常见病原菌采样分离过程
实验二植物病原菌的组织分离
实验二植物病原菌的组织分离实验二植物病原菌的组织分离、培养和纯化一、实验目的通过本次实验学习植物病原菌分离培养及纯化的原理和常用的方法。
二、材料和用具玉米大斑病叶、灰斑病叶、苹果果实轮纹病及霉心病、甘薯黑斑病等材料，5%次氯酸钠溶液（有效氯为5%，见光分解，尤其紫外光，现用现配），75%酒精，剪刀，镊子，无菌水，灭菌培养皿，保鲜膜封口膜，记号笔、解剖刀，75%酒精小喷壶、酒精灯，打火机、、无菌滤纸、酒精棉、培养皿三、分离材料的选择为减少腐生菌的污染，分离所用的病害材料应尽可能新鲜，并且最好在病、健交接处选材取样。
病、健交接处，除材料新鲜，污染的可能性小外，病原菌的生活力强、比较活跃，容易分离成功。
四、植物病原菌的分离方法病原菌分离的方法因材料不同而异，植病实验室最常见的方法有组织分离法和稀释分离法两种。
（一）.组织分离法：这种方法适用于大部分病菌的分离，此法又分为小块组织分离和大块组织分离两种方法。
1、病斑类病原菌的分离（玉米大斑病病、灰斑病及苹果果实轮纹病的分离、甘薯黑斑病）（1）将无菌培养皿、镊子、无菌水、无菌滤纸、75%酒精小喷壶等放入无菌操作台，开紫外灯15分钟。
期间融化培养基备用。
（2）在操作台外，用酒精消毒双手，晾干。
在操作台内再次消毒双手，晾干，将融化并冷却到50℃左右的PDA以无菌操作倒入培养皿8—10ml，在桌面上轻轻摇动，敞开盖，制成平，凝固后待用。
（3）在操作台外，取分离材料，在病、健交界处剪取2—3毫米长的病组织。
（4）在无菌条件下，用5%的次氯酸钠溶液消毒3-5min，（时间长短依病组织不同而异，处理种子约5—10分钟）。
（5）用经过三次火焰灭菌的镊子将消毒的病叶移至无菌水中，漂洗3次，在滤纸上吸干水分，移至PDA平板培养基上，每皿可放均匀放3~4片，使材料与培养基紧密接触。
倒置于25—28℃恒温箱内培养。
（6）3~4天后，待菌落长出后挑取前缘菌丝，回接于PDA培养基上，在25℃温箱中培养，待菌落颜色变深后，在无菌条件下镜检是否是玉米大斑病菌、灰斑病菌、黑斑病菌、轮纹病菌，若仅有这几种病原菌的分生孢子，则说明已获得了纯培养，否则，则需要继续转至斜面培养基上进行纯化，直至获得纯培养。
如何进行病原菌的分离
如何进行病原菌的分离如何进行病原菌的分离、纯培养材料用具菌种：米曲酶枯草芽孢杆菌大肠杆菌金黄色葡萄球白地霉蕈状芽孢杆菌（Bacillus mycoides）粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）巴氏芽孢梭菌（巴氏固氮梭状芽孢杆菌，Clostridum pasteurianum）荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）灰色链霉菌（Streptomyces griseus）酿酒酵母产黄霉菌（Penicillium chrysogenum）培养基：淀粉琼脂培养基牛肉膏蛋白胨培养基(斜面、液体、半固体) 马丁氏琼脂培养基查氏琼脂培养基庖肉培养基肉汤培养基马铃薯培养基麦芽汁酵母膏培养基溶液或试剂：10%酚，盛9ml无菌水的试管，盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，4%水琼脂，10%NaOH,灭菌的石蜡凡士林（1：1），焦性没食子酸，液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，95%乙醇，10%盐酸，无水氯化钙，食盐，干冰。
仪器或其他用具：无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，无菌培养皿，链霉素和土样，显微镜，血细胞计数板，接种针，酒精灯，棉花，厌氧罐，催化剂，产气袋，厌氧指示袋，无菌的带橡皮塞的大试管，无菌的玻璃板（直径比培养皿大3至4cm），滴管，烧瓶，小刀。
微生物的分离与纯化：一、基本原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的方法有1.简易单细胞挑取法：它需要特制的显微操作器或其他显微技术，因而其使用受到限制。
简易单孢子分离法是一种不需显微单胞操作器，直接在普通显微镜下利用低倍镜分离单孢子的方法。
它采用很细的毛细管吸取较稀的萌发的孢子悬浮液滴在培养皿盖的内壁上，在低倍镜下逐个检查微滴。
将只含有一个萌发孢子的微滴放一小块营养琼脂片，使其发育成微菌落。
再将微菌落转移到培养基中，即可获得仅由单个孢子发育而成的纯培养。
