HIV实验室ELISA检测方法
HIVELISA法检测操作程序
HIV ELISA法检测操作程序1简介使用前将试剂盒所有试剂自低温箱内取出置室温复温30分钟，取出所需的条板,剩余的及时封存。
注意不同批号的试剂不得混淆。
本品系用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型（HIV1/2）抗原（基因重组蛋白）包被的微孔板和酶标记的HIV1/2抗原及其他试剂组成，应用双抗原夹心法原理（Sandwish ELISA）检测人血清或血浆中的HIV1/2抗体。
2.试剂:试剂盒组成：1．HIV酶标板8×12孔7、显色剂A液60ml×1瓶2、HIV-Ⅰ型阳性对照1ml×1瓶8、显色剂B 液60ml×1瓶3、HIV-Ⅱ型阳性对照1ml×1瓶9、终止液60ml×1瓶4．HIV阴性对照lmlxl瓶10.自封袋1个5．HIV酶标试剂10ml×1 瓶11封板膜3张3.HIV抗体检测流程4.操作步骤：4.1配液:将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释至1000ml备用。
4.2编号:A1、A2、A3为阴性对照，A4为HIV-1型阳性对照，A5为HIV-2型阳性对照，将样品从6号开始编号，不设空白孔。
4.3加样：分别在相应孔中加人待测样品或阴、阳性对照100ul。
4.4温育:用封板膜封板后置37±1℃温育30±2分钟。
4.5洗涤:小心将封板膜揭掉,使用洗板机吸干孔内液体，用洗涤液洗涤5遍。
4.6加酶:每孔加人酶标试剂100ul。
4.7温育:用封板膜封板后置37±1℃温育30±2分钟。
4.8洗涤:小心将封板膜揭掉,使用洗板机吸干孔内液体．用洗涤液充分洗涤5边。
最后一次尽量扣干。
4.9显色：每孔加人显色剂A、B液各50ul，轻轻振荡混匀，用封板膜封板后置37±1℃避光显色15分钟。
4.10终止:每孔加终止液50 ul，（注意应与加底物的次序相同）轻轻振荡混匀。
4.11测量：4.11.1按LAB/SOP/01准备好酶标仪4.11.2输入数字。
艾滋病抗体检测方法
艾滋病抗体检测方法
艾滋病抗体检测方法是通过检测人体血液中是否存在艾滋病病毒（HIV）的抗体来确定是否感染了艾滋病病毒。
常见的艾滋病抗体检测方法包括：
1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：此测试是最常用的艾滋病抗体检测方法之一。
它可以检测人体血液中是否存在艾滋病病毒抗体。
2. 免疫荧光抗体法（IFA）：这是另一种检测艾滋病病毒抗体的方法。
它使用荧光标记的抗体来检测人体中的抗体。
3. 同时酶联免疫吸附试验（EIA）和免疫印迹分析（Western Blot）：EIA是首先进行的筛选测试，然后使用Western Blot进行确认。
Western Blot可以检测特定的蛋白质，以确定是否感染了艾滋病病毒。
4. 快速抗体检测（Rapid Test）：这是一种简单、快速的方法，可以在医疗机构外部进行。
这种测试通常使用血液、唾液或尿液作为样本，并且可以在30分钟内得到结果。
如果初步抗体检测结果为阳性，通常需要进行进一步确认测试，如多次重复抗体检测、核酸检测或抗原测定。
医生或专业机构应该进行解读结果并给出确诊。
ELISA法检测HIV抗体标准操作程序
ELISA法检测HIV抗体标准操作程序编号：舟曲县CDC艾—02号编写人：尚丽萍编写日期：2015-03-24一、目的：保证检测结果的准确性，减少或避免随机误差。
二、适用范围：适用于HIV抗体检测。
三、原理: 人血清或血浆中人类免疫缺陷病毒(1+2型)抗体,可与预包被高纯度基因组HIV(1+2型)抗原反应,加入HRP标记HIV(1+2型)抗原,然后用TMB底物作用显色,通过酶标仪检测吸光度(OD值)而判定样品中HIV抗体存在与否。
四、HIV抗体检测程序1、检测设备：①酶标仪，②洗板机，③恒温水浴箱，④移液器，⑤微量振荡器，⑥定时钟。
2、检测试剂：必须是HIV－1/2混合型，经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、在有效期内、并经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。
检测前标本及所用试剂应放置室温（18-25℃）平衡30min。
3、检测前仔细阅读说明书，严格按说明书中操作步骤进行检验，按原始记录的顺序加样，用一次性加样头，加样头不要碰到酶标板的包被层。
移液器最好一年校准一次，发现异常情况应随时标定。
4、正确使用酶标仪、洗板机、水浴箱，发现问题及时解决或找厂家维修。
