酶解辅助提取伊贝母总生物碱的方法与制作流程
生物碱的提取和分离技术
生物碱的提取和分离技术生物碱是一类广泛存在于自然界中的具有生物活性的化学物质，其具有众多的药理活性，被广泛应用于医药、农业、食品等领域。
为了获得高纯度的生物碱，需要采用适当的提取和分离技术。
本文将介绍生物碱的提取和分离技术。
生物碱在自然界中存在的形式多种多样，包括植物、动物、微生物等生物体中。
为了获得高纯度的生物碱，需要采用合适的提取方法，通常可以分为以下几种方法。
1、溶剂提取法溶剂提取法是一种常见的提取生物碱的方法，通过有机溶剂与生物材料发生相互作用，将生物碱从原料中提取出来。
该方法具有提取速度快，操作简便的优点，但溶剂的选择及提取工艺控制对提取效率及提取物纯度有着很大的影响。
2、超声波辅助提取法超声波辅助提取法利用超声波低频振动的能量作用于生物材料，破碎细胞壁使得生物碱向溶剂中释放。
超声波提取法具有操作简便、提取效率高、成本低、产物纯度高等优点，被广泛应用于提取生物碱。
微波辅助提取法是一种高效快速的提取方法，利用微波辐射能量作用于含有生物碱的样品，使其分子以热运动形式高速振动，从而达到提取目的。
微波辅助提取法具有提取效率高、时间短、操作简便等优点，被广泛应用于生物碱的提取。
生物碱的分离技术是将获得的生物碱进行纯化的重要手段，主要包括以下几种方法。
1、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种常用的分离技术，其通过传统液相色谱技术的改进，利用高压下将溶液通过色谱柱进行分离。
该法具有分离速度快、分离效率高、产物纯度高等优点，成为生物碱分离的重要手段。
2、毛细管电泳法毛细管电泳法是一种基于电泳原理的分离方法，其利用毛细管的细微通道结构进行分离。
该分离方法具有分离速度快、精度高、自动化程度高等优点。
3、胶体电泳法胶体电泳法是一种基于胶体粒子-溶液相互作用力的分离方法，其利用胶体颗粒的特殊性质进行分离。
该分离方法具有分离效率高、操作简便的优点，被广泛应用于生物碱的分离。
总结：生物碱的提取和分离技术是合成优质生物碱的关键技术，在当前化学技术的发展中具有重要意义。
生物碱的提取和分离技术
生物碱的提取和分离技术生物碱是一类含有碱性氮原子的天然产物，广泛存在于植物和微生物中，具有广泛的生物活性和药理作用。
生物碱的提取和分离技术是研究和开发生物碱的重要手段之一。
本文将介绍生物碱提取和分离的一般步骤和常用技术。
生物碱提取的一般步骤包括采集植物材料、研磨、浸泡、提取和浓缩等几个关键步骤。
采集新鲜的植物材料，并将其处理成适合提取的形态，如干燥、粉碎或切片等。
然后，将植物材料浸泡在适当的溶剂中，例如乙醇、甲醇或水等，以提高生物碱的溶解度。
浸泡的时间可以根据具体需求进行调整，通常为几小时到几天不等。
在浸泡过程中，需反复搅拌或震荡，以促进生物碱的释放和溶解。
浸泡结束后，通过过滤或离心等方法，将植物材料分离出来。
接下来，将所得的提取液加热蒸发，浓缩生物碱溶液，以得到较高的生物碱浓度。
生物碱的分离技术主要包括色谱技术、凝胶电泳技术和质谱技术等。
色谱技术是最常用的分离和纯化方法之一。
色谱技术根据生物碱在固定相和流动相之间的相互作用进行分离。
常用的色谱方法包括层析、柱层析、薄层层析和气相色谱等。
高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分离技术，可以根据生物碱的特性，选择适当的流动相和固定相条件，将混合物中的生物碱分离出来，并进行定量和纯化。
凝胶电泳技术主要应用于生物碱的分子量测定和纯化。
由于生物碱通常具有较高的电荷性质，凝胶电泳可以利用电荷的不同，将不同分子量的生物碱分离开来。
质谱技术是一种高灵敏度的分析方法，可用于生物碱的结构鉴定和定量分析。
通过质谱技术，可以获得生物碱的质谱图谱，并通过与数据库进行比对，确定生物碱的结构和分子量。
生物碱的提取和分离技术是研究和开发生物碱的重要手段。
通过采取适当的提取步骤和选择合适的分离技术，可以高效地提取生物碱并进行纯化和分析。
