两种不同检测法对猪瘟抗体阴性猪筛检的比较
猪瘟快速检测卡和ELISA方法的检测效果对比
多 、
典 病 例 表现 为最 急性 、哑急 性 或慢 性 病 程 ，死 率 高 最
急 型较 少 ，病猪 体 温升 高 ．常 无其他 症状 ，ｌ～２ｄ内死 亡 急
图１猪瘟病毒抗体ＥＩ ＩＳＡ试验结 果
性 型 常 ，体 温 Ｉ１『上 升 ￣ｌＪ４１ ｃ【：以上 ．食 欲减 退或 消 失 ，可 发 生
免 疫 猪 场 ，真 空 采 【ｎｌ管 （普 通 生 化 管 ），猪 瘟 病 毒 抗 体 ２．３ 猪 瘟 病 毒抗 体 ＥＬＩＳＡ和 快 速 检 测 卡 对 比
Ｅｌ ＩＳＡ试剂 ．猪瘟 病毒 机 体快速 检测 卡 １．２ 使 用 普 通 乍 化 管 采 取 免疫 猪 的 前 腔 静 脉 血
［关 键词 ］快 速检 测 卡 ＥＬＩＳＡ 检测 效 果对 比
瘟 俗称 “ 肠癌 ” ，是 Ｉ｛１黄病 毒 科猪 瘟 病 毒属 的 猪瘟 痫
Ｉｊｌ起 的一 种 急性 、发热 、接触 性 传 染传 染病 ，是 一种 具 有 高度 传
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［摘 要］ 目的 ： 比对 快速 检 测 卡和 ＥＬＩ ｓＡ两种检 测 方 法 的灵 敏度 和 准 确性 ，确 定 两种 方 法 的检 测对 象。方 法 ： 采用 真 空采 血 管 （抗 凝 管 ）从 免疫 过 猪瘟 疫 苗 的猪体 内采血 并 分 离血 清 ，采 用快 速检 测 卡和 ＥＬＩ ｓＡ方 法对 分 离的血 清 进行 检 测 。结 果： ＥＬＩ ｓＡ方 法 更加 灵敏 准 确 ，快 速检 测 卡 简便 快捷 。 结论 ：在 临床诊 断 和 紧急 情 况下 ，可 以使 用快速 检 测卡 进 行快 速诊 断和 治疗 ；在 正 常监 测过 程 中 ， 还 应 该 使 用 ＥＬＩ ｓＡ方 法 进 行 检 测 ， 更 加 准 确 可 信 。
猪免疫抗体不同检测方法的对比试验
猪免疫抗体不同检测方法的对比试验摘要应用某国产胶体金诊断试剂盒和进口酶联免疫吸附试验（ELISA）诊断试剂盒，分别检测猪血清中口蹄疫、猪瘟和蓝耳病抗体合格率，比较两种血清学诊断方法的准确性。
结果表明，胶体金诊断试剂盒结果和ELISA结果差异显著，两者的符合率较低。
因此，应加强国内部分胶体金诊断试剂的监控。
关键词：抗体检测；胶体金；ELISA随着养殖业的持续发展及动物防疫工作的进一步深化，对动物进行免疫接种已成为预防和控制动物疫病的重要手段。
口蹄疫、猪瘟和蓝耳病是国家要求强制免疫的重大动物疫病，其抗体监测关系免疫效果的考核、合理免疫程序的建立，也是评估疫苗质量、对重大动物疫情预警能力的的可靠依据。
县级以上兽医实验室目前开展抗体监测主要使用ELISA试剂盒，其昂贵、费时和要求专业仪器和专业人员的特点，使之不适合基层推广使用。
近年来，随着一系列胶体金检测产品在动物疫病检测领域的推广运用，以其操作简单、价格低廉、现场即时检测等特点，迅速获得了基层兽医站和养殖户的认可。
为了解这项新技术的检测准确性和可靠性，我们用胶体金和ELISA两种试剂盒检测猪血清中的抗体水平，其结果对比如下。
1 材料与方法1.1 被检血清从全市5个规模养猪场采集并分离猪血清共27份,-20℃保存备用。
1.2 诊断试剂口蹄疫合成肽ELISA试剂盒为上海优耐特生物医药有限公司生产，批号：201012004；猪瘟抗体ELISA试剂盒为北京爱德士元亨生物科技有限公司生产，批号：43220-X681；猪蓝耳病抗体ELISA试剂为北京爱德士元亨生物科技有限公司生产，批号： 40959-X061。
胶体金快速诊断试剂盒为苏州艾瑞德生物医药有限公司生产，猪口蹄疫抗体快速检测试剂盒批号：CFC005A；猪瘟抗体快速检测试剂盒批号：CFC002A；猪繁殖与呼吸综合症抗体快速检测试剂盒批号：CFC001A。
1.3 检测方法1.3.1 酶联免疫吸附试验（ELISA）严格按照说明书进行操作，以测得样品OD值大于临界值为阳性，否则为阴性。
两种猪瘟疫苗抗原检测方法对比分析
两种猪瘟疫苗抗原检测方法对比分析一、实时荧光定量PCR将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得Ct值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。
