确认可能的ASF感染情况。
病理学检查主要包括对猪只内脏器官进行解剖，观察器官的形态、大小、颜色等变化，并通过切片染色和显微镜观察，检查病原体是否存在。
一般来说，ASF感染的猪只内脏器官如肝脏、脾脏、淋巴结等会出现明显的变化，如肿大、出血、坏死等。
在屠宰检疫过程中，还需要进行病原学检查，以确定ASF病毒的存在和传播情况。
病原学检查可以通过病毒分离、鉴定和检测等多种方法进行。
病毒分离是指从疑似感染猪只的组织或体液中分离出病毒，并通过细胞培养或实验动物感染等方法，进行进一步鉴定。
病毒检测则是通过PCR等分子生物学方法，直接检测猪只体内是否存在ASF病毒。
在屠宰检疫过程中，还需要进行病原生物学监测，以监测和评估ASF的传播风险和流行趋势。
病原生物学监测可以通过采集猪只病死、淘汰或病变组织进行实验室检测，并通过建立流行病学模型分析，进行病原生物学监测和评估。
猪屠宰检疫过程中非洲猪瘟的检疫技术主要包括体检、病理学检查、病原学检查和病原生物学监测等。
这些技术可以帮助检疫人员及时发现和诊断ASF感染的猪只，保护养猪业的安全和发展。
但需要注意的是，非洲猪瘟病毒传播范围广泛，病毒量极低，必须采取严格的防护措施，保障检疫人员和养猪场的安全。
猪用生物制品及相关猪源原辅材料中非洲猪瘟病毒核酸检测方法
猪用生物制品及相关猪源原辅材料中非洲猪瘟病毒核酸检测方法1 适用范围1.1猪用及采纳猪源原辅材料制备的生物制品成品及半成品。
1.2猪源毒种。
1.3 猪源细胞及相关制品生产用细胞。
1.4其他猪源原辅材料〔如组织、血清、胰酶衍生物等〕。
2 取样和处理2.1 疫苗2.1.1 活疫苗取至少2瓶样品，按瓶签注明头份用适宜稀释液分别稀释成10头份/0.2ml，等量混合，取混合液进行核酸提取。
2.1.2 灭活疫苗取至少2瓶样品，等量混合后进行以下处理。
2.1.2.1 油佐剂灭活疫苗取36 ml混合疫苗，参加正戊醇4.0 ml，充分振荡混合1分钟，2～8℃冰箱静置不少于60分钟，直至油相和水相别离。
取水相进行核酸提取。
2.1.2.2 水性佐剂灭活疫苗2.1.2.2.1铝胶佐剂灭活疫苗取混合疫苗5.0 ml，摇匀，参加0.25 g解离剂CPG-odn〔人工合成的寡聚核苷酸〕，放入摇床〔200 r/min〕37℃解离1小时，5000 r/min离心10分钟，取上清液进行核酸提取。
2.1.2.2.2其他水性佐剂灭活疫苗直接取混合样品进行核酸提取。
2.2 其他生物制品和半成品冻干类制品，按活疫苗进行取样和处理；液体制品及半成品，取至少2份〔瓶〕样品，等量混合，取混合液进行核酸提取。
2.3 猪源毒种取至少2支毒种。
冻干毒种，按冻干前体积复溶后等量混合，取混合液进行核酸提取；非冻干毒种，等量混合后直接取混合液进行核酸提取。
2.4 猪源细胞除另有规定外，取至少2瓶细胞浓度不少于107.0个细胞/ml的细胞悬液进行核酸提取。
2.5 其他猪源原辅材料2.5.1 猪组织每种组织，分别取样和处理。
取不少于2.0 g组织，研磨后用5倍体积灭菌PBS悬浮，70℃灭活30分钟，4℃下以2022～3000 g离心10分钟，取上清液进行核酸提取。
2.5.2 猪血清每批血清取至少2个最小包装的样品，等量混合，取混合液进行核酸提取。
2.5.3 猪胰酶干粉状胰酶，取至少2份样品，依据使用情况分别配制成不低于 2.5%浓度的溶液，等量混合，取混合液进行核酸提取；液体胰酶，取至少2个最小包装的样品，等量混合，取混合液进行核酸提取。
非洲猪瘟试剂盒安全操作及保养规程
非洲猪瘟试剂盒安全操作及保养规程非洲猪瘟是一种高度接触性传染病，引起猪只严重的呼吸系统和胃肠道疾病，导致发热、呼吸急促、呼吸道病理变化、厚征性病变等。
非洲猪瘟的传播速度非常快，对养殖业和国家经济产生了严重影响。
因此，为了及时识别、监测、控制和预防非洲猪瘟，许多养殖场和疫病预测机构使用非洲猪瘟试剂盒。
使用这种试剂盒需要特别注意安全操作和保养规程。
试剂盒安全操作安全防护为了保障检测人员的安全和避免污染造成非洲猪瘟的传播，需要严格采取以下防护措施：1.需要穿戴防护衣或隔离衣，戴上防护口罩和手套，并严格遵守个人卫生规范；2.在处理样本和试剂的过程中，应尽可能避免产生气溶胶。