2.平板分离法：该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化。
花卉病原菌分离与鉴定方法
花卉病原菌分离与鉴定方法花卉作为美化环境、增添生活情趣的重要组成部分，常常受到各种病原菌的威胁。
为了及时有效地控制花卉病害，研究人员开发了一系列花卉病原菌分离与鉴定方法。
本文将探讨几种常用的花卉病原菌分离与鉴定方法，并介绍其原理及操作步骤。
一、菌落分离法菌落分离法是一种常见的花卉病原菌分离与鉴定方法。
首先，我们需要准备一定量的花叶或茎秆样本，并将其在无菌条件下切割成适当大小的块状。
然后，将这些样本分别接种在含有适当培养基的培养皿上，并进行孵育。
在孵育过程中，病原菌会生长并形成单独的菌落。
最后，我们可以通过分离单个菌落并进行纯化培养，得到纯种病原菌。
二、生物学特性鉴定法生物学特性鉴定法是通过病原菌的生长特性、形态学特征、生理生化特性等进行鉴定。
例如，通过观察病原菌的生长速度、菌落形态、色素产生能力等特点，可以初步确定其属于某一类别的病原菌。
此外，对于一些常见的病原菌，还可以进行特定的检测，如利用氧化酶试验、酸碱反应等方法进行鉴定。
三、分子生物学鉴定法分子生物学鉴定法是一种基于病原菌的遗传信息进行鉴定的方法。
通过从病原菌中提取DNA，并利用PCR或其他分子生物学技术进行扩增和分析，可以确定病原菌的分类和亲缘关系。
例如，利用特异性引物扩增病原菌的保守基因片段，然后通过凝胶电泳等方法分析扩增产物的大小和形态，可以得到病原菌的分子生物学信息，进而进行鉴定。
四、免疫学鉴定法免疫学鉴定法是利用病原菌与宿主的免疫反应进行鉴定的方法。
通过检测植物对病原菌的抗体反应，可以确定病原菌的种类和数量。
这种方法主要包括血凝试验、免疫电镜等技术。
通过与已知病原菌的免疫反应进行比较，可以鉴定未知病原菌的种类。
综上所述，花卉病原菌分离与鉴定是花卉病害研究的重要内容。
我们可以利用菌落分离法、生物学特性鉴定法、分子生物学鉴定法和免疫学鉴定法等多种方法进行鉴定。
通过这些方法的应用，我们可以更好地了解花卉病原菌的种类、特性和病害发生规律，为花卉病害的防治提供科学依据和技术支持。
细菌分离流程
细菌分离流程细菌分离是微生物学研究中的一项重要技术，它可以将复杂的微生物群落中的细菌分离出来，从而研究和分析单个细菌的特性和功能。
下面将详细介绍细菌分离的流程和步骤。
1. 样品收集细菌分离的第一步是收集样品。
样品可以是环境样品（如土壤、水样、空气等）或生物样品（如血液、尿液、组织等）。
在收集样品时，需要采取无菌操作，以避免外源性细菌的污染。
同时，还需要注意样品的保存条件，避免细菌失活或繁殖。
2. 样品预处理样品收集后，需要进行预处理以去除杂质和非细菌微生物。
预处理的方法包括过滤、离心、稀释等。
过滤可以去除大颗粒的杂质，离心可以沉淀细菌，稀释可以减少样品中的微生物数量，使细菌单个分离更容易。
3. 细菌分离培养基的选择选择适合细菌生长的培养基是细菌分离的关键。
常用的培养基有富集培养基、选择性培养基和差异培养基。
富集培养基可以促进细菌生长，选择性培养基可以抑制非目标菌群的生长，差异培养基可以根据细菌的生理特性进行筛选。
4. 细菌分离细菌分离是将复杂的细菌群落中的单个细菌分离出来，使其单独生长。
常用的细菌分离方法有涂布法、液体稀释法和滴定法。
4.1 涂布法涂布法是将样品均匀涂布在固体培养基表面，使单个细菌形成单个菌落。
具体操作步骤如下：1.取一定量的样品，用无菌工具（如无菌棉签、无菌针头）均匀涂布在固体培养基表面。
2.使用无菌铲子或铅笔头轻轻拖曳样品，使其均匀涂布。
3.使用无菌铲子或铅笔头在培养基上进行菌落分离，每次分离都使用新的工具。
4.标记每个菌落，以便后续的鉴定和分析。
4.2 液体稀释法液体稀释法是将样品逐渐稀释并接种在液体培养基中，使单个细菌形成单个菌落。
具体操作步骤如下：1.取一定量的样品，加入无菌稀释液（如生理盐水）中，进行均匀悬浮。
2.取一定体积的悬浮液，加入无菌稀释液中，再次进行均匀悬浮。
3.重复上述步骤，逐渐稀释样品。
4.取一定体积的稀释液，接种在液体培养基中。
5.在培养过程中观察是否有单个细菌形成菌落。
植物病原菌分离方法
病原菌分离方法一、实验原理：植物患病组织内的真丝菌丝体，如果给予适宜的环境条件，除了个别种类外，一般都能恢复生长和繁殖。
植物病原菌的分离就是指通过人工培养，重染病植物组织中将病原真菌与其他杂菌相分开并从寄主植物中分离出来，再将分离得到的病原菌于适宜环境内纯化，这个过程总称植物病原的分离培养。