可以实时定量检测目标的基因拷贝数。
优势方便，快捷，灵敏，非常微量的样品，在几个小时内就可以出结果。
劣势1、无法区别活的病毒和死亡的病毒，检测的结果只是病毒的基因拷贝数，跟活病毒数量无关。
针对这个问题，可以进行一个小实验。
疫苗企业、猪场、检测单位如果有兴趣均可以试试。
方法很简单，选择同一批次的三瓶疫苗，选择其中一瓶疫苗，加入适量甲醛灭活，然后与不灭活的剩余两瓶疫苗同时使用荧光定量PCR方法检测，看其检测结果。
2、无法鉴别出BVDV和猪瘟病毒的基因容易出现假阳性。
3、受操作影响较大，定量数据有一定偏差。
4、检测出的基因拷贝数跟在猪体上的免疫效果没有直接相关性。
5、没有标准可以参考，各自为战。
用处使用实时荧光定量PCR方法只能大致定量疫苗中的病毒基因数量，无法确定猪瘟疫苗中的活病毒的抗原含量，只可以在同等条件下大致评估疫苗中的基因含量高低，检测出的基因拷贝数量跟疫苗中的活病毒数量和免疫效果完全没有相关性。
目前，实时荧光定量PCR均是各个检测机构的自建方法，检测流程、引物与耗材等均按照自己的标准进行，没有国家标准可以参考，而且进行操作的实验室环境控制参差不齐。
因此，同一个样品，可能各个试验室检测的结果会有明显偏差。
二、兔体感染量(RID)检测按照疫苗瓶签注明的头份，使用生理盐水按照内控标准进行稀释，然后接种家兔，上下午各测体温一次，48小时后每隔6小时测定体温一次，当兔子出现典型的定型热反应时，疫苗判断合格。
胶体金法与酶联免疫吸附测定法检测猪瘟抗体的比较
胶体金法与酶联免疫吸附测定法检测猪瘟抗体的比较
徐维成;范秀铭;岳正河
【期刊名称】《畜牧兽医杂志》
【年(卷),期】2014(33)6
【摘要】为比较胶体金法与ELISA法检测猪瘟抗体的符合率,以了解胶体金法的特异性与敏感度,用胶体金法和ELISA法平行检测受检猪血清标本猪瘟抗体滴度.结果表明,胶体金法和ELISA法检测猪瘟抗体的结果符合率为86.6％,胶体金法较ELISA 法敏感度、特异度低,用胶体金法检测猪瘟抗体滴度存在一定程度的漏检率及误诊率,只能初步筛查猪瘟抗体.具有一定技术力量的县级兽医实验室使用ELISA法检测猪血样的猪瘟抗体滴度更为合适,对于胶体金法筛查阴性的猪血样,建议用ELISA法复检以防漏检.
【总页数】2页(P20-21)
【作者】徐维成;范秀铭;岳正河
【作者单位】惠州市大亚湾区动物卫生监督所,广东惠州516000;广东省肇庆市农业学校;镇安县动物疫病预防控制中心
【正文语种】中文
【中图分类】S852.4+3
【相关文献】
1.利用胶体金免疫层析法检测猪瘟强、弱毒抗体方法的建立 [J], 郑鸣;金彦法;闫国庆
2.胶体金免疫层析法检测猪瘟(强弱毒区分)抗体研究 [J], 李华玮;郑鸣
3.胶体金法与ELISA法检测猪瘟抗体结果对比分析 [J], 向林远;杜国芹
4.一步法胶体金快速诊断法与ELISA检测猪瘟抗体的比较 [J], 顾健;张燕;陆义超
5.对比胶体金法与酶联免疫吸附测定法对丙型肝炎病毒抗体的检测价值 [J], 成君俐
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猪瘟抗体检测两ELISA方法比较
猪瘟抗体检测两ELISA方法比较一、原理是什么？间接法：①该方法是检测猪瘟抗体的经典ELISA方法，其原理是在酶标板中包被猪瘟病毒或猪瘟病毒的表面抗原蛋白，加入待检血清同包被的抗原孵育后，加入酶标二抗和底物显色，通过OD值来判定猪瘟抗体的效价。
②如待检血清中有特异性抗体，则形成包被抗原-待检抗体-酶标二抗三种物质的结合物，OD值越高、显色越深、待检抗体含量越高，反之，则待检抗体含量越少。
显色深浅与待检抗体量呈正比。
阻断法：①该方法是基于基因工程和单克隆抗体发展起来的ELISA方法，其原理是在酶标板中包被通过基因工程得到的猪瘟病毒保护性抗原蛋白，然后加入待检血清与包被的抗原孵育，洗板后加入针对包被蛋白的酶标单抗再次孵育，后加入底物显色，通过OD值来判定猪瘟抗体的效价。
②如待检血清中有特异性抗体，则会阻断酶标单抗的反应，导致酶标单抗不会或少量地同抗原蛋白结合；若待检血清中没有特异性抗体，酶标单抗会更好地同抗原蛋白结合。
OD值越高，显色越深、待检抗体含量越少，反之，则待检抗体含量越多。
显色深浅与待检抗体量呈反比。
二、哪种方法更好？在农业部颁布的国家动物疫病监测方案中，规定可以采用阻断ELISA或间接ELISA等方法进行猪瘟抗体水平检测。
