糖类硅胶G薄层层析实验方法
请简述硅胶薄层层析的操作过程及注意事项
硅胶薄层层析是一种广泛应用于化学分离和分析中的技术，其操作过程相对复杂，需要严格的步骤和注意事项。
在进行硅胶薄层层析实验时，需要特别注意以下几个方面：一、准备工作1.1 准备硅胶薄层板在进行硅胶薄层层析前，首先需要准备好硅胶薄层板。
选择适当尺寸和厚度的硅胶薄层板，并确保其质量良好，无明显破损和污染。
1.2 准备混合溶液根据待分离物质的性质和分离条件，准备合适的溶剂和硅胶薄层层析用的移动相。
溶剂的选择应考虑其与样品的亲和性和分离度，移动相的浓度和pH值等因素。
1.3 样品预处理将待分离的样品进行预处理，包括溶解、过滤、浓缩等步骤。
确保样品的纯度和浓度符合硅胶薄层层析的要求。
二、操作步骤2.1 样品施加将经过预处理的样品施加在硅胶薄层板上，一般采用微量注射器或者均匀吹洒的方式进行。
2.2 样品带移动将硅胶薄层板放入层析槽中，加入足够的移动相，让样品随着移动相的运动而扩散和分离。
2.3 层析过程监控通过目视或者专用的层析仪器对层析过程进行监控，及时观察样品在硅胶薄层板上的分离情况，掌握分离的进展。
2.4 结果记录根据层析的结果，对硅胶薄层板进行标记和结果记录，以备后续的分析和处理。
三、注意事项3.1 操作规范在进行硅胶薄层层析实验时，需要严格遵守操作规程，确保操作步骤的准确性和标本的纯净性。
3.2 安全防护在使用化学药品和溶剂时，注意做好安全防护措施，避免化学品的接触和吸入，确保实验环境的安全。
3.3 质量控制在每个步骤中都要进行严格的质量控制，确保样品和试剂的质量符合实验要求，避免质量不合格对实验结果的影响。
3.4 数据分析对实验结果进行准确的数据分析和结果解读，确保实验的可靠性和结果的科学性。
对实验中出现的异常情况进行合理分析和处理，避免结果的误解和错误判断。
通过以上的简述，我们对硅胶薄层层析的操作过程及注意事项有了较为全面的了解。
只有在严格遵循操作规程，进行安全防护和质量控制的基础上，才能保证硅胶薄层层析实验的准确性和可靠性。
[精品]糖类硅胶G薄层层析实验方法
![[精品]糖类硅胶G薄层层析实验方法](https://img.taocdn.com/s3/m/264db0b47d1cfad6195f312b3169a4517723e5b6.png)
[精品]糖类硅胶G薄层层析实验方法糖类硅胶G薄层层析实验方法一、实验目的本实验旨在学习和掌握糖类化合物在硅胶G薄层上的分离和分析方法，了解糖类化合物的分离原理、操作技巧和鉴定方法。
二、实验原理糖类硅胶G薄层层析是一种常用的分离和分析糖类化合物的方法。
硅胶G薄层具有较高的分离效率和良好的选择性，可用于分离和鉴定各种糖类化合物，如单糖、低聚糖和多糖。
在层析过程中，糖类化合物在硅胶G薄层上的移动速度与它们的极性、分子量和官能团有关。
通过控制展开剂的极性和组成，可以实现对不同糖类化合物的有效分离。
三、实验步骤1.硅胶G薄层的制备：按照硅胶G薄层层析板的说明书，制备一定规格的硅胶G薄层板。
2.点样：用毛细管或微量注射器将标准糖样品点在硅胶G薄层的适当位置。
每个样品点应间隔一定距离，以便后续的定性分析。
3.展开：将点好样品的硅胶G薄层板放入展开槽中，注入展开剂。
展开剂的极性和组成应根据实验要求进行选择。
一般情况下，糖类化合物在极性较大的溶剂中移动速度较快。
4.显色：在展开后的硅胶G薄层板上，喷洒适当浓度的显色剂，使糖类化合物显色。
常见的显色剂包括硝酸银溶液、苯胺-二苯胺溶液和溴酚蓝溶液等。
根据需要选择合适的显色剂和显色条件。