这些技术的应用使得我们能够更好地了解生物碱的性质和功能，并为药物开发和天然产物利用提供了基础和支持。
酶法提取贝母中总生物碱的工艺研究
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中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 38 卷第 9 期 2007 年 9 月
连结, 采用纤维素酶可酶解破坏 -D-葡萄糖键, 使 植物细胞壁破坏, 增加了有效成分的溶出率[ 5] 。纤维 素酶作为一种蛋白质, 其酶解效果受酶解温度、pH 值、底物浓度、激动剂、抑制剂等多种因素的影响, 因 此提示在将纤维素酶用于其他中药材提取和工业化
试验号 A
1
1
2
1
ห้องสมุดไป่ตู้
3
1
4
2
5
2
6
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7
3
8
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3
K1
0. 067 7
K2
0. 101 3
K3
0. 103 7
R
0. 036 0
B
1 2 3 1 2 3 1 2 3 0. 089 5 0. 095 5 0. 087 7 0. 007 8
C
1 2 3 2 3 1 3 1 2 0. 088 7 0. 094 5 0. 089 5 0. 005 8
表 3 两种提取方法的结果比较 Table 3 Comparison of two extracting methods
加酶组
1 2 3
贝母总生物碱 提取率/ % 0. 106 5 0. 105 9 0. 107 1
未加酶组
1 2 3
贝母总生物碱 收率/ % 0. 076 5 0. 076 0 0. 077 0
酶解法提取川贝母组培物总生物碱
酶解法提取川贝母组培物总生物碱作者：廖黎樊荣徐文俊刘昆王跃华来源：《江苏农业科学》2016年第09期摘要：为了研究四川道地名贵药材川贝母及其组织培养物有效药用成分总生物碱的提取和含量测定方法，以及总生物碱含量的变化规律。
利用纤维素酶酶解细胞壁中纤维素促进生物碱溶出原理，以酶解温度（A）、pH值（B）、酶用量（C）和酶解时间（D）为影响因素进行总生物碱的酶解法正交提取试验，结合饱和Ca（OH）2溶液浸渍和乙醇回流法提取生物碱；通过酸性染料比色法测定总生物碱含量。
结果表明，总生物碱的酶解法最佳提取工艺为A3B3C2D1，采用酶解法最佳提取工艺，川贝母及其组织培养物总生物碱提取得率分别提高28.74%、42.86%，川贝母组培物的总生物碱含量超过川贝母114.07%。
酶解法提高了川贝母有效药用成分总生物碱的得率，经过研发得到的川贝母组织培养物总生物碱含量呈现快速增长规律，为以名贵道地药材川贝母的新药研发奠定了理论和应用基础。
关键词：川贝母；组培物；总生物碱；酶解法；正交试验中图分类号： R284.2 文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）09-0313-03川贝母（Fritillaria cirrhosa D. Don）是来源于百合科（Liliaceae）贝母属（Fririllaria L.）中多种植物的鳞茎，有悠久的使用历史，早在汉代《神农本草经》中就有记载，将其列为中品。
按其功能一般分为浙贝母与川贝母两大类，浙贝母清热化痰、开郁散结；川贝母清热润肺、化痰止咳，用于肺热燥咳、阴虚劳嗽、干咳少痰、咯痰带血[1-3]。
本研究以实验室培养的川贝母组培物为原料，以贝母素乙为对照品，探索在采用酸性染料比色法[4-6]前使用纤维素酶进行酶解，再采用饱和Ca（OH）2溶液浸渍和乙醇回流浸提工艺提取总生物碱以及用酸性染料比色法测定提取物中总生物碱的含量。