目前，世界动物卫生组织推荐的猪瘟抗体检测方法是ELISA法和荧光抗体中和试验（FVNT）, 其中FVNT可作为猪瘟抗体检测的“金标准”。
而中和试验对试验条件和操作人员的要求很高，且耗时长，仅适合专业实验室进行少量样本检测，不宜推广应用。
因此，ELISA方法是目前国际上承认的惟一适合大规模应用的血清检测方法。
在进行ELISA检测方法评价时，最重要的两个指标就是敏感性和特异性。
阻断ELISA采用了单克隆抗体，因此检测的特异性更高；而间接ELISA则更侧重于敏感性。
有研究表明，用OIE推荐的FVNT与上述两种ELISA方法进行符合验证实验，结果表明间接法与FVNT的符合率高于阻断法，间接法能更真实地反映疫苗免疫后的中和抗体水平，而阻断法对阳性样本有漏检情况。
猪病抗体检测
猪瘟抗体检测
• 1、猪瘟抗体：阻断率（Blocking）≥40%， 判为阳性结果；30%＜Blocking＜40%，判 为可疑结果；Blocking≤30%，判为阴性结 果。
• 2.离散度：Coefficient of Variation(CV) 离散度计算的是平均个体的变化，以平均滴 度背离的百分数来表示。 离散度是指所测的样品值与所有样品的平均 值的距离，距离越大，离散度越大。一般离散度 可以用标准差来衡量(STDEV)
猪 病 抗 体 检 测
付• 阴性：没有抗体
• 上图所示的阻断法检测猪瘟疫苗抗体的原 理，可以简单的概括为：第3步中加入的酶 标记物（抗猪瘟病毒的单克隆抗体），与 被检血清中的抗猪瘟病毒抗体，两者竞争 与包被抗原结合。而第2步加入的被检血清 中如果大量含有抗猪瘟病毒抗体，就会阻 断酶标物抗体与包被抗原的结合。最后加 入底物显色。被检血清中猪瘟病毒抗体越 多，阻断率越高，颜色越浅.
• 蓝耳：IRPC是免疫反应阳性细胞。抗体 irpc就是说抗体参与特异性免疫反应产生阳 性细胞。通常是求数量。
• S/N:样品比阴性值
• 公式如下： 离散度 CV = 标准偏差（STDEV）/平均阻断 率×100%CV≤40%,显示了群内猪只有一个均衡 的、相似反应。（表示猪群内不同个体之间抗体 水平稳定，免疫效果良好）CV≥60%,显示了群内 猪只滴度反应变化高于正常估计值。（表示猪群 内不同个体之间抗体水平差异较大；生产管理水 平，疫苗质量、免疫程序制定有提升与商榷的余 地）。作为衡量猪群抗体稳定性与均匀度的指标， CV值对评判免疫结果具有重要意义。
猪瘟抗体阴性猪筛选方法的比较
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猪瘟抗体 阴性 猪筛选方法 的 比较
高金源 ， 陈晓春 ， 华伟 ， 永 ， 吴 邓 郎洪武
（ 中国兽医药品监察所 ， 北京 １０ ８ ） ００ １ ［ 收稿 日 ］０ ０— ４ ０ ［ 期 ２ １ ０ — ７ 文献标识码 ］ ［ Ａ 文章编号 ］０ ２ １８ （０ １ ０ — ０ ０－ ２ ［ １０ — ２ ０ ２ １ ） １ ０ ２ ０ 中图分类号］ ８ ２ ５ ￥ ５ ．３
来飞速发展 的一种 免疫检 测方 法 ， 种类 繁 多 ， 应用 广 泛， 尤其在 抗体 检 测 方 面。本 文 采用 两 种 商 品化 的
检测 ， 中华 人 民 共 和 国 兽 用 生 物 制 品 规 程》 《 二ｏｏｏ年版（ 以下简称规程） 《 、 中华人民共和国兽 药典》 二ｏ０五年版（ 以下简称药典） 规定 ， 采用兔体
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4种猪瘟病毒抗体检测方法的比较
4种猪瘟病毒抗体检测方法的比较马超英【摘要】为比较4种猪瘟病毒抗体检测方法的优缺点,应用正向间接血凝试验(IHA),间接ELISA、Dot-ELISA、胶体金免疫层析试纸条(GICA)4种方法分别对142份猪血清样品进行检测.结果表明,间接ELISA方法检出阳性样品119份,IHA检出阳性样品117份,Dot-ELISA检出阳性样品115份,GICA检出阳性样品109份.结果提示,在对猪瘟病毒抗体进行检测时,间接ELISA由于其灵敏性高,可作为首选检测方法,但操作时需要避免假阳性的出现；正向间接血凝试验虽然灵敏度稍低,对血清质量要求高,但结果准确,是猪瘟抗体检测必不可少的检测方法,适合个体检测；胶体金试纸条和dot-ELISA检测时间较短、操作简单、无需特殊仪器设配,由于受其敏感性较低所限,适合对畜群进行检测.