霉菌和酵母菌检测
霉菌和酵母菌检测
霉菌和酵母菌检测方法
GB 4789.15-2010
一、稀释
1、无菌吸管吸取25ml样品至装有225ml无菌蒸馏水的无菌锥形瓶中，充分混
匀。
2、吸取1ml混匀的样品，缓慢注入装有9ml稀释液的无菌试管中（枪头不要
接触液面），混匀。
3、按步骤2制备10倍系列稀释样品，每次更换无菌枪头。
4、根据估计，选择合适的2~3个样品匀液，吸取1ml至无菌平皿，每个梯度
做两个平皿，同时用1ml稀释液做空白对照。
5、将15~20ml冷却至46℃左右的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基倾注平皿，转动
混匀。
二、培养
1、琼脂凝固后倒置28℃±1℃培养5d，观察记录。
三、计数
1、选择菌落数在10~150之间的平皿，根据菌落形态分别计算霉菌和酵母数。
霉菌蔓延生长整个平板记录多不可计。
菌落数应采用两个平皿的平均数。
四、报告
1、计算两个平皿菌落的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。
2、若所有平皿菌落数均大于150，则对稀释度最高的平皿进行计算，其他平皿
可记录为多不可计，结果按最高稀释倍数计算结果报告。
3、若所有平皿菌落数小于 10，则对稀释度最低的平皿进行计算。
4、若所有平皿均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释度计算，如为原液，
则以小于1计算。
5、小于100菌落数时，四舍五入原则取两位有效数字。
大于或等于100菌落
数时，第三位四舍五入原则，取前两位，剩余位数为0。
6、空白对照有菌落生长，结果无效。
霉菌和酵母菌计数
— 1—
• 样品的制备
检
1.固体和半固体样品的制备：
测
称取25 g样品,加人225 mL无菌稀释液(蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液),
方
充分振摇,或用拍击式均质器拍打1 min-2min，制成1 : 10的样品匀液。
法
— 1—
• 样品的制备
检
2.液体样品的制备：
测
以无菌吸管吸取25 mL样品至盛有225 mL无茵稀释液(蒸馏水或生理盐水
方
或磷酸盐缓冲液)的适宜容器内(可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)
法
或无菌均质袋中,充分振摇或用拍击式均质器拍打1 min-2 min,制成1-
10的样品匀液。
— 1—
• 接种及培养
检
1.系列稀释：
测
取1 mL 1: 10样品匀液注人含有9mL无菌稀
25ml
1ml
方
释液的试管中,另换一支1mL无菌吸管反复吹
告
和酵母。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为菌
落蔓延。
— 1—
• 结果报告
① 计算同一稀释度的两个平板菌落数的平均值,
计
再将平均值乘以相应稀释倍数。
数 报
② 若有两个稀释度平板上菌落数均在10 CFU-
告
150 CFU之间,则按照GB 4789.2的相应规定进行
计算。
③若所有平板上菌落数均大于150 CFU,则对稀释
方 法
倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取1 mL样品
匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1 mL无菌稀释
液加人2个无菌平皿作空白对照。及时将20 mL-25
mL冷却至46 ℃的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼
脂(可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温)倾注
霉菌以及酵母菌检测
酵母及酵母菌的检测一、霉菌和酵母菌介绍：霉菌和酵母菌及其检验酵母菌是真菌中的一大类，通常是单细胞，呈圆形,卵圆形、腊肠形或杆状。
霉菌也是真菌，能够形成疏松的绒毛状的菌丝体的真菌称为霉菌。
霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为食品中正常菌相的一部分。
长期以来，人们利用某些霉菌和酵母加工一些食品，如用霉菌加工干酪和肉，使其味道鲜美；还可利用霉菌和酵母酿酒、制酱；食品、化学、医药等工业都少不了霉菌和酵母。
但在某些情况下，霉菌和酵母也可造成中腐败变质。
由于它们生长缓慢和竞争能力不强，故常常在不适于细菌生长的食品中出现，这些食品是pH低、湿度低、含盐和含糖高的食品、低温贮藏的食品，含有抗菌素的食品等。
由于霉菌和酵母能抵抗热、冷冻，以及抗菌素和辐照等贮藏及保藏技术，它们能转换某些不利于细菌的物质，而促进致病细菌的生长；有些霉菌能够合成有毒代谢产物－霉菌毒素。
霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味。
例如，酵母在新鲜的和加工的食品中繁殖，可使食品发生难闻的异味，它还可以使液体发生混浊，产生气泡，形成薄膜，改变颜色及散发不正常的气味等。
因此霉菌和酵母也作为评价食品卫生质量的指示菌，并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。
目前已有若干个国家制订了某些食品的霉菌和酵母限量标准。
我国已制订了一些食品中霉菌和酵母的限量标准。
二、检验方法：霉菌和酵母的计数方法，与菌落总数的测定方法基本相似。
主要步骤为：将样品制作成10倍梯度的稀释液，选择3个合适的稀释度，吸取1mL于平皿，倾注培养基后，培养观察，计数。
对霉菌的计数，还可以采用显微镜直接镜检计数的方法。