二、实验用具：酒精灯、手术剪、镊子、75%酒精、3%~5%次氯酸钠、灭菌水、培养皿、封口膜、乳酸等三、实验前的准备工作：1、煮培养基（PDA）：马铃薯200g,葡萄糖20g，琼脂粉(AGAR)20g（10:1:1）水1000ml（1）将去皮称量好的马铃薯切片后加水煮沸15~20min（水可以适量多加200ml 左右，因为在煮的过程中会蒸发一些），待土豆煮软即可。
（2）三层纱布滤去马铃薯后将过滤的水倒入洗净的锅中，加琼脂粉搅拌充分后再加热煮沸，小火使其充分融化。
（3）加入葡萄糖并不断搅拌，待其完全融化后双层纱布过滤，定容到1000ml，分装到500ml的玻璃瓶内，每个玻璃瓶最多装300ml，121℃湿热灭菌30min。
2、培养皿干热灭菌170℃1h;蒸馏水、枪头等湿热灭菌121℃30min。
四、实验步骤：1、用75%酒精擦拭超净工作台，所有器具用紫外灯灭菌30min,分离室要保持清洁。
2、取样，病斑大小约20个（含病缘线）3、分装培养基：（1）融PDA，松盖在微波炉中加热约3min（看量多少而定）（2）待冷却至50℃后在超净工作台指示灯显绿灯时分装(3) 分装时滴入一管乳酸约20滴（每10ml培养基中加3滴乳酸）（4）左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15m1(300ml一瓶的培养基倒20多个平板)，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。
4、表面消毒：（1）75%的酒精3ml~4ml没过样表面10s，快速吸掉酒精（2）3%~5%次氯酸钠（现配现用、避光）10ml消毒2~3min（3）无菌水冲洗2~3次5、转样：（1）器具经酒精灯消毒后无菌水水洗（2）培养皿上写明名称、分离时间后，在酒精灯旁转五点于培养基上。
医院常规细菌培养(1)
医院常规细菌培养(1)医院常规细菌培养是临床微生物学中不可或缺的一个环节，是诊断疾病和制订治疗方案的重要依据。
下面从常规细菌培养的方法、过程和意义三个方面进行阐述。
一、方法医院常规细菌培养是指采用一系列技术方法将病原微生物分离培养出来、明确其种类和数量的过程。
具体方法如下：1.取样。
体液如血、尿、脑脊液等通过无菌技术采样。
2.标本前处理。
主要包括清洁、消毒等步骤，以防止空气和表面微生物污染。
3.分离微生物。
采用无菌棉签或接种环将标本转移到培养基上，进行器械对每种菌株的分离。
4.接种培养基。
将制备好的培养基表面进行接种。
5.培养。
菌落在培养基上生长并繁殖，在一定时间内可通过肉眼或显微镜观察到。
6.鉴定。
通过菌落形态、色素、生长速度等方面的鉴定，对分离和培养出的微生物进行明确种类的鉴定。
二、过程医院常规细菌培养的过程是一个漫长而复杂的过程。
通常情况下，细菌培养会分为初步鉴定和决定鉴定两个阶段：初步鉴定通过菌落的大小、形态、产生气味等特征判断目标微生物的种类；而决定鉴定则是通过进一步的生化试验和特殊的染色技术等手段确认细菌的种类，为后续的治疗提供准确的依据。
三、意义医院常规细菌培养的意义在于：1.确定病原菌种类。
通过对分离出的病原菌进行鉴定，医生才能按照正确的药物敏感性数据和治疗建议进行个性化治疗。
2.预测病情变化。
通过观察菌落数量和菌群的变化，预测病情的发展趋势和变化，制定合理的治疗方案。
3.判断治疗效果。
随着治疗方案的调整，医院常规细菌培养也可以对治疗效果进行“实时监测”；4.预防疾病扩散。
通过对病原微生物的细菌培养，防止疾病的扩散和传播，保护公共健康。
总之，医院常规细菌培养作为临床诊断的重要环节，对于人们的健康和生命有着重要的作用。
因此，在临床实践中，应加强细菌培养技术的应用和熟练度提高，以提高临床诊断和个性化治疗水平。
桃腐烂病病原菌的分离鉴定
桃腐烂病病原菌的分离鉴定桃腐烂病是桃树上常见的一种严重病害，其发生和流行严重影响了桃树的生长和果实的品质。
该病害的病原菌主要是一种真菌，为了对其进行有效的防治，需进行病原菌的分离鉴定。
一、材料与方法1. 病株样品：从发病的桃腐烂病病株上切取均匀发病组织。
2. 培养基：PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）。
3. 分离工具和器皿：无菌的医用手术刀、无菌的钳子、无菌的移液枪、无菌培养皿。
4. 消毒液：70%乙醇，1%次氯酸钠溶液。
5. 鉴定方法：观察菌落形态特征、孔菌丝形态特征、生理生化特性和分子生物学特性。
