人(Human)中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒说明书
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒(磁微粒化学发光免疫分析法)产品技术要求热景
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒（磁微粒化学发光免疫分析
法）
适用范围：用于体外定量测定人血清和尿液样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的含量。
1.1规格：60人份/盒，100人份/盒。
1.2组成：
标准曲线卡（条码）：内含标准曲线信息及校准品靶值信息
2.1外观
试剂盒外观应整洁，文字符号标识清晰、内容完整；液体组分无沉淀或絮状物。
2.2 准确度
使用中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的纯品进行测试，其回收率在85%～115%范围内。
2.3空白限
试剂盒空白限应不大于10ng/mL。
2.4 线性
[10,1000]ng/mL范围内，相关系数（r）应不低于0.9900。
2.5精密度
2.5.1批内变异系数（CV）应不高于8.0%。
2.5.2批间变异系数（CV）应不高于15.0%。
2.5.3批内瓶间差变异系数（CV）应不高于8.0%。
2.6 特异性
表1 与其它物质的交叉反应
2.7溯源性
根据GB/T21415有关规定提供校准品的来源、溯源过程及测量不确定度等内容，溯源至企业工作校准品并与已上市产品比对赋值。
2.8稳定性
2℃～8℃保存12个月，取到效期后两个月内的产品进行检测，测定结果应符合上述2.2、2.3、2.4、2.5.1要求。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒(荧光免疫层析法)产品技术要求广州天宝颂原生物
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒（荧光免疫层
析法）
1.性能指标
2.1物理性状
2.1.1 外观
测试卡外壳应整洁完整，印刷内容清晰；测试卡内部试纸条应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固。
稀释液应澄清无沉淀。
2.1.2 宽度
测试卡内部试纸条宽度应在 4.1mm±0.2mm 范围内。
2.1.3 移行速度
液体移行速度应不低于10mm/min。
2.2精密度
2.2.1 批内精密度
用经标定的NGAL浓度为100.0ng/mL、500.0ng/mL、4000.0ng/mL的NGAL样本进行检测，其变异系数CV不大于15%，所使用的样本浓度按附录B进行溯源定值。
2.2.2 批间精密度
任取3批测试卡，用经标定的NGAL浓度为100.0ng/mL、500.0ng/mL、4000.0ng/mL的样本进行检测，其批间变异系数CV不大于20%，所使用的样本浓度按附录B进行溯源定值。
2.3 准确度
用经标定的NGAL浓度为100.0ng/mL、500.0ng/mL、4000.0ng/mL的样本进行检测，其相对偏差（B%）不大于10%，所使用的样本浓度按附录B进行溯源定值。
2.4 分析灵敏度
分析灵敏度应不高于25.0ng/mL。
2.5分析测量范围
其分析测量范围为25.0ng/mL～4000.0ng/mL，相关系数r2≥0.99。
1。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)产品技术要求万泰德瑞
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）适用范围：用于体外定量测定人血浆或尿液中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的含量。
1.1包装规格1)试剂1：15mL×1、试剂2：15mL×1；2)试剂1：30mL×1、试剂2：30mL×1；3)试剂1：30mL×3、试剂2：30mL×3；4)试剂1：20mL×1、试剂2：10mL×1；5)试剂1：40mL×1、试剂2：20mL×1；6)试剂1：40mL×3、试剂2：20mL×3；7)试剂1：45mL×1、试剂2：15mL×1；8)试剂1：45mL×3、试剂2：15mL×3；9)试剂1：24mL×1、试剂2：6mL×1；10)试剂1：48mL×1、试剂2：12mL×1；11)试剂1：48mL×3、试剂2：12mL×3；12)试剂1：25mL×1、试剂2：5mL×1；13)试剂1：50mL×1、试剂2：10mL×1；14)试剂1：50mL×3、试剂2：10mL×3；校准品：1.0mL×5（5个水平）（选配）；质控品水平1：0.5mL×1（选配）；质控品水平2：0.5mL×1（选配）。
1.2组成成分试剂1：甘氨酸缓冲液（pH7.4）40mmol/L试剂2：甘氨酸缓冲液（pH7.4）40mmol/L羊抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体结合胶乳＞80ng/mL校准品：中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、Tris缓冲液、人血浆(含量≥5%)，（目标浓度范围：水平1：80ng/mL-120ng/mL，水平2：400ng/mL-600ng/mL，水平3：1200ng/mL-1800ng/mL，水平4：2400ng/mL-3600ng/mL，水平5：4000ng/mL-6000ng/mL）批特异，具体浓度见瓶签；质控品：中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、Tris缓冲液、人血浆(含量≥5%)，（质控品水平1靶值范围：64ng/mL-96ng/mL；质控品水平2靶值范围：464ng/mL-696ng/mL）批特异，具体浓度见瓶签。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求万孚
1 产品名称 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒（化学发光免疫分析法） 型号、规格 型号：型号W，型号D，型号L； 规格： 2×50人份/盒。
结构及组成 试剂盒主要由磁珠包被物(R1)、酶标记物(R2)和校准品组成。其中磁珠包被物(R1)主要成分为包被着NGAL抗体的超顺磁性微粒，悬浮于缓冲液，含防腐剂（ProClin 300）；酶标记物(R2)主要成分为NGAL 抗体-碱性磷酸酶标记物稀释于缓冲液，含防腐剂（ProClin 300）；校准品主要成分为NGAL抗原。
产品适用范围/预期用途 用于定量测定人尿液样本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的含量。 临床上主要用于辅助诊断肾功能损伤。
2 性能指标
2.1 外观 外观应符合如下要求： a) 磁珠包被物R1 摇匀后应为棕褐色悬浊液；静止久后，棕褐色磁珠沉降于底部， 上清液应为无色液体；酶标记物R2 应为无色液体，无沉淀或絮状物；校准品应为无色液体，无沉淀或絮状物； b) 试剂盒各组分应齐全、完整，液体无渗漏； c) 中文包装标签清晰，无磨损。
2.2 准确度 将具有溯源性的两个正确度控制品进行检测，检测结果与标定浓度的相对偏差在±10% 范围内。
2.3 空白限 不大于 10ng/mL。 2.4 线性 试剂盒在 10 ng/mL～1500 ng/mL 区间内，其相关系数（r）绝对值不低于 0.9900。 2.5 重复性 变异系数 CV≤8%。 2.6 批间差 变异系数 CV≤10%。 2.7 校准品 2.7.1 装量 校准品装量≥0.5mL。 2.7.2 校准品准确度 2