具体检测标准参见：GB4789.15-94，《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物检验霉菌和酵母计数》三、说明：1．样品的处理。
为了准确测定霉菌和酵母数，真实反映被检食品的卫生质量，首先应注意样品的代表性。
对大的固体食品样品，要用灭菌刀或镊子从不同部位采取试验材料，再混合磨碎。
霉菌和酵母计数
霉菌和酵母计数1、原理、定义、目的：霉菌和酵母数的测定是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所的霉菌和酵母菌落数（粮食样品是指1g粮食表面的霉菌总数）。
霉菌和酵母数主要作为判定食品被污染程度的标志，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
本方法适用于所有食品。
2.仪器设备与器具：参照大肠杆菌群的检测标准。
3.试剂：3.1 霉菌和酵母菌培养基的配置：3.1.1 称取30g虎虹琼脂培养基加入蒸馏水1000ml，摇动灭菌。
3.1.2 以棉塞或硅胶塞，牛皮纸包封好瓶口，3.1.3 置于高压杀菌釜内，以116℃30分钟灭菌。
3.1.4 取出培养基自然冷却至不烫手后（约45℃）备用。
3.2稀释液：8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，高压灭菌121℃、15分钟。
4.测定方法：4.1.检样稀释及培养：4.1.1以无菌操作将检样25g（ml）放于含有225 ml灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内（瓶内预放置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳体内，经充分震摇或研磨成1：10的均匀稀释液。
4.1.2用1 ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1 ml，注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，用定量加液器在试管内鼓气三至四次使其混合均匀，作成1：100的稀释液。
4.1.3另取1ml灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释液，每递增一次，换用一支1 ml灭菌吸管。
4.1.4根据食品卫生标准要求或对污染情况的估计，选取三个适宜稀释度，分别在10倍递增的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1 ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做二个平皿。
4.1.5培养皿上分别注明样品编号，稀释度等。
4.1.6稀释液移入平皿后，注入冷却到45℃虎红琼脂约15 ml，水平徐徐震摇，使培养基检液混合均匀后，同时将虎红琼脂培养基倾入加有1 ml稀释液的灭菌平皿内做空白对照。
4.1.7待虎红琼脂凝固后，翻转平板，置25至28℃培养箱中培养3天后观察，共培养观察五天。
菌落总数、霉菌和酵母菌总数等微生物检验方法
菌落总数、霉菌和酵母菌总数等微生物检验方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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霉菌及其酵母菌
1、样品的稀释培养
（1）以无菌操作将检样25mL(或25g)放于含
有225mL灭菌蒸馏水的三角瓶中，振摇30min，
即为1：10稀释液。
（2）用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，
沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌蒸馏水的试管内，
振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。
（3）另取1mL灭菌吸管，按上项操作顺序，
制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换
用1支1mL灭菌吸管。
（4）根据标准要求或对污染情况的估计，选
择3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的
同时，以吸取该稀释度的吸管移取1mL稀释液
于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。
及时将15mL～20mL 冷却至46℃的马铃薯-葡 萄糖-琼脂或孟加拉红培养基(可放置于 46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转 动平皿使其混合均匀。 待琼脂凝固后，将平板倒置，28℃±1℃培养 5d，观察并记录。
制片镜检观察，可见分生孢子梗很粗糙。顶囊 呈烧瓶形或近球形。分生孢子在小梗上呈链状着 生，分生孢子的周围有小突起、球形、粗糙。 制片镜检观察，可见分生孢子梗很粗糙。顶囊呈 烧瓶形或近球形。分生孢子在小梗上呈链状着生 ，分生孢子的周围有小突起、球形、粗糙。
二、黄曲霉毒素检测方法
可归纳为化学方法、生物学方法和免疫学方法 三大类。 1、生物学方法 1. 抑菌试验 通过平皿中抑菌圈大小来衡量AFT含量 2. 荧光测定法 将待检菌株接种于培养基中，28—30 ℃培养48 ～72h，产生的毒素便浸入培养基中，在紫外灯光 下照射培养基会呈现出特异的荧光。此法操作简便 对AFT最低检出量为5pg/mL(拷贝数/毫升)。 3. 动物试验 大白鼠试验法、鸡胚试验、鸭雏试验
观察酵母菌和霉菌的实验报告单
