墨旱莲抗环磷酰胺诱导的胸腺细胞凋亡的实验研究

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NS5ATP9抑制血清饥饿诱导的HepG2细胞凋亡

形式的比例增加，而出现去极化电位形式的比例显著减少（Ｐ＜００）而Ｎ５Ｔ９干扰ＲＡ组线粒．５；ＳＡＰＮ体膜电位保持正常形式的比例显著减少（Ｐ＜００）．５。Ｗｅｔｒｌ检测结果显示，ＳＡＰｓｎｂｔｅｏＮ５Ｔ９干扰ＲＡＮ组促凋亡分子Ｂｘａ表达量显著升高（Ｐ＜００）Ｎ５Ｔ９过表达组Ｂｘ表达量则有下降趋势。结．５，ＳＡＰａ
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Siglecs家族分子在肿瘤中的表达与意义

Siglecs家族分子在肿瘤中的表达与意义①蒋奎莹齐莉莉②康富标③闫聪艺④王玲（河北医科大学第三医院骨与软组织肿瘤科，石家庄 050051）中图分类号R730.1 R730.3 文献标志码 A 文章编号1000-484X（2023）11-2428-07［摘要］唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素（Siglecs）是一类唾液酸结合受体，在多种免疫细胞表面表达，具有复杂多样的免疫调节功能。

Siglecs在肿瘤微环境（TME）中发挥不同的免疫及非免疫调节作用，介导炎症反应，促进肿瘤细胞发生免疫逃逸，调控肿瘤生长、侵袭、转移等生物学行为，加速肿瘤进展，影响患者预后与转归。

因此，靶向Siglecs家族分子是目前肿瘤研究热点，并可能成为继PD-1之后肿瘤免疫治疗的明星分子。

本文就Siglecs家族中影响肿瘤进展的分子类型、在TME中的作用机制及其作为治疗靶点的研究进展进行综述。

［关键词］Siglecs；肿瘤微环境；免疫调节Expression and significance of Siglecs family molecules in tumorsJIANG Kuiying， QI Lili， KANG Fubiao， YAN Congyi， WANG Ling. Department of Orthopedic Oncology， the Third Hospital of Hebei Medical University， Shijiazhuang 050051， China［Abstract］Sialic-acid-binding immunoglobulin-like lectins （Siglecs）are a family of sialic acid-binding receptors that are expressed on surface of a variety of immune cells and have complex and diverse immunomodulatory functions. Siglecs play different immune and non-immune regulatory roles in tumor microenvironment （TME）， mediating inflammatory response， promoting immune escape of tumor and participate in tumor progression through various mechanisms such as regulating tumor growth and metastasis， and affecting prognosis and outcome of patients. Therefore， targeting Siglecs family molecules has aroused broad interest in current oncology research and may become a target therapeutic molecule of tumor immunotherapy， after PD-1. This paper reviews molecular types of Siglecs family that affect tumor progression， their mechanisms in TME and research progress as therapeutic targets.［Key words］Siglecs；Tumor microenvironment；ImmunomodulatorySiglecs家族分子可在人巨噬细胞、T细胞、B细胞、树突状细胞（dendritic cell，DC）、自然杀伤（natu‐ral killer，NK）细胞等多种免疫细胞中特异性表达，参与免疫细胞活化、增殖及凋亡等多个重要的生理过程［1］。