5.定性分析：通过观察硅胶G薄层板上各糖类化合物的Rf值（相对移动距离）和显色情况，对各糖类化合物进行定性分析。
标准糖样品可作为参照对比。
6.定量分析：采用合适的测量方法，如光密度法或荧光法等，测定硅胶G薄层板上各糖类化合物的含量。
根据标准曲线或标准样品，对未知样品进行定量分析。
四、注意事项1.在制备硅胶G薄层时，应选择合适的硅胶G品牌和规格，确保层析板的分离效果和质量。
2.点样时应注意样品的浓度和上样量，避免样品过载对分离效果的影响。
3.在选择展开剂时，应根据实验要求和糖类化合物的性质进行选择，以获得最佳的分离效果。
注意控制展开剂的极性和组成，避免对层析板和样品的损害。
4.在进行定性分析时，应注意观察各糖类化合物的Rf值和显色情况，避免误判。
可溶性糖的硅胶G薄层层析
可溶性糖的硅胶G 薄层层析一、实验目的1.了解薄层层析测定可溶性糖的原理。
2.掌握硅胶G 薄层层析的操作方法。
二、实验原理薄层层析(简称TL C)是一种微量而快速的层析方法，是在吸附剂或支持剂均匀涂布的薄层上进行的，故称薄层层析。
为了使所要分析的样品各组分得到分离，必须选择合适的吸附剂。
硅胶、氧化铝和聚酰胺是广泛采用的吸附剂，硅藻土和纤维素是分配层析中常用的支持剂，在吸附剂或支持剂中添加合适的粘合剂后再涂布，可使薄层紧贴在玻璃板上。
硅胶G 是一种添加了粘合剂的硅胶粉，约含12％~13％的石膏(C aS04)，它可以把一些物质从溶液中吸附于自身表面。
利用它对各种物质吸附能力的不同，再用适当的溶剂系统展层，使不同的物质得以分离。
例如，糖在硅胶G 薄层上的移动速度与糖的相对分子质量和羟基数有关，经过适当的溶剂展开后，糖在薄板上的移动速度是戊糖＞己糖＞双糖＞三糖。
对已分开的斑点显色，而将与它位置相当的另一个末显色的斑点从薄层上与硅胶G 一起刮下，以适当的溶剂将糖从硅胶G 上洗脱下来，就可用糖的定量测定方法测出各组分的含糖量。
薄层层析与其他方法比有明显的优点：层析时间短、样品用量范围大(1μg~0.5g)、观察结果方便、可以分离多种化合物等，其灵敏度比纸层析高10~100倍，显色方法甚至可以用腐蚀性显色剂。
而且薄层层析法操作方便，设备简单，所以薄层层析法目前应用范围相当广泛。
三、仪器和试剂仪器烘箱、吹风机、薄层玻板(20cm×20cm)、分光光度计。
试剂1.1％糖标准溶液：取木糖、葡萄糖、果糖和蔗糖各l00mg，分别用75%的乙醇定容10mL，使其浓度均为10mg/mL。
糖类的提取分离与薄层层析分析
糖类的提取分离与薄层层析分析实验简介：薄层层析(thin layer chromatography,TLC)是在吸附剂或支持介质均匀涂布的薄层上进行的，是一种广泛应用于氨基酸、多肽、核苷酸、脂肪酸、脂肪类、糖类、磷脂和生物碱等多种物质的分离和鉴定的层析方法。
本实验是从水果中提取单糖、双糖和多糖组分，采用硅胶G薄层层析法分析糖类成分。
一、实验目的1、了解并初步掌握从水果中分离提取单糖、蔗糖及淀粉的原理。
2、学习薄层层析的一般操作及定性鉴定的方法。
二、实验原理1、单糖及多糖的提取凡不能水解为更小分子的糖即为单糖。
单糖种类很多，其中以葡萄糖分布最为广泛，存在于各种水果、谷类、蔬菜和动物血液中。
由于单糖分子中有多个羟基，增加了它的水溶性，尤其在热水中溶解度很大；在乙醇中也有很好溶解性，但不溶于乙醚、丙酮等有机溶剂中。
而蔗糖等双糖分子也易溶于水和乙醇中。
因此，单糖和双糖一般可用热水或乙醇将其提取出来。
多糖是由多个单糖分子失水缩合而成的大分子化合物。
在自然界中分子结构复杂而多种多样，有不溶性的结构多糖如植物纤维素、半纤维素，动物的几丁质等；另有一些为贮存物质如淀粉、糖原等；还有一些多糖具有复杂的生理功能。