1 仪器与材料1.1 仪器ESJ120-4电子分析天平（沈阳龙腾电子仪器有限公司）、UV-1100型紫外可见光分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）、HH-4数显恒温水浴锅（常州澳华仪器有限公司）、DHG9141型电热恒温干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）、KG22V11T1/222西门子自动温控冰箱。
生物碱的提取和分离技术
生物碱的提取和分离技术生物碱是一类植物次级代谢产物，具有广泛的药理活性和应用价值。
它们通常存在于植物体内的细胞器中，如液泡、叶绿体和线粒体等。
由于其结构和性质的多样性，生物碱的提取和分离技术也多种多样。
本文将介绍几种常用的生物碱提取和分离技术。
最常用的生物碱提取方法是溶剂提取法。
这种方法根据生物碱的性质选择合适的溶剂，在适当的温度和pH下进行溶剂萃取。
常见的溶剂有乙醇、醚、酸和水等。
通常将粉碎的植物样品与溶剂混合，在适当的时间内进行充分搅拌和浸泡，使生物碱溶解到溶剂中。
然后，通过离心、滤液等操作进行提取，最后通过蒸发溶剂或冷冻浓缩等方法得到生物碱的浓缩提取物。
萃取技术中的超声波提取法也常用于生物碱的提取。
超声波提取法利用超声波的机械振动效应和能量效应来增强溶剂对植物样品的渗透和扩散，并破坏细胞壁，使生物碱更容易溶解到溶剂中。
在超声波提取过程中，将植物样品和溶剂置于超声波清洗机中，通过超声波震荡来增加溶剂和样品之间的接触面积和质量传递速率，提高生物碱的提取效率。
色谱技术也是生物碱分离的重要手段之一。
色谱技术包括层析、气相色谱、液相色谱等。
液相色谱是最常用的生物碱分离方法之一。
在液相色谱中，根据生物碱的物理化学性质和它们与色谱柱固定相之间的相互作用选择适当的分离方法，如离子交换色谱、凝胶过滤色谱等。
这些方法通过调节流动相的性质和运行条件，从复杂的混合物中逐一分离和纯化目标生物碱。
还有一些其他分离技术，如凝胶电泳、萃取电泳、薄层色谱等。
这些技术通常用于生物碱的进一步分析和鉴定。
凝胶电泳可以根据生物碱的电荷和分子大小进行分离，萃取电泳则利用电场调控生物碱的迁移速率和方向来实现分离。
薄层色谱可以通过植物样品的吸附、分配和解吸作用分离和纯化生物碱。
生物碱的提取和分离技术有很多种，每种技术都有其特点和适用范围。
研究人员可以根据自己的需求选择合适的技术来进行生物碱的提取和分离，以便更好地研究和利用这一珍贵的植物次级代谢产物。
一种伊贝母提取物的制备方法和用途[发明专利]
![一种伊贝母提取物的制备方法和用途[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/4b8f218368dc5022aaea998fcc22bcd126ff42f9.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610238239.1(22)申请日 2016.04.15(71)申请人 中国科学院新疆理化技术研究所地址 830011 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市北京南路40号附1号(72)发明人 阿布力米提·伊力 李燕 阿吉艾克拜尔·艾萨 (74)专利代理机构 乌鲁木齐中科新兴专利事务所 65106代理人 张莉(51)Int.Cl.A61K 36/8966(2006.01)A61P 11/14(2006.01)(54)发明名称一种伊贝母提取物的制备方法和用途(57)摘要本发明涉及一种伊贝母提取物的制备方法和用途，该方法将伊贝母干燥、粉碎，加浓氨水溶液浸润，加入乙醇回流提取，过滤，减压回收至无醇味；将通过Amberlite FPC 22Na或Amberlite200大孔强酸性阳离子吸附树脂，用含氨水的乙醇溶液通过大孔强酸性阳离子吸附树脂，将树脂上吸附的生物碱洗脱下来，收集洗脱液并减压回收浓缩，将浓缩的提取液置于干燥箱内干燥，得到伊贝母提取物；通过本发明所述方法获得的伊贝母提取物能够在延长咳嗽潜伏期、减少咳嗽次数、促进酚红分泌方面组间具有显著性差异（P <0.01）；具有镇咳化痰功效，本发明所述方法避免了使用石油醚、氯仿等有机溶剂的问题。