观察酵母菌和霉菌的实验报告单一、实验目的本实验旨在观察酵母菌和霉菌在不同环境条件下的生长情况，了解其生长特点，为进一步研究微生物提供基础知识。
二、实验材料与方法2.1 实验材料酵母菌和霉菌样品、琼脂培养基、无菌试管、移液器、无菌手套、无菌培养皿等。
2.2 实验方法2.2.1 酵母菌的培养准备好琼脂培养基并用自来水冲洗干净无菌培养皿，装入琼脂后进行无菌操作。
取少量酵母菌样品，接种于琼脂培养基表面，用移液器将接种口火焰消毒后放回无菌培养皿中，封好口，并进行恒温培养。
2.2.2 霉菌的培养准备好琼脂培养基并用自来水冲洗干净无菌培养皿，装入琼脂后进行无菌操作。
取少量霉菌样品，接种于琼脂培养基表面，用移液器将接种口火焰消毒后放回无菌培养皿中，封好口，并进行恒温培养。
2.2.3 环境条件的变化分别将霉菌和酵母菌培养皿放置于不同的环境条件下，如高温、低温、强光照射等，观察其生长情况并进行记录。
三、实验结果与分析3.1 酵母菌的生长情况酵母菌在琼脂培养基上表现出快速生长的特点，生长周期约为24-48小时。
在高温环境下，酵母菌的生长速度加快，但数量较少；在低温环境下，酵母菌的生长速度变慢，但数量增多。
在强光照射下，酵母菌的生长受到抑制，数量较少。
3.2 霉菌的生长情况霉菌在琼脂培养基上表现出缓慢生长的特点，生长周期约为3-5天。
在高温环境下，霉菌的生长速度加快，但数量较少；在低温环境下，霉菌的生长速度变慢，但数量增多。
在强光照射下，霉菌的生长受到抑制，数量较少。
四、实验结论在合适的环境条件下，酵母菌和霉菌都表现出较快的生长速度，且在不同环境下的生长特点有所不同。
研究微生物的生长特点，可以为工业生产、医药研究等方面提供参考和指导。
五、参考文献无。
霉菌及酵母菌计数测定方法操作规程
食品中霉菌及酵母菌计数测定方法操作规程一、范围本规程规定了食品中霉菌和酵母菌（moulds and yeasts）的计数方法。
本规程适用于各类食品中霉菌和酵母菌的计数。
二、编写依据GB 4789. 15-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母菌计数》三、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1冰箱：21〜5（。
3.2恒温培养箱：28o C±ΓCo3.3均质器。
3.4恒温振荡器。
3.5 显微镜：10×-100×o3.6电子天平：感量0. 1g。
3.7无菌锥形瓶：容量500mL. 250mLo3.8无菌广口瓶：500mLo3.9无菌吸管：1mL（具0.01 mL刻度）、10mL（具0. 1mL刻度）。
3.10无菌平皿：直径90mmo4.11 无菌试管：10mm×75mmo5.12无菌牛皮纸袋、塑料袋。
四、培养基和试剂6.1马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基：同GB 4789. 15项下制法。
6.2孟加拉红培养基：同GB 4789. 15项下制法。
6.3氢氧化钠Imol/L： 8g配200ml蒸储水。
6.41ICL lmol/L：7. 3g 配200ml 蒸储水。
五、检验程序5.1样品的稀释5.1.1固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225mL灭菌蒸储水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。
或放入盛有225 mL无菌蒸储水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min,制成1:10的样品匀液。
5.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品至盛有225 mL无菌蒸储水的锥形（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。
7.1.3取1 mL 1:10稀释液注入含有9 mL无菌水的试管中，另换一支1 mL无菌吸管反复吹吸，此液为1： 100稀释液。
5.1.4按5. 1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。
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霉菌和酵母菌检测
1 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
1.1 冰箱：2℃～5℃。
1.2 恒温培养箱：28℃±1℃。
1.3 均质器。
1.4 恒温振荡器。
1.5 显微镜：10×～100×。
1.6 电子天平：感量0.1g。
1.7 无菌锥形瓶:容量500ml、250ml。
1.8 无菌广口瓶：500ml。
1.9 无菌吸管：1ml(具0.01ml刻度)、10ml(具0.1ml刻度)。
1.10 无菌平皿：直径90mm。
1.11 无菌试管：10mm×75mm。
1.12 无菌牛皮纸袋、塑料袋。
2 培养基和试剂
2.1 马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基：见附录A中A.1。
2.2 孟加拉红培养基：见附录A中A.2。
3 操作方法
3.1 试验前准备
3.1.1 将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、量筒、吸管（1ml、10ml）、稀释剂等移至操作室内。
准备好足够用量，避免操作中出入操作间。
3.1.2 开启无菌室紫外杀菌灯和洁净工作台的空气过滤装置30min。
3.1.3 操作人员用肥皂洗手，关闭紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋，用消毒液洗手或用乙醇棉球擦手，穿戴好无菌衣、帽、口罩、手套等。
