基因表达应用示例

合集下载

原核基因表达和真核基因表达的异同点

原核基因表达和真核基因表达的异同点

原核基因表达和真核基因表达的异同点示例文章篇一:《原核基因表达和真核基因表达的异同点》嗨,小伙伴们!今天咱们来聊聊特别神奇的事儿,那就是原核基因表达和真核基因表达。

这就像是两个不同的小世界有着各自独特的运转方式呢。

先说说原核生物吧。

原核生物的细胞结构比较简单,没有像真核生物那样有细胞核之类复杂的结构。

原核基因表达就像是在一个小作坊里工作。

原核生物的基因通常是连续的,没有那些多余的间隔。

比如说,基因转录的时候,就直接按照顺序来,就像一条生产线上,一个环节接着一个环节,很少有什么阻碍。

而且原核生物转录和翻译是几乎同时进行的呢。

这就好比在小作坊里,一边生产原材料,一边就直接组装产品了。

我就想啊,这多有效率啊!原核生物的基因表达调控也相对简单一些。

就像是小作坊里的管理规则,没有那么多条条框框。

比如说,操纵子就是原核生物基因表达调控的一个重要方式。

它就像一个小团队,大家协同工作,根据环境的变化,比如说有营养物质多了或者少了,这个小团队就做出反应,让基因表达多一点或者少一点。

那真核生物呢?真核生物可就复杂多啦,就像一个超级大工厂。

真核生物的基因有内含子和外显子之分。

这就像是大工厂里的生产流程,有些是核心步骤(外显子),有些是辅助步骤或者准备步骤(内含子)。

在基因转录的时候,先把所有的都转录出来,然后再把内含子去掉,只留下外显子拼接起来,这多麻烦啊!真核生物的转录和翻译可不像原核生物那样同步。

转录是在细胞核里进行的,就像在一个专门的办公室里准备生产计划。

而翻译呢,要到细胞质里进行,就像到生产车间去实施计划。

真核生物的基因表达调控那更是复杂得很。

它有好多层次的调控呢。

从染色质的结构变化开始,就像大工厂里的整体布局调整,到转录因子的调控,就像不同部门的主管下达指令,再到转录后的调控,就像生产后的质量检查和调整。

那它们有什么相同点呢?不管是原核生物还是真核生物,基因表达的最终目的都是为了合成蛋白质啊。

这就像是不管是小作坊还是大工厂,都是为了生产出产品。

il-1β 基因

il-1β 基因

il-1β 基因全文共四篇示例,供读者参考第一篇示例:IL-1β 基因是编码白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的基因,是炎症反应中一个非常重要的因子。

IL-1β是一种重要的促炎因子,它参与了免疫系统的调节,对炎症和免疫反应起着关键作用。

IL-1β基因在人体中的表达水平与疾病的发生发展密切相关,因此对IL-1β基因的研究具有重要的意义。

IL-1β基因位于人类的第2号染色体上,是一个包含7个外显子的基因。

IL-1β基因的编码蛋白质是一种由269个氨基酸组成的细胞因子,它在炎症过程中起着重要的作用。

IL-1β蛋白主要由单核细胞、巨噬细胞和一些其他免疫细胞产生,它能够促进炎症反应的发生,并引起发热、血管扩张和疼痛等症状。

IL-1β基因的突变和多态性已经被发现与多种疾病的发生有关。

IL-1β 基因的多态性可能会增加一些自身免疫性疾病的风险,如类风湿关节炎和炎症性肠病等。

IL-1β基因在心血管疾病、肿瘤和感染等疾病的发生发展中也扮演着重要的角色。

IL-1β基因的研究对于预防与治疗相关疾病具有重要的意义。

近年来,许多科研人员已经发现IL-1β在炎症反应调节中的重要性,并且针对IL-1β的药物已经开始进入临床试验阶段。

这些针对IL-1β的药物可以用于治疗类风湿关节炎、炎症性肠病以及其他相关疾病,为临床治疗带来了新的希望。

IL-1β基因在免疫系统中扮演着非常重要的角色,它对于炎症反应的调节具有重要的作用。

IL-1β基因的研究不仅可以帮助我们了解疾病的发生机制,还可以为相关疾病的预防与治疗提供新的思路。

希望未来能够有更多的研究针对IL-1β基因展开,为人类健康带来更大的福祉。

第二篇示例:IL-1β基因是人体免疫系统中的一种重要基因,它编码了一种促炎细胞因子,对于炎症反应的调控起着至关重要的作用。

IL-1β基因的异常表达与多种疾病的发生和发展密切相关,例如风湿性关节炎、类风湿性关节炎、强直性脊椎炎等自身免疫性疾病,以及白血病、淋巴瘤、肺炎、肝炎等炎症相关性疾病。