权利要求书1页 说明书5页 附图2页CN 105770375 A 2016.07.20C N 105770375A1.一种伊贝母提取物的制备方法，其特征在于按下列步骤进行：a、将伊贝母干燥、粉碎过60目筛，得伊贝母药材粉末；b、将步骤a得到的粉末加入浓氨水溶液浸润12小时，再加入5-30倍量60-95%的乙醇回流提取1-4次，每次0.5-3小时，过滤，合并滤液，减压回收至无醇味，得提取液；c、将步骤b得到的提取液通过Amberlite FPC 22Na或Amberlite 200大孔强酸性阳离子吸附树脂，然后用3-6倍量树脂的去离子水除杂，再将含1-3mol/L氨水的体积浓度为65%-95%乙醇溶液，2-5倍量树脂/小时的流速，6-10倍量树脂的用量洗脱树脂上吸附的生物碱，将树脂上吸附的生物碱洗脱下来，收集洗脱液并减压回收浓缩至浸膏；d、将步骤c所得浸膏置于干燥箱内以温度40-55℃干燥72小时，得到伊贝母提取物。
从贝母中同时分离提取总生物碱和淀粉的方法[发明专利]
专利名称：从贝母中同时分离提取总生物碱和淀粉的方法专利类型：发明专利
发明人：高文远,王书军,陈海霞,于璟琳
申请号：CN200510015970.X
申请日：20051109
公开号：CN1765910A
公开日：
20060503
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种从贝母中同时分离提取总生物碱和淀粉的方法。
该方法包括以下过程：贝母粗粉加入乙醇中，加热回流提取、超声提取或冷浸提取，得到的提取物浓缩，回收乙醇得到浸膏，浸膏用盐酸溶解，过滤，酸水液依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，再用氨水碱化至pH9以上，用氯仿萃取至上清液无颜色为止，回收氯仿得总生物碱；残渣烘干粉碎，细粉悬浮于NaOH或NaHSO溶液中，经静置，弃去上层液体。
再用蒸馏水反复使沉淀悬浮，直到上层溶液无色为止，倾去上清液，沉淀液离心分离，倾去上清夜，去掉沉淀层上下层的杂质，得到纯净的贝母淀粉。
本发明分离提取方法简单，得到的总生物碱和淀粉产率高，而且淀粉纯度高，开发利用价值高。
申请人：天津大学
地址：300072 天津市南开区卫津路92号
国籍：CN
代理机构：天津市学苑有限责任专利代理事务所
代理人：任延
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酶辅助提取法操作方法
酶辅助提取法操作方法酶辅助提取法是一种利用酶的催化作用来提高物质提取效率的方法。
该方法广泛应用于生物化学、农业、医药等领域，常用于提取蛋白质、核酸、多糖等生物大分子物质。
下面将详细介绍酶辅助提取法的操作方法。
1. 实验前准备- 准备所需的实验仪器和试剂，包括酶制剂、基质样品、缓冲液、洗涤液、显色剂等。
- 清洗实验仪器，以保证实验的准确性和可靠性。
- 根据实验目的选择合适的酶制剂，常用的酶包括蛋白酶、核酸酶、淀粉酶等。
2. 准备基质样品- 根据实验需要，选择合适的基质样品进行提取。
基质样品可以是细胞、组织、食品等。
- 将基质样品切碎或粉碎，以提高酶的作用效果。
3. 提取过程- 将切碎或粉碎的基质样品加入适量的缓冲液中，制备样品混悬液。
- 根据实验需要选择合适的酶制剂，将酶制剂加入样品混悬液中，并进行充分混合。
- 对样品混悬液进行酶解反应，通常需要控制反应时间和温度，以达到最佳的酶催化效果。
反应时间和温度的选择应根据基质样品的特性和酶制剂的要求进行。
- 在酶解反应过程中进行短时间的混匀，以保证酶能均匀地作用于样品。
- 酶解反应结束后，可以通过离心或过滤等方法，获取溶液中溶解的目标物质。
4. 后处理步骤- 对提取得到的溶液进行适当的清洁和纯化，以去除杂质和未被酶降解的物质。