3.1.4 操作前先用乙醇棉球擦手、工作台面，再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌剪刀或镊子将供试品启封。
3.2 样品稀释液的制备
根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备样品稀释液。
样品稀释液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。
样品稀释液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
3.2.1 固体和半固体样品
称取25g样品至盛有225ml灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。
或放入盛有225ml无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10的样品匀液。
3.2.2 液体样品
以无菌吸管吸取25ml样品至盛有225ml无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
3.3 霉菌和酵母菌计数
3.3.1 用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1ml，沿管壁缓慢注于盛有9ml 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
3.3.2 按3.3.1操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用1次1ml 无菌吸管或吸头。
3.3.3 根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1ml样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
同时，分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
3.3.4 及时将15ml～20ml冷却至46℃的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基或孟加拉红培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
3.4 培养
待琼脂凝固后，将平板翻转，28℃±1℃培养5d，观察并记录。
3.5 菌落计数
肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。
以菌落形成单位（colony forming units，CFU）表示。
选取菌落数在10CFU～150CFU的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。
霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。
菌落数应采用两个平板的平均数。
3.6 结果与报告
3.6.1 计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。
3.6.1.1 若所有平板上菌落数均大于150CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
3.6.1.2 若所有平板上菌落数均小于10CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
3.6.1.3 若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于1计数。
3.6.2 报告
菌落数在100以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。
菌落数大于或等于100时，前3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数来表示结果；也可用10的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字。
称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/ml为单位报告，报告或分别报告霉菌和/或酵母数。
附录培养基和试剂
1 马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基
1.1 成分
马铃薯(去皮切块) 300g
葡萄糖20.0g
琼脂20.0g
氯霉素0.1g
蒸馏水1000ml
1.2 制法
将马铃薯去皮切块，加1000ml蒸馏水，煮沸10min～20min。
用纱布过滤，补加蒸馏水至1000ml。
加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装后，121℃灭菌20min。
倾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中
2 孟加拉红培养基
2.1 成分
蛋白胨 5.0g
葡萄糖10.0g
磷酸二氢钾 1.0g
硫酸镁（无水）0.5g
琼脂20.0g
孟加拉红0.033g
氯霉素0.1g
蒸馏水1000ml
2.2 制法
上述各成分加入蒸馏水中，加热溶化，补足蒸馏水至1000ml，分装后，121℃灭菌20min。
倾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。