二、步骤1. 样品消毒：将采集样品放入70%乙醇中浸泡5分钟，再用1%次氯酸钠溶液浸泡5分钟，最后用无菌去离子水洗3次。
2. 分离过程：将经消毒的样品置于无菌台上，用无菌的医用手术刀在菌斑附近切取一小块组织，迅速悬浮于无菌蒸馏水中，得到悬浮液。
3. 分离培养：将悬浮液分装在培养皿中，加入适量的PDA培养基，均匀摇匀后培养。
4. 培养条件：将培养皿放置在恒温培养箱中，温度设定为25-28℃，光照强度4000-5000lx，相对湿度70-80%。
5. 菌落鉴定：观察培养皿中的菌落形态特征，如色素、形状、边缘、质地等。
6. 孔菌丝培养：将单一菌落挑选出来，再次进行分离培养得到纯种的菌丝，观察其形态特征。
7. 鉴定：对菌丝进行显微镜观察，观察菌丝的结构、分枝、生殖器官等特征。
8. 生理生化特性鉴定：进行菌株的喜好温度、酶活性、生长速率等方面的测定。
9. 分子生物学特性鉴定：通过PCR扩增和DNA测序，对菌株的基因序列进行比对和分析。
三、结果与讨论通过上述分离鉴定的步骤，可以得到桃腐烂病菌株的纯种培养，并进行其形态特征、生理生化特性和分子生物学特性的鉴定。
这些信息可以用于科学家们对病原菌进行进一步研究和防治措施的制定。
对不同的菌株进行比对和分析，还可以了解桃腐烂病病原菌的种类和变异情况，为病害的防治提供更加科学的依据。
常见病原菌采样分离过程
金黄色葡萄球菌采样分离过程1、样本采集及初步分离（1）奶样的采集：采集有乳房炎和隐形乳房炎症状较明显的奶牛，消毒挤奶人手、奶牛乳头，弃2-3把乳，以乳样收集管无菌收集每个乳区乳样10-30mL，编好编号，4个乳区按：左前LF、左后LH、右前RF、右后RH编号，采集后尽快返回实验室，如不能尽快返回，应放在低温环境中带回。
（2）乳房皮肤拭子用0.5mL肉汤润湿的消毒棉球拭子从乳房皮肤檫拭到乳头顶端，如果乳房土较多的话先檫掉土。
拭子放入5mL离心管中，再放入冰盒中，迅速带回实验室处理。
（3）鼻腔拭子用消毒棉球拭子插入动物鼻腔中，取出后放到盛有0.5mL肉汤的5mL离心管中，放入冰盒中，迅速带回实验室处理。
菌种的初步分离首次分离时，用接种环蘸取样品在科玛嘉金黄色葡萄球菌显色平板上涂布接种，37℃，16-18小时培养后，从显色平板上挑取红色的单菌落，用脑心浸液（BHI）肉汤35℃培养18小时左右。
需要注意的是金葡菌初次分离时，接种显色培养基后培养时间最好不超过18h进行观察，因为超过24h后所有的葡萄球菌属细菌皆会导致显色培养基变色，进而出现假阳性。
2、菌种的保存2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80 ℃（长期）或-20 ℃（临时）冻存。
3、菌种的复苏如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在显色平板或哥伦比亚血琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。
肠球菌采样分离过程1、样本采集及初步分离（1）肛门拭子以灭菌长棉签采集猪肛门拭子或蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入肛门4-5厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
（2）泄殖腔拭子以灭菌短棉签采集鸡泄殖腔拭子或采集一段盲肠后蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入泄殖腔2-3厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
金黄色葡萄球菌采样分离过程
1、样本采集及初步分离
（1）奶样的采集：
采集有乳房炎和隐形乳房炎症状较明显的奶牛，消毒挤奶人手、奶牛乳头，弃2-3把乳，以乳样收集管无菌收集每个乳区乳样10-30mL，编好编号，4个乳区按：左前LF、左后LH、右前RF、右后RH编号，采集后尽快返回实验室，如不能尽快返回，应放在低温环境中带回。
（2）乳房皮肤拭子
用0.5mL肉汤润湿的消毒棉球拭子从乳房皮肤檫拭到乳头顶端，如果乳房土较多的话先檫掉土。
拭子放入5mL离心管中，再放入冰盒中，迅速带回实验室处理。
（3）鼻腔拭子
用消毒棉球拭子插入动物鼻腔中，取出后放到盛有0.5mL肉汤的5mL离心管中，放入冰盒中，迅速带回实验室处理。
菌种的初步分离
首次分离时，用接种环蘸取样品在科玛嘉金黄色葡萄球菌显色平板上涂布接种，37℃，16-18小时培养后，从显色平板上挑取红色的单菌落，用脑心浸液（BHI）肉汤35℃培养18小时左右。