- 可以使用洗涤液或纯化试剂进行溶液的清洗和纯化。
- 对纯化后的物质进行浓缩，以便进行进一步的分析和应用。
5. 结果分析和评估- 对提取得到的物质进行定性和定量分析，以确定提取效果和纯度。
- 可以使用分光光度计、电泳等常用实验仪器和方法进行分析。
- 根据实验结果进行数据处理和统计分析，评估酶辅助提取法的提取效率和适用性。
总结：酶辅助提取法是一种利用酶的催化作用来提高物质提取效率的方法。
其操作方法包括实验前准备、准备基质样品、提取过程、后处理步骤以及结果分析和评估。
通过严格控制实验条件和操作步骤，可以有效地实现酶辅助提取，提高提取效率和纯度。
一种贝母生物碱的提取方法及其抗肺纤维化用途
一种贝母生物碱的提取方法及其抗肺纤维化用途随着生物技术的不断发展，生物化学领域的研究也越来越深入。
贝母生物碱是一种具有重要药用价值的天然生物活性物质，被广泛应用于中药制剂中。
本文旨在介绍一种贝母生物碱的提取方法及其在抗肺纤维化方面的应用。
首先，我们需要了解贝母生物碱的化学结构和生物活性。
贝母生物碱属于天然生物碱类化合物，化学式为C27H35NO9，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，贝母生物碱的提取和应用一直备受关注。
贝母生物碱的提取方法可以采用多种技术，如超声波提取、微波提取、酶解提取、有机溶剂提取等。
其中，超声波提取是一种常用的方法，具有操作简便、提取效率高等优点。
具体操作步骤如下：首先，将贝母样品粉碎成细粉末，然后用70%乙醇浸泡1小时；接着，将混合液放入超声波提取仪中，超声波频率为40kHz，功率为400W，提取时间为30分钟；最后，过滤提取液，用旋转蒸发仪浓缩，得到贝母生物碱提取物。
贝母生物碱提取物具有很强的药理活性，可用于治疗多种疾病。
其中，抗肺纤维化是其一项重要的应用。
肺纤维化是一种常见的肺部疾病，其病因未完全明确，但通常伴随着肺部纤维化和瘢痕组织增生。
贝母
生物碱可通过抑制肺纤维化过程中的炎症反应和氧化应激，达到抗肺纤维化的效果。
一些实验研究表明，贝母生物碱的抗纤维化作用与其调节肺组织的基质金属蛋白酶有关。
总之，贝母生物碱具有重要的药理活性，在中药制剂中应用广泛。
本文介绍了贝母生物碱的提取方法及其在抗肺纤维化方面的应用，希望能够为相关领域的研究提供一定的参考和启示。
一种贝母生物碱的提取方法及其抗肺纤维化用途
一种贝母生物碱的提取方法及其抗肺纤维化用途贝母（Fritillaria ussuriensis Maxim.），又称川贝母，是一种常见的中药材，具有止咳化痰、润肺降火等药理作用。
同时，贝母中富含贝母生物碱，也是其主要有效成分之一、贝母生物碱具有多种生理活性，如抗炎、抗氧化和抗肿瘤等作用，对肺纤维化也有一定的抑制作用。
提取贝母生物碱的方法通常包括以下几个步骤：1.制备贝母样品：将贝母干燥后研磨成粉末，可以选择不同粒度的粉末进行提取。
2.提取溶剂选择：选择适合提取贝母生物碱的溶剂，常用的有乙醇、醚类溶剂等。
可以通过试验确定最佳的提取溶剂。
3.提取过程：将贝母粉末与溶剂进行浸泡，在适当的温度条件下进行搅拌或超声波提取，使贝母生物碱溶解到溶剂中。
4.过滤和浓缩：将提取液经过滤纸过滤，去除固体残渣。
然后对过滤液进行蒸发浓缩，得到贝母生物碱的浓缩物。
5.结晶纯化：对浓缩物进行结晶纯化，可以通过加热、冷却或添加其他化学试剂等方法得到纯度更高的贝母生物碱。
提取得到的贝母生物碱可以应用于抗肺纤维化的治疗中。
肺纤维化是一种病理性的肺部疾病，其特征为肺组织纤维化和胶原沉积增多，导致肺功能受损。
已有研究证实，贝母生物碱具有一定的抗纤维化作用，并且能够调节肺组织的炎症反应。
研究表明，贝母生物碱能够通过多种途径发挥抗肺纤维化作用。
首先，贝母生物碱可以减轻炎症反应，抑制炎症细胞的释放。
其次，贝母生物碱可以抑制胶原蛋白的合成和分泌，减少肺间质的纤维化。
此外，贝母生物碱还能够减轻氧化应激反应，抑制肺纤维化过程中产生的自由基。
为了更好地发挥贝母生物碱的抗肺纤维化作用，可以采用口服、注射等不同给药途径。