26432378_墨旱莲及其化学成分的药理作用、体内代谢及质量控制研究进展

㊀基金项目:国家重点研发计划(Ｎｏ.２０１９ＹＦＣ１７１１００８)ꎻ∗同为通信作者㊀作者简介:焦广洋ꎬ男ꎬ研究方向:生药学ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｊｉａｏｇｕａｎｇｙａｎｇ＠ａｌｉｙｕｎ.ｃｏｍ㊀通信作者:陈军峰ꎬ男ꎬ博士研究生ꎬ副研究员ꎬ研究方向:中药学ꎬＴｅｌ:０２１－５１３２２４０３ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｃｊｆ１２３４７８３１＠ｆｏｘｍａｉｌ.ｃｏｍꎻ张凤ꎬ女ꎬ博士研究生ꎬ副主任药师ꎬ研究方向:生药学㊁临床药学ꎬＴｅｌ:０２１－５１３２２４０３ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｆｅｎｇｚｈａｎｇｋｙ＠ａｌｉｙｕｎ.ｃｏｍ墨旱莲及其化学成分的药理作用㊁体内代谢及质量控制研究进展焦广洋１ꎬ２ꎬ李澍坤３ꎬ邓易４ꎬ殷军１ꎬ陈万生２ꎬ４ꎬ陈军峰２∗ꎬ张凤４∗(１.沈阳药科大学中药学院ꎬ辽宁沈阳１１００１６ꎻ２.上海中医药大学中药研究所ꎬ上海２０１２０３ꎻ３.海军军医大学基础医学院学员六大队十七队ꎬ上海２００４３３ꎻ４.中国人民解放军海军军医大学第二附属医院药材科ꎬ上海２００００３)摘要:墨旱莲为菊科植物鳢肠(ＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａＬ.)的干燥地上部分ꎬ作为传统药用植物在世界范围内均有广泛的临床应用ꎮ本文基于近年来公开发表的文献ꎬ对墨旱莲及其化学成分的药理作用㊁体内代谢及质量控制研究进展进行归纳总结ꎬ以期为墨旱莲的临床应用及质量研究提供参考ꎮ关键词:墨旱莲ꎻ药理作用ꎻ体内代谢ꎻ质量控制中图分类号:Ｒ２８５㊀文献标识码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２１)１０－０６７３－００６ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２１.１０.０１１ＲｅｖｉｅｗｏｆｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓꎬｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａＬ.ａｎｄｉｔｓｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓＪＩＡＯＧｕａｎｇｙａｎｇ１ꎬ２ꎬＬＩＳｈｕｋｕｎ３ꎬＤＥＮＧＹｉ４ꎬＹＩＮＪｕｎ１ꎬＣＨＥＮＷａｎｓｈｅｎｇ２ꎬ４ꎬＣＨＥＮＪｕｎｆｅｎｇ２∗ꎬＺＨＡＮＧＦｅｎｇ４∗(１.ＳｃｈｏｏｌｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａꎬＳｈｅｎｙａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＳｈｅｎｙａｎｇ１１００１６ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＳｈａｎｇｈａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＳｈａｎｇｈａｉ２０１２０３ꎬＣｈｉｎａꎻ３.ＳｅｖｅｎｔｅｅｎｔｈＴｅａｍꎬＳｉｘｔｈＢｒｉｇａｄｅꎬＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅꎬＮａｖａｌＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＳｈａｎｇｈａｉ２００４３３ꎬＣｈｉｎａꎻ４.ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｙꎬＳｅｃｏｎｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＳｈａｎｇｈａｉ２００００３ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:ＥｃｌｉｐｔａｅＨｅｒｂａꎬｔｈｅｄｒｙａｅｒｉａｌｐａｒｔｏｆＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａＬ.(Ｆａｍｉｌｙａｓｔｅｒａｃｅａｅ).Ａｓａｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｌａｎｔꎬｉｔｈａｓｂｅｅｎｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎｃｌｉｎｉｃａｌａｌｌｏｖｅｒｔｈｅｗｏｒｌｄ.Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｌｉｔｅｒａｔｕｒｅｐｕｂｌｉｓｈｅｄｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓꎬｔｈｉｓｐａｐｅｒｒｅ￣ｖｉｅｗｅｄｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｏｆｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓꎬｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａＬ.ａｎｄｉｔｓｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓꎬｉｎｏｒｄｅｒｔｏｐｒｏｖｉｄｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎａｎｄｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａ￣ｔａＬ..Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａＬ.ꎻＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓꎻＭｅｔａｂｏｌｉｓｍꎻＱｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌ㊀㊀墨旱莲又称旱莲草㊁水旱莲ꎬ为一年生菊科植物鳢肠(ＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａＬ.)的干燥地上部分ꎬ在我国各地均有分布ꎮ墨旱莲所含化学成分丰富ꎬ主含噻吩㊁黄酮㊁香豆草醚㊁三萜皂苷及挥发油类成分ꎬ临床主要用于肝肾阴虚㊁牙齿松动㊁外伤出血等疾病的治疗[１]ꎬ在我国及印度㊁巴西等地拥有悠久的用药历史ꎬ现已被«中国药典»«英国药典»«欧洲药典»等收载[２－３]ꎬ也是国家卫健委批准的可用于保健食品的中药[４]ꎮ因其具有较高的药用价值ꎬ近年来ꎬ国内外学者对墨旱莲的药理作用㊁体内代谢及质量控制方面做了大量研究ꎬ本文就上述研究内容进行整理和分析ꎬ以期为墨旱莲的进一步深入研究及临床应用提供参考ꎮ１㊀药理作用研究表明墨旱莲具有多种药理作用ꎬ其中保肝㊁凉血止血㊁抗蛇毒等作用属于墨旱莲的传统功效ꎬ而现代研究也在墨旱莲丰富的化学成分[５]中发现其具有降血脂㊁抗肿瘤㊁抗炎㊁抑菌等多种药理活性ꎬ这使人们对墨旱莲药用价值有了更为清晰的认识ꎬ也为墨旱莲的临床应用提供了极具价值的参考ꎮ１.１㊀保肝作用㊀保肝作用为墨旱莲的传统功效ꎬ现代药理学研究从细胞及动物等多个层面探究了墨旱莲的保肝作用及其可能机制ꎮ墨旱莲不具有肝毒性ꎬ但能通过抑制ＣＣｌ４诱导的肝细胞脂质过氧化㊁调节氨基比林Ｎ－脱甲基酶及膜结合葡萄糖６－磷酸酶等肝微粒体药物代谢酶的水平来发挥保肝作用[７－８]ꎮ其所含成分蟛蜞菊内酯已被证明能够通过ＮＦ－κＢ信号通路缓解小鼠肝炎症状ꎬ保护肝细胞[９]ꎮ墨旱莲在治疗非酒精性脂肪肝上同样具有较好的活性ꎬＨｅｌｍｙ等[１０]发现高剂量(３００ｍｇｋｇ－１)的墨旱莲甲醇提取物对非酒精性脂肪肝大鼠的肝功能和血脂水平有明显改善作用ꎬ利用靶向代谢组学技术证实墨旱莲及所含有的槲皮素[１１]及蟛蜞菊内酯[１２]可通过调节肠道菌群及脂质代谢来改善脂肪肝症状ꎮ体外研究证实ꎬ墨旱莲对丙型肝炎病毒[１３]㊁Ｈｅｐ－Ｇ２肝癌细胞[１４]等同样有较好的抑制作用ꎮ１.２㊀降血脂作用㊀墨旱莲是印度等地的传统降血脂药物ꎮＧｕｐｔａ等[１５]发现墨旱莲乙酸乙酯部位可能通过抑制了ＡＫＴ/ｍＴＯＲ通路激活从而抑制３Ｔ３－Ｌ１前体脂肪细胞和ｈＭＳＣ衍生的脂肪细胞的分化ꎬ并能显著降低高脂血症金黄地鼠体内血清甘油三酯㊁总胆固醇和低密度脂蛋白等指标ꎬ抑制成脂过程的转录因子和蛋白在附睾脂肪组织中的表达ꎮ高血脂也是诱发动脉粥样硬化和冠心病的重要原因ꎬ墨旱莲正丁醇提取物连续给药六周后可显著降低小鼠血清中总胆固醇和甘油三酯水平ꎬ并改善动脉粥样硬化和冠心病症状[１６]ꎮ１.３㊀抗肿瘤作用㊀Ｙａｄａｖ等[１７]研究了墨旱莲乙醇提取物对７种不同癌细胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１(乳腺)㊁ＨｅＬａ(宫颈)㊁ＳＫ－ＯＶ－３(卵巢)㊁ＳＷ６２０(结肠)㊁ＤＵ１４５(前列腺)㊁Ａ５４９(肺)和ＰＡＮＣ－１(胰腺)的抑制作用ꎬ发现其通过破坏线粒体膜电位和ＤＮＡ的方式能够对菌株的生长产生抑制作用ꎬ且对乳腺癌细胞株生长和迁移的抑制最为明显ꎬ并通过体外及体内安全性评价实验证明墨旱莲乙醇提取物无明显的毒性作用ꎮ已有研究表明ꎬ从墨旱莲中分离得到的a－三联噻吩甲醇可以通过调节ＮＡＤＰＨ氧化酶产生活性氧来诱导人子宫内膜癌细胞(Ｈｅｃ１Ａ和Ｉｓｈｉｋａｗａ)的凋亡(ＩＣ５０值分别为０.３８μｍｏｌＬ－１和０.３５μｍｏｌＬ－１)ꎬ可能为子宫内膜癌的药物研发提供依据[１８]ꎮ研究发现ꎬ蟛蜞菊内酯对前列腺㊁乳腺等肿瘤细胞[１９－２０]具有一定的抑制生长和诱导凋亡的作用ꎮ１.４㊀抗炎与镇痛作用㊀墨旱莲叶甲醇提取物对卡拉胶和蛋清所致的大鼠足肿胀均有明显的抗炎作用ꎬ且呈剂量依赖性ꎬ其抗炎活性与吲哚美辛(１０ｍｇｋｇ－１)和赛庚啶(８ｍｇｋｇ－１)相当[２１]ꎮ墨旱莲甲醇提取物还能够降低哮喘小鼠支气管及肺部中的炎症细胞因子浓度[２２]ꎮ从墨旱莲中分离得到的刺囊酸可通过ＮＦ－kＢ信号通路来抑制脂多糖诱导的小鼠ＲＡＷ２６４.７细胞炎症因子的表达[２３]ꎻ蟛蜞菊内酯可通过抑制ＮＦ－kＢ信号通路的关键激酶ＩＫＫ来抑制脂多糖诱导的ｃａｓｐａｓｅ－１１的表达[２４]ꎮ１.５㊀抗氧化作用㊀林朝鹏等[２５]发现墨旱莲黄酮类提取物可增强血清中ＳＯＤ和ＧＳＨ－Ｐｘ的活性ꎬ降低血清中ＭＤＡ含量ꎬ发挥抗氧化作用ꎮＳｉｎｇｈ等[２６]发现甲醇提取物与其他溶剂提取物相比ꎬ含有较高的多酚和黄酮类成分ꎬ在ＤＰＰＨ㊁ＡＢＴＳ㊁ＳＯＤ㊁Ｃａｔａｌａｓｅ㊁ＧＳＴ等活性实验中发挥了最强的抗氧化活性ꎮＵｎｎｉｋｒｉｓｈｎａｎ等[２７]的实验结果与上类似ꎮ１.６㊀抑菌作用㊀Ｒａｕｔ等[２８]采用抑菌圈法和最小抑菌浓度法测试表明ꎬ墨旱莲甲醇提取物在最低浓度１２.５ｍｇｍＬ－１时即可对大肠杆菌和玫瑰微球菌产生抑制作用ꎬ强于其石油醚提取物ꎻ也有研究认为其石油醚提取物对多种真菌的抑制作用最佳[２９]ꎮ实验表明ꎬ在ｐＨ５.５~９.０条件下ꎬ墨旱莲总皂苷可通过破坏细菌细胞膜的方式达到对枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌生长的抑制作用[３０]ꎮＧｕｒｒａｐｕ等[３１]发现墨旱莲叶中含有的生物碱对大肠杆菌㊁铜绿假单胞菌㊁鲍氏志贺菌㊁金黄色葡萄球菌和粪链球菌等５种菌株均有抑制作用ꎬ且呈浓度依赖性ꎬ但最高浓度５００μｇｍＬ－１时的抑菌能力仍不及环丙沙星ꎮ１.７㊀其他活性㊀据文献报道ꎬ墨旱莲在抗骨质疏松[３２]㊁调节免疫[３３]㊁抗糖尿病[３４]㊁驱蚊[３５]㊁止血[３６]㊁抗蛇毒[３７]等方面同样具有一定的治疗效果ꎮ此外ꎬ蟛蜞菊内酯可通过调节ＮＦ－κＢ通路显著抑制ＬＰＳ介导的人肾小球系膜细胞异常增殖炎症反应ꎬ治疗肾损伤[３８]ꎮ墨旱莲石油醚提取物还能够显著的改善毛囊环境[３９]ꎬ促进毛发生长ꎬ治疗效果优于２％的米诺地尔[４０]ꎮ２㊀体内代谢Ｌｉ等[４１]通过ＵＨＰＬＣ/Ｑ－Ｏｒｂｉｔｒａｐ－ＭＳ技术分析了大鼠口服墨旱莲乙醇提取物(１ｇｋｇ－１)后入血成分ꎬ鉴别得２４种原型成分和２００种代谢产物ꎬ均以黄酮类化合物为主ꎬ代谢途径包括氧化㊁氢化㊁甲基化㊁葡萄糖醛酸化和磺化等ꎬ其中以葡萄糖醛酸化等Ⅱ相代谢途径为主ꎮ文献报道ꎬ墨旱莲提取物给药后血浆中的黄酮类化合物大部分以结合物形式存在ꎬ因此采用了酶解法处理大鼠血浆ꎬ基于液相分析方法检测木犀草素㊁野黄芩素㊁芹菜素和香叶木素的游离和结合总浓度ꎬ血药浓度－时间曲线呈双峰或多峰现象[４２]ꎮＣｈｅｒｕｖｕ等[４３]测定了墨旱莲三氯甲烷提取物灌胃给药后大鼠血浆木犀草素㊁蟛蜞菊内酯和芹菜素的药动学行为ꎬ大鼠血浆采用液液萃取进行前处理ꎬ结果表明上述成分在体内１ｈ左右出现血药峰浓度ꎬ半衰期为５ｈ左右ꎬ且血药浓度－时间曲线存在双峰现象ꎬ与Ｃｈｅｎ等[４４]的报道类似ꎬ这表明芹菜素和蟛蜞菊内酯等在体内可能存在肝－肠循环现象ꎮＣｈｅｎ等[４５]发现大鼠在口服５.００ｍｇｋｇ－１蟛蜞菊内酯代谢情况与上述报道类似ꎬ并通过体外肝微粒体孵育实验验证了其在体内代谢的规律ꎮ３㊀质量控制«中国药典»２０２０年版[２]主要通过观察性状和薄层色谱法(ＴＬＣ)以及测定水分㊁灰分㊁酸不溶性灰分来对墨旱莲进行鉴别和检查ꎬ而含量测定方面仅以对蟛蜞菊内酯进行高效液相分析方法(ＨＰＬＣ)为标准ꎬ但是墨旱莲化学成分及药理作用复杂多样ꎬ仅对蟛蜞菊内酯这一种化学成分进行含量测定并不能够完全评价其质量的优劣ꎮ近年来关于墨旱莲的质量控制方法从传统的显微㊁薄层以及ＨＰＬＣ逐渐发展到液相色谱－质谱联用(ＨＰＬＣ－ＭＳ)和毛细管电色谱法(ＣＥＣ)等ꎬ为墨旱莲所含成分分析提供了各种科学数据ꎮ３.１㊀ＴＬＣ㊀ＴＬＣ主要用于墨旱莲药材及其制剂的定性鉴别以及对旱莲苷Ａ㊁α－醛基三聚噻吩㊁蟛蜞菊内酯等指标性成分的含量测定ꎬ增强了墨旱莲质量控制方法的灵活性和可执行性ꎮＴＬＣ在墨旱莲质量控制中的应用见表１ꎮ表１㊀ＴＬＣ在墨旱莲质量控制中的应用样品对照品固定相展开剂显色条件９０％甲醇提取物α－醛基三联噻吩硅胶Ｇ环己烷－三氯甲烷－乙酸乙酯(８ʒ２ʒ１)ＵＶ３６６ｎｍ乙醚提取物[４７]槲皮素硅胶Ｇ甲苯－醋酸乙酯－甲酸(５ʒ４ʒ０.５)１％三氯化铝乙醇溶液ꎬＵＶ３６５ｎｍ乙酸乙酯提取物[４８]墨旱莲对照药材硅胶Ｇ正己烷－乙酸乙酯(９ʒ１)ＵＶ３６５ｎｍ甲醇提取物[４９]蟛蜞菊内酯硅胶６０Ｆ－２５４甲苯ʒ乙酸乙酯(９ʒ１)ＵＶ３６６ｎｍ水提取物[５０]蟛蜞菊内酯硅胶６０Ｆ－２５４甲苯ʒ乙酸乙酯ʒ丙酮ʒ甲酸(６ʒ２ʒ１ʒ１)ＵＶ３５１ｎｍ３.２㊀ＨＰＬＣ㊀ＨＰＬＣ是墨旱莲多指标性成分同时测定的常用方法ꎮ从表２可以看出ꎬＨＰＬＣ主要对墨旱莲中的香豆素类(蟛蜞菊内酯㊁去甲蟛蜞菊内酯)㊁三萜皂苷类(旱莲苷Ⅰ㊁旱莲苷Ⅶ)㊁黄酮类(木犀草素㊁芹菜素)㊁噻吩类(α－三联噻吩甲醛㊁α－三联噻吩甲醇)等化合物进行检测ꎮ发现不同产地㊁批次的墨旱莲中化学成分含量差异较大ꎬ如:蟛蜞菊内酯的含量范围为０.０１７０％~０.０１９０％ꎬ旱莲苷Ｉ为０.０１４０％~０.０１６０％ꎬ旱莲苷ＶＩＩ为０.００４３％~０.００５９％ꎬ木犀草素为０.０１７０％~０.０４８０％ꎬα－三联噻吩甲醛为０.０１２５％~０.１８４５％ꎬα－三联噻吩甲醇为０.００６３％~０.０７７７％ꎮ此外ꎬ吴红霞等[６４]通过高效液相色谱法建立了墨旱莲药材的指纹图谱ꎬ并对来自不同产地的墨旱莲进行质量分析ꎬ发现此方法可应用于墨旱莲的质量控制当中ꎮ表２㊀ＨＰＬＣ在墨旱莲质量控制中的应用检测对象检测化合物色谱柱流动相检测波长颗粒[５２]原儿茶酸㊁原儿茶醛１８(４.６ｍｍˑ１５０ｍｍꎬ５μｍ)甲醇－０.