需要注意的是金葡菌初次分离时，接种显色培养基后培养时间最好不超过18h进行观察，因为超过24h后所有的葡萄球菌属细菌皆会导致显色培养基变色，进而出现假阳性。
2、菌种的保存
2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80 ℃（长期）或-20 ℃（临时）冻存。
3、菌种的复苏
如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在显色平板或哥伦比亚血琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。
肠球菌采样分离过程
1、样本采集及初步分离
（1）肛门拭子
以灭菌长棉签采集猪肛门拭子或蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入肛门4-5厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
（2）泄殖腔拭子
以灭菌短棉签采集鸡泄殖腔拭子或采集一段盲肠后蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入泄殖腔2-3厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
首次分离时，将样品在6.5%NaCl营养肉汤中，45℃，18-24小时预增菌进行选择性培养后，将上述培养物以划线方式接种在肠球菌选择性培养基（叠氮钠-结晶紫-七叶苷培养基，BEA）上，37℃，培养18-24小时，从选择性培养基上挑取灰色，半透明，1-2mm大小的单菌落，用脑心浸液（BHI）肉汤37℃培养18小时左右。
2、菌种的保存
2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80 ℃（长期）或-20 ℃（临时）冻存。
3、菌种的复苏
如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在BEA琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。
需要注意的是由于BEA琼脂颜色的变化导致假阳性的发生，因此，可以将肠球菌疑似菌株在BEA琼脂上进行二次筛选，提高分离准确率。
大肠杆菌采样分离过程
1、样本采集及初步分离
（1）肛门拭子
以灭菌长棉签采集猪肛门拭子或蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入肛门4-5厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
（2）泄殖腔拭子
以灭菌短棉签采集鸡泄殖腔拭子或采集一段盲肠后蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入泄殖腔2-3厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
首次分离时，用接种环蘸取样品在科玛嘉大肠杆菌显色平板上涂布接种，37℃，16-18小时培养后，从显色平板上挑取蓝色的单菌落，用营养肉汤37℃培养18小时左右。
2、菌种的保存
2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80 ℃（长期）或-20 ℃（临时）冻存。
3、菌种的复苏
如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。
沙门氏菌采样分离过程
1、样本采集及初步分离
（1）肛门拭子
以灭菌长棉签采集猪肛门拭子或蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入肛门4-5厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
（2）泄殖腔拭子
以灭菌短棉签采集鸡泄殖腔拭子或采集一段盲肠后蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入泄殖腔2-3厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
需要注意的是成年动物沙门氏菌携带率非常低，因此对于沙门氏菌的采集应以弱雏为主要分离对象来提高分离率。