研究人员还可以根据具体情况，合理地调整贝母生物碱的剂量和使用时间，以达到最佳的治疗效果。
需要注意的是，贝母生物碱的提取方法和抗肺纤维化的应用研究仍处于初步阶段，还需要进一步的临床实验和研究来验证其疗效和安全性。
此外，贝母生物碱作为一种天然产物，与其他药物的相互作用等问题也需要进一步研究。
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本技术涉及一种酶解辅助提取伊贝母中总生物碱的方法，该方法将伊贝母干燥粉碎过筛，称取伊贝母粉末，加入pH=36的酸水，再加入纤维素酶，水浴搅拌进行反应，过滤，收集提取液，将经酶解的伊贝母置于室温下，用乙醇或酸水提取，收集、合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱。
本技术将纤维素酶应用于伊贝母生物碱的提取中，在优选的常规提取工艺前加上酶解步骤，以期达到提高提取率，并为生物酶解技术在中药有效成分提取方面的应用提供依据。
本技术提取率高，工艺简单，易于工业化生产，是提取生物碱的理想方法之一。
技术要求1.一种酶解辅助提取伊贝母总生物碱的方法，其特征在于按下列步骤进行：a．将伊贝母粉碎，过60-80目筛，得伊贝母药材粉末；b．将步骤a所得伊贝母粉末按料液比1:7-1:10 加入pH=3-6的酸水，再加入纤维素酶，于水浴25-50℃中酶解1-4h，过滤，收集提取液，其中纤维素酶的加入量为伊贝母药材重量的0.5-2%；c．将步骤b经酶解后的伊贝母置于室温下，用6-30倍的体积浓度0.1-1%的酸水提取2-4次，每次0.5-3h，收集，合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱；或将步骤b经酶解后的伊贝母按料液比为1:10-40，用体积浓度为65-95%的乙醇加热回流提取，提取温度50-80℃，提取2-4次，每次0.5-3h，收集，合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱。
技术说明书一种酶解辅助提取伊贝母总生物碱的方法技术领域本技术涉及一种酶法与传统方法相结合，从伊贝母鳞茎中高效提取生物碱的方法，该提取物可作为治疗或预防咳嗽相关的药物制备原料，属于医药技术领域。
背景技术伊贝母是《中国药典》收载的常用药材，为百合科植物伊犁贝母Fritillariapallidiflora Schrenk或新疆贝母F.walujewii的干燥鳞茎。
具有清热润肺、化痰止咳的功效，在临床应用方面与药材川贝母相媲美，具有“止咳圣药”之称，是中医处方和中成药生产常用的药材。
其野生品种唯独生长在中国新疆，目前大规模种植伊贝母产业己成为拉动新疆当地农牧民收入的重要途径，为新疆特色药材。
利用酶制剂或酶工程法转化天然产物中的有效成份的研究是在20世纪90年代兴起的新技术。
目前,酶法在中药转化中的应用主要是纤维素酶的应用。
大部分中药材的细胞壁是由纤维素构成的,植物的有效成分往往包裹在细胞壁内，天然产物中植物药的有效成分存在于细胞质和细胞核内,极少数存在于细胞间隙中。
新鲜药材经干燥后细胞萎缩,同时细胞液泡中的药用成分呈结晶或无定性状态沉积在细胞壁内,甚至形成空隙,细胞质膜的半透性丧失,提取这些有效成分时,多用溶剂法浸泡药材。
在液体静压和毛细管的作用下,使溶剂透过药材空隙进入细胞组织内。
此时,溶剂通过扩散、渗透作用透过细胞壁进入细胞组织内部,溶解有效成分,造成细胞内外的浓度差。
有效成分接着随溶剂扩散至溶剂主体,从而达到提取目的。
而在整个过程中,植物细胞壁不溶于大部分溶剂,像屏障一样阻碍了细胞壁内有效成分的溶出时间和溶出量。
因此,在提取过程中,降解细胞组织尤其是不溶性的细胞壁是非常有意义的。
近年来,纤维素酶在各个领域的应用极为广泛,在中草药提取方面的工业化应用也已进入初开发阶段,国内已民用工业学者对其进行了初步探索。
细胞壁的不溶性主要是由其结构决定的。