3.手洗：使用肥皂和流动水，洗手必须要彻底（至少洗20秒钟），排干后再用干纸巾擦干操作规程1.将检测试剂的包袋取出，并拆开包袋，将所需材料和试剂摆放在干净的工作台上。
2.将试管架最后一列再加手套，示例样品分别加入易污染方位即中包，取适量样品注满管内并于管内缝隙无空气泡即可，加样品前大力震动10-20秒；3.取试管架上的空试管向其分别加入试剂，并按说明书上的要求顺序加入。
并使用试剂管盖口或笔等工具轻轻搅拌，轻旋容10min；4.操作完毕后，对污染的物品进行处置，并进行消毒。
试剂盒保养规程为了保证试剂盒的准确性和使用寿命，需要采取以下保养规程：1.储存温度：试剂盒应存放在干燥、通风、无尘、避光、不同温度的房间内；长期保存的试剂，应尽量存放在冰箱内，避免被日光直接照射。
2.试剂盒生产日期、保质期等信息需要在使用前查看，过期后不得使用。
3.在试剂盒使用期间，应对试剂进行定时检查和校准；如果发现试剂已经过期或者出现凝固、霉变等异常，应立即更换。
4.使用后，试剂盒必须妥善存放。
不再使用的试剂和废弃物应妥善处理，禁止将残留试剂直接排入下水道或其他自然环境中，应按规定进行分类处置。
5.预防试剂储存时间过长或条件不恰当所导致的失效，并保证试剂的安全性和准确性。
非洲猪瘟抗原检测原理(一)
非洲猪瘟抗原检测原理(一)非洲猪瘟抗原检测什么是非洲猪瘟？非洲猪瘟（African swine fever，ASF）是一种由非洲猪瘟病毒（ASFV）引起的猪类传染病。
该病毒没有疫苗，传染性很强，致死率高达100%，在全球范围内造成了重大的经济损失。
什么是抗原检测？抗原检测是一种常见的生物医学检测方法，用于检测样品中是否存在一定的分子（即抗原），用于快速诊断病毒和微生物感染。
ASF抗原检测原理ASF抗原检测利用ASFV的特异性抗原与检测试剂中特异性抗体结合的原理，通过观察试剂是否与样本反应来判断样本中是否存在ASFV 抗原。
具体来说，ASF抗原检测包含以下步骤：•提取样本中的ASFV抗原•将提取得到的抗原与检测试剂中的特异性抗体结合•通过观察测定结果来判断样品中是否存在ASFV抗原，如果有，则会出现特定的信号ASF抗原检测方法目前，常用的ASF抗原检测方法包括：•酶联免疫吸附试验（ELISA）•原位杂交检测（ISH）•免疫荧光法（IFA）•金标记免疫层析试验（IC）其中，ELISA是最常用的一种方法。
它具有灵敏度高、操作简单、成本低的特点，可以在不到30分钟内进行检测，特别适用于野外环境下的快速检测。
ASF抗原检测的应用ASF抗原检测可以用于ASF感染的快速诊断，从而采取相应的防治措施，避免病毒传播和扩散。
目前，在全球多个疫区，ASF抗原检测已经成为一项重要的监测手段，用于保障猪肉生产的安全。
结论非洲猪瘟的抗原检测是一种快速、准确的诊断方法，可以为ASF的预防和控制提供重要的支持。
未来，随着病毒检测技术的不断创新和完善，ASF抗原检测将更加普及和应用。
ASF抗原检测的局限性虽然ASF抗原检测是一种有效的快速检测方法，但是它也存在着一些局限性。
首先，ASF抗原检测的灵敏度存在一定的限制。
在疫情早期和低病毒载量的情况下，可能会出现假阴性的结果，导致病情没有得到及时的发现和诊断。
其次，ASF抗原检测还存在一定的交叉反应问题。
生猪屠宰检疫过程中非洲猪瘟的检疫技术
生猪屠宰检疫过程中非洲猪瘟的检疫技术非洲猪瘟（African Swine Fever，ASF）是一种由非洲猪瘟病毒引起的猪传染病，其病原体是一种DNA病毒，是一种可导致猪高死亡率和严重经济损失的疾病。
近年来，非洲猪瘟疫情在全球范围内呈现蔓延的趋势，对养殖业造成了极大的影响。
为了有效防控非洲猪瘟疫情的蔓延，生猪屠宰检疫过程中的检疫技术显得尤为重要。
本文将介绍生猪屠宰检疫过程中非洲猪瘟的检疫技术。
一、对进场猪只进行合格证明检查在生猪屠宰前，首先需要对猪只进行合格证明检查。
检查的内容主要包括猪只的来源、存栏时间、接触史、疫苗注射记录等情况。
对有可疑症状的猪只要进行隔离观察，对有疑似非洲猪瘟的猪只要立即报告。
二、入场检疫在生猪屠宰厂的入场区，需要设置检疫闸并配备专业的检疫人员。