１％磷酸水溶液ＵＶꎬ２８０ｎｍ药材[５３]木犀草素ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａＣ１８柱(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)乙腈－０.１％磷酸水溶液ＤＡＤꎬ３４８ｎｍ墨旱莲配方颗粒[５４]绿原酸㊁咖啡酸ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢ－Ｃ１８柱(４.６ｍｍˑ１５０ｍｍꎬ５μｍ)甲醇－０.１％磷酸水溶液ＤＡＤꎬ３２７ｎｍ药材[５５]α－三联噻吩甲醛㊁α－三联噻吩甲醇ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢ－Ｃ１８柱(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)乙腈－０.５％甲酸水溶液ＶＷＤꎬ３９５ｎｍ药材[５６]木犀草素㊁芹菜素Ｎｕｃｌｅｏｄｕｒ１００－５Ｃ１８柱(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)甲醇－０.２％磷酸水溶液ＵＶꎬ３５０ｎｍ药材正丁醇提取部位[５７]墨旱莲皂甙Ａ㊁齐墩果酸㊁芹菜素㊁木犀草素㊁α－三联噻吩㊁(丁烯－３－炔－卜基)２ꎬ２－二联噻吩㊁蟛蜞菊内酯㊁去甲基蟛蜞菊内酯ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ－２柱(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)乙腈:０.５％乙酸水溶液－甲醇:０.４％的磷酸水溶液ＳＰＤ－１０Ａｖｐꎬ２１０ｎｍ药材[５８]木犀草素ＳｙｍｍｅｔｒｙＯＤＳＣ１８柱(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)甲醇－０.２％磷酸水溶液ＰＤＡꎬ３５０ｎｍ药材[５９]木犀草素㊁芹菜素Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋＣＬＣ－ＯＤＳ柱(６ｍｍˑ１５０ｍｍꎬ５μｍ)乙腈－２％的醋酸水溶液ＳＰＤ－１０Ａｖｐꎬ３４０ｎｍ药材[６０]旱莲苷Ｃꎬ旱莲苷ＩＶꎬ旱莲苷Ａꎬ刺囊酸－２８－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８柱(２.１ｍｍˑ１５０ｍｍꎬ１.７μｍ)乙腈－水溶液ＰＤＡꎬ２１０ｎｍ药材[６１]木犀草素㊁芹菜素ＡｃｑｕｉｔｙＢＥＨＣ１８柱(２.１ｍｍˑ５０ｍｍꎬ１.７μｍ)乙腈－１％乙酸水溶液ＰＤＡꎬ３４０ｎｍ药材[６２]异槲皮苷㊁木犀草苷㊁异去甲蟛蜞菊内酯㊁异绿原酸Ａ㊁异绿原酸Ｃ㊁木犀草素㊁蟛蜞菊内酯㊁芹菜素ＷａｔｅｒｓＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣＢＥＨＣ１８柱(２.１ｍｍˑ１００ｍｍꎬ１.７μｍ)乙腈－０.１％甲酸水溶液ＤＡＤꎬ３５０ｎｍ测器ꎻＰＤＡ－光电二极管阵列检测器３.３㊀ＨＰＬＣ－ＭＳ㊀Ｈａｎ等[６５]通过ＨＰＬＣ－ＭＳ/ＭＳ建立了同时测定墨旱莲中９种化合物的方法ꎬ所检测化合物包括木犀草苷㊁旱莲苷Ｃ㊁木犀草素㊁旱莲苷ＩＶ㊁芹菜素㊁旱莲苷Ａ㊁刺囊酸２８－Ｏ－β－Ｄ－吡喃葡萄糖苷㊁刺囊酸㊁３－氧代－１６α－羟基齐墩果烷－１２－烯－２８－酸ꎻ并通过测定１３个产地的墨旱莲对该方法进行验证ꎬ证实该方法可应用于墨旱莲的质量控制ꎮ夏爱军等[６６]通过ＵＨＰＬＣ－Ｑ－ＴＯＦ/ＭＳ方法对对不同产地旱莲草药材中的５个指标性成分同时进行含量测定的方法ꎬ发现芹菜素㊁十六烷酸㊁木樨草素㊁蟛蜞菊内酯㊁木樨草苷在不同产地墨旱莲的测定结果存在着较大差异ꎮ３.４㊀其他方法㊀刘海兴等[６７]通过ＣＥＣ测得旱莲莲中总黄酮的平均含量最高为０.５４４ｍｇｋｇ－１ꎮＰｕｋｕｍｐｕａｎｇ等[６８]通过ＵＶ对墨旱莲不同提取物的总酚含量进行测定ꎬ测得正丁醇部位的总酚含量为(９０.２８８ʃ０.２４０)ｍｇｋｇ－１ꎮ综上分析可见ꎬ每种检测方法均有其优势与不足ꎬ如薄层色谱法凭借其操作简便㊁成本低廉㊁方法成熟㊁检测效率高等优势ꎬ至今仍为«中国药典»对墨旱莲鉴别的主要方法ꎬ但是由于其在结果的重复性㊁试剂毒性以及对生物高分子分离效果差㊁准确度低等不足ꎬ还需要不断的改进和完善ꎻ由于中药质量控制的指标成分需满足药材特有㊁临床效应明确㊁可定性㊁定量等条件ꎬ而２０１０年版«中国药典»[６９]首次通过ＨＰＬＣ对墨旱莲指标性成分蟛蜞菊内酯进行含量测定ꎬ弥补了先前药典仅通过显微㊁薄层等方法对墨旱莲进行真伪鉴别而无法进行含量测定的不足ꎬ成为墨旱莲质量控制和评价的重要手段ꎮ但是目前«中国药典»仅以蟛蜞菊内酯为检测指标进行高效液相色谱的含量测定ꎬ检测指标单一ꎬ而前期研究报道中通过ＨＰＬＣ法对墨旱莲中α－三联噻吩甲醛㊁木犀草素㊁芹菜素等多种活性成分为指标对墨旱莲进行质量控制为«中国药典»的更新和完善提供了借鉴ꎬ相信未来多指标成分测定将成为墨旱莲质量控制的必要内容ꎮ４　结语与展望墨旱莲药食同源ꎬ在临床应用及养生保健上具有一定的地位ꎮ目前对于墨旱莲的研究主要是在化学成分提取分离的基础上ꎬ开展提取物及单体的药理活性考察ꎬ以及少数化合物的体内代谢和药材的质量控制方法等ꎮ但是对于墨旱莲药效物质与其传统功效的关联性仍需进一步明确ꎬ未来需加强对其特征性成分如噻吩类㊁旱莲苷类㊁黄酮类等成分的功效和代谢特征进行全面㊁综合的分析ꎬ明确其成分与功效的关联性ꎬ建立更为科学的质量控制体系ꎬ才能为墨旱莲的药用价值及临床应用提供了更有力的科学依据ꎮ参考文献:[１]㊀程敏ꎬ胡正海.墨旱莲的生物学和化学成分研究进展[Ｊ].中草药ꎬ２０１０ꎬ４１(１２):２１１６－２１１８.[２]国家药典委员会.中华人民共和国药典２０２０年版(一部)[Ｓ].北京:中国医药科技出版ꎬ２０２０:３９１.[３]ＷＡＮＧＭꎬＦＲＡＮＺＧ.ＴｈｅｒｏｌｅｏｆｔｈｅＥｕｒｏｐｅａｎＰｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ(ＰｈＥｕｒ)ｉｎＱｕａｌｉｔｙＣｏｎｔｒｏｌｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＨｅｒｂａｌＭｅｄｉｃｉｎｅｉｎＥｕｒｏｐｅａｎＭｅｍｂｅｒＳｔａｔｅｓ[Ｊ].ＷＪＴＣＭꎬ２０１５ꎬ１(１):５－１５. [４]国家卫生计生委公布１０１种药食同源品种征求意见[Ｊ].山东中医杂志ꎬ２０１５ꎬ３４(１):７６.[５]ＸＩＯＮＧＨＰꎬＸＩＦＭꎬＣＨＥＮＷＳꎬｅｔａｌ.ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｆＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａ[Ｊ].ＣｈｅｍＮａｔＣｏｍｐｏｕｎｄꎬ２０２１ꎬ５７(１):１－３. [６]ＹＵＳＪꎬＹＵＪＨꎬＨＥＦꎬｅｔａｌ.ＮｅｗａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｔｈｉｏｐｈｅｎｅｓｆｒｏｍＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａ[Ｊ].Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａꎬ２０２０(１４２):１０４４７１.[７]徐汝明ꎬ邓克敏ꎬ陆阳.中药墨旱莲扶正固本和保肝作用的研究[Ｊ].上海交通大学学报(医学版)ꎬ２００９ꎬ２９(１０):１２００－１２０４. [８]ＳＡＸＥＮＡＡＫꎬＳＩＮＧＨＢꎬＡＮＡＮＤＫＫ.ＨｅｐａｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＥｃｌｉｐｔａａｌｂａｏｎｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｅｖｅｌｓｉｎｒａｔｓ[Ｊ].ＪＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌꎬ１９９３ꎬ４０(３):１５５－１６１.[９]ＬＵＯＱꎬＤＩＮＧＪꎬＺＨＵＬꎬｅｔａｌ.ＨｅｐａｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅＥｆｆｅｃｔｏｆＷｅｄｅｌｏ￣ｌａｃｔｏｎｅａｇａｉｎｓｔＣｏｎｃａｎａｖａｌｉｎＡ－ＩｎｄｕｃｅｄＬｉｖｅｒＩｎｊｕｒｙｉｎＭｉｃｅ[Ｊ].ＡｍＪＣｈｉｎＭｅｄꎬ２０１８ꎬ４６(４):８１９－８３３.[１０]ＨＥＬＭＹＡＳꎬＳＨＥＲＩＦＮＭꎬＧＨＡＮＥＭＨＺꎬｅｔａｌ.Ｔａｒｇｅｔｅｄｍｅｔａｂｏ￣ｌｏｍｉｃｓｒｅｖｅａｌｓｔｈｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｉｍｐａｃｔｏｆＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａｏｎｄｉｅｔ－ｉｎｄｕｃｅｄｎｏｎ－ａｌｃｏｈｏｌｉｃｆａｔｔｙｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅｉｎｒａｔｓ[Ｊ].ＪＡｐｐｌｉｅｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅꎬ２０１９ꎬ９(Ｓ１):７７－９０.[１１]ＰＯＲＲＡＳＤꎬＮＩＳＴＡＬＥꎬＭＡＲＴÍＮＥＺ－ＦＬÓＲＥＺＳꎬｅｔａｌ.Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆｑｕｅｒｃｅｔｉｎｏｎｈｉｇｈ－ｆａｔｄｉｅｔ－ｉｎｄｕｃｅｄｎｏｎ－ａｌｃｏｈｏｌｉｃｆａｔｔｙｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅｉｎｍｉｃｅｉｓｍｅｄｉａｔｅｄｂｙｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｂｉｏｔａｉｍｂａｌａｎｃｅａｎｄｒｅｌａｔｅｄｇｕｔ－ｌｉｖｅｒａｘｉｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ[Ｊ].ＦｒｅｅＲａｄｉｃａｌＢｉｏＭｅｄꎬ２０１７(１０２):１８８－２０２.[１２]ＺＨＡＯＹꎬＰＥＮＧＬꎬＹＡＮＧＬꎬｅｔａｌ.ＷｅｄｅｌｏｌａｃｔｏｎｅＲｅｇｕｌａｔｅｓＬｉｐｉｄＭｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄＩｍｐｒｏｖｅｓＨｅｐａｔｉｃＳｔｅａｔｏｓｉｓＰａｒｔｌｙｂｙＡＭＰＫＡｃｔｉ￣ｖａｔｉｏｎａｎｄＵｐ－ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＰＡＲα/ＬＰＬａｎｄＬＤＬＲ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０１５ꎬ１０(７):ｅ１３２７２０.[１３]ＭＡＮＶＡＲＤꎬＭＩＳＨＲＡＭꎬＫＵＭＡＲＳꎬｅｔａｌ.Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｅｖａｌ￣ｕａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉＨｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｆｒｏｍＥｃｌｉｐｔａａｌｂａ[Ｊ].ＪＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１２ꎬ１４４(３):５４５－５５４.[１４]ＣＨＵＮＧＩꎬＲＡＨＵＭＡＮＡＡꎬＭＡＲＩＭＵＴＨＵＳꎬｅｔａｌ.ＡｎＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＣｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙａｎｄＣａｓｐａｓｅ－ＭｅｄｉａｔｅｄＡｐｏｐｔｏｔｉｃＥｆｆｅｃｔｏｆＧｒｅｅｎＳｙｎ￣ｔｈｅｓｉｚｅｄＺｉｎｃＯｘｉｄｅＮａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓＵｓｉｎｇＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａｏｎＨｕｍａｎＬｉｖｅｒＣａｒｃｉｎｏｍａＣｅｌｌｓ[Ｊ].Ｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ(ＢａｓｅｌꎬＳｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ)ꎬ２０１５ꎬ５(３):１３１７－１３３０.[１５]ＧＵＰＴＡＡꎬＫＵＭＡＲＡꎬＫＵＭＡＲＤꎬｅｔａｌ.ＥｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅｆｒａｃｔｉｏｎｏｆＥｃｌｉｐｔａａｌｂａ:ａｐｏｔｅｎｔｉａｌｐｈｙｔｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｔａｒｇｅｔｉｎｇａｄｉｐｏｃｙｔｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ[Ｊ].ＢｉｏｍｅｄＰｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒꎬ２０１７(９６):５７２－５８３. [１６]ＫＩＭＤꎬＬＥＥＳꎬＣＨＯＩＪꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｂｕｔａｎｏｌｆｒａｃｔｉｏｎｏｆＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓ￣ｔｒａｔａ(Ｌｉｎｎ)ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｒｅｄｕｃｅｓｓｅｒｕｍｌｉｐｉｄｌｅｖｅｌｓａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｓａｎ￣ｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎＣＤｒａｔｓ[Ｊ].ＮｕｔｒＲｅｓꎬ２００８ꎬ２８(８):５５０－５５４.[１７]ＹＡＤＡＶＮＫꎬＡＲＹＡＲＫꎬＤＥＶＫꎬｅｔａｌ.ＡｌｃｏｈｏｌｉｃＥｘｔｒａｃｔｏｆＥｃｌｉｐｔａａｌｂａＳｈｏｗｓＩｎＶｉｔｒｏＡｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｎｄＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＡｃｔｉｖｉｔｙｗｉｔｈｏｕｔＥｘｈｉｂｉｔｉｎｇＴｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌＥｆｆｅｃｔｓ[Ｊ].ＯｘｉｄＭｅｄＣｅｌｌＬｏｎｇｅｖꎬ２０１７(２０１７):９０９４６４１.[１８]ＬＥＥＪꎬＡＨＮＪꎬＣＨＯＹꎬｅｔａｌ.α－ＴｅｒｔｈｉｅｎｙｌｍｅｔｈａｎｏｌꎬｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａꎬｉｎｄｕｃｅｓａｐｏｐｔｏｓｉｓｂｙｇｅｎｅｒａｔｉｎｇｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓｖｉａＮＡＤＰＨｏｘｉｄａｓｅｉｎｈｕｍａｎｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＪＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１５(１６９):４２６－４３４.[１９]ＳＡＲＶＥＳＷＡＲＡＮＳꎬＧＡＵＴＡＭＳＣꎬＧＨＯＳＨＪ.