细胞壁是原生质体生命活动的产物,是植物细胞周围没有生命的部分,具有一定的坚韧性。
由于大部分天然产物的细胞壁都是由纤维素类物质构成的,用传统的热水、酸、碱、有机溶剂浸提法对其有效成分进行提取,受细胞壁主要成分纤维素的阻碍,提取效率较低。
纤维素酶可以破坏尽葡萄糖链,改变细胞壁的通透性,以利于有效成分的溶出,提高药物成分的提取率。
技术内容本技术目的在于，提供一种酶解辅助提取伊贝母总生物碱的方法，该方法将伊贝母干燥粉碎过筛，称取伊贝母粉末，加入pH＝3-6的酸水，再加入纤维素酶，水浴搅拌进行反应，过滤，收集提取液，将经酶解的伊贝母置于室温下，用乙醇或酸水提取，收集、合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱。
本技术将纤维素酶应用于伊贝母生物碱的提取中，在优选的常规提取工艺前加上酶解步骤，以期达到提高提取率，并为生物酶解技术在中药有效成分提取方面的应用提供依据。
本技术提取率高，工艺简单，易于工业化生产，是提取生物碱的理想方法之一。
本技术所述的一种酶解辅助提取伊贝母总生物碱的方法，按下列步骤进行：a.将伊贝母粉碎，过60-80目筛，得伊贝母药材粉末；b.将步骤a所得伊贝母粉末按料液比1:7-1:10加入pH＝3-6的酸水，再加入纤维素酶，于水浴25-50℃中酶解1-4h，过滤，收集提取液，其中纤维素酶的加入量为伊贝母药材重量的0.5-2％；c.将步骤b经酶解后的伊贝母置于室温下，用6-30倍的体积浓度0.1-1％的酸水提取2-4次，每次0.5-3h，收集，合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱；或将步骤b经酶解后的伊贝母按料液比为1:10-40用体积浓度为65-95％的乙醇加热回流提取，提取温度50-80℃，提取2-4次，每次0.5-3h，收集，合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱。
本技术所述的一种酶解辅助提取伊贝母总生物碱的方法，该方法将纤维素酶应用于伊贝母生物碱的提取中，在优选的常规提取工艺前加上酶解步骤，将经酶解后的伊贝母用0.1-1％(v/v)的酸水提取时，出膏率为21.1-29.4％，含总生物碱以西贝素计为0.7-5.2％；或将酶解后的伊贝母用乙醇进行加热回流提取时，出膏率为23-30.2％，含总生物碱以西贝素计为0.5-5.4％。
其提取率较无酶解时提高10％-50％，此为生物酶解技术在中药有效成分提取方面的应用提供依据。
本技术提取率高，工艺简单，易于工业化生产，是提取生物碱的理想方法之一。
具体实施方式实施例1a.将5g伊贝母粉碎，过60目筛，得伊贝母药材粉末；b.将步骤a所得伊贝母粉末按料液比1:7加入pH＝4的酸水，再加入纤维素酶，纤维素酶用量为伊贝母药材重量的2％，于水浴温度40℃中酶解3h后，过滤，收集提取液；c.将步骤b经酶解后的伊贝母置于室温下，用10倍量的体积浓度0.5％的酸水，提取3次，每次2.5h，收集、合并提取液，减压浓缩及得伊贝母总生物碱，其出膏率为24.4％，含总生物碱以西贝素计为4.8％。
实施例2a.将5g伊贝母粉碎，过80目筛，得伊贝母药材粉末；b.将步骤a所得伊贝母粉末按料液比加入1:10pH＝5的酸水，再加入纤维素酶，纤维素酶用量为伊贝母药材重量的2％，于水浴温度25℃中酶解2h后，过滤，收集提取液；c.将步骤b经酶解后的伊贝母按料液比为1:10，用体积浓度85％的乙醇进行加热回流提取，提取温度70℃，提取3次，每次3h，收集、合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱，其出膏率为29.4％，含总生物碱以西贝素计为4.4％。