首次分离时，将样品在SC肉汤（亚硒酸盐-半胱氨酸肉汤）中，37℃，18-24小时预增菌进行选择性培养后，将上述培养物以划线方式接种在沙门氏菌选择性培养基上，37℃，培养18-24小时，从选择性培养基上挑取紫色的单菌落，用脑心浸液（BHI）肉汤37℃培养18小时左右。
2、菌种的保存
2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80 ℃（长期）或-20 ℃（临时）冻存。
3、菌种的复苏
如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在BEA琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。
弯曲杆菌采样分离过程
2、样本采集及初步分离
（1）肛门拭子
以灭菌长棉签采集猪肛门拭子或蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入肛门4-5厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
（2）泄殖腔拭子
以灭菌短棉签采集鸡泄殖腔拭子或采集一段盲肠后蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式
插入泄殖腔2-3厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
需要注意的是因此对于弯曲杆菌的采集应以成年鸡（大于20日龄）为主要分离对象来提高分离率，因为小于20日龄的鸡无法检测到弯曲杆菌。
首次分离时，用接种环直接勾取样品（盲肠内容物或粪便）在弯曲杆菌选择性培养基（skirrow培养基，由sigma公司生产加5%无菌脱纤绵羊全血及配套增补剂）平板划线接种，42℃，培养48h，初次分离有时可培养至72h。
从选择性培养基上挑取不溶血，灰黄色或灰白色，圆形凸起，边缘整齐，1-2mm大小，透明成水泡状的单菌落，直接在含有5%羊血的血琼脂培养基或哥伦比亚血琼脂培养基上进行进一步纯化。
2、菌种的保存
2mL灭菌离心管中加入400μL的BHI肉汤+200μL60%灭菌甘油，将血琼脂上的纯培养物直接用灭菌棉棒刮取到上述制备好的甘油肉汤中，-80 ℃长期冻存。
3、菌种的复苏
如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在血琼脂平板或MH琼脂上划线培养。
需要注意的是初次分离弯曲菌时，粪便样品要直接接种在弯曲菌选择性培养基中，不能增菌。
为了提高分离率，可以采用Skirrow（42℃）和CCDA培养基（37℃）（含有木炭-头孢哌酮-两性霉素B选择性培养基）同时接种的方法。
同时，弯曲菌在液体培养基中生长不良，保存菌种最好不要用液体培养基进行培养保种。
牛乳样品中常见病原菌采样分离过程
1、隐性乳房炎检测—乳汁体细胞间接计数法
隐性乳房炎快速诊断液
弃去前几把乳，再将乳分别挤在盘中；诊断盘倾斜45度，弃去多余乳汁，诊断盘中各皿中再约留2毫升乳样。
每个样品加2毫升诊断液，使诊断盘做水平同心圆摇动，上下倾斜摇动50秒作判定。
判定标准：
“-”0~20万/mL，均质，流动无异常，黄绿色或稍有绿色；
“±”20~50万/mL，薄絮，稍有绿色，可疑；
“+”50~150万/mL，明显絮状，黄绿色，隐性乳房炎；
“++”150~500万/mL，黏稠挂底，黄绿色；
“+++”> 500万/mL，胶冻样，深绿色。
3、乳样采集
消毒挤奶人手、奶牛乳头，弃2-3把乳，以乳样收集管无菌收集每个乳区乳样1-5ml，编好编号，4个乳区按：左前LF、左后LH、右前RF、右后RH编号，采集后尽快返回实验室，如不能尽快返回，应放在低温环境中带回。
将10-20μL乳样涂布于血琼脂培养基上，37℃培养18-24h后，挑取血琼脂培养基上各种不同菌落形态的单一菌落，直接在不同选择性培养基上进行划线培养进行进一步鉴定，或者将单一菌落置于BHI肉汤中扩大培养，进行保存备用。
4、菌种的保存
2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80 ℃（长期）或-20 ℃（临时）冻存。
5、菌种的复苏
如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在BEA琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。