多糖中的淀粉不溶于冷水及乙醇，但可溶于热水中形成胶体溶液。
因此可以用乙醇提取单糖及低聚糖，然后提取淀粉等多糖。
2、薄层层析薄层层析的主要原理是根据各组分在溶剂中的溶解度不同和吸附剂对样品各组分的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列的斑点。
糖的分离鉴定可用吸附层析或分配层析，吸附层析常用的吸附剂为硅胶，分配层析常用的支持剂是硅藻土。
在吸附剂或支持剂中添加适宜的黏合剂后再涂布于支持板上，可使薄层粘牢在玻璃板(或涤沦片基)这类基底上。
硅胶G是一种已添加了黏合剂—石膏(CaSO4)的硅胶粉，糖在硅胶G薄层上的移动速度与糖的相对分子质量和羟基数等有关，经适当的溶剂展开后，糖在硅胶G薄板上的移动距离为戊糖＞己糖＞双糖＞三糖。
1%氢氧化钠溶液制备的硅胶g薄层板
1%氢氧化钠溶液制备的硅胶g薄层板
硅胶是一种广泛应用于化学、制药、食品等领域的材料，它具有良好的吸附性能和化学稳定性。
制备硅胶的方法有很多种，其中一种常用的方法是使用氢氧化钠溶液。
制备硅胶g薄层板的过程如下：
1. 准备氢氧化钠溶液。
将1克氢氧化钠加入100毫升去离子水中，搅拌至完全溶解。
2. 准备硅酸钠溶液。
将1克硅酸钠加入50毫升去离子水中，搅拌至完全溶解。
3. 将氢氧化钠溶液缓慢滴入硅酸钠溶液中，同时不断搅拌。
反应会产生白色沉淀，这就是硅胶。
4. 将硅胶沉淀洗涤至中性，去除余下的氢氧化钠和硅酸钠。
5. 将洗涤后的硅胶沉淀平铺在玻璃板上，待其干燥。
6. 将干燥后的硅胶板切割成所需大小。
制备好的硅胶g薄层板可以用于分离和纯化化合物，例如在制药行业中用于纯化药物。
此外，硅胶g薄层板还可以用于检测和分析样品中的化合物，例如在食品行业中用于检测食品中的添加剂。
需要注意的是，在制备硅胶g薄层板时，要注意安全操作，避免接触氢氧化钠溶液和硅酸钠溶液。
同时，在操作过程中要保持环境清洁，避免杂质进入制备过程中。
简述采用硅胶板薄层色谱分离实验时具体的操作步骤和注意事项
简述采用硅胶板薄层色谱分离实验时具体的操作步骤和注意事项一、实验操作步骤采用硅胶板薄层色谱分离实验的操作步骤如下：1.硅胶板的制备：选择合适的硅胶板，如硅胶G板或硅胶H板。
将硅胶与适量的黏合剂混合，搅拌均匀后涂在玻璃板上，制成硅胶薄层板。
薄层板制成后需干燥，然后活化处理，以提高分离效果。
2.点样：将待分离的样品溶液点在硅胶板上，用毛细管或自动点样器进行点样操作。
点样时需注意控制点样量，过量的样品可能导致拖尾、边缘效应等。
3.展开：在密闭的容器中进行展开，选择合适的展开剂，确保待分离的组分能够得到较好的分离。
展开剂的选择应根据样品的性质进行优化。
4.显色：展开后的薄层板需进行显色处理，以便观察和检测组分的斑点。
根据待分离组分的性质选择合适的显色剂，如荧光剂、金属盐等。
5.检测与记录：通过合适的方法对薄层板上的组分进行检测，如紫外可见吸收光谱法、荧光法等。
记录各组分的斑点位置、大小及颜色等信息，以便后续的分析和处理。
6.薄层板的回收和处理：实验结束后，需对薄层板进行回收和处理。
对于有价值的组分，可进行进一步分离和纯化。
对于不再需要的薄层板，需按照实验室规定进行处理，避免对环境造成污染。
二、注意事项在进行硅胶板薄层色谱分离实验时，需要注意以下几点：1.硅胶板的选择与制备：根据实验需求选择合适的硅胶板类型（如硅胶G 板或硅胶H板）。
制备时需确保硅胶与黏合剂的比例合适，搅拌均匀，避免出现硅胶颗粒等杂质。
