卵巢癌组织中miR—26a的表达及其临床意义
血浆miR-20a和let-7在卵巢癌中的表达及其临床意义-第三军医大学学报
血浆miR-20a和let-7a在卵巢癌中的表达及其临床意义孟伟伟，贺付成，吕品，曲蕴慧( 450052 郑州，郑州大学第一附属医院检验科)[摘要] 目的检测microRNA-20a(miR-20a)和let-7a在卵巢癌患者血浆中的表达，探讨其临床意义。
方法选取卵巢癌患者50例为实验组，另选择同期与其年龄性别相匹配的健康体检者20例为健康对照组，采用实时定量荧光定量酶链反应（qRT-PCR）检测血浆miR-20a和let-7a表达水平，同时采用电化学发光法测定其血浆中糖类抗原125（CA125）的含量并进行统计分析。
结果卵巢癌患者血浆中miR-20a和let-7a的相对表达量分别为4.02±3.77和0.42±0.34，卵巢癌患者血浆中miR-20a和CA125的表达均高于对照组（P<0.05），let-7a表达低于对照组（P<0.05）。
临床病理分期I/Ⅱ期和Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌患者血浆let-7a相对表达量的中位数分别为0.39和0.21，差异有均统计学意义（P<0.05），而血浆miR-20a的表达与临床病理分期无关，miR-20a和let-7a的相对表达量与年龄、淋巴结转移和组织学分类均无关,P>0.05。
miR-20a、let-7a和CA125的ROC曲线下面积为0.898（95%CI：0.802～0.957），0.876（95%CI：0.775～0.942），0.819（95%CI：0.708～0.900）。
结论卵巢癌患者血浆中miR-20a和let-7a均表达异常，提示能够成为辅助卵巢癌诊断的标志物。
[关键词]卵巢癌；miR-20a；let-7a；CA125；血浆[中图法分类号] R 737.3 [文献标志码] A卵巢癌占女性肿瘤死亡率的第四位，全世界每年发病的大约200，000例中有125,000 死于卵巢癌，由于70%患者就诊时已属晚期,常形成难治的复发及转移,而缺少早期诊断方法是其主要原因[1]。
鼻咽癌miR-26a
miRNA
• MicroRNA（miRNA）是近年来新发现的一类大小约为 19~25 个 核苷酸（nucleotide, nt）的非编码单链小分子 RNA，由具有发 夹结构的大小约为70~100nt 的单链 RNA 前体（pre-miRNA）经 过 Dicer 酶剪切加工后生成，通过与靶基因 mRNA 的3’非编码区 （3’ untranslated region, 3’UTR）互补匹配导致该 mRNA 的降解， 大多数 miRNA 与底物 mRNA 不完全配对结合，通过转录后抑制 翻译来调控基因表达。 • miRNA基因以单拷贝、多拷贝或基因簇等多种形式存在于基因 组中，而且绝大部分定位于基因间隔区，其转录独立于其他基 因，并不翻译成蛋白质，而是在体内代谢过程中发挥多种调控 作用，包括动植物的组织器官发育、细胞分化和凋亡、胰岛素 分泌、脂肪代谢等多种生命活动，其表达失调将导致重大疾病， 如肿瘤的发生。
主要研究内容
• 检测了miR-26a在鼻咽癌组织和细胞系中的 表达水平，并观察了其对细胞生长、细胞 周期分布、克隆形成的影响。并采用裸鼠 模型观察miR-26a对鼻咽癌肿瘤形成的作用， 并探讨了这些作用的分子机制。
Figure 1. The expression of miR-26a was reduced in NPC cell lines and clinical specimens. A, expression of miR-26a in 7 NPC cell lines. B, average expression level of miR-26a in human NPC specimens (n ¼ 18) and normal nasopharyngeal epithelial tissues (n ¼ 16). miRNA abundance was normalized to U6 RNA.
