猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较试验

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猪瘟快速检测卡和ELISA方法的检测效果对比

多、
典病例表现为最急性、哑急性或慢性病程，死率高最
急型较少，病猪体温升高．常无其他症状，ｌ～２ｄ内死亡急
图１猪瘟病毒抗体ＥＩＩＳＡ试验结果
性型常，体温Ｉ１『上升￣ｌＪ４１ｃ【：以上．食欲减退或消失，可发生
免疫猪场，真空采【ｎｌ管（普通生化管），猪瘟病毒抗体２．３猪瘟病毒抗体ＥＬＩＳＡ和快速检测卡对比
ＥｌＩＳＡ试剂．猪瘟病毒机体快速检测卡１．２使用普通乍化管采取免疫猪的前腔静脉血
［关键词］快速检测卡ＥＬＩＳＡ检测效果对比
瘟俗称 “ 肠癌 ” ，是Ｉ｛１黄病毒科猪瘟病毒属的猪瘟痫
Ｉｊｌ起的一种急性、发热、接触性传染传染病，是一种具有高度传
染性疫瘸．址威胁养猜业的主要传染病之一，其特是：急性，
多数化广．、ＩＥ急性，常于本痫流干亍地区．痫程可延至２～３胤；
仃的转为慢性．常拖延１～２个月．．表现黏膜苍ｈ，眼险有 … ｌｎ【
点皮肤 …现紫斑，病猪极度消瘦死亡以仔猪为多，成年猾彳ｆ
的Ｉｌ『以州过、怍痫猜Ｉ诊症状不明，呈慢性，常见于 “架
［摘要］目的：比对快速检测卡和ＥＬＩｓＡ两种检测方法的灵敏度和准确性，确定两种方法的检测对象。方法：采用真空采血管（抗凝管）从免疫过猪瘟疫苗的猪体内采血并分离血清，采用快速检测卡和ＥＬＩｓＡ方法对分离的血清进行检测。结果：ＥＬＩｓＡ方法更加灵敏准确，快速检测卡简便快捷。结论：在临床诊断和紧急情况下，可以使用快速检测卡进行快速诊断和治疗；在正常监测过程中，还应该使用ＥＬＩｓＡ方法进行检测，更加准确可信。

猪免疫抗体不同检测方法的对比试验

猪免疫抗体不同检测方法的对比试验摘要应用某国产胶体金诊断试剂盒和进口酶联免疫吸附试验（ELISA）诊断试剂盒，分别检测猪血清中口蹄疫、猪瘟和蓝耳病抗体合格率，比较两种血清学诊断方法的准确性。

结果表明，胶体金诊断试剂盒结果和ELISA结果差异显著，两者的符合率较低。

因此，应加强国内部分胶体金诊断试剂的监控。

关键词：抗体检测；胶体金；ELISA随着养殖业的持续发展及动物防疫工作的进一步深化，对动物进行免疫接种已成为预防和控制动物疫病的重要手段。

口蹄疫、猪瘟和蓝耳病是国家要求强制免疫的重大动物疫病，其抗体监测关系免疫效果的考核、合理免疫程序的建立，也是评估疫苗质量、对重大动物疫情预警能力的的可靠依据。

县级以上兽医实验室目前开展抗体监测主要使用ELISA试剂盒，其昂贵、费时和要求专业仪器和专业人员的特点，使之不适合基层推广使用。

近年来，随着一系列胶体金检测产品在动物疫病检测领域的推广运用，以其操作简单、价格低廉、现场即时检测等特点，迅速获得了基层兽医站和养殖户的认可。

为了解这项新技术的检测准确性和可靠性，我们用胶体金和ELISA两种试剂盒检测猪血清中的抗体水平，其结果对比如下。

1 材料与方法1.1 被检血清从全市5个规模养猪场采集并分离猪血清共27份,-20℃保存备用。

1.2 诊断试剂口蹄疫合成肽ELISA试剂盒为上海优耐特生物医药有限公司生产，批号：201012004；猪瘟抗体ELISA试剂盒为北京爱德士元亨生物科技有限公司生产，批号：43220-X681；猪蓝耳病抗体ELISA试剂为北京爱德士元亨生物科技有限公司生产，批号： 40959-X061。