同时，制成的薄层板需干燥并活化处理，以提高分离效果。
2.点样操作：点样时需控制点样量，避免过量的样品导致拖尾、边缘效应等问题。
可以采用毛细管或自动点样器进行点样，提高点样精度和效率。
3.展开剂的选择与优化：展开剂的选择对于薄层色谱分离的效果至关重要。
应根据待分离组分的性质选择合适的展开剂，并进行优化实验，以提高分离效果。
同时，需注意展开剂的配比和组成，以获得最佳的分离效果。
4.显色处理：选择合适的显色剂对展开后的薄层板进行显色处理，以便观察和检测组分的斑点。
糖类的提取分离与薄层层析分析实验步骤
实验1 糖类的提取分离与薄层层析分析实验简介：薄层层析(thin layer chromatography, TLC)是在吸附剂或支持介质均匀涂布的薄层上进行的，是一种广泛应用于氨基酸、多肽、核苷酸、脂肪酸、脂肪类、糖类、磷脂和生物碱等多种物质的分离和鉴定的层析方法。
本实验是从水果中提取单糖、双糖和多糖组分，采用硅胶G薄层层析法分析糖类成分。
一、实验目的1．了解并初步掌握从水果中分离提取单糖、蔗糖及淀粉的原理。
2．学习薄层层析的一般操作及定性鉴定的方法。
二、实验原理1．单糖及多糖的提取凡不能水解为更小分子的糖即为单糖。
单糖种类很多，其中以葡萄糖分布最为广泛，存在于各种水果、谷类、蔬菜和动物血液中。
由于单糖分子中有多个羟基，增加了它的水溶性，尤其在热水中溶解度很大；在乙醇中也有很好溶解性，但不溶于乙醚、丙酮等有机溶剂中。
而蔗糖等双糖分子也易溶于水和乙醇中。
因此，单糖和双糖一般可用热水或乙醇将其提取出来。
多糖是由多个单糖分子失水缩合而成的大分子化合物。
在自然界中分子结构复杂而多种多样，有不溶性的结构多糖如植物纤维素、半纤维素，动物的几丁质等；另有一些为贮存物质如淀粉、糖原等；还有一些多糖具有复杂的生理功能。
多糖中的淀粉不溶于冷水及乙醇，但可溶于热水中形成胶体溶液。
因此可以用乙醇提取单糖及低聚糖，然后提取淀粉等多糖。
2．薄层层析薄层层析的主要原理是根据各组分在溶剂中的溶解度不同和吸附剂对样品各组分的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列的斑点。
糖的分离鉴定可用吸附层析或分配层析，吸附层析常用的吸附剂为硅胶，分配层析常用的支持剂是硅藻土。
在吸附剂或支持剂中添加适宜的黏合剂后再涂布于支持板上，可使薄层粘牢在玻璃板(或涤沦片基)这类基底上。
硅胶G是一种已添加了黏合剂—石膏(CaSO4)的硅胶粉，糖在硅胶G薄层上的移动速度与糖的相对分子质量和羟基数等有关，经适当的溶剂展开后，糖在硅胶G薄板上的移动距离为戊糖＞己糖＞双糖＞三糖。
薄层层析硅胶制备板
薄层层析硅胶板的制备主要涉及以下步骤：
1.准备硅胶粉末：选择高纯度的薄层层析硅胶（粉状）作为原料，其化学性质稳定，除强碱和氢氟酸外，不与其他酸碱反应。
2.调胶：以一定比例的硅胶和粘结剂混合，通常是0.5%羧甲基纤维素钠盐(CMCNa)溶液和硅胶G粉末。
3.铺板：取4cmx7cm平滑玻璃板，洗净晾干置于水平桌面。
用移液枪吸取调好的硅胶匀浆均匀滴在玻板上，重复三次。
在桌面边缘颠动玻璃板，让液体薄而均匀的覆盖满玻璃板。
4.晾干：将铺好的硅胶板在室温干燥15小时。
5.活化：把完全晾干的硅胶板在110℃烘烤30分钟，降至室温后取出，保存于干燥的环境中备用。
6.展层剂制备：根据需要选择合适的展层剂，例如乙酸乙酯：丙酮：乙酸：水=8：2：1：1（V/V/V/V），配置好后倒入展层缸，液面高度低于硅胶板的标记线。
将硅胶板底端浸入展层液，并用保鲜膜将缸口密封好，室温下展层。