妊娠期肝内胆汁淤积症患者中miR-26a的表达及临床意义
妊娠期肝内胆汁淤积症患者中miR-26a的表达及临床意义发表时间：2016-04-29T17:08:13.600Z 来源：《心理医生》2015年13期供稿作者：谢晶谢黎明王淑芬蒋丰童文娟[导读] 南华大学附属第一医院妇产科湖南衡阳 421001）目前病因尚不清楚，妊娠期肝内胆汁淤积症可能与女性激素、遗传及环境等因素发挥重要作用有关[1]。
谢晶谢黎明王淑芬蒋丰童文娟（南华大学附属第一医院妇产科湖南衡阳 421001）【摘要】目的：研究miR-26a在妊娠期肝内胆汁淤积症患者中的表达及其在妊娠期肝内胆汁淤积症中的作用。
方法：收集妊娠期肝内胆汁淤积症51例患者外周血及同期正常妊娠妇女51例外周血RNA，qRT-PCR检测表达。
结果：miR-26a在妊娠期肝内胆汁淤积症患者中明显高于正常妊娠妇女。
血清miR-26a水平与围产儿预后相关，但是与患者的年龄、经产、孕周与否没有关系，但是。
结论：血清miR-26a在妊娠期肝内胆汁淤积症的诊断和围产儿预后预测中有一定的作用和意义。
【关键词】妊娠；miR-26a；临床意义【中图分类号】R714.25 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2015）13-0098-02 妊娠期肝内胆汁淤积症是妊娠中、晚期的肝脏疾病，一般产后预后较好。
发病最初以皮肤瘙痒，有时出现血胆汁酸、胆红素、肝酶升高为临床特点。
目前病因尚不清楚，妊娠期肝内胆汁淤积症可能与女性激素、遗传及环境等因素发挥重要作用有关[1]。
最早人们在线虫中发现了lin-4 and let-7这两个miRNA后，紧接着又有许多miRNA被研究者成功的发现。
在人类各种疾病中，miRNA表达谱能根据其特定的疾病特性从而能对不同的疾病进行分型。
miRNA这种独特的分类特性同时与多种疾病的预后也有明显关系，其包括对疾病治疗后效果、是否复发及对总体生存率的影响。
miR-26a位于人类第3号染色体上，全长有21个核苷酸组成，且在多种组织中能广泛表达。
血清中MiRNA-26a检测在早期前列腺癌诊断中的意义
１ ． ４ Ｐ Ｓ Ａ 检 测
由佳木斯大学附属第一 医院检验科完成 ， 查 阅病 历 可 获
得。
１ ． ５ ｍｉ Ｒ ＮＡ 的提 取 、 分离和 Ｒ Ｔ—Ｐ Ｃ Ｒ 检 测
按 照 ＡＢ Ｉ 公 司 ｍｉ ＲＮＡ 提 取 试 剂盒 说 明分 离 、 提 取 ｍｉ Ｒ — ＮＡ。 严 格 按 照 试 剂 盒 说 明书 方 法 步 骤 进行 逆转 录 ， 最 终 获 得
Ｍａ ｎ Ｍｉ Ｒ ＮＡ Ｒ Ｔ Ｋｉ ｔ ２ ０ ０ ｒ ｘ ｎ ｓ ＡＢ Ｉ 生 物 公 司 ；Ｔ ａ ｑ Ｍａ ｎ ＴＭ
Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ａ １ Ｐ Ｃ Ｒ Ｍａ ｓ ｔ ｅ ｒ Ｍｉ ｘ ２ Ａ Ｂ Ｉ 生物公司。
１ ． ３ 引物 和 探 针
ＧＡＡＣＧＣＴＴＣＡＣＧＡＡＴＴＴＧＣ ＧＴＡＡＴＣＣＡＧＧＡｒ ＣＴＧＴＣＡＡＣＧＡＴＡＣＧＣＴＡＣＰ ＣＲ Ｕ６ ｆ ｏ ｒ ＲＴ ＧＡＡＣＧＣＴＴＣＡＣＧＡＡＴＴＴＧＣ
Ｍ． Ｒ一 ２ ６ ａ ｆ ｏ ｒ ＧＣＴＧＴＣＡＡＣＧＡＴＡＣＧＣＴＡＣＣＴＡＡＣＧＧＣＡＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＡＧ ＲＴ
进行 Ｐ Ｃ Ｒ反应扩增 。 数据分析 ： 采 用 校 正 曲线 法 进 行 分 析 。 １ ． ６ 统 计 学 处 理
（ 佳 木斯 大 学 附属 第一 医院 ， 黑龙 江 佳 木 斯 １ ５ ４ ０ ０ ３ ）