测定校准品，C1，C2 测定结果的相对偏差在±10%范围内，C0 测定结果的绝对偏差的绝对值不高于 10ng/mL。 2.7.3 校准品瓶内均一性 校准品C1，C2 瓶内均一性≤8%，C0 的SD≤10ng/mL。 3 2.7.4 校准品瓶间均一性 校准品C1，C2 瓶间均一性≤5%，C0 的SD≤10ng/mL。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)测定试剂(荧光免疫层析法)产品技术要求万孚0
1.性能指标
1.1外观检查
外观应平整，材料附着应牢固，各组分应齐全、完整，标签清晰，卡固定紧密，液体无渗漏。
1.2物理检查
膜条宽为4.0±0.5mm ；液体移行速度应不低于10mm/min。
1.3准确度
用参考物质作为样本进行检测，其测量结果的相对偏差(Bias%)应在±15% 内。
1.4最低检测限
应不大于10ng/mL。
1.5线性
试剂在（10~1500）ng/mL 的范围内，线性相关系数r≥0.9900。
1.6精密度
1.6.1批内精密度
检测2 个不同浓度的样本，批内精密度应不大于15%。
1.6.2批间精密度
检测2 个不同浓度的样本，批间精密度应不大于15%。
1.7分析特异性
选择同一浓度的 NGAL 样本分别加入干扰物，使干扰物最终浓度肌酐(50mg/mL)、尿素(120mg/mL)、白蛋白(25mg/mL)，各干扰样本重复检测 3 次，计算样本检测结果的均值和相对偏差，其中相对偏差(Bias%)在±15%内。
1。
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋(NGAL)
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白一、临床适应症背景情况中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（Neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）又称人脂质运载蛋白2(lipocalin2,Ln2)或噬铁蛋白(siderocalin)，是人脂质运载蛋白家族中的一个新成员。
近年来，NGAL 作为一种新的肾损伤标志物倍受关注。
早期急性肾损伤、慢性肾病、心肾综合症等疾病血清和尿液中NGAL会显著升高，且其水平监测对病情轻重、疗效及预后判断具有较好的诊断价值。
临床检测NGAL主要有免疫层析法、免疫比浊法、速率色散比浊法、乳胶增强免疫比浊法等。
胶乳增强免疫比浊法是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测方法。
肾脏损伤约占所有泌尿生殖道损伤的65%左右。
急性肾损伤是一组临床综合征，是指突发(1-7d内)和持续(>24h)的肾功能突然下降，定义为血清肌酐至少上升0.5mg/dl 1，表现为氮质血症、水电解质和酸碱平衡以及全身各系统症状，可伴有少尿（<400ml/24h或17ml/h）或无尿（<100ml/24h）。
肾病的发病迁延难愈，时间超过三个月，病人尿液和相关的血液指标出现异常，肾脏病理学、影像学发现异常，或肾脏的肾小球有效滤过率低于60%，都可统称为“慢性肾病”。
慢性肾病如未能及时有效救治，导致病情恶化进展，则随病程迁延，慢性肾病患者将发展成为慢性肾功能不全、肾衰竭，最终形成尿毒症。
心肾综合征（cardio-renalsyndrome，CRS)即心脏或肾脏对另一器官的损害不能代偿时，互为因果,形成恶性循环，最终加速心脏和肾脏功能的共同损害和衰竭。
其发病率、死亡率高，给社会和患者带来沉重的负担。
目前对心肾综合征的认识有限，缺乏有效的治疗措施，是临床处理的难题。
早期诊断急性肾功能损伤时血、尿NGAL浓度通常会迅速升高，2h最为明显( 比临界值升十至几百倍)，血清肌酐、尿酶等传统指标往往要在24～72h才后明显升高，因而NGAL可用于急性肾功能损伤的早期诊断。
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本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、7.5、15、30、60、120ng/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2.灵敏度：最低检测浓度小于1.0ng/mL。
3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.有效期：6个月免责声明1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
FOR RESEARCH USE ONLY.NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.Human Neutrophil Gelatinase-associated Lipocalin(NGAL)ELISA Kit instructionIntended useThis NGAL ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at450nm using a spectrophotometer.In order to measure the concentration of NGAL in the sample, this NGAL ELISA Kit includes a set of calibration standards.The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus NGAL concentration.The concentration of NGAL in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Sample collection and storagesSerum-Use a serum separator tube and allow samples to clot for30minutes before centrifugation for10minutes at approximately3000×g.Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at-20℃or-80℃.Avoid repeated freeze-thaw cyclesPlasma-Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant.Centrifuge samples for30minutes at3000×g at2-8℃within30minutes of collection.Store samples at-20℃or-80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids-Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at-20℃or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note:The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.Materials required but not supplied1.Standard microplate reader(450nm)2.Precision pipettes and Disposable pipette tips.3.37℃incubatorPrecautions1.Do not substitute reagents from one kit to another.Standard,conjugate and microplates are matched for optimal e only the reagents supplied by manufacturer.2.Do not remove microplate from the storage bag until needed.Unused strips should be stored at2-8°C in their pouch with the desiccant provided.3.Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature (20-25°C)Materials suppliedName96determinations48determinations Microelisa stripplate12*8strips12*4stripsStandard0.3ml*6tubes0.3ml*6tubesSample Diluent 6.0ml 3.0mlHRP-Conjugate reagent10.0ml 5.0ml20X Wash solution25ml15mlChromogen Solution A 6.0ml 3.0mlChromogen Solution B 6.0ml 3.0mlStop Solution 6.0ml 3.0mlClosure plate membrane22User manual11Sealed bags11Note:Standard(S0→S5)concentration was followed by:0,7.5,15,30,60,120 ng/ml.Reagent preparation20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water1:20.Assay procedure1.Prepare all re a g e n t s before starting assay procedure.It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2.Add standard:Set Standard wells,testing sample wells.Add standard50μl to standard well.3.Add Sample:Add testing sample10μl then add Sample Diluent40μl to testing sample well;Blank well doesn’t add anyting.4.Add100μl of HRP-conjugate reagent to each well,c over with an adhesive strip and incubate for60minutes at37°C.5.Aspirate each well and wash,repeating the process four times for a total of five washes.Wash by filling each well with Wash Solution(400μl)using a squirt bottle, manifold dispenser or plete removal of liquid at each step is essential to good performance.After the last wash,remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting.Invert the plate and blot it against clean paper towels.6.Add chromogen solution A50μl and chromogen solution B50μl to each well. Gently mix and incubate for15minutes at37°C.Protect from light.7.Add50μl Stop Solution to each well.The color in the wells should change from blue to yellow.If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform,gently tap the plate to ensure thorough mixing.8.Read the Optical Density(O.D.)at450nm using a microtiter plate reader within15minutes.Calculation of results1.This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample.The standard curve is generated by plotting the average O.D.(450nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical(Y)axis versus the corresponding concentration on the horizontal(X)axis.2.First,calculate the mean O.D.value for each standard and sample.All O.D.values,are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation.Construct the standard curve using graph paper or statistical software.3.To determine the amount in each sample,first locate the O.D.value on theY-axis and extend a horizontal line to the standard curve.At the point of intersection,draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration.4.Any variation in operator,pipetting and washing technique,incubation time ortemperature,and kit age can cause variation in result.Each user should obtain their own standard curve.5.The sensitivity by this assay is1.0ng/ml6.Standardcurve Storage：2-8℃.validity：six months.FOR RESEARCH USE ONLY;NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS!PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!。