来厂猪只必须进行临时检疫，包括对体温、呼吸、精神状态等进行检查，一旦发现可能患病的猪只要立即进行隔离处理。
对于从疫区输送过来的猪只，更需要进行特别监管，确保不会带入非洲猪瘟病毒。
三、隔离检疫在生猪屠宰厂内，需要设置专门的隔离检疫区域。
对于有疑似非洲猪瘟病例的猪只要进行隔离观察，并及时采取应急防控措施。
要加强对隔离区的消毒和通风，确保环境的洁净。
四、消毒处理在生猪屠宰厂内，需要经常对各个区域进行消毒处理。
特别是对于有接触疫区猪只的工作人员，需要定期进行消毒测温，并配备好相应的防护用具。
对车辆、设备、工作区域等也需要进行消毒处理，确保病毒不会通过这些途径传播。
五、检疫技术人员培训生猪屠宰厂内的检疫技术人员需要定期接受培训，了解最新的非洲猪瘟疫情防控技术和知识。
特别是要加强对非洲猪瘟病毒的识别和判断，以便及时发现疫情并采取措施。
六、监测体系建立生猪屠宰检疫过程中，需要建立健全的非洲猪瘟监测体系，包括建立疫情报告机制、加强对易感区的监测等。
只有及时发现病例并立即采取措施，才能最大程度地遏制疫情的传播。
七、人员防护在生猪屠宰检疫过程中，工作人员的防护非常重要。
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一、非洲猪瘟现场快速检测实验操作规程
本规程推荐的检测程序、仪器设备和试剂等可作为非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测方法的一般性指南，用户可根据实验室需求选择仪器设备型号及耗材，优化最佳的检测程序。
1 样品处理
1.1试验材料：待检样品为采集的猪全血，非洲猪瘟病毒荧光定量PCR快速检测试剂盒（缓冲液B1和缓冲液B2）。
1.2 设备与材料：小型离心机，涡旋振荡器，100μl移液器，吸头，1.5ml离心管。
1.3 操作步骤
血液混样操作：可将5份猪全血进行混样，每份血样取10μl于离心管后，涡旋振荡混匀，即为混样。
取10μl单样或混样新鲜抗凝全血加入100μl的缓冲液B1中，室温消化3分钟，涡旋混匀3~5次。
向上述混合液中加入100μl的缓冲液B2（恢复至室温并混匀使用），涡旋混匀，12000转/分钟离心1分钟，上清为PCR待检核酸，取2μl PCR待检核酸进行PCR反应。
如在2小时内检测则PCR待检核酸置于4℃保存，否则置于﹣20ºC以下冰箱保存。
2 PCR反应
2.1 试验材料：待检样品为PCR待检核酸，非洲猪瘟病毒荧光定量PCR快速检测试剂盒（PCR反应液、反应阳性对照和阴性对照）
2.2 设备与材料：荧光定量PCR仪，掌式离心机，20μl移液器，10μl移液器，吸头，荧光定量PCR反应管，乳胶手套，口罩。
2.3 操作步骤
扩增试剂准备：每个反应的体积为20μl。
根据检测样品数量每个反应管加入18μl PCR反应液。
依次取2μl阴性对照、PCR待检核酸、反应阳性对照到PCR反应管中。
PCR反应：加样后，将PCR管置于荧光定量PCR仪内进行如下反应：
1）95ºC预变性20秒；2）95℃变性10秒，58℃延伸20秒，共40个循环；设置58℃收集FAM荧光信号。
判定结果的有效性：阳性对照应出现特异性扩增曲线且Ct值＜35，阴性对照无特异性扩增曲线或无Ct值。
当样品的扩增结果有典型的扩增曲线且Ct 值<40时可判定为阳性（强阳性样本的Ct 值<30）。
当样品的扩增结果无Ct 值或背景信号之下时，判定为阴性结果。
每个反应管加入18μl PCR 反应液
PCR 反应 抗凝全血10μl 血清/血浆20μl 组织样品0.1~0.2g 加入10倍体积生理盐水 饲料样品0.1~0.2g 研钵、玻璃匀浆器、研磨
仪制成组织匀浆液 加入10倍体积生理盐水
研钵、玻璃匀浆器、研磨仪制成组织匀浆液
10000rpm 离心1min ，取
200 μl 上清 DNA 病毒基因组提取试剂盒提取污水等液体样品200μl
装有100μl 缓冲液B1的1.5ml 离心管
取匀浆液20μl
取PCR 待检核酸2μl
室温3分钟内涡旋混匀3~5次 加入100μl 缓冲液B2，涡旋混
12000转/分钟离心1分钟，上清为PCR 待检核。