关键 词 ： 血清 ； Ｍｉ Ｒ ＮＡ一 ２ ６ ａ ； 早 期 前 列 腺 癌 中 图分 类 号 ： Ｒ７ ３ ７ ． ２ ５ 文献标识码 ： Ｂ 文章 编 号 ： １ Ｏ Ｏ ８ —０ １ ０ ４ （ ２ ０ １ ３ ） Ｏ ４ —０ ０ ４ ３ 一Ｏ ２ 前 列腺癌 （ ｐ ｒ ｏ ｓ ｔ ａ ｔ ｅ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ， Ｐ Ｃ ａ ） 在 欧 美 国家 尤 其 非 洲 裔 诊 收 治 的 良性 前 列 腺 增 生 患 者 血 清 ２ Ｏ 例， 前 列 腺 癌 患 者 血 清 黑人最常见 ； 在 亚 洲 及 前 苏 联 国家 较 少 见 。 近年 来 ， 我 国 的经 ２ Ｏ 例， 正 常人 血 清２ Ｏ 例。
microRNA对肝癌诊断和治疗的潜在意义_刘明洋
692《癌症进展》2011年11月第9卷第6期ONCOLOGY PROGRESS，Nov2011，Vol.9，No.6*综述＊microRNA对肝癌诊断和治疗的潜在意义刘明洋综述关健审校中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院病理科，北京100730关键词：microRNA肝细胞性肝癌分子标志物基因治疗中图分类号：R735.7文献标识码：A肝细胞性肝癌是预后较差的恶性肿瘤之一，由于病人被发现时多已是中晚期，并且缺乏有效的治疗手段，因此死亡率较高。
微小RNA（microRNA，miRNA）是一族长度为19 22nt的非编码RNA，在正常细胞中调控细胞增殖发育、分化和凋亡等，与肿瘤的发生发展相关。
本文就miRNA与肝癌的关系，以及对肝癌分子诊治的潜在价值进行综述。
1肝癌肝细胞性肝癌（肝癌）是全球发病率居第五位的恶性肿瘤。
原发性肝癌中有80% 90%是肝细胞性肝癌（以下简称肝癌），其他为胆管细胞性肝癌和混合性肝癌等［1］。
肝癌侵袭力强、死亡率高［2］。
早期肝癌治疗的有效手段为手术切除、肝移植，但术后5年生存率仅为70%。
进展期肝癌治疗手段更为有限，由于已发生血行转移，多数患者丧失手术机会，而化疗作用收效不大且有药物毒性［3］，因此早期诊断是肝癌有效治疗的关键。
寻找肝癌有效的早期诊断标志尤为重要。
肝癌多由于乙型、丙型肝炎病毒感染至肝硬化，最终发展为肝癌，其他病因有酒精性肝炎、自身免疫性肝炎等［4］。
肝癌的发生伴随着基因的改变，包括p53、C－myc、CyclinD1、Wnt－β－catenin及多种激酶生长因子受体的表达异常。
近年来研究发现，微小RNA与肿瘤的发生有关，为肝癌的诊断和治疗提供新的研究方向。
2miRNAmiRNA是长度为19 22nt的非编码RNA，不编码蛋白质，曾被认为是无功能的分子，近年来成为基因分子领域的研究热点。
发现其作用在靶基因mRNA3’UTR区，以干扰mRNA翻译的方式负向调控基因的表达［5］。
不同转移能力卵巢癌细胞系的microRNA和基因表达谱研究的开题报告
不同转移能力卵巢癌细胞系的microRNA和基因表
达谱研究的开题报告
一、研究背景和意义：
卵巢癌是女性生殖系统中最常见的一种恶性肿瘤，其高度侵袭性和
易于复发的特点给治疗带来了挑战。
近年来，越来越多的研究表明，microRNA（miRNA）和基因表达谱（gene expression profile）在卵巢癌的发生和转移中发挥着关键作用。
然而，虽然已有研究报道了不同转移
能力的卵巢癌细胞系的miRNA和基因表达谱存在明显差异，但整体上还
未形成系统性、综合性的证据，因此有必要对该领域进行深入系统研究。
二、研究内容和方法：
本研究将收集两种不同程度转移能力的卵巢癌细胞系，综合运用miRNA和基因表达谱的分析技术，分别对两种卵巢癌细胞系进行分析，
并将其与正常卵巢成纤维细胞的miRNA和基因表达谱进行比较，挖掘差
异表达的miRNA和基因。
同时，结合miRNA和基因表达的分析结果，探究其在卵巢癌发生、发展和转移中的生物学功能和相互关系。