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2012(033)010【总页数】4页(P128-131)【关键词】猪瘟抗体;检测方法;优缺点【作者】马超英【作者单位】青海省海西州乌兰县铜普兽医站,青海乌兰817000【正文语种】中文【中图分类】S852.651猪瘟（Classical swine fever，CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起猪的一种高度接触性、致死性的传染病，临床上主要以稽留高热、皮肤和黏膜出现大量出血点为主要特征［1］。
猪瘟具有高度传染性，主要通过呼吸道和消化道传染，传播速度快，发病率和病死率高，给全球养猪业造成了巨大的经济损失，世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须报告的动物传染病，我国也将其列为一类动物疫病，是严重危害我国养猪业的最重要的疫病之一［2－6］。
近年来，我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大变化，转变为隐性感染和亚病毒感染，在临床表现上也更加复杂，既有区域性流行，又有零星散发，既有高病死率的急性症状，又有持续感染的温和性症状趋于复杂化，出现了所谓“非典型猪瘟”、“温和型猪瘟”和“带毒母猪综合征”，在病理剖检上也常常不同于典型猪瘟的病理变化，给兽医临床诊断带来了很大困难［7］。
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关 键 词： Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法 ： 兔体 中和反应 法 ；猪瘟 抗 体 阴性 猪 中 图分 类 号 ：￥ ８ ５ ２ ． ６ ５ ． ６ 文献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１ ０ ０ ５ — ８ ５ ６ ７ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ４ — ０ ０ ３ ７ — ０ ２
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广 东畜牧兽 医科技 ２ ０ １ ３ 年（ Байду номын сангаас３ ８ 卷） 第４ 期
试 验研究 ・ ３ ７ ・
两种不 同检测法对猪瘟 抗体 阴性猪筛检 的比较
李 小静 ，唐 满 华 ，邓 月嫦 ，叶健 聪 （ 广 东 大华 农动 物保 健 品股份 有 限公 司 ，广 东 云浮 ５ ２ ７ ４ ０ ０）
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摘 要 ：猪瘟抗体 阴性猪是猪瘟活疫 苗安检 的重要 实验 动物 ， 目前对 于猪 瘟抗体 阴性猪 筛选是 采用兔 体 中和反 应法 ，实验 复杂，工作量 大并且 易受 实验兔 个体 差异等 因素影 响。随着生物 学及其技 术的发展 ， Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ被 广泛 用于生物制品的各个领域 。本试验应 用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法和 兔体 中和反应 法对猪 瘟抗体 阴性猪进行 筛 选 ，共检 测 １ ６ ０ 份血 清，检 测结果显示 两种方法结果有很 高的一致性 ，但 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法更为敏感 ，快捷 ，更适
Ｋ ｗ硼 ｓ ：ＥＬ Ｉ Ｓ Ｒａ ｂ ｂ ｉ ｔ Ｎｅ ｕ ｔ ｒ ａ ｌ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎＴ ｅ ｓ ｔ ； Ｓ ｗｉ ｎ ｅ Ｆ ｅ ｖ ｅ ｒ ｎ ｔ Ａ ｉ ｂ ｏ ｄ ｙ － Ｎｅ ｇ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｐ ｉ ｇ ｓ