实施例3a.将5g伊贝母粉碎，过60目筛，得伊贝母药材粉末；b.将步骤b所得伊贝母粉末按料液比1:8加入pH＝3的酸水，再加入纤维素酶，纤维素酶的加入量为伊贝母药材重量的0.5％，于水浴温度25℃中酶解1h，过滤，收集提取液；c.将步骤b经酶解后的伊贝母置于室温下，用6倍的体积浓度0.1的酸水提取2次，每次0.5h，收集，合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱；出膏率为21.1％，含总生物碱以西贝素计为0.7％。
实施例4a.将5g伊贝母粉碎，过80目筛，得伊贝母药材粉末；b.将步骤a所得伊贝母粉末按料液比1:9加入pH＝4的酸水，再加入纤维素酶，纤维素酶的加入量为伊贝母药材重量的1％，于水浴温度30℃中酶解2h，过滤，收集提取液；c.将步骤b经酶解后的伊贝母置于室温下，用10倍的体积浓度0.5％的酸水提取3次，每次1h，收集，合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱；出膏率为23.1％，含总生物碱以西贝素计为4.6％。
实施例5a.将5g伊贝母粉碎，过60-80目筛，得伊贝母药材粉末；b.将步骤a所得伊贝母粉末按料液比1:10加入pH＝6的酸水，再加入纤维素酶，纤维素酶的加入量为伊贝母药材重量的1.5％，于水浴温度50℃中酶解4h，过滤，收集提取液；c.将步骤b经酶解后的伊贝母置于室温下，用30倍的体积浓度1％的酸水提取4次，每次3h，收集，合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱；出膏率为28.4％，含总生物碱以西贝素计为3.2％。
实施例6a.将5g伊贝母粉碎，过60-80目筛，得伊贝母药材粉末；b.将步骤a所得伊贝母粉末按料液比1:7加入pH＝3的酸水，再加入纤维素酶，纤维素酶的加入量为伊贝母药材重量的0.5％，于水浴温度25℃中酶解1h，过滤，收集提取液；c.步骤b经酶解后的伊贝母按料液比为1:10，用体积浓度为65％的乙醇加热回流提取，提取温度50℃，提取2次，每次0.5h，收集，合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱，出膏率为23.6％，含总生物碱以西贝素计为0.9％。
实施例7a.将5g伊贝母粉碎，过70目筛，得伊贝母药材粉末；b.将步骤a所得伊贝母粉末按料液比1:8加入pH＝4的酸水，再加入纤维素酶，纤维素酶的加入量为伊贝母药材重量的1％，于水浴温度30℃中酶解2h，过滤，收集提取液；c.步骤b经酶解后的伊贝母按料液比为1:20，用体积浓度为70％的乙醇加热回流提取，提取温度60℃，提取3次，每次1h，收集，合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱，出膏率为28.9％，含总生物碱以西贝素计为1.4％。
实施例8a.将5g伊贝母粉碎，过80目筛，得伊贝母药材粉末；b.将步骤a所得伊贝母粉末按料液比1:9加入pH＝5的酸水，再加入纤维素酶，纤维素酶的加入量为伊贝母药材重量的1.5％，于水浴温度40℃中酶解3h，过滤，收集提取液；c.步骤b经酶解后的伊贝母按料液比为1:30，用体积浓度为85％的乙醇加热回流提取，提取温度70℃，提取4次，每次2h，收集，合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱，出膏率为17.2％，含总生物碱以西贝素计为1.9％。
实施例9a.将5g伊贝母粉碎，过60-80目筛，得伊贝母药材粉末；b.将步骤a所得伊贝母粉末按料液比1:10加入pH＝6的酸水，再加入纤维素酶，纤维素酶的加入量为伊贝母药材重量的2％，于水浴温度50℃中酶解4h，过滤，收集提取液；c.步骤b经酶解后的伊贝母按料液比为1:40，用体积浓度为95％的乙醇加热回流提取，提取温度80℃，提取4次，每次3h，收集，合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱，出膏率为10.9％，含总生物碱以西贝素计为4.2％。
实施例10将实施例1-9任意一种得到的伊贝母总生物碱进行含量测定，结果显示：总生物碱含量较没有酶解时提高一半左右。