三、研究意义：
本研究将为卵巢癌的研究提供重要参考。
首先，该研究将揭示miRNA和基因表达谱在卵巢癌的发生、发展和转移中的调控机制和作用，为研究卵巢癌的病因学提供重要证据。
其次，本研究的结果将为发现新
的治疗目标和治疗策略提供一定的理论依据。
最后，本研究的整体研究
设计和研究方法对miRNA和基因表达谱在其他癌症中的应用也具有一定
的参考和借鉴作用。
miRNA在卵巢癌化疗耐药中的作用
收稿 日期 ： ２ ０ １ ３— ０ ８—２ ２ 修 回日期 ： ２ ０ １ ３—１ ０— ２ ９
遏制 肿瘤 形成 的基 因。对 于 正 常 细胞 ， 原 癌基 因和 抑癌基 因 的协调 表达 是 调节控 制 细胞 生长 的重 要分 子机 制之一 。抑 癌基 因 的丢失 或失 活导 致 肿瘤 的发
生 。在卵巢癌 组织 里 ， 某些 ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ的表 达 出现 明显
抑癌 基 因的活性 或使 其功 能缺失 ； 如果 ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ在 癌 症 中 的表 达水平 下调 ， 则 为抑癌 基 因 ， 下调相 关原 癌
基 因的活 性 ， 促 进 细胞 的 凋 亡 。 因此 ， ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ 的 异
巢癌 发病 隐 匿 ， 且 缺乏准确有效 的早期诊断方法 ， ７ ０ ％ ～８ ０ ％ 患者 一经 确诊 已属 晚期 。肿瘤 细胞 减 灭 术加 以铂 类 和紫杉 醇 为基础 的联合 化疗 已成 为 当 前 卵 巢癌 的标 准治 疗 手段 ， 然 而 由于化 疗 耐 药 的存 在， ５年 生存 率 仅 为 ３ ０ ％Ｅ ２ ］ 。因此 迫 切 需 要 寻 找特 异性 强且 患者 可耐受 的治疗 卵巢癌 的有效 方 法 。近 年来 ， 许 多 国内外 学者研 究证 实微 小 Ｒ Ｎ Ａ（ ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ） 的表 达水 平 与 卵 巢 癌 化疗 耐 药 的 产 生 有 密 切 的关
等 研究 发现 ， ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ一 ２ １在 上皮 性 卵巢 癌 组织 中
式结 合到靶 ｍ Ｒ Ｎ Ａ， 可直接分 裂靶 ｍ Ｒ Ｎ Ａ， 或 与靶
ｍＲ Ｎ Ａ的 ３ 端非 编码 区 （ ３ 一Ｕ Ｔ Ｒ） 完 全 或 近乎 完全 互 补结 合 抑 制 其 翻 译 ， 从 而 发 挥 基 因 表 达 调 控 作
鼻咽癌miR-26a
Figure 4 . EZH2 was involved inmiR-26a-induced growth inhibition in NPC cells. A, C666-1 cells were infected with LV-shEZH2 or LV-miR26a. Cell growth rate and cell-cycle distribution were measured by MTT assay and flow cytometry. B, C666-1 cells were infected with LV-miR26a for 72 hours, followed by infection with LV-EZH2, and MTT assay and cell-cycle analysis were then performed. **, P < 0.01 compared with control or comparison between 2 groups as indicated.