5、通过阴、阳性对照和外部对照来判定本次实验是否有效、结果是否可靠，如发现问题应及时报告室主任，共同分析原因，以保证实验的准确性。
6、血液标本验收合格后，用初筛检测试剂进行检测，如呈阴性反应，则作HIV抗体阴性报告。
7、初筛检测结果呈阳性反应的标本，需进行复检。
复检时用两种不同原理或不同厂家的检测试剂复检。
两种试剂复检结果均呈阴性反应，则作HIV抗体阴性报告；如均呈阳性反应，或有一份阳性，该标本须送上级实验室进一步确认。
送检时填写“HIV抗体初筛阳性送检化验单”，与血液标本一并送检（必要时重新采集血样）。
8、妥善保存各种实验记录、感染者档案，不得擅自修改和销毁，严格遵守保密制度，未经省级卫生行政部门许可，不得向无关人员或单位提供任何情况。
ELISA检测HIV抗体室内质控
或重新分析新的质控物不是最有效的办法，必须找出问题 原因，找出解除故障方法，并消除原因，防止将来出现同 样的问题。建议由专人负责质控图，每月定期召开质控分 析会，讨论本月的质量控制情况。建议长期、稳定地使用 同一质量好的试剂盒，更换不同厂家的试剂盒，必须重新 绘制质控图。质控品避免反复冻融、过期，用前要充分混 匀。建立常用仪器的维护、使用及校准制度。总之，ＨｌＶ 抗体检测具有特殊性，涉及到个人隐私，必须建立一套 ＨＩｖ抗体检测的质量体系，加强自身实验室质量管理，保 证每次检测结果的准确可靠。
物检验 万工方作．数据
（下转第１０００页）
继续推行针器交换，在全国范围内掀起信自运动（尤其在吸毒
人群及ＨＩＶ合并｝ⅡⅣ／瞰Ｖ的人群），推行监狱服务项目，防
止ＨＩＶ等传染病的流行，加强ＨＩＶ疫苗的研究等。
上都座无虚席，讨论非常热烈。大家共同分享，共同探讨， 共同进步，正是这种积极向上的学术氛围使得英国ＨＩＶ防 治走在世界前列。
１．１试剂购自英科新创（厦门）科技有限公司。产品批 号２００４０３０９，生产日期２００４０３０８，有效期２００５０３０７。
倍的标准差（＿一２ｓ＝１．７６０，－ｙ十２ｓ＝３．２９１）定出外部对 照允许的幅度（９５％的可信限）。以Ｓ／（Ｄ值为纵轴，不同
１．２质控血清的制备和保存内部对照质控血清由试剂盒 的检测次数为横轴，绘制质控图（见图１）。将每次检测的
毽盐烫堕匡堂２ＱＱ§生筮塑鲞筮垒翅丛四！虫堕塑￡堕陋丛鲤丛坠！：２Ｑ竖：监ａ：≥≥：坠Ｉ旦：§
【实验技术及其应用】
ＥＬＩＳＡ检测ＨＩＶ抗体室内质控
张志祥
［关键词】ＨＩＶ抗体；临界值质控图；质量控制
［中图分类号】Ｒ５１２．９１
［文献标识码］Ｃ
［文章编号】１００３—８５０７（２００６）０６—０９９０—０２
HIV抗体检测的标准操作程序（ELISA法和快速法）
HIV测定（ELISA法）标准操作规程1、检验目的应用双抗原夹心酶联免疫法原理（ELISA）定性检测人血清、血浆标本中的HIV（1+2）型抗体的测定，用于HIV感染的辅助诊断，抗HIV药物治疗的效果的监测。
2、原理采用夹心ELISA方法检测血清或血浆标本中人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）型抗体，预包被高纯度基因重组HIV（1+2）型抗原，可与标本中的抗-HIV抗体反应，加入HRP标记HIV （1+2）型抗体抗原结合，形成抗原－抗体－酶标抗原复合物，然后加入TMB底物产生显色反应。
通过酶标仪检测吸光度（OD值），根据OD值判断HIV抗体的存在与否。
3、性能参数灵敏度高（0.5ng/ml）4、标本要求（1）标本类型：血清，血浆。
（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置不超过8小时，2-8℃不超过72小时，-20℃可长期保存，应避免反复冻融（4）标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。
本文来自检验地带网5、容器和添加剂类型6、试剂（1）试剂名称：人类免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗体诊断试剂盒。
（2）试剂生产厂家：上海科华生物工程股份有限公司（3）包装规格：96T/Kit（4）试剂盒组成：①、HIV酶标板；②、HIV酶标试剂；③、HIV（1+2）型阳性及阴性对照血清；④、显色剂A液和B液；⑤、此外还有浓缩洗涤液、终止液、自封袋、封板膜、说明书等。
7、仪器设备：酶标仪：ZS板式，北京普朗生物技术有限公司，每年由计量单位进行一次校准。
洗板机：DNM-9620型，北京普朗生物技术有限公司，每年由国家计量单位进行一次校准。
移液器：上海求精，每年由国家计量单位进行一次校准。