转基因的原理及应用

转基因的原理及应用

转基因的原理及应用1. 什么是转基因?转基因是指将外源基因导入特定生物体中,并将其加入到目标生物体的基因组中的技术。

通过转基因技术,可以实现在生物体中插入特定的基因,使其拥有某种新的性状或功能。

2. 转基因的原理转基因的原理是通过将外源基因导入目标生物体的细胞中,使其融入到目标生物体的染色体中,从而实现新基因的表达。

具体步骤如下:1.选择目标基因:根据需要的性状或功能,选择目标基因。

2.制备载体:将目标基因载入到适当的载体中,常用的载体有质粒、病毒等。

3.导入细胞:将载有目标基因的载体导入目标生物体的细胞中,常用的方法有基因枪法、电穿孔法等。

4.基因整合:目标基因在细胞中整合到染色体上,被复制和传递给细胞的后代。

5.基因表达:目标基因在目标生物体的细胞中被转录为mRNA,并翻译为蛋白质,从而表达出目标性状或功能。

3. 转基因的应用转基因技术在农业、医药、工业等领域具有广泛的应用。

以下是几个常见的转基因应用示例:1.转基因植物:转基因植物广泛应用于农业领域,其中最著名的应用之一是转基因作物的开发。

通过插入耐草害、抗虫害、耐旱等性状的基因,改良了作物的抗病性、抗虫性以及适应环境能力,提高了农作物的产量和品质。

2.转基因动物:转基因技术也被用于动物遗传改良。

例如,在转基因小鼠中引入人类疾病相关的基因,构建模型来研究人类疾病的机制,加速药物研发进程。

此外,转基因技术还可用于改良畜禽品种,提高其抗病能力、生长速度等。

3.转基因微生物:转基因微生物常用于工业生产,例如利用大肠杆菌进行重组蛋白生产。

通过插入目标基因,使微生物能够高效地合成某种酶或蛋白质,从而简化工艺流程,提高生产效率。

4.转基因药物:转基因技术也被用于医药领域的药物研发。

例如,通过转基因技术生产重组人胰岛素,提供给糖尿病患者使用。

同时,借助转基因技术,还可以生产其他蛋白质药物,如生长因子、抗体药物等。

4. 转基因技术的争议转基因技术虽然在各个领域有广泛的应用,但也引发了一系列争议。

植物src2基因

植物src2基因

植物src2基因全文共四篇示例,供读者参考第一篇示例:植物src2基因,顾名思义,是一种植物基因,主要编码一种特定的蛋白质。

src2基因在植物的生长发育过程中扮演着重要的角色,参与调控植物的生长、发育、抗逆性等生物学过程。

本文将从src2基因的功能、调控机制、研究进展等方面对该基因进行较为详细的介绍。

src2基因最早由植物学家在植物细胞中鉴定出来,通过对该基因的功能研究发现,src2基因在植物中广泛表达,其编码的蛋白质在植物生长发育中发挥着关键作用。

研究表明,src2基因参与调节植物的生长节律、根系发育、开花、果实成熟等重要过程。

在植物逆境环境中,src2基因也能够调控植物的抗逆性,帮助植物应对干旱、盐碱、病虫害等外界胁迫。

在植物体内,src2基因的表达受到多种因素的调控。

研究发现,植物激素如赤霉素、脱落酸等可以诱导src2基因的表达,参与调控植物生长发育过程。

植物光照、温度、病虫害等外部环境因素也能够影响src2基因的表达。

通过对src2基因的调控机制的研究,有助于深入了解植物生长发育的调控网络,为改良植物的生长性状、提高产量和抗逆性提供理论依据。

近年来,越来越多的研究者开始关注src2基因在植物中的作用机制。

通过转基因技术、蛋白质互作研究等手段,揭示了src2基因与其他关键基因的相互作用关系,阐明了src2基因在植物生长发育过程中的生物学功能。

在一些植物中,研究者通过基因编辑技术对src2基因进行定点突变,进一步验证了src2基因在植物生长发育中的作用。

这些研究为深入理解src2基因的功能和调控机制提供了重要的实验依据。

除了在植物生长发育中的作用外,src2基因还具有潜在的应用价值。

在农业方面,通过调控src2基因可以改良作物的品质、产量和抗逆性,为农业生产提供有效的手段。

在生物技术领域,src2基因的研究也有助于探索植物发育的分子机制,为新型植物品种的培育和农业生产的可持续发展提供技术支撑。

基因表达与性状的关系 高一生物(人教版2019必修2)