以上信息仅供参考，实际操作中可能需要根据实际情况调整参数。
另外，为了确保安全和效果，建议在专业人员的指导下进行操作。
层析
实验四可溶性糖的硅胶G薄层层析一、实验目的：1、掌握薄层层析法的基本原理和方法；2、掌握可溶性糖分离鉴定的原理和方法。
二、实验原理：薄层层析是吸附剂或支持剂均匀有效地涂布在薄层上进行的层析，是一种微量而快递的层析方法。
硅胶G是一种添加了粘合剂的硅胶粉，约含12%—13%的石膏，它可以把一些物质从溶液中吸附于自身的表面上，利用它对各种物质的吸附能力不同，再用适当的溶剂系统展层，使不同的物质得以分离，使用显色剂显色，得到不同的Rf值。
三、实验仪器：烘箱、吹风筒、喷雾器、分光光度计、微量进样器、层析缸、点样毛细管、薄层玻璃（20cmX 20cm）、试管（15mlX 24）四、实验材料及试剂：１、木糖、葡萄糖、果糖和蔗糖标准溶液２、糖标准溶液：取木糖、葡萄糖、果糖和蔗糖各１００ｍｇ，分别７５％乙醇定容至１０ｍｌ，其质量浓度均为１０ｍｇ／ｍｌ。
３、层析溶剂：氯仿：甲醇＝６０：４０（Ｖ／Ｖ）４、苯胺－二苯胺－磷酸显色剂：１ｇ二苯胺，苯胺１ｍｌ和８５％磷酸５ｍｌ溶于５０ｍｌ丙酮中。
５、０.１ｍｏｌ／Ｌ硼酸溶液，硅胶Ｇ粉。
五、实验步骤：1、制备硅胶G薄层板。
取硅胶Ｇ粉３０ｇ，加入７５ｍｌｍｏｌ／Ｌ硼酸溶液中，调匀后铺于洁净平整的玻璃板上，铺层后的薄板与１００℃烘箱中烘干。
取出后可贮于干燥器中备用。
薄层表面要求平整，厚薄均匀。
2、糖在硅胶Ｇ薄层上的分离。
选取制备好的薄层板一块，在距底边１.５ｃｍ的直线上选４个点，相互距离２ｃｍ。
用毛细管分别点上不同的糖样品于４个点，点样量控制在５－１０ｕｇ，边点样变吹干，斑点直径不超过３ｍｍ。
待薄层板上样品自然干燥后，将薄板置于盛有层析溶剂的层析缸中，自下向上展层，当展层溶剂到达离薄板顶端约１ｃｍ处时取出薄板，前沿作一记号，于６０℃烘干２－３ｈ，挥发尽溶剂后用喷雾器均匀地喷上显色剂，于８５℃烘烤１０ｍｉｎ，则各种糖分别显出不同的颜色。
六、实验结果：从上面的图片从左往右依次为10mg/ml木糖、葡萄糖、果糖和蔗糖四种糖，硅胶板上的OB值为14.80cm，木糖、葡萄糖、果糖和蔗糖四种糖跑离O点的距离分别为13.00cm，11.40cm，11.80cm，10.20cm。
硅胶G薄层层析.doc
实验一硅胶G薄层层析薄层层析是在吸附色谱基础上发展起来的一种快速微量操作简便的层析法。
硅胶是薄层层析中应用最广的吸附剂，由于硅胶薄层的机械性能差，一般必须加入10％～15％的煅石膏作为粘合剂，称为硅胶G。
展层剂凭借毛细管效应在薄层中移动，点在薄层上的样品随展层剂的移动而不同程度的移动。
因为被分离物质的极性有差异，因而与吸附剂和展开剂的亲和力有差别，结果在薄层板上的迁移率Rf值不同，对于某一物质，在一定的溶剂系统和一定的温度下，Rf值是该物质的特征常数，被分离物质Rf值差别越大，分离效果越好。
可选择适当的展开剂扩大被分离物质的Rf值差别，以期达到较理想的分离效果。
第一部分可溶性糖的薄层分离与鉴定一、原理糖是多羟基化合物，在硅胶G薄层上展层时，被吸附的强弱有差别，其吸附力主要与糖分子中所含有羟基数目有关。
吸附力大小顺序为：三糖>二糖>己糖>戊糖。
展层后，喷显色剂显色，不同的糖呈现不同的颜色，吸附力越大的糖Rf值越小，与已知标准糖的颜色和Rf值比较，即可鉴别样品提取液中糖的种类和含量，显色后进行拍照或扫描定量。