EZH2在NPC组织中表达升高
EZH2与miR-26a表达的负相关
C666-1
EZH2过表达可以拮抗miR-26a的抑制作用
细胞周期相关基因：EZH2 上调的基因与 miR-26a下调的基因具有一致性， EZH2能拮抗miR-26a的作用
Figure 5. Cell-cycle regulators contributed to the growth inhibition induced by miR-26a. A, deregulated expression of 14 cell-cycle regulators in C666-1 cells after miR-26a mimic or inhibitor transfection. B, their dysregulated expression in C666-1 cells after LV-EZH2 or LV-shEZH2 infection. C, EZH2 overexpression rescued the deregulated expression of miR-26a effectors in C666-1 cells. D, a diagram of miR-26a signaling pathways for cell-cycle control in NPC cells.
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卵巢癌组织中miR—26a的表达及其临床意义
目的探讨分析卵巢癌组织中miR-26a的表达及其临床意义。
方法采用qRT-PCR檢测卵巢癌组织中miR-26a的表达情况，分析卵巢癌组织中miR-26a 表达与其临床分期及淋巴结转移间的关系。
结果qRT-PCR检测显示，miR-26a 在25例卵巢癌组织中的表达值为0.47±0.07，miR-26a在癌旁对照组中表达值为1.12±0.14相比，存在差异，具有统计学意义（P＜0.01）；卵巢癌临床Ⅲ/Ⅳ期、Ⅰ/Ⅱ期组织中miR-26a表达值分别为0.66±0.09，0.21±0.02，存在差异，具有统计学意义（P＜0.01）；miR-26a在淋巴结转移和无淋巴结转移组织中表达值分别为0.54±0.08、0.34±0.05，存在差异，具有统计学意义（P＜0.01）。
miR-26a的表达随着卵巢癌临床分期演进而增高。
结论miR-26a与卵巢癌的发生、临床进展、转移密切相关，其可能成为卵巢癌治疗、预后判断的潜在生物学指标。
标签：miR-26a；卵巢癌；生长与侵袭
miR-26a在多种恶性肿瘤的异常表达，同时与肿瘤细胞的增殖、转移等相关。
Shen等[1]研究证明miR-26a 的异位表达促进卵巢癌细胞增殖和克隆形成，且促进卵巢癌细胞生长的作用是通过ER-α的转录后的的miR-26a的抑制作用介导的。
Chung[2]通过miRNA芯片分析了2例浆液性卵巢癌患者与健康组对照的miRNA 血清表达谱，血清中miR-26a被视为是浆液性卵巢癌潜在候选的新生标志物。
本研究利用RT-qPCR 技术检测卵巢癌患者组织miR-26a的表达改变与临床病理参数之间的关系，探讨卵巢癌发病机制及为临床有效的治疗方法提供了实验依据。
1资料与方法
1.1一般资料标本来自本院2011年7月～2013年2月卵巢癌和癌旁正常组织标本25例。
1.2逆转录常规Trizol试剂（Invitrogen公司）抽提组织总RNA。
紫外分光光度计测定RNA纯度、浓度。
逆转录按转录miRNA逆转录试剂盒（吉玛生物公司）说明书进行。
1.3 qPCR检测采用Biorad公司的定量PCR仪IQ5进行定量PCR反应。
1.4统计学分析数据采用SPSS 13.0进行相关数据分析，计数资料采用x±s 表示，组间比较实施t检验。
P＜0.05存在差异，具有统计学意义。
2结果
2.1 miR-26a在卵巢癌组织中的表达情况qRT-PCR检测显示，miR-26a在25例卵巢癌组织中的表达值为0.47±0.07，miR-26a在癌旁对照组中表达值为
1.12±0.14相比，存在差异（P＜0.01），具有统计学意义。
2.2 miR-26a表达水平与卵巢癌临床病理参数之间的关系卵巢癌临床Ⅲ/Ⅳ