8、校准程序9、操作步骤①、配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水25倍稀释至1000ml备用。
②、编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照2孔、阳性对照3孔，空白对照2孔。
③、加样：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照100μl，用封板膜封板后置37℃温育60min。
人类免疫缺陷病毒(HIV) 检测
④检测时，先将硝基纤维素膜细条恢复室温，再与待检血清（用稀释 液稀释后）共同浸泡，37℃孵育60min（需用振荡摇床）。 ⑤取出硝基纤维素膜细条，用洗涤液洗涤5次，每次5min（用振荡摇 床）。 ⑥加酶标记抗人IgG 抗体，于37℃孵育60min（需用振荡摇床）。 ⑦洗涤同⑤。 ⑧加酶底物，显色10～20min。终止反应（放置于室温观察）。
第 4页
（1）ELISA 间接法检测HIV 抗体：将待测的血清稀释后按HIV 酶标诊断试剂盒的说明进行操作；该法的特异性和敏感性强， 操作简单、快速安全，比较适合大批量标本和筛选实验，但对 HIV 感染初期病人不能检测到抗体是其不足之处。
第 5页
（2）蛋白印迹试验：ELISA 法确诊的阳性标本应做蛋白印迹试 验以确证。
人类免疫缺陷病毒（HIV） 检测
第 1页
人类免疫缺陷病毒（HIV）是引起人类艾滋病（获得性免疫缺 陷综合征，AIDS）的病原体。
第 2页1.方法第 Nhomakorabea页有检测HIV 抗原和检测HIV 抗体两种。前者可用组织细胞培养 法、核酸检测法及免疫酶标法；后者有凝集试验、免疫荧光试 验、蛋白印迹试验及放射免疫试验和免疫酶标技术等。 目前世界上常用酶联免疫吸附试验（ELISA）间接法作为经典筛 选试验，蛋白印迹试验作为确证试验。
第 12 页
谢谢大家！
第 13 页
第 10 页
（2）蛋白印迹试验：AIDS病人血清中的抗HIV 抗体与HIV的 多肽片段（外膜蛋白与核心蛋白）特异性结合后可形成多条蛋 白区带。强阳性反应显示HIV 几个基因组编码的全部蛋白带， 弱阳性反应显示两条或几条显色较弱的蛋白带，阴性反应则无 任何蛋白带显示。
第 11 页
3.注意事项 （1）使用公认的HIV 酶标诊断试剂盒，不同厂家的试剂盒有可 能操作有异，应严格按说明书操作；不同厂家的产品有不同的 阳性判断标准，应按说明书慎重判断。 （2）鉴于HIV 及有关试验过程的特殊危险性，应严格规范实验 室操作规程，增加试验结果的准确性；严格规范安全防范措施， 防止感染；阳性结果应重复试验。
ELISA法对HIV抗体的检测
了解 受 血 者 输 血 前 情 况 ， 低 医 护 人 员 职 业 感 染 率 ， 少 医 患 降 减
纠纷 ， 院从 ２０ 本 ０ ０年起 ， 患 者 进 行 输 血 前 检 查 （ 括 获 得 性 对 包 免疫 缺 陷综 合 症 抗 体 检 测 ） 。本 院 从 ２ ０ ０ ０年 ３月 至 ２ ０ ０ ６年 ６ 月 采用 酶联 免 疫 吸 附 试 验 （ Ｌ Ｓ 检 测 ＨＩ 抗 体 ２ ５ Ｅ ＩＡ） Ｖ ４０ ６例 ， 其 中 初 筛 阳性 患 者 ２ ６例 ， 疾 病 预 防 控 制 中 心 回报 确 诊 阳 性 省 １ ８例 ， 阳性 符 合 率 为 ６ 。现 将 Ｅ Ａ 法 检 测 ＨＩ 抗 体 应 ９ ｌＳ Ｉ Ｖ
甲 醇一 乙 胺 （ 三 比例 ： ７ ５：４ ． ４． ７ ５：５： ． ） 配 比 ， 峰 时 间 ０４相 出 慢 ， 留 时 间较 稳 定 ， 且 分 离 效 果 很 好 。 保 而
夜 （ 置 ２ ） 再 称 重 ， 失 的重 量 用 氯 仿 补 足 。过 滤 ， 续 滤 放 ４ｈ ， 减 取
３ 峰 计 算 应 不 低 于 ． ２００ 士 的 宁 峰 的 拖 尾 因 子 在 ０ ９ ～ １ Ｏ ０ ， ． ５ ． ５之 间 ， 其 最 近 杂 与 质 峰 分离 度 大 于 ２ ０ ．。
表 ２ 两 种 方 法 测 得 士 的 宁 含 量 结 果 比较 （ ） ｍｇ
３ ３ 不 同方 法 试 验 薄 层 色 谱 扫 描 法 与 ＨＰ ＨＰ Ｃ法 比较 ， ． — Ｌ 后 者 灵 敏 度 高 ， 现性 好 ， 作 简 便 、 速 。 重 操 迅
HIV实验室检测方法和步骤
HIV实验室检测方法和步骤HIV，也称为人类免疫缺陷病毒，是一种能导致艾滋病的病毒。
HIV实验室检测方法和步骤被广泛应用于检测感染HIV的个体。
以下是一般情况下使用的实验室检测方法和步骤的详细说明。
1.预处理和登记在进行HIV实验室检测之前，需要对样本进行预处理和登记。
预处理包括标识样本的相关信息，如样本编号和患者信息。