二、材料、仪器和试剂1．材料苹果或其他植物材料2．仪器①离心机及大离心管②涂布器③天平④烘箱⑤研钵⑥微量点样器或毛细管⑦层析缸⑧吹风机、喷雾器⑨电热水浴⑩蒸发皿、量筒（50ml）、刻度吸管、玻璃板（15×7cm）3．试剂①95％乙醇和80％乙醇②硅胶G和0.1mol∕L硼酸③氯仿④冰乙酸⑤1％标准糖溶液（10mg∕ml）:木糖、果糖、葡萄糖、蔗糖⑥苯胺－二苯胺－磷酸显色剂：称取2.0g二苯胺于烧杯中，加入2ml苯胺溶液溶解后、再加10ml 85％磷酸，边加边搅然后用100ml丙酮溶解混匀四．操作步骤1．硅胶G薄板的制备制板用的玻璃板应平整光滑，预先用洗液或其他洗涤剂洗净，干燥后备用。
称取硅胶G粉3.5g，加0.1mol∕L硼酸溶液9ml，于研钵中充分研磨，待硅胶由稀变稠、发出如脂肪光泽时，倾入涂布器中均匀涂布在玻璃板上，可铺7×15cm薄板1块。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
糖类硅胶G薄层层析实验方法【目的和要求】1、了解并初步掌握吸附层析的原理。
2、学习薄层层析的一般操作及定性与定量鉴定的方法。
【原理】薄层层析是一种广泛应用于氨基酸，多肽，核苷酸，脂肪类，糖脂和生物碱等多种物质的分离和鉴定的层析方法。
由于层析是在吸附剂或支持介质均匀涂布的薄层上进行的，所以称之为薄层层析。
薄层层析的主要原理是，根据样品组分与吸附剂的吸附力及其在展层溶剂中的分配系数的不同而使混合物分离。
当展层溶剂移动时，会带着混合样品中的各组分一起移动，并不断发生吸附与解吸作用以及反复分配作用。
根据各组分在溶剂中溶解度不同和吸附剂对样品各组分的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列的斑点。
如果把标准样品在同一层析薄板上一起展开，便可通过在同一薄板上的已知标准样品的Rf值和未知样品各组分的Rf值进行对照，就可初步鉴定未知样品各组分的成分。
薄层层析根据所支持物的性质和分离机制的不同包括吸附层析，离子交换层析和凝胶过滤等。
糖的分离鉴定可用吸附剂或支持剂中添加适宜的黏合剂后再涂布于支持板上，可使薄层粘牢在玻璃板(或涤沦片基)这类基底上。
硅胶G是一种已添加了黏合剂石膏(CaSO4)的硅胶粉，糖在硅胶G薄层上的移动速度与糖的相对分子质量和羟基数等有关，经适当的溶剂展开后，糖在硅胶G薄析上的移动距离为戊糖>已糖>双糖>三糖。
若采用硼酸溶液代替水调制硅胶G制成的薄板可提高高糖的分离效果。
如对已分开的斑点显色，而将与它位置相当的另一个未显色的斑点从薄层上与硅胶G 一起刮下，以适当的溶液将糖从硅胶G上洗脱下来，就可用糖的定量测定方法测出样品中各组分的糖含量。
薄层层析的展层方式有上行，下行和近水平等。
一般常采用上行法，即在具有密闭盖子的玻璃缸(即层析缸)中进行，将适量的展层溶液倒于缸底，把点有样品的薄层板放入缸中即可(如图1所示)。
保证层析缸内有充分展层溶剂的饱和蒸气是实验成功的关键。
与纸层析，柱层析等方法比较，薄层层析有明显的优点：操作方便，层析时间短，可分离各种化合物，样品用量少(0。
1至几十向微克的样品均可分离)，比纸层析灵敏度高10～100倍，显色和观察结果方便，如薄层由无机物制成，可用浓硫酸，浓盐酸等腐蚀性显色剂。
因此，薄层层析是一项实验常用的分离技术，其应用范围主要在生物化学，医药卫生，化学工业，家业生产，食品和毒理分析等领域，对于天然化合物的分离和鉴定也已广泛应用。
【操作方法】1、硅胶G薄层板的制备将制备薄层用的玻璃板预先用洗液洗干净并烘干，玻璃板要求表面光滑。
称取硅胶G粉6g，加入12mL 0.1mol/L硼酸溶液，用玻棒在烧杯中慢慢搅拌至硅胶浆液分散均匀，黏稠度适中，然后倾倒在干净，干燥的坡璃板上，倾斜玻璃或用玻棒将硅胶G由一端向另一端推动，使硅胶G铺成厚薄均匀的薄层。