期、Ⅰ/Ⅱ期组织中miR-26a表达值分别为0.66±0.09，0.21±0.02，存在差异，（P ＜0.01），具有统计学意义；miR-26a在淋巴结转移和无淋巴结转移组织中表达值分别为0.54±0.08、0.34±0.05，存在差异，（P＜0.01），具有统计学意义。
miR-26a 的表达随着卵巢癌临床分期演进而增高。
3讨论
卵巢癌的发病率占所有女性生殖肿瘤第六位，其中每年约有230，000例新发卵巢癌患者。
卵巢癌由于缺少有效的筛查手段，确诊时70%以上已是晚期，而且目前大部分病人对目前的化疗案已产生耐药，对卵巢癌患者的治疗成功率很低。
大约每年有140，000位卵巢癌患者死亡，且对人民的生命健康造成严重威胁[3]。
研究证明，miRNAs成为分子生物学研究的焦点，且与肿瘤的发生发展有着极为密切的关系，研究者通过利用芯片等高等检测技术发现miRNAs在肿瘤组织与正常组织之间存在明显差异，且组织特异性明显，重要的是现发现miRNAs 能在人体的血清、血浆等体液中被检测出来，进一步为无创技术诊断带来了可能[4]。
目前有关miR-26a在肿瘤中的作用的研究报道很少。
Chai等[5]发现在肝细胞癌中miR-26a能使PI3K/AKT通路能下调巨噬细胞集落刺激因子的表达抑制巨噬细胞的招募。
同时研究者发现miR-26a在乳腺癌细胞中显著下调，miR-26a模拟物能显著抑制乳腺癌组织及细胞增殖生长。
通过凋亡试剂盒检测发现，miR-26a 过表达将引起乳腺癌细胞凋亡。
本文运用qRT-PCR进行检测miR-26a在卵巢癌组织中的表达情况，同时分析其临床表达意义。
结果显示与对照正常组上皮组织相比，miR-26a在卵巢癌组织表达显著上调，存在差异（P＜0.05），具有统计学意义；此外，miR-26a随着卵巢癌的临床分期进展而表达增高，且有淋巴结转移的卵巢癌表达明显高于无淋巴结转移的卵巢癌，存在差异（P＜0.01），具有统计学意义。
我们的结果表明miR-26a在卵巢癌细胞与对照正常组织之间存在表达差异，同时也证明血清中miR-26a可以作为卵巢癌诊断的分子指标；卵巢癌患者血清miR-26a表达与卵巢癌的临床分期、病理等级呈正相关，同时也表明miR-26a可能作为癌基因参与卵巢癌的发生发展过程，不过日后仍需进行大量实验进行验证。
参考文献：
[1]Shen W，Song M，Liu J，et al.MiR-26a promotes ovarian cancer proliferation and tumorigenesis[J].PLoS One.2014；9（1）：e86871.
[2]Chung YW，Bae HS，Song JY，et al.Detection of microRNA as novel biomarkers of epithelial ovarian cancer from the serum of ovarian cancer patients[J].Int J Gynecol Cancer.2013，23（4）：673-9.
[3]Wright JD，Shah M，Mathew L，et al.Fertility preservation in young women
with epithelial ovarian cancer[J].Cancer，2009，115（18）：4118-26.
[4]WitwerKW.Circulating microRNA biomarker studies：pitfalls and potential solutions[J].Clin Chem. 2015 Jan；61（1）：56-63.
[5]Chai ZT，Zhu XD，Ao JY，et al.microRNA-26a suppresses recruitment of macrophages by down-regulating macrophage colony-stimulating factor expression through the PI3K/Akt pathway in hepatocellular carcinoma. J Hematol Oncol.2015 May 29；8：56.。