胶体金快速诊断试剂盒为苏州艾瑞德生物医药有限公司生产，猪口蹄疫抗体快速检测试剂盒批号：CFC005A；猪瘟抗体快速检测试剂盒批号：CFC002A；猪繁殖与呼吸综合症抗体快速检测试剂盒批号：CFC001A。

1.3 检测方法1.3.1 酶联免疫吸附试验（ELISA）严格按照说明书进行操作，以测得样品OD值大于临界值为阳性，否则为阴性。

猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的应用分析

１材料与方法１．１猪瘟抗体间接ＥＬＩＳＡ检测试剂盒简介
３讨论
猪瘟是一种由猪瘟病毒引起的发热、急性、接触性传染疾本次试验的猪瘟抗体间接ＥＬＩＳＡ试剂盒，批号为２０１４０５２０，病。是养猪业中最常见的传染病之一，如果没有处理好猪瘟的问由上海江莱生物ＥＬＩＳＡ试剂盒供应商提供，而猪瘟抗体阻断ＥＬＩＳＡ题，就会给养猪业造成毁灭性的损失，后果不堪设想。而猪瘟是试剂盒，批号为４３２２０一ｖ５１１，来自ＩＤＥＸＸ公司的产品。本实验室否能得到有效控制，主要依赖于疫苗免疫的功效是否强大。因此分别选取了１８ｌｆｙ猪瘟阳性血清、１１份猪瘟阴性血清并且购买了广本次试验主要探讨猪瘟抗体间接ＥＬＩＳＡ检测试剂盒的稳定性和保存条件，促进试剂盒能更好的应用于免疫动物抗体的动态监测。东永顺生物制药有限公司的批号为０８５２０的猪瘟活疫苗。
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猪瘟抗体间接ＥＬｌＳＡ检测试剂盒的应用分析
张爱荣
（广州市白云区动物防疫监督所，广东广州
摘
５１０４２０）
１．２批内稳定性试验由于试剂盒质量的重要标准包括试剂盒的稳定程度，因此，

猪瘟ELISA抗体检测试剂盒的应用效果比较试验

变化。试验所得数据中各个观察值的变异程度不大，试验数据具盒实际供应及监测经费紧张等问题。
有较高的参考价值。２．２定性比较了解２种试剂盒的相似性与差异性，可以参考２种试剂盒检测
参考文献
［１］庞然，张小敏，周斌，等．４种商品化试剂盒检测猪瘟病毒抗体
病之一。按照农业部国家动物疫病强制免疫计划和省属要求，猪２．３符合率比较
瘟免疫抗体检测采用正向间接血凝试验（ＩＨ瘟抗体的阳性符合率为９８．０８％，阴性
附试验（ＥＬＩＳＡ）２种方法，其中，ＥＬＩＳＡ应用最广。然而，不同符合率为７８．１３％，总符合率为９０．４８％，具有较高的符合率，见厂家生产的试剂盒检测结果是否存在差异，一些技术人员还很难表２。但Ｂ厂家的试剂盒比Ａ厂家试剂盒的亲和性更高，敏感性更
２结果与分析
２．１重复性试验
在实际基层工作中可以灵活应用；保证免疫监测工作的完成，为同一份样品，用２种不同试剂盒检测，其阴性、阳性结果没有指导生产、防制猪瘟的暴发提供可靠的依据。同时，解决了试剂
按盒内说明书进行，各试剂检测均设对照，检测结果按试剂盒要
求判定。
（２）综上所述，从本次试验结果分析来看，两厂家生产的猪

猪瘟抗体检测两ELISA方法比较

猪瘟抗体检测两ELISA方法比较一、原理是什么？间接法：①该方法是检测猪瘟抗体的经典ELISA方法，其原理是在酶标板中包被猪瘟病毒或猪瘟病毒的表面抗原蛋白，加入待检血清同包被的抗原孵育后，加入酶标二抗和底物显色，通过OD值来判定猪瘟抗体的效价。

②如待检血清中有特异性抗体，则形成包被抗原-待检抗体-酶标二抗三种物质的结合物，OD值越高、显色越深、待检抗体含量越高，反之，则待检抗体含量越少。

显色深浅与待检抗体量呈正比。

阻断法：①该方法是基于基因工程和单克隆抗体发展起来的ELISA方法，其原理是在酶标板中包被通过基因工程得到的猪瘟病毒保护性抗原蛋白，然后加入待检血清与包被的抗原孵育，洗板后加入针对包被蛋白的酶标单抗再次孵育，后加入底物显色，通过OD值来判定猪瘟抗体的效价。