Ｗｅｄｅｌｏｌａｃｔｏｎｅꎬａｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｌａｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄｃｏｕｍｅｓｔａｎꎬｉｎｄｕｃｅｓｃａｓｐａｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｖｉａｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＰＫＣｅｐｓｉｌｏｎｗｉｔｈｏｕｔｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇＡｋｔ[Ｊ].ＩｎｔＪＯｎｃｏｌꎬ２０１２ꎬ４１(６):２１９１－２１９９. [２０]ＮＥＨＹＢＯＶＡＴꎬＳＭＡＲＤＡＪꎬＤＡＮＩＥＬＬꎬｅｔａｌ.Ｗｅｄｅｌｏｌａｃｔｏｎｅｉｎｄｕｃｅｓｇｒｏｗｔｈｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｂｙｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅ￣ｃｅｐｔｏｒｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ[Ｊ].ＪＳｔｅｒｏｉｄＢｉｏｃｈｅｍＭｏｌＢｉｏｌꎬ２０１５(１５２):７６－８３.[２１]ＡＲＵＮＡＣＨＡＬＡＭＧꎬＳＵＢＲＡＭＡＮＩＡＮＮꎬＰＡＺＨＡＮＩＧＰꎬｅｔａｌ.Ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｍｅｔｈａｎｏｌｉｃｅｘｔｒａｃｔｏｆＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａＬ.(Ａｓｔｅａｒａｃｅａｅ)[Ｊ].ＡｆｒｉｃａｎＪＰｈａｒｍａｃｙＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬ２００９ꎬ３(３):９７－１００.[２２]ＤＥＦＲＥＩＴＡＳＭＯＲＥＬＬＪꎬＤＥＡＺＥＶＥＤＯＢＣꎬＣＡＲＭＯＮａＦꎬｅｔａｌ.ＡｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄｍｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｆＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａ(Ｌ.)Ｌ.(Ａｓ￣ｔｅｒａｃｅａｅ)ｒｅｄｕｃｅｓｂｒｏｎｃｈｉａｌｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓａｎｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＴｈ２ｃｙｔｏｋｉｎｅｓｉｎａｍｕｒｉｎｅｍｏｄｅｌｏｆａｓｔｈｍａ[Ｊ].ＪＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１７(１９８):２２６－２３４.[２３]ＲＹＵＳꎬＳＨＩＮＪＳꎬＪＵＮＧＪＹꎬｅｔａｌ.ＥｃｈｉｎｏｃｙｓｔｉｃａｃｉｄｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｉＮＯＳꎬＴＮＦ－ａｌｐｈａꎬａｎｄＩＬ－６ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｖｉａＮＦ－ｋａｐｐａＢｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｎＲＡＷ２６４.７ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ[Ｊ].ＰｌａｎｔａＭｅｄꎬ２０１３ꎬ７９(１２):１０３１－１０３７. [２４]ＫＯＢＯＲＩＭꎬＹＡＮＧＺꎬＧＯＮＧＤꎬｅｔａｌ.ＷｅｄｅｌｏｌａｃｔｏｎｅｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓＬＰＳ－ｉｎｄｕｃｅｄｃａｓｐａｓｅ－１１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙｄｉｒｅｃｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅＩＫＫｃｏｍｐｌｅｘ[Ｊ].ＣｅｌｌＤｅａｔｈＤｉｆｆｅｒꎬ２００４ꎬ１１(１):１２３－１３０.[２５]林朝朋ꎬ芮汉明ꎬ许晓春.墨旱莲黄酮类提取物抗自由基作用及体内抗氧化功能的研究[Ｊ].军事医学科学院院刊ꎬ２００５ꎬ２９(４):３４４－３４５.[２６]ＳＩＮＧＨＬꎬＡＮＴＩＬＲꎬＫＵＭＡＲＤꎬｅｔａｌ.ＰｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓａｎｄＩｎ－ｖｉｔｒｏａｓｓａｙｓｆｏｒａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＢｈｒｉｎｇｒａｊｈｅｒｂＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａ(Ｌ.)[Ｊ].ＪＰｈａｒｍＰｈｙｔｏｃｈｅｍꎬ２０１９ꎬ８(３):４５２７－４５３３.[２７]ＵＮＮＩＫＲＩＳＨＮＡＮＫＰꎬＦＡＴＨＩＭＡＡꎬＨＡＳＨＩＭＫＭꎬｅｔａｌ.Ａｎｔｉｏｘｉ￣ｄａｎｔＳｔｕｄｉｅｓａｎｄＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＷｅｄｅｌｏｌａｃｔｏｎｅｉｎＥｃｌｉｐｔａａｌｂａ[Ｊ].ＪＰｌａｎｔＳｃｉꎬ２００７ꎬ２(４):４５９－４６４.[２８]ＲＡＵＴＳꎬＲＡＵＴＳꎬＧＨＡＤＡＩＡ.Ｐｈｙｔｏｃｅｕｔｉｃａｌｅｖａｌｕａｔｉｏｎａｎｄａｎｔｉ￣ｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆＥｃｌｉｐｔａａｌｂａａｎｄＴｙｌｏｐｈｏｒａｉｎｄｉｃａ[Ｊ].ＩｎｔＪＭｉｃｒｏｂｉｏｌＲｅｓꎬ２０１２ꎬ４(５):２２７－２３０.[２９]ＮＡＧＡＢＨＵＳＨＡＮꎬＲＡＶＥＥＳＨＡＫＡꎬＳＨＲＩＳＨＡＤＬ.Ａｎｔｉｄｅｒｍａｔｏ￣ｐｈｙｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａＬ.ａｇａｉｎｓｔｈｕｍａｎｉｎｆｅｃｔｉｖｅＴｒｉｃｈｏ￣ｐｈｙｔｏｎａｎｄＭｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍｓｐｐ[Ｊ].ＩｎｔＪＣｈｅｍＡＮａｌｙｔＳｃｉꎬ２０１３ꎬ４(２):１３６－１３８.[３０]ＲＡＹＡꎬＢＨＡＲＡＬＩＰꎬＫＯＮＷＡＲＢＫ.ＭｏｄｅｏｆＡｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＥｃｌａｌｂａｓａｐｏｎｉｎＩｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＥｃｌｉｐｔａａｌｂａ[Ｊ].ＡｐｐｌＢｉｏ￣ｃｈｅｍＢｉｏｔｅｃｈꎬ２０１３ꎬ１７１(８):２００３－２０１９.[３１]ＧＵＲＲＡＰＵＳꎬＭＡＭＩＤＡＬＡＥ.ＩｎｖｉｔｒｏＡｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＡｌ￣ｋａｌｏｉｄｓＩｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＬｅａｖｅｓｏｆＥｃｌｉｐｔａａｌｂａＡｇａｉｎｓｔＨｕｍａｎＰａｔｈｏ￣ｇｅｎｉｃＢａｃｔｅｒｉａ[Ｊ].ＰｈａｒｍａｃｏｇｎｏｓｙＪꎬ２０１７ꎬ９(４):５７３－５７７. [３２]ＤＥＮＧＹＴꎬＫＡＮＧＷＢꎬＺＨＡＯＪＮꎬｅｔａｌ.ＯｓｔｅｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅＥｆｆｅｃｔｏｆＥｃｈｉｎｏｃｙｓｔｉｃＡｃｉｄꎬａＴｒｉｔｅｒｐｏｎｅＣｏｍｐｏｎｅｎｔｆｒｏｍＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａꎬｉｎＯｖａｒｉｅｃｔｏｍｙ－ＩｎｄｕｃｅｄＯｓｔｅｏｐｏｒｏｔｉｃＲａｔｓ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０１５ꎬ１０(８):ｅ１３６５７２.[３３]ＣＨＲＩＳＴＹＢＡＰＩＴＡＤꎬＤＩＶＹＡＧＮＡＮＥＳＷＡＲＩＭꎬＭＩＣＨＡＥＬＲＤ.ＯｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＥｃｌｉｐｔａａｌｂａｌｅａｆａｑｕｅｏｕｓｅｘｔｒａｃｔｅｎｈａｎｃｅｓｔｈｅｎｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓａｎｄｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＯｒｅｏ￣ｃｈｒｏｍｉｓｍｏｓｓａｍｂｉｃｕｓ[Ｊ].ＦｉｓｈＳｈｅｌｌｆｉｓｈＩｍｍｕｎꎬ２００７ꎬ２３(４):８４０－８５２.[３４]ＫＵＭＡＲＤꎬＧＡＯＮＫＡＲＲＨꎬＧＨＯＳＨＲꎬｅｔａｌ.Ｂｉｏ－ａｓｓａｙｇｕｉｄｅｄｉ￣ｓｏｌａｔｉｏｎｏｆａｌｐｈａ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｆｒｏｍＥｃｌｉｐｔａａｌｂａ.[Ｊ].ＮａｔＰｒｏｄＣｏｍｍｕｎꎬ２０１２ꎬ７(８):９８９－９９０.[３５]ＤＡＳＳＫꎬＭＡＲＩＡＰＰＡＮＰ.ＬａｒｖｉｃｉｄａｌＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＣｏｌｏｃａｓｉａｅｓｃｕｌｅｎｔａꎬＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａａｎｄＷｒｉｇｈｔｉａｔｉｎｃｔｏｒｉａＬｅａｆＥｘｔｒａｃｔＡｇａｉｎｓｔＣｕｌｅｘｑｕｉｎｑｕｅｆａｓｃｉａｔｕｓ[Ｊ].ＰｒｏｃｅｅｄＮａｔＡｃａｄＳｃｉＩｎｄｉａꎬ２０１６ꎬ８６(１):１３９－１４３.[３６]庄晓燕ꎬ杨菁ꎬ李华侃ꎬ等.热盛胃出血小鼠模型的制作及墨旱莲对其止血作用机制的研究[Ｊ].数理医药学杂志ꎬ２０１０ꎬ２３(１):３５－３７.[３７]ＤＩＯＧＯＬＣꎬＦＥＲＮＡＮＤＥＳＲＳꎬＭＡＲＣＵＳＳＩＳꎬｅｔａｌ.ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＳｎａｋｅＶｅｎｏｍｓａｎｄＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅｓＡ２ｂｙＥｘｔｒａｃｔｓｆｒｏｍＮａｔｉｖｅａｎｄＧｅｎｅｔｉｃａｌｌｙＭｏｄｉｆｉｅｄＥｃｌｉｐｔａａｌｂａ:ＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＡｃｔｉｖｅＣｏｕｍｅｓｔａｎｓ[Ｊ].ＢａｓｉｃＣｌｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌꎬ２００９ꎬ１０４(４):２９３－２９９.[３８]ＳＨＥＮＰꎬＹＡＮＧＸꎬＪＩＡＮＧＪꎬｅｔａｌ.ＷｅｄｅｌｏｌａｃｔｏｎｅｆｒｏｍＥｃｌｉｐｔａａｌｂａｉｎｈｉｂｉｔｓｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ－ｅｎｈａｎｃｅｄｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｒｅｎａｌｍｅｓａｎｇｉａｌｃｅｌｌｓｖｉａＮＦ－κＢｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＡｍＪＴｒａｎｓｌＲｅｓꎬ２０１７ꎬ９(５):２１３２.[３９]ＢＥＧＵＭＳꎬＬＥＥＭＲꎬＧＵＬＪꎬｅｔａｌ.ＥｘｏｇｅｎｏｕｓｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｗｉｔｈＥｃｌｉｐｔａａｌｂａｐｒｏｍｏｔｅｓｈａｉｒｍａｔｒｉｘｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｓＴＧＦ－ｂｅｔａ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｎｕｄｅｍｉｃｅ[Ｊ].ＩｎｔＪＭｏｌＭｅｄꎬ２０１５ꎬ３５(２):４９６－５０２.[４０]ＲＯＹＲＫꎬＴＨＡＫＵＲＭꎬＤＩＸＩＴＶＫ.ＨａｉｒｇｒｏｗｔｈｐｒｏｍｏｔｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＥｃｌｉｐｔａａｌｂａｉｎｍａｌｅａｌｂｉｎｏｒａｔｓ[Ｊ].ＡｒｃｈＤｅｒｍａｔｏｌＲｅｓꎬ２００８ꎬ３００(７):３５７－３６４.[４１]ＬＩＭꎬＳＩＤꎬＦＵＺꎬｅｔａｌ.Ｅｎｈａｎｃｅｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｎｖｉｖｏｍｅ￣ｔａｂｏｌｉｔｅｓｏｆＥｃｌｉｐｔａｅＨｅｒｂａｉｎｒａｔｐｌａｓｍａｂｙｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇｕｎｔａｒｇｅｔｅｄｄａｔａ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＭＳ２ａｎｄｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅｍｕｌｔｉｐｌｅｒｅａｃｔｉｏｎｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ－ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ－ｅｎｈａｎｃｅｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｓｃａｎ[Ｊ].ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＢꎬ２０１９(１１０９):９９－１１０.[４２]邓斌ꎬ韦炳华ꎬ黄盛超ꎬ等.ＨＰＬＣ法同时测定大鼠口服墨旱莲提取物后血浆中四种黄酮类化合物[Ｊ].中药材ꎬ２０１４ꎬ３７(９):１６３６－１６４０.[４３]ＣＨＥＲＵＶＵＨＳꎬＹＡＤＡＶＮＫꎬＶＡＬＩＣＨＥＲＬＡＧＲꎬｅｔａｌ.ＬＣ－ＭＳ/ＭＳｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｌｕｔｅｏｌｉｎꎬｗｅｄｅｌｏ￣ｌａｃｔｏｎｅａｎｄａｐｉｇｅｎｉｎｉｎｍｉｃｅｐｌａｓｍａｕｓｉｎｇｈａｎｓｅｎｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙｐａｒａｍ￣ｅｔｅｒｓｆｏｒｌｉｑｕｉｄ－ｌｉｑｕｉｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ:ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｔｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓｏｆＥｃｌｉｐｔａａｌｂａｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍｆｒａｃｔｉｏｎ[Ｊ].ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＢꎬ２０１８(１０８１/１０８２):７６－８６.[４４]ＣＨＥＮＴꎬＬＩＬＰꎬＬＵＸＹꎬｅｔａｌ.ＡｂｓｏｒｐｔｉｏｎａｎｄｅｘｃｒｅｔｉｏｎｏｆｌｕｔｅｏｌｉｎａｎｄａｐｉｇｅｎｉｎｉｎｒａｔｓａｆｔｅｒｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍｅｘｔｒａｃｔ[Ｊ].ＪＡｇｒｉｃＦｏｏｄＣｈｅｍꎬ２００７ꎬ５５(２):２７３－２７７. [４５]ＣＨＥＮＱꎬＷＵＸꎬＧＡＯＸꎬｅｔａｌ.ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄＶａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆａｎＵｌｔｒａ－ＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬｉｑｕｉｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＭｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅＤｅｔｅｒｍｉ￣ｎａｔｉｏｎｏｆＷｅｄｅｌｏｌａｃｔｏｎｅｉｎＲａｔＰｌａｓｍａａｎｄｉｔｓＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎａＰｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃＳｔｕｄｙ[Ｊ].Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓꎬ２０１９ꎬ２４(４):７６２.[４６]张朝凤ꎬ孙志华ꎬ张勉ꎬ等.墨旱莲的质量标准研究:２０１０全国知名中医院院长暨道家文化与中医药养生论坛论文集[Ｃ].２０１０:４４－４７.[４７]黄诺嘉ꎬ肖树雄.墨旱莲与其混淆品元宝草的鉴别[Ｊ].中药材ꎬ１９９７(９):４５６－４５７.[４８]李铮ꎬ傅欣彤ꎬ张小茜.养血安神丸质量标准研究[Ｊ].中国中医药信息杂志ꎬ２００９ꎬ１６(７):４８－４９.(下转第６８３页)ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ:ｃｏｒｅ－ｓｈｅｌｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅｓｗｉｔｈｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｆｏｒｅｎｈａｎｃｅｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ[Ｊ].ＳｃｉＲｅｐꎬ２０２１ꎬ１１(１):１－１８.[５８]ＫＡＮＧＫꎬＫＩＭＹꎬＪＥＯＮＨꎬｅｔａｌ.Ｔｈｒｅｅ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｂｉｏｐｒｉｎｔｉｎｇｏｆｈｅｐａｔｉｃｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｗｉｔｈｄｉｒｅｃｔｌｙｃｏｎｖｅｒｔｅｄｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ－ｌｉｋｅｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＴｉｓｓｕｅＥｎｇｉＰａｒｔＡꎬ２０１８ꎬ２４(７/８):５７６－５８３.[５９]ＷＡＮＧＪＺꎬＸＩＯＮＧＮＹꎬＺＨＡＯＬＺꎬｅｔａｌ.Ｒｅｖｉｅｗｆａｎｔａｓｔｉｃｍｅｄｉｃａｌｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆ３Ｄ－ｐｒｉｎｔｉｎｇｉｎｌｉｖｅｒｓｕｒｇｅｒｉｅｓꎬｌｉｖｅｒｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎꎬｌｉｖｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎａｎｄｄｒｕｇｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｔｅｓｔｉｎｇ:ａｒｅｖｉｅｗ[Ｊ].ＩｎｔＪＳｕｒｇꎬ２０１８(５６):１－６.[６０]ＦＡＵＬＫＮＥＲ－ＪＯＮＥＳＡꎬＦＹＦＥＣꎬＣＯＲＮＥＬＩＳＳＥＮＤＪꎬｅｔａｌ.Ｂｉｏ￣ｐｒｉｎｔｉｎｇｏｆｈｕｍａｎｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔｓｔｅｍｃｅｌｌｓａｎｄｔｈｅｉｒｄｉｒｅｃｔｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎ￣ｔｉａｔｉｏｎｉｎｔｏｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ－ｌｉｋｅｃｅｌｌｓｆｏｒｔｈｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｍｉｎｉ－ｌｉｖｅｒｓｉｎ３Ｄ[Ｊ].Ｂｉｏｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎꎬ２０１５ꎬ７(４):０４４１０２.[６１]ＮＧＵＹＥＮＤＧꎬＦＵＮＫＪꎬＲＯＢＢＩＮＳＪＢꎬｅｔａｌ.Ｂｉｏｐｒｉｎｔｅｄ３ＤＰｒｉｍａｒｙＬｉｖｅｒＴｉｓｓｕｅｓＡｌｌｏｗＡｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆＯｒｇａｎ－ＬｅｖｅｌＲｅｓｐｏｎｓｅｔｏＣｌｉｎｉｃａｌＤｒｕｇＩｎｄｕｃｅｄＴｏｘｉｃｉｔｙＩｎＶｉｔｒｏ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０１６ꎬ１１(７):ｅ０１５８６７４.[６２]ＭＡＺＺＯＣＣＨＩＡꎬＤＥＶＡＲＡＳＥＴＴＹＭꎬＨＵＮＴＷＯＲＫＲꎬｅｔａｌ.Ｏｐｔｉ￣ｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｃｏｌｌａｇｅｎｔｙｐｅＩ－ｈｙａｌｕｒｏｎａｎｈｙｂｒｉｄｂｉｏｉｎｋｆｏｒ３Ｄｂｉｏ￣ｐｒｉｎｔｅｄｌｉｖｅｒｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ[Ｊ].Ｂｉｏｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎꎬ２０１８ꎬ１１(１):０１５００３.[６３]ＭＡＳＳＡＳꎬＳＡＫＲＭＡꎬＳＥＯＪꎬｅｔａｌ.Ｂｉｏｐｒｉｎｔｅｄ３Ｄｖａｓｃｕｌａｒｉｚｅｄｔｉｓ￣ｓｕｅｍｏｄｅｌｆｏｒｄｒｕｇｔｏｘｉｃｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓ[Ｊ].Ｂｉｏｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓꎬ２０１７ꎬ１１(４):０４４１０９.[６４]ＬＥＥＫꎬＬＥＥＪꎬＬＥＥＳ.３Ｄｌｉｖｅｒｍｏｄｅｌｓｏｎａｍｉｃｒｏｐｌａｔｆｏｒｍ:ｗｅｌｌ－ｄｅｆｉｎｅｄｃｕｌｔｕｒｅꎬｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆｌｉｖｅｒｔｉｓｓｕｅａｎｄｌｉｖｅｒ－ｏｎ－ａ－ｃｈｉｐ[Ｊ].ＬａｂＣｈｉｐꎬ２０１５ꎬ１５(１９):３８２２－３８３７.[６５]ＤＥＮＧＪꎬＺＨＡＮＧＸꎬＣＨＥＮＺꎬｅｔａｌ.Ａｃｅｌｌｌｉｎｅｓｄｅｒｉｖｅｄｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｌｉｖｅｒｍｏｄｅｌｆｏｒｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙｄｒｕｇ－ｄｒｕｇｉｎ￣ｔｅｒａｃｔｉｏｎ[Ｊ].Ｂｉｏｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓꎬ２０１９ꎬ１３(２):０２４１０１.[６６]ＫＡＬＣＨＭＡＮＪꎬＦＵＪＩＯＫＡＳꎬＣＨＵＮＧＳꎬｅｔａｌ.Ａｔｈｒｅｅ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｔｕｍｏｒｃｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎａｓｓａｙｔｏｓｃｒｅｅｎｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆａｎｔｉ－ｍｉｇｒａｔｏｒｙｄｒｕｇｓａｎｄｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｌｏｗ[Ｊ].ＭｉｃｒｏｆｌｕｉｄＮａｎｏｆｌｕｉｄｉｃｓꎬ２０１３ꎬ１４(６):９６９－９８１.[６７]ＢＨＩＳＥＮＳꎬＭＡＮＯＨＡＲＡＮＶꎬＭＡＳＳＡＳꎬｅｔａｌ.Ａｌｉｖｅｒ－ｏｎ－ａ－ｃｈｉｐｐｌａｔｆｏｒｍｗｉｔｈｂｉｏｐｒｉｎｔｅｄｈｅｐａｔｉｃｓｐｈｅｒｏｉｄｓ[Ｊ].Ｂｉｏｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎꎬ２０１６ꎬ８(１):０１４１０１－０１４１０１.[６８]ＭＥＮＯＮＮＶꎬＬＩＭＳＢꎬＬＩＭＣＴ.Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓｆｏｒｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄｄｒｕｇｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｃａｎｃｅｒ[Ｊ].ＣｕｒｒＯｐｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１９(４８):１５５－１６１.(上接第６７７页)[４９]ＳＡＶＩＴＡＫꎬＰＲＡＫＡＳＨＣＨＡＮＤＲＡＫ.ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＣｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａＳｅｎｓｉｔｉｖｅＨＰＴＬＣＭｅｔｈｏｄｆｏｒＥｓ￣ｔｉｍａｔｉｏｎｏｆＷｅｄｅｌｏｌａｃｔｏｎｅｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＥｃｌｉｐｔａａｌｂａ[Ｊ].ＩｎｔＪＰｈａｒｍＳｃｉＤｒｕｇＲｅｓꎬ２０１１ꎬ３(１):５６－６１.[５０]ＷＡＮＩＮＳꎬＤＥＳＨＭＵＫＨＴＡꎬＰＡＴＩＬＶＲ.ＡｒａｐｉｄｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｆｏｒｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｗｅｄｅｌｏｌａｃｔｏｎｅｉｎｈｅｒｂａｌｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓｕｓｉｎｇＨＰＴＬＣ[Ｊ].ＪＣｈｅｍＭｅｔｒｏｌꎬ２０１０ꎬ４(１):２８－３３.[５１]夏天一ꎬ张凤ꎬ韩强ꎬ等.ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ法同时测定墨旱莲中蟛蜞菊内酯㊁旱莲苷Ｉ和旱莲苷ＶＩＩ的含量[Ｊ].沈阳药科大学学报ꎬ２０１７ꎬ３４(１):５７－６１.[５２]周燕园ꎬ吴怀恩ꎬ梁臣艳ꎬ等.ＨＰＬＣ测定墨旱莲配方颗粒中的原儿茶酸和原儿茶醛[Ｊ].华西药学杂志ꎬ２０１３ꎬ２８(５):５１４－５１６.[５３]陈腾飞ꎬ萧伟ꎬ尚强ꎬ等.ＨＰＬＣ法测定不同产地墨旱莲药材中木犀草素含量[Ｊ].南京中医药大学学报ꎬ２０１１ꎬ２７(２):１５８－１６０.[５４]周燕园.ＨＰＬＣ法测定墨旱莲配方颗粒中绿原酸和咖啡酸[Ｊ].中成药ꎬ２０１２ꎬ３４(２):３７４－３７７.[５５]韩强ꎬ习峰敏ꎬ张凤ꎬ等.ＨＰＬＣ法测定墨旱莲中两个噻吩类化合物的含量[Ｊ].沈阳药科大学学报ꎬ２０１５ꎬ３２(４):２８５－２８８. [５６]邓斌ꎬ韦炳华ꎬ黄盛超ꎬ等.ＨＰＬＣ法同时测定旱莲草中木犀草素和芹菜素的含量[Ｊ].中国药房ꎬ２０１４ꎬ２５(３９):３６８５－３６８７. [５７]孔燕凌.ＨＰＬＣ同时测定墨旱莲正丁醇有效部位含量分析[Ｊ].实验与检验医学ꎬ２０１７ꎬ３５(４):４７５－４７８.[５８]房信胜ꎬ王建华ꎬ蕾魏ꎬ等.不同提取条件下墨旱莲的ＨＰＬＣ－ＰＡＤ图谱分析[Ｊ].天然产物研究与开发ꎬ２０１０ꎬ２２(Ｂ０８):５５－５９.[５９]杨海英ꎬ王雪梅ꎬ杜刚ꎬ等.高效液相色谱法测定旱莲草中木犀草素和芹菜素的含量[Ｊ].时珍国医国药ꎬ２００８ꎬ１９(１２):２９９４－２９９５.[６０]赵晶ꎬ夏明辉ꎬ李莉ꎬ等.ＵＰＬＣ－ＰＤＡ测定不同产地墨旱莲中的４种皂苷[Ｊ].中国实验方剂学杂志ꎬ２０１６ꎬ２２(３):６３－６６. [６１]杨海英ꎬ曾程ꎬ杜刚.ＵＰＬＣ法测定旱莲草中木犀草素和芹菜素的含量[Ｊ].中药材ꎬ２０１０ꎬ３３(８):１２７５－１２７６.[６２]侯雪峰ꎬ孙帅ꎬ汪刚ꎬ等.ＵＰＬＣ同时测定墨旱莲药材中８种成分的含量[Ｊ].中国中药杂志ꎬ２０１６ꎬ４１(２１):３９８２－３９８７. [６３]ＰＡＴＩＬＡＡꎬＳＡＣＨＩＮＢＳꎬＳＨＩＮＤＥＤＢꎬｅｔａｌ.ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｓａｍｐｌｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｖａｒｉａｂｌｅｓｆｏｒｗｅｄｅｌｏｌａｃｔｏｎｅｆｒｏｍＥｃｌｉｐｔａａｌｂａｕ￣ｓｉｎｇＢｏｘ－ＢｅｈｎｋｅｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｅｓｉｇｎｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙＨＰＬＣｉｄｅｎｔｉｆｉ￣ｃａｔｉｏｎ[Ｊ].ＡｎｎａｌｅｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｑｕｅｓＦｒａｎçａｉｓｅｓꎬ２０１３ꎬ７１(４):２４９－２５９.[６４]吴红霞ꎬ高晓霞ꎬ赵云丽ꎬ等.墨旱莲药材的高效液相指纹图谱及聚类分析[Ｊ].沈阳药科大学学报ꎬ２００６ꎬ２３(２):９７－１００. [６５]ＨＡＮＬꎬＬＩＵＥꎬＫＯＪＯＡꎬｅｔａｌ.ＱｕａｌｉｔａｔｉｖｅａｎｄＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａＬ.ｂｙＬＣ/ＭＳ[Ｊ].ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＷｏｒｌｄＪｏｕｒｎａｌꎬ２０１５(２０１５):９８１８９０.[６６]夏爱军ꎬ李玲ꎬ董昕ꎬ等.ＵＨＰＬＣ－Ｑ－ＴＯＦ/ＭＳ法测定中药旱莲草中五种指标性化学成分的含量[Ｊ].解放军药学学报ꎬ２０１４ꎬ３０(３):２１０－２１２.[６７]刘海兴ꎬ刘凤芹ꎬ于爱民ꎬ等.毛细管电色谱法测定旱莲中总黄酮的含量[Ｊ].潍坊学院学报ꎬ２００５ꎬ５(６):９５－９６.[６８]ＰＵＫＵＭＰＵＡＮＧＷꎬＣＨＡＮＳＡＫＡＯＷＳꎬＴＲＡＧＯＯＬＰＵＡＹ.Ａｎ￣ｔｉｏｘｉｄａｎｔＡｃｔｉｖｉｔｙꎬＰｈｅｎｏｌｉｃＣｏｍｐｏｕｎｄＣｏｎｔｅｎｔａｎｄＰｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌＣｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｏｆＥｃｌｉｐｔａｐｒｏｓｔｒａｔａ(Ｌｉｎｎ.)Ｌｉｎｎ.[Ｊ].ＣｈｉａｎｇＭａｉＪＳｃｉꎬ２０１４ꎬ４１(３):５６８－５７６.[６９]国家药典委员会.中华人民共和国药典２０１０年版(一部)[Ｓ].北京:中国医药科技出版ꎬ２０１０:３５１.。