待薄板表面水分开干燥后置于烘箱内，待温度升至110℃后活化30min。
冷却至室温后取出，置于干燥器中备用(注意：避免薄板骤热，骤冷使薄层断裂或在展层过程中脱落)。
制成的薄层板，要求表面平整，厚薄均匀。
手工涂布薄板的方法：(1)玻棒涂布：选用一根直径为1～1.2cm的玻璃棒或玻璃管在两端绕几圈胶布，胶布的圈数视薄层的厚度而定，常用厚度为0.56～1.0mm，把吸附剂倒在玻璃板上，用这根玻璃棒在玻璃上将吸附剂向一个方向推动，即成薄板。
(2)倾斜涂布：将吸附剂浆液倒在玻璃上，然后倾斜使吸附剂漫布于玻板上面成薄层。
2、点样取制备好的薄板一块，在距底边1.5cm处划一条直线，在直线上每隔1.5～2cm作为一记号(用铅笔轻点一下，不可将薄层刺破)，共4个点。
用0.5mm直径的毛细管吸取取糖样品量约5～50g，点样体积约1-1.5 L，可分次滴加，控制点样斑点直径不超过2mm。
在点样过程中可用吹风机冷热风交替吹干样品，也可以让样自然干燥。
3、展层将已点样的薄板点样一端放入盛有展层溶剂的层析缸中，展层液面不得超过点样线，层析缸密闭，自下向上展层，当展层溶剂到达距薄析顶端约1cm处时取出薄板，前沿用铅笔或小针作一记号。
60℃烘箱内烘干或晾干。
4、将苯胺-二苯胺磷酸显色剂均匀喷雾在薄层上，置85℃烘箱内加热至层析斑点显现，此显色剂可使各种糖显现出不同的颜色。
5、样品中糖定性鉴定薄层显色后，根据各显色斑点的颜色相对位置，测算Rf值将混合样品图谱与标准样品图谱相比较或通过混合样品与标准样品Rf值的比较，确定混合样品中所分离的各个斑点分别为何种糖。
6、定量测定【影响Rf值的因素如下】①、展层溶剂的样品组分的性质：样品组分若在固定相中溶解度较大，在流动相中溶解度小，则Rf值小；反之，Rf值大。
②、吸附剂的性质和质量：不同批号和厂家的产品，其性质和质量不尽相同。
③、吸附剂的活度。
④、薄层的厚度。
⑤、层析槽的形状，大小和饱各度。
⑥、展层方式。
⑦、杂质的存在和量的多少。
⑧、展层的距离。
⑨、样品量。
⑩、温度。
由于影响Rf值因的因素很多，故不能仅根据Rf值来鉴定未知样品组分。
一般采用几种薄层层析法来确证样品的未知组分，如一种用吸附薄层层析，另一咱用聚酰胺薄层层析等。
实践中，也可把未知样品与标准品混合点样，然后进行薄层层析。
如果在几个不同类型的薄层层析中，两者都不发生分离，则可证明这两个化全物是相同的。
【注意事项】1、制备薄板时，薄板的厚度及均一性对样品的分离效果和Rf值的重复性影响很大，普通薄层厚度以250m为宜。
若用薄层层析法制备少量的纯物质时，薄厚度可稍大些，常见为500～700m，甚至1～2mm。
2、活化后的薄层析在空气中不能放置太久，否则会因吸潮降低活性。
3、用于薄层层析的样品溶液的质量要求非常高，样品中必须不含盐，若含有盐分则会引起不严重的拖尾现象，甚至有时得不到正确的分离效果。
4、样品溶液应具有一定的浓度，一般为1～5g/L，若样品太稀，点样次数太多，就会影响分离效果，所以必须进行浓缩处理。
5、样品的溶剂最好使用挥发性的有机溶液(如乙醇，氯仿等)，不宜用水溶液，因为水分子与吸附剂的相互作用力较弱，当它点据了吸附表面上的活性位置时，就使吸附剂的活性降低，从而使斑点扩散。
6、样品点样量不宜太多，若点样量超载(即超过该吸附剂负载能力)，则会降低Rf值，层析斑点的形状被破坏。
点样量一般为几到几十g，体积为1～20 L。
7、展层必须在装闭的器皿中进行，器皿事先应用展层溶液剂饱和，把薄板的点样端浸入展层剂中，深度约为0.5～1.0cm。