②如待检血清中有特异性抗体，则会阻断酶标单抗的反应，导致酶标单抗不会或少量地同抗原蛋白结合；若待检血清中没有特异性抗体，酶标单抗会更好地同抗原蛋白结合。

OD值越高，显色越深、待检抗体含量越少，反之，则待检抗体含量越多。

显色深浅与待检抗体量呈反比。

二、哪种方法更好？在农业部颁布的国家动物疫病监测方案中，规定可以采用阻断ELISA或间接ELISA等方法进行猪瘟抗体水平检测。

目前，世界动物卫生组织推荐的猪瘟抗体检测方法是ELISA法和荧光抗体中和试验（FVNT）, 其中FVNT可作为猪瘟抗体检测的“金标准”。

而中和试验对试验条件和操作人员的要求很高，且耗时长，仅适合专业实验室进行少量样本检测，不宜推广应用。

因此，ELISA方法是目前国际上承认的惟一适合大规模应用的血清检测方法。

在进行ELISA检测方法评价时，最重要的两个指标就是敏感性和特异性。

阻断ELISA采用了单克隆抗体，因此检测的特异性更高；而间接ELISA则更侧重于敏感性。

有研究表明，用OIE推荐的FVNT与上述两种ELISA方法进行符合验证实验，结果表明间接法与FVNT的符合率高于阻断法，间接法能更真实地反映疫苗免疫后的中和抗体水平，而阻断法对阳性样本有漏检情况。

非洲猪瘟试剂盒的临床实验报告

非洲猪瘟试剂盒的临床实验报告一、中国动物疫病预防控制中心于2021年7月2日，公布了33个非洲猪瘟抗体ELISA检测试剂盒，这对于检测检验行业有着怎样的重要意义?这个通知可谓是千呼万唤始出来。

早在2021年3月5日农业农村部办公厅就颁发了《进一步严厉打击非洲猪瘟假疫苗有关违法行为的通知》(简称“通知”)。

“通知”里提到，非洲猪瘟病毒抗体阳性的视为感染猪群，不得开具检疫证明，不得出栏，不得屠宰上市。

同时，国家参考实验室也制定了《养猪场非洲猪瘟变异株监测技术指南》(简称“指南”)。

在这个“指南”里面提到，不仅要进行病原的检测，同时也要进行抗体的检测。

但是，之前没有发布过官方推荐使用的非洲猪瘟抗体ELISA检测的试剂盒。

“通知”和“指南”的推出使我们不光有了政策的依据，同时也有了强有力的检测工具。

二、市场上的非洲猪瘟抗体检测试剂盒可以说是多种多样，每种试剂盒都有其各自的特点，我们该如何挑选一个合适的非洲猪瘟抗体ELISA检测的试剂盒?目前中国动物疫病预防控制中心公布的33个抗体ELISA试剂盒，是可以供实验室进行选择的，但是如何从其中选择最适合实验室使用的试剂盒，需要从以下几个方面来进行挑选：第一，需要对试剂盒厂家的生产工艺研发的情况、蛋白纯化的情况进行了解，包括厂家使用了什么样的工艺进行蛋白的表达，使用什么设备对蛋白进行纯化，以及厂家生产的条件等，通过这些可以让我们对厂家的生产理念和工艺进行基本的评价。

第二，需要了解这些试剂盒的生产厂家进行的一些试验数据，例如试剂盒研发过程中有没有进行动物试验，最早几天可以检测到非洲猪瘟病毒的抗体，抗体持续期是多久，以及试剂盒在真正的临床实验室中共检测了多少份样品，还要了解阳性、阴性的数据，阳性的敏感性，阴性的特异性，等等。

这部分的数据很重要，需要ELISA试剂盒的生产厂家进行提供。

第三，每个实验室需要对这些试剂盒进行基本的评价。

虽然说用了“评价”这个词，但是实际上我们无法对某个试剂盒的全部性能进行科学的、全面的评价，只能说是在实验室中对一些性能进行验证，因此称“性能验证”更为合适。

采用不同ELISA试剂盒对猪瘟抗体水平调查结果的影响

猪瘟又称经典猪瘟（ＣｌａｓｓｉｃａｌＳｗｉｎｅＦｅｖｅｒ，ＣＳＦ），是由猪瘟养户，共计３２０头份。其中，免疫血清２５０头份，非免疫仔猪血清
病毒（Ｃｌａｓｓｉｃａｌｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ，ＣＳＦＶ）引起的一类高度接触性７０头份。传染病，是世界粮农组织和各国政府密切关注的主要传染病之一
中国畜牧兽医文摘
２０１５年
３１卷
第ｌ期
基础研究
采用不同ＥＬＩＳＡ试剂盒对猪瘟抗体水平调查结果的影响
蔺露董春霞孙燕徐璐王琴
（１．重庆市动物疫病预防控制中心，重庆４０１１２０；２．中国兽医药监察所，北京１０００８１）
［摘要］本文采用猪瘟抗体间接ＥＬＩＳＡ和阻断ＥＬＩＳＡ检测试剂盒对３２Ｏ份血清样本进行猪瘟抗体检测，符合率达８０．６３％，对检测结果不一致的样品，利用抗体中和试验（ＦＶＮＴ）做定性检测，结果表明，间接ＥＬＩｓＡ试剂盒的敏感性和特异性均高于阻断ＥＬＩＳＡ试剂盒，猪瘟间接ＥＬＩＳＡ试剂盒更适用于我国猪瘟抗体检测。［关键词］猪瘟抗体中和试验酶联免疫吸附法
表２两种试剂盒对不同背景血清的检测结果统计表
作者简介：蔺露（１９８３一），女，兽医师，硕士，主要从事动物疫病实验室诊断及研究。通讯作者：蔺露

211182912_8种非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的比对试验研究

672023年40卷第4期 SWINE INDUSTRY SCIENCE 猪业科学猪场兽医VETERINARY为了评价不同品牌的非洲猪瘟病毒ELISA 抗体检测试剂盒的有效性，从而保证实验室的检测结果更加的真实可信。

本试验样品血清由北京测易生物科技有限公司提供的第一批124份和第二批240份血清样本，分别根据说明书进行8种不同品牌的非洲猪瘟ELISA 抗体试剂盒进行检验。

以3种进口品牌试剂盒分别比对，选定最优试剂盒作为参考标准。

随后检测5种国产试剂盒的kappa 一致性，敏感性、特异性和符合率，将5种品牌试剂盒的检测效果进行比对分析。

5种试剂盒的一致性有差异，但整体水平较高；根据试验结果其中4种试剂盒的一致性及诊断效能的表现较为优秀，1种试剂盒一致性水平较低，诊断效能较差。

市场所售的非洲猪瘟商品化试剂盒的检测效果存在较大差异。

因此，建议监测工作中，采用国际或国内已知或指定的分析方法，通常根据公司的设备进行测试，并评估分析和分析效果，被认为是选择设备的最重要因素，以确保设备的有效性，并确保有效监测和控制非洲猪瘟。

非洲猪瘟（ASF ）是一种具有8种非洲猪瘟病毒ELISA 抗体检测试剂盒的比对试验研究李涵乔 1，王海伦 2，苏美玉 1（1.北京中育种猪责任有限公司，北京 100094；2.中牧实业股份有限公司，北京 100071）高传染性的病毒性疾病，其发病率和致死率几乎为100%，主要是由于非洲猪瘟病毒（ASFV ）所致。