ILC2在炎症性疾病中作用的研究进展

doi:10.3969/j.issn.1000⁃484X.2020.21.023ILC2在炎症性疾病中作用的研究进展①毋梦林　牛志国　曹　旗　黄青松(新乡医学院医学检验学院,河南省免疫与靶向药物重点实验室,新乡453003) 中图分类号　R392.9 文献标志码　A 文章编号　1000⁃484X (2020)21⁃2672⁃06①本文受国家自然科学基金(81200506㊁81570624㊁81770721㊁U1804167)和河南省自然科学基金重点项目(162300410210)资助㊂作者简介:毋梦林,女,硕士,主要从事肾脏纤维化方面的研究,E⁃mail:2387906399@㊂通讯作者及指导教师:曹　旗,男,博士,教授,主要从事巨噬细胞与肾脏炎症方面的研究,E⁃mail:qi.cao @xx⁃㊂黄青松,女,博士,副教授,主要从事肾脏免疫生物治疗方面的研究,E⁃mail:xxmuhqs@㊂[摘　要]　2型固有淋巴细胞(ILC2)是最近发现的新型固有淋巴细胞群体,主要存在于肺㊁肠道㊁皮肤及黏膜组织,在IL⁃25和IL⁃33等刺激下能够产生IL⁃4㊁IL⁃5㊁IL⁃9和IL⁃13等Th2型细胞因子,在自身免疫病㊁抗感染和体内免疫平衡中发挥重要作用㊂本文综述了ILC2在炎症性疾病发展过程中的免疫学特性及其发挥的作用,及脏器局部微环境改变对ILC2的影响,为进一步了解ILC2参与的炎症性疾病发病机制及相关治疗提供理论依据㊂[关键词]　2型固有淋巴细胞;炎症;Th2型细胞因子Research progress of ILC2in inflammatory diseasesWU Meng⁃Lin ,NIU Zhi⁃Guo ,CAO Qi ,HUANG Qing⁃Song .Henan Key Laboratory of Immunology and Targeted Drugs ,School of Laboratory Medicine ,Xinxiang Medical University ,Xinxiang 453003,China[Abstract ]　Type 2innate lymphoid cell(ILC2)are a newly discovered new type of innate lymphocytes,which mainly found inlungs,intestines,skin and mucosal tissues.Under the stimulation of IL⁃25and IL⁃33,they can produce Th2cytokines such as IL⁃4,IL⁃5,IL⁃9and IL⁃13,which play an important role in autoimmune diseases,anti⁃infection and immune balance in vivo.This article reviewsthe immunological characteristics and role of ILC2in development of inflammatory diseases,as well as influence of local organ microen⁃vironment changes on ILC2,so as to provide theoretical basis for further understanding of the pathogenesis and related treatment of ILC2in inflammatory diseases.[Key words ]　Type 2innate lymphoid cell;Inflammation;Th2cytokines 固有淋巴细胞(innate lymphoid cells,ILCs)是对抗感染的关键免疫防御系统之一,具有典型淋巴细胞的形态特征,是一类非B 细胞㊁非T 细胞的淋巴细胞,但又可产生与辅助性T 细胞亚群匹配的效应细胞因子,且ILC 表面高表达细胞因子受体亚单位,包括IL⁃2受体α亚单位(CD25)和IL⁃7受体α亚单位(CD127)等[1]㊂由于ILC 不表达抗原特异性识别受体BCR 或TCR,而是通过对损伤诱导的信号做出反应,如对上皮细胞产生的细胞因子信号诱导做出反应,与自然杀伤(natural killer,NK)细胞和淋巴组织诱导(lymphtissue inducer,LTi)细胞统称为固有淋巴细胞,参与免疫反应㊁组织发育及重塑[2]㊂ILC 和T 细胞相互调节,放大或限制免疫应答㊂ILC 来源于共同淋巴祖细胞(common lymphoid progenitor,CLP),转录因子DNA 抑制子2(Id2)能够抑制CLP 向T㊁B 细胞分化,上调CD161和早幼粒细胞白血病锌指蛋白表达,维持CD127表达,并促进其向共同ILC 祖细胞分化,最后通过转录因子T⁃bet㊁GATA 结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA3)㊁维甲酸相关孤核受体γt(retinoid acid receptor related orphan receptor γt,RORγt)等将ILC 祖细胞分为ILC1㊁ILC2和ILC33个亚群,并且这3个亚群与辅助性T 细胞亚群Th1㊁Th2㊁Th17功能平行,并形成类似的细胞因子受体表达模式㊂ILC1在IL⁃12㊁IL⁃15和IL⁃18的刺激下,可分泌IFN⁃γ和TNF,在抗胞内菌及抗寄生虫感染中发挥重要作用[3⁃5];ILC2在IL⁃25和IL⁃33等刺激因子作用下产生Th2,如IL⁃4㊁IL⁃5㊁IL⁃9和IL⁃13,在多种炎症环境中调节固有免疫和适应性免疫反应[6];ILC3在IL⁃1β和IL⁃23刺激后产生IFN⁃γ㊁IL⁃17和IL⁃22,并参与慢性炎症反应和组织㊃2762㊃中国免疫学杂志2020年第36卷修复等[7]㊂1　ILC2的发育与调控ILC2作为固有免疫细胞的一员,是介于固有免疫和适应性免疫应答的跨界细胞,其表达的表面分子有CD25㊁CD90㊁CD117㊁CD127㊁ST2(IL⁃1R1)㊁IL17RB及NKp30受体等,可以非特异地保护机体免受多种生物体侵害,如寄生虫㊁细菌㊁病毒㊁真菌和过敏原[8]㊂然而,当免疫调节作用失控时,它们可以促发慢性炎症,如由ILC2促发的过敏和哮喘[9,10]㊂ILC2作为小鼠和人类2型免疫反应的中枢调节因子之一,主要分布于黏膜组织(肺和肠道)㊁非淋巴器官(肝㊁肾和内脏脂肪组织)㊁淋巴器官(脾㊁骨髓)及血液,有助于宿主防御㊁组织修复及抗炎症性疾病[11,12]㊂ILC2在转录因子Id2㊁RORα和GATA3的调控下发育成熟,实验表明ILC2的发育依赖GATA3的产生,GATA3可直接调节ILC2的增殖及其生存相关基因,即使在ILC2完全成熟后, GATA3对其晚期发育维持和存活也具有重要作用[13]㊂ILC2活化的主要途径是通过其表面受体ST2/T1或IL⁃17受体等接受IL⁃33㊁IL⁃25以及胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin, TSLP)刺激,进而主要产生并分泌IL⁃5和IL⁃13,而在豆蔻酰佛波醇乙酯(phorbol⁃12⁃myristate⁃13⁃acetate,PMA)刺激下还可产生IL⁃4㊁IL⁃9和双调蛋白,主要介导2型免疫应答㊂ILC2的表型㊁激活状态和功能可因其所在的组织及细胞因子微环境的改变而改变[14]㊂此外,ILC2还可以被脂质递质半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes,CysLT)㊁前列腺素D2(prostaglandin D2,PGD⁃2)㊁TNF相似配体1 (TNF⁃like ligand1A,TL⁃1⁃A)及癌细胞激活[15⁃17]㊂而脂质A4(lipoxin A4,LXA4)㊁前列腺素E和前列腺素I2(prostaglandin I2,PGI2)可以抑制ILC2激活[18]㊂免疫反应在体内无处不在,ILC2在体内与脂类代谢㊁寄生虫感染㊁过敏性炎症㊁皮肤炎症等炎症性疾病密切相关[19⁃22]㊂2　ILC2的作用2.1　ILC2与消化系统的关系　ILC2并不是一个统一的种群,其表达的标记也存在不一致性,这主要取决于驱动其激活的细胞因子[23]㊂自然性ILC2 (nILC2)和炎症性ILC2(iILC2)是最近发现的2个亚群,iILC2在全身受到刺激时,仅存在于肺脏,在炎症过程中受趋化信号作用在组织间迁移,nILC2和iILC2的主要区别在于细胞因子受体的表达模式,nILC2对IL⁃33的刺激保持稳定状态并表达ST2,低表达类似于致死细胞凝集素受体G1(KLRG1), iILC2在IL⁃25刺激或感染后表达大量的活化标记KLRG1和IL⁃25受体(IL⁃17RB),但不表达ST2[24]㊂iILC2的发展依赖于IL2Rγ和IL⁃17Rα,且iILC2在蠕虫感染期间是nILC2的暂时态祖细胞,最终将转化为nILC2或者ILC3,有助于对抗蠕虫和真菌引起的免疫反应[24]㊂ILC2分泌大量IL⁃13和双调蛋白(amphiregulin,Areg),IL⁃13使杯状细胞分泌黏液并通过平滑肌收缩清除寄生虫,双调蛋白通过激活上皮细胞表面的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)进而促进上皮细胞的增殖和修复[25]㊂炎症性肠道疾病的特点是Th1/Th2类细胞因子比例失衡,Th1型免疫反应促进炎症发展, Th2型免疫反应是宿主对抗寄生虫的防御反应㊂IL⁃25或寄生虫诱导下发生的Th2型免疫反应的发生机制是来源于肠道固有层中驻留的nILC2能够不依赖T/B细胞介导的免疫反应,而依赖于1⁃磷酸鞘氨醇(S1P)介导的趋化反应,通过淋巴管上皮细胞进入淋巴管,并通过血液循环迁移至外周组织,分泌Th2型细胞因子发挥抗炎反应,ILC2的肠⁃肺循环就是肠道中nILC2迁移至肺部成为iILC2,由于nILC2数量较少,增殖速度低于iILC2,因此iILC2是ILC2细胞对抗寄生虫感染的重要来源[26]㊂研究发现, ILC的另一个新型调节细胞亚群(ILCregs)不同于ILC和调节性T细胞(Treg),其表达Id3和Sox4等转录因子而缺乏ILC2和Treg的典型转录因子(如RORα㊁GATA3和Foxp3),在肠道炎症的发生和调节中起重要作用[27]㊂在炎症刺激作用下,肠内ILCregs增多,该细胞通过分泌IL⁃10抑制ILC1和ILC3的活化,从而抑制ILC1和ILC3分泌的IFN⁃γ以及IL⁃17A对肠道黏膜的损伤作用,但并不抑制ILC2在肠道炎症过程中的功能㊂以上结论提示ILCregs对肠道炎症起保护作用㊂2.2　ILC2与呼吸系统的关系2.2.1　肺炎　呼吸道黏膜与外界环境直接相通,时刻接受病原体㊁理化因素及变应原等刺激因素的影响,是多种病原体感染和炎症的病变部位㊂ILC2广泛存在于机体的各组织,其中黏膜组织,尤其是肺脏黏膜组织,是人类和小鼠ILC2的主要聚集地,占主导地位㊂急性和慢性肺炎通过抑制精氨酸酶⁃1 (Arg1)活性发生,小鼠和人ILC2内的Arg1活性被抑制,破坏了ILC2的代谢过程,抑制了ILC2的增殖和细胞因子产生,从而破坏了ILC2在肺部的抗炎反应,表明Arg1是ILC2的关键调控因子[28]㊂在慢性㊃3762㊃毋梦林等　ILC2在炎症性疾病中作用的研究进展　第21期呼吸系统疾病加重期,ILC2与NK细胞和肺泡巨噬细胞相互作用,ILC2产生大量IL⁃5,并在感染期间诱导嗜酸性粒细胞生成,从而引发哮喘㊂ILC2和Treg可促进肺炎时肺上皮细胞损伤后的修复[29,30]㊂ILC2高表达RORα,RORα敲除的小鼠均缺乏ILC2,缺乏ILC2的小鼠虽然拥有正常的Th2细胞免疫应答,但不能对蛋白酶抗原产生快速的肺部炎症反应, ILC2是肺损伤后修复的中枢调节因子,可恢复肺组织急性损伤后的稳态[31]㊂研究发现,细胞间黏附分子1(ICAM⁃1)缺陷小鼠骨髓和周围组织中的ILC2水平明显降低,且ILC2功能受损,Th2型细胞因子的分泌也显著降低,在给予ICAM⁃1缺陷小鼠过敏原刺激后,肺中ILC2的数量减少导致气道炎症明显缓解,这些结果将ICAM⁃1确定为ILC2的调节器[32]㊂有研究发现ILC2释放的IL⁃13可驱动血吸虫感染引起的肺炎㊁肺纤维化和胶原沉积,敲除IL⁃25或其受体IL⁃17RB可减轻肉芽肿体积和血吸虫卵数量,提示IL⁃25和ILC2可能是治疗血吸虫感染引起的肺炎及肺纤维化的靶标[33]㊂2.2.2　哮喘　ILC2释放大量Th2型细胞因子,如IL⁃4㊁IL⁃5㊁IL⁃13,驱动2型免疫反应发挥对蠕虫的防御作用,但如果不严格控制ILC2,则可引发病理性的2型免疫应答,过敏性气道炎症就是其中之一㊂过敏性哮喘是一种气道慢性炎症性疾病,通常是无害的过敏原或病原体接触患者,表现为Th2细胞㊁肥大细胞和嗜酸性粒细胞高度活化,IgE水平显著升高,并作出不恰当的Th2反应㊂ILC2诱导哮喘患者Th2相关细胞因子活性上调,导致哮喘控制的顽固性状态,被过敏原破坏或激活的上皮细胞产生IL⁃33㊁TSLP和IL⁃25,激活ILC2,产生IL⁃5㊁IL⁃9和IL⁃13,引起过敏性哮喘,其中IL⁃4可促使Th0细胞向Th2细胞转化,还可促进B细胞分泌抗体[34,35];IL⁃5可以募集并活化嗜酸性粒细胞;IL⁃13可以促进杯状细胞分泌黏液,并触发气道高反应的显著变化[36]㊂人类在呼吸道疾病的发病率和严重程度上存在显著的性别差异,淋巴细胞限制雌激素受体α缺陷提示,是雄性激素调节ILC2在肺和骨髓的功能,且ILC2由于雄性激素的过量而减少,表明雄性激素抑制ILC前体向ILC2的转变,也提示了女性哮喘患病率比男性高2倍的原因[37]㊂ILC2是哮喘免疫反应最重要的调节因子,骨髓源性抑制细胞骨髓源性抑制细胞(myeloid⁃derived suppressor cells,MDSCs)因其免疫抑制活性备受关注,早期研究表明,Th2细胞因子的增加与MDSCs有关㊂在哮喘患者㊁慢性阻塞性肺疾病或呼吸道病毒感染患者的外周血中,ILC2或MDSCs及其特有的细胞因子或转录因子显著增强㊂同时,在哮喘患者中发现一种以Th2为主的细胞,这种Th2极化与ILC2和MDSCs之间的协同作用密切相关,并增强了气道的高反应性,因此ILC2和MDSCs可能是哮喘的治疗的新方向[38]㊂2.3　ILC2与神经系统的关系　有研究发现人和小鼠肠道中的ILC2具有丰富的β2⁃肾上腺素能受体,肾上腺素能神经元与ILC2共定位,在机体受到寄生虫㊁真菌或其他病原菌感染时,肠道中的肾上腺素能神经元会产生大量肾上腺素,后者与小肠ILC2中的β2⁃肾上腺素能受体结合,抑制ILC2增殖,减弱2型免疫反应,从而保护寄生虫[39]㊂在此基础上,该课题组还发现了小鼠胃肠道中ILC2与表达神经肽U (NMU)的胆碱能神经元共定位,ILC2选择性地表达NMU受体1(NMUR1)[40]㊂ILC2受NMU诱导后细胞快速活化㊁增殖,分泌Th2型细胞因子IL⁃5㊁IL⁃9和IL⁃13,从而增强2型免疫作用,发挥抗寄生虫反应,最终保护肠道免受寄生虫感染,即哺乳动物的神经系统已经进化出双重机制,可快速激活或抑制ILC2,以保护宿主免受各种炎症因子刺激㊂说明神经系统可对免疫系统中的ILC2发挥免疫调控作用,同时提供了治疗寄生虫感染的重要靶点㊂2.4　ILC2与循环系统的关系　循环系统相关研究表明,ILC2可促进B细胞增殖及抗体分泌,该机制主要是由于ILC2细胞产生IL⁃5,引起B细胞增殖并产生天然的IgM发挥抗炎反应[41,42]㊂动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是导致心血管疾病的主要原因,ILC1细胞存在于AS中,并以TLR4依赖的方式增加促炎细胞因子表达,从而加重AS[43]㊂但ILC2是Th2型细胞因子IL⁃5和IL⁃13的重要来源,IL⁃5和IL⁃13通过不同的机制调控小鼠AS的发展[44]㊂ILC2是限制AS发展的主要细胞类型,通过对缺乏ILC2的小鼠研究发现,内源性ILC2在控制AS进展方面发挥重要作用,这种作用依赖于ILC2产生的IL⁃5和IL⁃13,其他细胞类型产生的IL⁃5和IL⁃13无法弥补ILC2来源的细胞因子(尤其是IL⁃13)的缺乏及其AS的保护作用㊂IL⁃13可通过增加胶原沉积保护斑块发展㊁促进斑块的稳定性,并促使巨噬细胞表型(M1)向选择性活化巨噬细胞(M2)转换,IL⁃5通过抑制巨噬细胞对低密度脂蛋白(LDL)的摄取阻止AS形成㊂实验中高脂肪喂养小鼠,ILC2数量显著降低,并伴随AS加速㊂在AS模型中,每天给予载脂蛋白E缺陷小鼠IL⁃25可大幅增加脾脏中ILC2数量和提高血清中IL⁃5水平,通过扩增ILC2,增加IL⁃5分泌和提高血清中IgM的水平,可限制㊃4762㊃中国免疫学杂志2020年第36卷AS的发展,提示IL⁃25和ILC2分泌的Th2型细胞因子作为抗炎因子可抑制AS发展[45,46]㊂2.5　ILC2与泌尿系统的关系　慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)是心血管疾病的主要危险因素,肾小球损伤可导致蛋白尿㊁肾小球硬化及肾功能恶化[47]㊂肾脏纤维化是各种慢性肾脏疾病终末期的病理改变,主要为肾小球硬化和肾间质纤维化㊂肾脏纤维化的主要原因是肾脏各种细胞分化为肌成纤维细胞,过度产生肾细胞外基质,而肾细胞外基质的过度堆积可引发肾脏纤维化㊂研究证明IL⁃33受体ST2阳性ILC2是健康人及小鼠肾脏的主要ILC 亚型,IL⁃33是一种扩增组织ILC2的治疗方法,ILC2定位于上皮细胞附近,并对受损或者死亡上皮细胞释放的细胞因子报警信号做出反应[48]㊂肾脏组织发生炎症时,给予IL⁃33治疗后,定位于肾脏肾小管间质的ILC2大量扩增,ILC2保护肾脏组织免受进行性损伤的机制包括ILC2分泌的IL⁃5诱导嗜酸性粒细胞增多,并促进组织再生[49];ILC2分泌的IL⁃13诱导巨噬细胞替代活化,可促进肾脏组织再生,进而可防止进展性肾小球硬化和肾功能丧失[50,51]㊂ILC2对肾损伤模型有促进修复作用,课题组在肾缺血再灌注中发现IL⁃25及IL⁃33诱导的ILC2增多可减少肾缺血再灌注损伤,与之前Hams等[33]提出IL⁃25诱导ILC2释放的IL⁃13可驱动血吸虫感染的肺纤维化模型胶原沉积的结论相左,但考虑到其模型为血吸虫感染肉芽肿纤维化模型,与无病原体的肾缺血再灌注存在巨大差异,课题组认为ILC2极有可能是一把双刃剑,这种作用依赖于器官特异性㊁病程或者其他应激因素[52⁃54]㊂近期研究发现了一种混合免疫调节细胞因子IL⁃233(IL⁃2和IL⁃33的混合细胞因子),可增强Treg和ILC2的功能,防止肾损伤㊂接受IL⁃233治疗的小鼠在所有方案中都表现出不良反应减少㊁肾脏损伤和肾纤维化程度降低㊂即使在小鼠阿霉素注射2周后给予IL⁃233,也能完全恢复肾功能,同时减少促炎因子,增加抗炎因子㊂Treg和ILC2都具有产生双调蛋白的机制,并有助于损伤的上皮细胞再生,即IL⁃233是治疗肾炎的有效策略,增强Treg和ILC2不仅可以抑制肾损伤,还可以促进组织再生[55]㊂因此,ILC2作为治疗肾纤维化的靶点,为临床治疗肾病肾间质纤维化提供理论依据㊂2.6　ILC2与其他疾病的关系　研究发现,关节炎患者的血液和关节组织中ILC2明显增加,且与疾病严重程度呈负相关㊂在动物关节炎模型中,过继性输入ILC2可显著减轻关节炎,该机制通过ILC2分泌的IL⁃4/13发挥作用,IL⁃4/13可以抑制巨噬细胞功能,相应地减少促炎细胞因子IL⁃1β和TNF⁃α的分泌,从而缓解关节炎[56]㊂ILC2与关节组织中调节性T细胞(Treg)密切相关,其可以通过分泌IL⁃9促进Treg活化从而发挥抗炎作用㊂缺乏IL⁃9可导致ILC2诱导的Treg增殖和活化功能受损,导致慢性关节炎,提示ILC2在关节炎症方面发挥重要作用[57]㊂3　展望ILC2在不同的炎症性疾病中扮演不同角色,既往研究发现人和小鼠肠道中的ILC2存在丰富的β2⁃肾上腺素能受体,当机体发生感染,肠道中的肾上腺素能神经元会产生大量肾上腺素,后者与小肠ILC2中的β2⁃肾上腺素能受体结合,抑制ILC2的增殖,减弱2型免疫反应,从而保护寄生虫㊂课题组根据以上结论猜测,β2⁃肾上腺素可能在阻塞性肾病中与肾脏组织ILC2中的β2⁃肾上腺素能受体结合,抑制ILC2增殖,β2⁃肾上腺素可能会改善肾纤维化进程㊂相应的肠道发生感染时,来源于肠道中的ILC2依赖S1P介导的趋化反应,通过淋巴管上皮细胞进入淋巴管并通过血液循环迁移至外周组织分泌Th2型细胞因子发挥抗炎作用,那么肾炎患者肾组织中的ILC2能否也依赖S1P介导的趋化作用发挥抗炎效应,最终改善肾炎引发的一系列疾病仍有待验证㊂参考文献:[1]　Von 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………………1.1.1 三级标题（五号宋体）正文文字内容（五号宋体，不分栏）。