千万勿使点样斑点浸入展层溶剂中。
8、展层溶剂的选择：(1)、根据溶剂的结构，性质的不同而定，主要以溶液剂的极性大小为依据。
在同一吸附剂上，溶剂极性越大，对同一性质的化合物的洗脱能力也越大，即在薄层板上把这一化合物推进得越远，Rf值也越大。
如果发现用一种溶液支展开某一化合物，其Rf值太小，则可考虑换用另一种极性较大的溶剂，或在原来的溶剂中加入一定量极性较大的溶液进行展层。
溶液极性极大小次序如下：水>甲醇>正丙醇>丙酮>乙酸甲酯>乙酸乙酯>乙醚>氯仿>三氯甲烷>苯>三氯乙烯>四氯化碳>二硫化碳>石油醚。
(2)、根据被分离物质的极性和吸附剂的性质而定。
在同一吸附剂上，不同化合物的吸附规律是：①饱和碳氢化合物不易吸附或吸附不牢。
②不饱和碳氢化合物被吸附，含双键越多，吸附得越牢。
③碳氢化合物被一个功能基取代后，其吸附性增大。
各功能基使吸附性增大的递增顺序是：在薄层上，对于吸附较大合物，一般需用极性较大的溶剂(展层剂)才能推动它。
表2列出一些物质的展层溶液系统。
(3)、若样品组分具有酸碱性，则可将展层的pH值作适当调整。
若样品组分为碱性，则调节展层溶剂pH为碱性，以增加展层溶液的分辨率，使样品在薄板上展层后，斑点圆而集中，避免拖尾现象。
当样品组分具有酸性时，调节展层溶剂pH为酸性，可得到圆而集中的斑点。
9、在薄层层析时，层析缸溶剂饱和度对分离效果影响较大，在不饱和层和析缸中，展层易引起边缘较应，因为极性较弱的溶液和沸点较低的溶剂在边缘挥发得快，从而使样品组分在边缘的Rf值高于中部的Rf值，用饱和的层析缸可以消除边缘效应。
10、为了获得更好的薄层层析的效果，也可采用双向展层，多次展层和连续展层。
多次展层是指选用一种溶剂展开至一定距离后，将薄层板取出，待溶剂挥发后再按同一方向用第二种溶液展开。
11、薄层层析展开后，对被分离的样品组分进行定性或定量分析，都要用不同的显色方法先确定它们的位置。
有的物质在紫外灯下可显示出荧光斑点，如核苷酸等；对于在紫处光下不显荧光的样品，可用荧光薄层检出，该薄层的制法是将荧光物质(1.5%硅酸镉粉)加入吸附剂中，或在薄板上喷0.04%荧光钠水溶液，0.5%硫酸奎宁醇溶液及1%磺基水杨酸的丙酮溶液；有的有色物质在展层后可显示有颜色的斑点；对无色化合物的显色，主要采用两种方法，即物理方法和化学方法。
物理方法如用紫外灯照射，属非破坏性显色方法。
化学方法如用茚三酮显色剂喷雾显色可使氨基酸类化合物显色；对于无机吸附剂制成的薄层，可用强腐蚀性显色剂如硫酸，硝酸或其他混合溶液，因为这些显色剂几乎可使所有机化合物转变成碳，为破坏性显色方法，此类显色剂称为万能显色剂，但它们不适用于定量测定或制备用的薄层上。
【材料与试剂】1、实验材料：木糖(或棉子糖)，葡萄糖，蔗糖，混合样品，硅胶G2、实验试剂(1)1%糖标准溶液：取木糖(或棉子糖)，葡萄糖，蔗糖各1g，分别用75%乙醇溶解并定容到100mL 。
(2)1%糖标准混合溶剂：取上述各种糖各1g，混合后用75%乙醇溶解并定容至100mL。
(3)0。
1mol/L硼酸(H3BO3)溶液。
(4)展层溶剂：氯仿：甲醇=60：40(V/V)。
(5)苯胺-二苯胺-磷酸显色剂：1g二苯胺溶于由1mL苯胺，5mL85%磷酸，50mL丙酮组成的混合溶液中。
【实验器材】①烧杯；②玻璃板(8cm 12cm)；③层析缸( 15cm 30cm)；④毛细管( 0。
5mm)；⑤玻棒；⑥喷雾器；⑦烘箱；⑧尺，铅笔；⑨干燥器。
【思考题】中生网收集整理1、本实验在操作过程中有哪些方面是实验成功的关键2、分析本实验的层析图谱。