1921年，肯尼亚首先报告了该病，随后出现了好几个主要的洲际传染。

中国第一例非洲猪瘟病例于2018年8月在辽宁省沈阳市被发现。

从那以后，ASFV 迅速蔓延到了全国各地，造成了大量的生猪生产损失。

世界动物卫生组织将该病列为国家法定报告性传染病，在我国并列为国家重点防治的一类疫病。

酶联免疫吸附实验（ELISA ）是实验室惯用的检测方式。

ELISA 检验的优点有很多，例如：节约时间、操作便捷、价格低廉、不需要有规定实验室等。

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Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｒｅｗａｓａｗｉｄｅｖａｒｉｅｔｙｏｆｄｏｍｅｓｔｉｃａｎｄｆｏｒｅｉｇｎＣＳＦＶＥＬＩＳＡａｎｔｉｂｏｄｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎｋｉｔｓｔｏｃｈｏｏｓｅｆｒｏｍｉｎｍａｒｋｅｔ．Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｏｆｆｅｒａｕｓｅｆｕｌｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒａｃｔｕａｌｌｙｕｓｉｎｇ，ｎｅｇａｔｉｖｅ，ｗｅａｋｐｏｓｉｔｉｖｅａｎｄｐｏｓｉｔｉｖｅａｎｔｉｓｅｒａｏｆＣＳＦＶｗｅｒｅｙａｒｄｓｔｉｃｋｓｂｙｗｈｉｃｈｔｏｃｏｍｐａｒｅｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅｒａｔｅｏｆ１４ｄｏｍｅｓｔｉｃａｎｄｆｏｒｅｉｇｎＣＳＦＶＥＬＩＳＡａｎｔｉｂｏｄｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎｋｉｔｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅｒａｔｅｓｏｆ６ｂｌｏｃｋｉｎｇＥＬＩＳＡｋｉｔｓｗｅｒｅ１００％．Ａｓａｗｈｏｌｅ．ｔｈｅｂｌｏｃｋｉｎｇＥＬＩＳＡｋｉｔｓｗｅｒｅｍｏｒｅｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｓｐｅｃｉｉｃｆｔｈａｎｉｎｄｉｒｅｃｔＥＬＩＳＡｋｉｔｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｌａｓｓｉｃａｌｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒ；ａｎｔｉｂｏｄｙ；ＥＬＩＳＡ
［摘
要］目前国内外的猪瘟ＥＬＩＳＡ抗体检测试剂盒病毒阴性、弱阳性、强阳性血清参考品为标尺，比较了１４种国内外猪瘟病毒ＥＬＩＳＡ抗体检测试
剂盒的符合率。结果表明，６种阻断ＥＬＩＳＡ试剂盒符合率均可达到１００％，在敏感性和特异性上整体
猪瘟（ＣｌａｓｓｉｃａｌＳｗｉｎｅＦｅｖｅｒ，ＣＳＦ）是由猪瘟病毒（ＣｌａｓｓｉｃａｌＳｗｉｎｅＦｅｖｅｒＶｉｒｕｓ，ＣＳＦＶ）感染引起的
ＥＬＩＳＡ方法是目前应用最广、发展最快的检测技术，是猪瘟诊断、免疫效果评价和流行病学调查的重要手段。本试验用中国兽医药品监察所制备的猪瘟阴、阳性血清参考品对国内外１４个猪瘟病毒
ＪＩＡＮＧＨｕｉ，ＬＩＣｕｉ，ＤＡＩＺｈｉ — ｈｏｎｇ，ＷＡＮＧＺａｉ — ｓｈｉ
（ＣｈｉｎａＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｂｅｊｉｉｎｇ１０００８１，Ｃｈｉｎａ）
猪的急性、热性、高度致死性传染病，在世界上很多国家和地区均有发生＿１］，是严重影响养猪业发展的主要疫病之一。世界动物卫生组织（ＯＩＥ）将其
列为Ａ类ｌ６种传染病之一。我国亦将其列为一类
优于间接ＥＬＩＳＡ试剂盒。
［关键词］猪瘟；抗体；ＥＬＩＳＡ
ＣｏｍｐａｒａｂｌｅＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｏｆＣＳＦＶＥＬＩＳＡＡｎｔｉｂｏｄｙＤｅｔｅｃｔｉｏｎＫｉｔｓ
中国兽药杂志
２０１５，４９（６）：６ — ８／蒋卉，等
猪瘟病毒ＥＬＩＳＡ抗体检测试剂盒的比较试验
蒋卉，李翠，戴志红，王在时
（中国兽医药品监察所，北京１０００８１）
【收稿日期］２０１５一Ｏ１一ｏ４【文献标识码］Ａ［文章编号］１００２ — １２８０（２０１５）０６ — ０００６ — ０３［中图分类号］￥８５２．６５１
ＥＬＩＳＡ抗体检测试剂盒（其中６种为阻断ＥＬＩＳＡ方
法，８种为间接ＥＬＩＳＡ方法）进行比较试验，为实际
传染病，是发生最多、危害最大、流行最广的动物传染病之一３］，被纳入重大动物疫病防控计划。猪瘟抗体检测技术包括病毒中和试验、酶联免疫吸附试