表1 表格标题项目12 数值1数值2数值3数值4正文文字内容（五号宋体，不分栏）。

图1 图片标题………………全文不超过6页参考文献[1]作者名.书名.版本（第1版不著录）.出版地：出版者，出版年[2]作者名.题名.刊名，出版年，卷（期）[3]作者名.题名.论文集名.出版地：出版者，出版年[4]作者名.题名.保存地点：保存单位，年份[5]作者名.报告题名.出版地：出版者，出版年 ???????????????基金项目：项目名称，项目编号【篇二：科技论文格式模板】带作者信息的论文格式模板□□□□□□论文题目□□□□□□?作者姓名（多作者之间用逗号隔开）（作者所在单位及部门，所在省和城市邮编）摘要（宋体5号字）□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□。

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华蟾素调控PI3K

２０２４－０２－２７接收基金项目：安徽省２０２１年重大疑难疾病（卵巢癌）中西医协同攻关
项目（编号：皖中医药发展秘〔２０２２〕７０号）；安徽省第十三批“１１５”产业创新团队作者单位：１安徽医科大学中西医结合临床医学系，合肥２３００３２２安徽医科大学第一附属医院中西医结合肿瘤科，合肥２３００２２作者简介：舒美玲，女，硕士研究生；张梅，女，副教授，主任医师，博士生导师，责任作者，Ｅｍａｉｌ：ｚｍ１３８５６９９００１９＠１６３．ｃｏｍ
１材料与方法
１．１实验材料人卵巢癌细胞株Ａ２７８０和人卵巢癌细胞株顺铂耐药株Ａ２７８０／ＤＤＰ购自中国科学院上海细胞生物所；顺铂注射液（货号：Ｈ２００１０７４）购自江苏豪森药业集团有限公司；ＣＢＧ注射液（货号：国药准字Ｚ３４０２０２７３）由安徽华润金蟾药业股份有限公司提供；ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴＩＮ２抑制剂（货号：２６８４４１２４１５）购自美国ＭＣＥ公司；ＲＩＰＡ１６４０培养基（货号：Ｃ１１８７５５００ＢＴ）和胎牛血清（货号：Ａ５６７０７０１）购自美国Ｇｉｂｃｏ公司；ＡＢＷ基质胶（货号：０８２７０４５）购自上海诺娃医药科技有限公司；ＥｄＵ试剂盒（货号：Ｃ００７１Ｓ）和Ｈｏｅｃｈｓｔ试剂盒（货号：Ｃ０００３）均购自碧云天生物技术有限公司；磷酸肌醇
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安徽医科大学学报ＡｃｔａＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＭｅｄｉｃｉｎａｌｉｓＡｎｈｕｉ２０２４Ａｐｒ；５９（４）
３激酶（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｉｄｅ３ｋｉｎａｓｅ，ＰＩ３Ｋ）（货号：Ｒ２７７６８）、丝氨酸／苏氨酸激酶（ＡＫＴ）又名蛋白激酶Ｂ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＢ，ＰＫＢ）（货号：Ｒ２３４１２）、Ｅ钙黏蛋白（货号：３４０３４１）、Ｎ钙黏蛋白（货号：３８０６７１）抗体购自成都正能生物技术责任有限公司；逆转录试剂盒（货号：Ｑ１１１０２）和ＲＴｑＰＣＲ试剂盒（货号：Ｒ２２２０１）购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司。１．２方法１．２．１人卵巢癌细胞株的培养Ａ２７８０和Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞贴壁培养于含１０％胎牛血清、１％青－链霉素和０１％支原体清除剂的ＲＩＰＡ１６４０培养基中，置于含５％ＣＯ２的３７℃恒温培养箱中。细胞密度达８０％时进行传代。此外，Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞在传代贴壁后另给予１μｇ／ｍｌ顺铂以维持耐药性。１．２．２ＣＣＫ８法检测细胞增殖能力分别取对数生长期Ａ２７８０和Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞，按照８×１０３个／孔的密度接种于９６孔板，细胞贴壁后按实验设计分别给药：ＤＤＰ（２５、５、１０、２０、４０、８０、１００、１６０μｍｏｌ／Ｌ），ＣＢＧ（２００、１００、５０、２５、１２５、６２５、３１２５ｍｇ／ｍｌ）于２４、３６、４８ｈ后每孔加入ＣＣＫ８溶液１０μｌ，避光孵育１５ｈ后读取５６２ｎｍ处光密度（ｏｐｔｉｃａｌｄｅｎｓｉｔｙ，ＯＤ）值。计算ＤＤＰ对Ａ２７８０和Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞或ＣＢＧ对Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞的半数抑制浓度（ｍｅｄｉａｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｔｒａｔｉｏｎ，ＩＣ５０），并计算出Ａ２７８０／ＤＤＰ的耐药指数（ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｅｘ，ＲＩ）＝ＩＣ５０（Ａ２７８０／ＤＤＰ）／ＩＣ５０（Ａ２７８０）。ＣＢＧ（０、２、４、６ｍｇ／ｍｌ）处理２４ｈ后再加入梯度浓度ＤＤＰ（２５、５、１０、２０、４０、８０、１００、１６０μｍｏｌ／Ｌ），２４ｈ后加入ＣＣＫ８溶液１０μｌ，避光孵育１５ｈ后读取５６２ｎｍ处ＯＤ值，计算ＣＢＧ的逆转指数（ｒｅｖｅｒｓａｌｆｏｌｄ，ＲＦ）＝ＩＣ５０（０ｍｇ／ｍｌ）／ＩＣ５０（２、４、６ｍｇ／ｍｌ）ＣＢＧ［５］。实验独立重复３次，设３个复孔。１．２．３实验分组根据ＣＢＧ的ＩＣ５０值和逆转耐药指数设计实验分组：对照组（１２５μｍｏｌ／ＬＤＤＰ）、低剂量组（１２５μｍｏｌ／ＬＤＤＰ＋２ｍｇ／ｍｌＣＢＧ）、中剂量组（１２５μｍｏｌ／ＬＤＤＰ＋４ｍｇ／ｍｌＣＢＧ）、高剂量组（１２５μｍｏｌ／ＬＤＤＰ＋６ｍｇ／ｍｌＣＢＧ）、抑制剂组（１２５ μｍｏｌ／ＬＤＤＰ＋６ｍｇ／ｍｌＣＢＧ＋６ μｍｏｌ／ＬＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ抑制剂）。１．２．４平板克隆实验评估细胞的克隆增殖能力将Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞按５００个／孔的密度接种于６孔板中，待细胞贴壁生长后按分组更换含药培养基。持续培养２周，期间每隔４ｄ换液。培养结束后，弃

3 墨旱莲的化学成分与药理作用研究进展2008

墨旱莲的化学成分与药理作用研究进展陈　献,王艳红(玉林制药有限责任公司,广西玉林　537001) 关键词:墨旱莲;化学成分;药理作用;综述中图分类号:R28217　文献标识码:A　文章编号:1008-7486(2008)01-0076-03 墨旱莲(Herba Ecliptae)为菊科一年生草本植物鳢肠(E2 clipta prost rata L1)的干燥地上部分,又名旱莲草、鳢肠草、金陵草等,中国各地均有出产。

花开时采割,晒干生用。

性寒,味甘、酸。

归肝,肾经;功能凉血止血,滋阴益肾;用于阴虚内热,血热妄行引起的吐血、衄血、咳血、尿血、崩漏出血和外伤出血及肝肾阴虚出现头晕目眩、牙齿松动、须发早白、腰痛筋软等证。