这些信息对于结果记录和跟踪是至关重要的。
此外，还需检查样本的适应性和完整性。
2.血液样本采集3.血清分离采集到的血液样本需要进行血清分离。
这可以通过离心来分离血液的不同成分，例如血红蛋白和血清。
离心速度和时间需要根据实验室设备和协议进行调整。
4.酶联免疫吸附测定法（ELISA）最常用的HIV实验室检测方法是酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
这种方法使用特定的抗体来检测血液中特定的抗原。
根据ELISA方法的不同，可检测HIV抗原或抗体。
实验室技术人员将患者血清样本加入到已包含HIV相关抗原或抗体的试剂盘中，然后根据试剂盘的建议操作，包括孵育时间、温度和洗涤步骤。
任何与接触抗原或抗体反应的特异性颜色改变，都可作为阳性结果。
否则，结果被视为阴性。
5.确认试验在进行HIV检测的初步结果后，通常会进行一个或多个确认试验。
确认试验的目的是统一确定检测结果的可靠性。
常用的确认试验包括HIV免疫荧光试验（IFA）和西方印迹法（Western blot）。
这些试验通过检测血清中的HIV特异性抗体，以确保先前的结果的准确性。
6.分子检测有时，为了获得更加可靠和敏感的结果，实验室会使用分子检测方法，例如聚合酶链式反应（PCR）。
PCR可以检测和放大病毒的基因或核酸，以确定HIV感染的存在和病毒的数量。
7.结果解读和记录HIV实验室检测结束后，实验室技术人员需要解读并记录结果。
阳性结果意味着存在HIV感染，而阴性结果则表示未检测到HIV感染。
针对不同的检测方法和样本类型，结果的解释可能有所不同。
因此，在结果解读和记录时，实验室人员需要严密遵循实验室的标准操作规程（SOP）。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）
1 试剂信息
试剂厂家：北京万泰生物药业股份有限公司
2 样本要求
2.1 本试剂使用样品为人血清或血浆，含有EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。
2.2 不能检测含悬浮纤维蛋白或聚集物，重度溶血的样品。
2.3 样品中应无微生物，可在2-8℃储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。
2.4 使用前请将样品室温平衡30分钟以上，冷冻样品实验前需混匀。
3 检测步骤
3.1 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。
3.2 编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照1型、2型各1孔、空白对照1孔。
3.3 加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照100μL。
3.4 温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。
3.5 洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。
3.6 加酶：每孔加入酶标试剂100μL，空白孔除外。
3.7 温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。
3.8 洗板：操作同步骤5。
3.9 显色：每孔加入显色剂A、B液各50μL，轻轻震荡混匀，37±1℃避光显色30±1分钟。
3.10 测定：每孔加入终止液50μL，轻轻振荡混匀，10分钟内测定结果。
4 参考值
临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照A均值+0.12.
5 检验结果的解释
5.1 阴性对照孔A值≦0.10，阳性对照A值≧0.80，否则试验无效。
5.2 若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃，若两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1，应重复试验。
5.3 阴性判定：样品A值<临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阴性。
5.4 阳性判定：样品A值≧临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阳性。
（注意：初试阳性应重新取样双孔复试。
复试阳性者应按《全国艾滋病检测技术规范》送HIV确证实验室进行确证实验。
）。