1　化学成分赵越平等[1]采用硅胶柱色谱和HPLC进行分离,根据IR,MS,HNMR,CNMR等光谱技术和水解等方法鉴定化合物的结构,研究了中药墨旱莲的化学成分,结果鉴定出4个化合物,分别为刺囊酸(Ⅰ)、刺囊酸232O2β2D2吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷(Ⅱ)、豆甾醇232O2β2D2吡喃葡萄糖苷(Ⅲ)和槲皮素(Ⅳ)。

他们还应用柱色谱和HPLC法分离纯化,通过光谱分析(IR,MS,HNMR,CNMR,DEPT,HMOC和HMBC)鉴定其化学结构,结果分离并鉴定了5个三萜皂苷,分别为:eclal2 basaponinsⅡ,Ⅰ,Ⅲ,eclalbasaponinsⅪ和Ⅻ[2]。

其中1和5具有诱导稻瘟霉菌丝变形活性。

余建清等[3]采用水蒸汽蒸馏提取挥发油,用GC2MS进行成分分析,对墨旱莲挥发油化学成分进行了研究,结果鉴定出37个化合物,占挥发油总量的84157%。

墨旱莲挥发油的主要成分为1,5,5,82四甲基2 122氧双环[9,1,0]十五碳23,72双烯(10182%)、6,10,142三甲基222十五酮(9127%)、δ2愈创木烯(7173%)、新二氢香芹醇(7150%)、3,7,Ⅱ,152四甲基222十六烯212醇(6167%)、十六烷酸(5182%)、环氧石竹烯(5139%)、十七烷(5134%)、原红霞[4]等采用高效液相色谱法同时测定了墨旱莲中香豆素醚类成分蟛蜞菊内酯和异去甲基蟛蜞菊内酯含量。

基于网络药理学、分子对接、实验研究探讨白屈菜治疗鼻咽癌的物质基础及潜在机制

基于网络药理学、分子对接、实验研究探讨白屈菜治疗鼻咽癌的物质基础及潜在机制作者：陈思睿吴天鸿刘洁张文青姚敬心何迎春史红健王贤文范婧莹来源：《湖南中医药大学学报》2024年第02期〔摘要〕目的运用网络药理学和分子对接技术预测白屈菜抗鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）的作用靶点和机制，并通过实验验证主要活性成分对NPC细胞增殖和凋亡的影响。

方法借助在线数据平台TCMSP、ETCM和BATMAN-TCM检索白屈菜的化学成分和作用靶点。

通过 GEO数据库检索NPC相关靶点，生信在线工具分析白屈菜与NPC的交集靶点。

使用STRING构建共同靶点的PPI网络，运用Cytoscape 3.7.1获得核心靶点。

通过R软件编程进行 GO 功能富集分析和KEGG通路富集分析。

分子对接分析核心靶点与主要活性成分之间的结合情况。

实验验证：（1）将5-8F细胞分为溶剂对照组、血根碱（2.5 μmol·L-1、5 μmol·L-1）组、白屈菜红碱（2.5 μmol·L-1、5 μmol·L-1）组、顺铂4 μg·mL-1组。

MTT检测白屈菜主要活性成分对NPC细胞增殖的影响。

（2）将5-8F细胞分为溶剂对照组、血根碱5μmol·L-1组、白屈菜红碱5 μmol·L-1组、顺铂4 μg·mL-1组；Annexin-V FITC/PI双荧光染色法检测细胞凋亡；Western blot检测白屈菜主要活性成分对NPC细胞增殖、凋亡、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）和磷脂酰肌醇三激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）信号通路关键蛋白的影响。

结果检索得到白屈菜37个主要活性成分和1 419个作用靶点。

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墨旱莲抗环磷酰胺诱导的胸腺细胞凋亡的实验研究景辉1,白秀珍1,刘玉铃2,李艳琴2(1 锦州医学院生物化学与分子生物学教研室;2 锦州医学院电镜室,辽宁锦州 121001)!摘要∀目的研究中药墨旱莲(Eclipta Prostr ata L)对环磷酰胺(CY)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的影响。

方法小鼠腹腔注射CY,建立胸腺细胞凋亡模型,同时用墨旱莲灌胃进行治疗。

应用电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳,研究墨旱莲对环磷酰胺(CY)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡的影响。

结果电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳显示环磷酰胺组出现典型的细胞凋亡表现,墨旱莲组较环磷酰胺组有一定程度的改善。

结论墨旱莲能不同程度抑制CY诱导的小鼠胸腺细胞凋亡。

!关键词∀胸腺细胞;细胞凋亡;墨旱莲;环磷酰胺!中图分类号∀ R967 !文献标识码∀ A !文章编号∀ 1000-5161(2004)05-0022-03 Experimental Study on Effect of Eclipta Prostrata L onT hymocyte Apoptosis Induced w ith CyclophosphamideJING Hui,BAI Xiu-zhen,LIU Yu-ling,LI Yan-qin(Jinzhou Medical College,Jinzhou121001China)!Abstract∀Objective To study the effect of Eclipse prostrata L on the apoptosis of m urine thymocyte induced by cy clophosphamide Methods Cyclophospham ide w as injected into the abdomen of mice and model of thymocy te w as constructed After treament of Eclipta prostrata L,they w ere detected by electron microscopy,agarose gel electrophoresis Results It indicated that thymocyte treated by cy clophosphamide display ed typical apoptosis and Eclipta prostrata L can inhabit the cyclophosphamide induced thymocy te apoptosis to different degree by electron microscopy and agarose gel electrophoresis C onclusions Eclipta prostrata L can inhibit the apoptosis of thymocyte induced by cyclophosphamide in some deg ree!Key words∀ thymocyte;apoptosis;Eclipta prostrata L;cyclophosphamide细胞凋亡又称程序性死亡(PCD),是一种与坏死截然不同的死亡方式,是多细胞有机体为调控机体发育,维护内环境的稳定性,由基因控制的细胞主动死亡过程。

目前发现,细胞凋亡在免疫耐受、胚胎定形、肿瘤形成和昆虫的变态等许多生理和病理过程中起重要作用。

墨旱莲为菊科植物鳢肠(Eclipta prostrata L)的全草,具有较强的免疫调节作用,能提高机体免疫力、增强抗病力,并具有抗诱变及延缓衰老等作用[1]。

但关于墨旱莲对免疫细胞凋亡是否具有调节作用,还未见报道。

本实验研究墨旱莲在活体内对胸腺细胞凋亡的影响,从而为墨旱莲的免疫作用的进一步研究提供实验依据。

1 材料和方法1 1 实验动物昆明种小鼠70只,3~4周龄,体重18~22g,雌雄各半,由锦州医学院实验动物中心提供。

1 2 药品和试剂墨旱莲干燥全草,购自锦州市22锦州医学院学报J Jinzhou M ed College2004Oct ,25(5)作者简介景辉,(1977-),辽宁省葫芦岛市人,硕士学位,主要研究方向为中药药理作用。

成大方圆药店,制成浓度为1g/ml的水煎剂。

环磷酰胺(上海第二制药厂);RNA酶A(RNAase A) (华美公司);溴化乙啶(EB)、蛋白酶K、琼脂糖(Sigma公司);其它试剂均为国产分析纯。

1 3 主要仪器透射电子显微镜(日本JEM-1200EX型),超薄切片机(日本LKB-5型),台式高速冷冻离心机(T GLL-18G),电泳仪(EC250-90)。

1 4 动物模型的培养将70只小鼠随机分为7组,正常对照组、环磷酰胺组、墨旱莲组每公斤体重给墨旱莲2g、4g、8g、16g,共4组。

墨旱莲各组小鼠连续6d以墨旱莲水煎剂灌胃,正常对照组、环磷酰胺组以生理盐水代替。

第四天,正常对照组于腹腔注射生理盐水,环磷酰胺组和墨旱莲各组腹腔注射环磷酰胺50mg/kg。

1 5 凋亡细胞检测1 5 1 电镜检测末次给药24h后,颈椎脱位处死小鼠,取出胸腺,投入含4%戊二醛的固定液的小瓶中,4#保存。

用0 1mol/L的PB缓冲液洗一次,1%的锇酸后固定30~60m in。

用超薄切片机切片,加醋酸铀染色30min,柠檬酸铅染色30 min,用透射电镜观察,拍照。

1 52 琼脂糖凝胶电泳末次给药24h后,颈椎脱位处死小鼠,取胸腺。

于平皿内用PBS清洗干净,用眼科剪剪碎,过200目筛网制成细胞悬液,用细胞裂解液4#,20m in,14000r/m in离心20 min。

取上清,加入等体积的酚:氯仿:异戊醇(25∃24∃1)混匀12000r/min,离心5min,移取上层水相,重复抽提,至水相和有机相之间无蛋白层为止。

加入等体积的氯仿:异戊醇(24∃1)混匀离心,加入1/10体积的3mol/L的醋酸钠,加入2 5倍体积的预冷的无水乙醇混匀,置-20#过夜沉淀DNA,然后离心弃上清。

沉淀先后用70%和100%的乙醇洗涤之后,加入TE缓冲液混匀,在1 8%的琼脂糖凝胶中80V恒压电泳,EB染色,紫外灯下观察,照相。

2 结果2 1 电镜观测结果见图1。

正常胸腺细胞呈圆形或椭圆形,核大,异染色质丰富。

环磷酰胺组细胞体积缩小,细胞膜完整,胞浆浓缩,细胞电子密度增加,染色质凝集,在核膜周边形成新月形或花瓣状团块,核膜光滑完整。

墨旱莲16g/kg组较环磷酰胺组变化明显减轻,与正常组相似。

2 2 琼脂糖凝胶电泳检测结果见图2。

琼脂糖凝胶电泳是检测细胞凋亡时染色体从核小体间裂断形成由大约180~200bp或其多聚体组成的寡核苷酸片段。

将这些DNA提取出来,在UV灯下观察可见特征性的%梯状(ladder)&带。

图2可以看出正常对照组的小鼠胸腺细胞核DNA 未发生降解,显基因组条带位于加样孔附近,而CY组则出现非常明显的%梯状(ladder)&带,墨旱莲各给药组梯状带逐渐变浅,EP(16g/kg)组的DNA接近正常组,位于加样孔附近。

3 讨论胸腺是机体重要的免疫器官,是T淋巴细胞发育成熟的主要场所。

胸腺细胞凋亡涉及T淋巴细胞发育、免疫调节、免疫系统稳定以及与免疫有关的疾病的发生与治疗[2]。

环磷酰胺是临床常用的氮芥类免疫抑制剂,具有明显的细胞毒性,可以引起胸腺细胞凋亡[3]。

本实验图1B显示CY组出现明显的凋亡的形态学改变,胞浆浓缩,染色质凝集成花瓣型,琼脂糖凝胶电泳结果显示CY组出现非常明显的%梯状(ladder)&带,均表明CY已诱导小鼠胸腺细胞凋亡。

细胞凋亡的形态学变化有细胞体积缩小,胞浆浓聚,核糖体与线粒体等细胞器聚集,结构尚无明显改变,细胞核内的染色质逐渐凝聚成新月状或花瓣状,细胞核固缩成均一的致密物,进而断裂成碎块,此时细胞膜仍保持完整;然后胞膜和核膜不断出芽脱落,变成凋亡小体:最后凋亡小体被周围具有吞噬功能的细胞吞噬、消化[4]。

本实验电镜结果显示正常胸腺细胞核大而圆,异染色质丰富, CY组细胞体积缩小,细胞电子密度增加,染色质凝集,在核膜周边形成花瓣状团块,核膜光滑完整,墨旱莲组染色质损伤较CY组明显减轻,胞浆浓缩不明显,染色质仅有轻微的凝集,接近正常组。

细胞凋亡的典型生化特征之一就是DNA被内源性核酸内切酶降解,形成由大约为180~200bp 或其多聚体组成的寡核苷酸片段,在琼脂糖凝胶电泳上呈现阶梯状条带[5]。

图2中CY组出现非常明显的%梯状(ladder)&带,而正常组的小鼠胸腺细胞显基因组条带位于加样孔附近,墨旱莲各给药组随着给药剂量的增加梯状带逐渐不明显,EP (16g/kg)组最不明显,接近正常组。

23景辉,等墨旱莲抗环磷酰胺诱导的胸腺细胞凋亡的实验研究综上所述,墨旱莲能够抑制环磷酰胺所致的胸腺细胞凋亡,减轻环磷酰胺所造成DNA 损伤。

本实验为深入研究墨旱莲的免疫作用和药理作用提供了理论依据,但其通过哪条途径抑制或拯救细胞凋亡还有待进一步从基因水平上进行研究。

参考文献[1] 江苏新医学院中药大词典[M ] 上海:上海人民出版社,1977 2615[3] 姜泊细胞凋亡的基础与临床[M ] 北京:人民军医出版社,1999 131[4] Cas tteel K,Waer M ,Bouillon R,et al 1,25-Dihydroxyvitamin D 3restores sencitivity to cyclophosphamide -induced apoptosis in non -obese diabetic (NOD)m i ce and protects a gainst di abetes [J ] Cli n Exp Immunol,1998,112(2):181[5] Kerr JFR,Wyllie AH,Currie AB Apoptosis:A basic biological phenomenon w ith w ide-ranging i m plications i n ti ssue kinet ics [J] BrJ Cancer,1972,26:239[6] Barke RA,Roy S,Chapi n RB,et al The role of programmedcell death (apoptosis )in thymic involuti on following sepsis [J] Arch Surg,1994,129(12):1256收稿日期 2004-08-29A 正常对照组(∋10000)B C Y 组(∋10000)C CY+EP (16g/kg)组(∋10000)图1 电镜观测结果M marker 标记 1EP (16g/kg)组 2EP (8g/kg)组 3EP (4g/kg)组 4EP (2g/kg)组 5CY 组 6正常组图2 琼脂糖凝胶电泳检测结果24锦州医学院学报 2004年10月,25(5)。