基因表达与性状的关系 高一生物(人教版2019必修2)

表观遗传
★表观遗传修饰中,除了DNA甲基化,构成染色体的组蛋白 发生甲基化、乙酰化等修饰也会影响基因的表达。(教材P74)
思考与讨论:①结合下图分析组蛋白修饰前后的作用?
表观遗传 资料9:植物的春化作用:低温促使植物开花的作用
冬小麦的Flc基因所在部位的组蛋白被修饰
表观遗传
合作探究三:利用关键词“基因”、“基因表达”、“表观修饰”、 “环境”、“性状”等关键词建构概念关系图式
表观遗传信息是如何调控基因表达的? 怎样理解基因与性状关系的复杂性?
01 Part One 基因表达产物与性状的关系
基因表达产物与性状的关系
案例1:豌豆的圆粒与皱粒
合作探究一 1、如何从基因控制性状的角度解释这一对相对性状的形成原因? 直接原因?根本原因? 2、请依据学案和教材资料进行填空。
基因表达产物与性状的关系
基因的选择性表达与细胞分化
1、不同类型细胞中DNA和mRNA种类P72 1)同种生物的不同类型细胞中DNA是一样的。 2)同种生物的不同类型细胞中mRNA、蛋白质是不完全一样的。
基因的选择性表达与细胞分化 2、细胞分化 1)细胞分化的本质:基因的选择性表达 2)管家基因:
在所有细胞中都表达的基因,指导合成的蛋白质是维持细胞基本生 命活动所必需的,如核糖体蛋白基因、ATP合成酶基因。
②突变型的Lcyc基因是隐性基因吗?与野生 型的 Lcyc基因序列是否一致?
表观遗传
资料3:突变型的Lcyc基因的测序结果,在基因编码区并未检测到改变的碱基;而对 野生型和突变型不同发育阶段Lcyc基因表达情况的检测中发现突变型任何发育阶段 均没有Lcyc基因的转录。
资料4:为了进一步探究野生型与突变型Lcyc基因表达差异的原因,科学家用限制性

水稻中的pti标记基因

水稻中的pti标记基因

水稻中的pti标记基因全文共四篇示例,供读者参考第一篇示例:水稻是世界上最重要的粮食作物之一,也是许多人类主食的重要来源。

水稻中有许多基因起着重要的作用,其中PTI标记基因是其中一个关键基因,它在水稻的抗病性中起着重要的作用。

PTI(PAMP-triggered immunity)是一种植物激活的免疫反应,主要是通过植物感知外源病原体相关分子模式(PAMPs)来启动这种免疫反应。

PTI标记基因在水稻中被广泛研究,并且已经证明在水稻的抗病性中扮演着重要的角色。

PTI标记基因能够激活一系列的防御反应,包括诱导植物产生抗菌物质、加强细胞壁的厚度以提高植物对病原体的抵抗能力等。

研究显示,PTI标记基因对水稻的抗病性有着显著的影响。

通过对这一基因进行功能研究,科学家们发现,在水稻中增加PTI标记基因的表达可以显著提高水稻对多种病原体的抵抗能力。

研究表明,通过转基因技术将PTI标记基因导入水稻中,可以显著提高水稻对水稻稻瘟病、白叶枯病等病害的抗性。

这为水稻的抗病育种提供了新的途径和思路。

PTI标记基因的研究还有助于揭示水稻抗病机制的相关过程。

科学家们通过研究发现,PTI标记基因能够调节水稻中的一系列防御反应的启动和执行,从而提高水稻对病原体的抵抗能力。

这些研究结果不仅有助于我们更好地理解水稻的抗病机制,还为进一步改良水稻抗病品种提供了重要的理论依据。

PTI标记基因在水稻中的作用是不可忽视的。

通过研究和利用这一基因,我们可以更好地了解水稻的抗病机制,提高水稻对病原体的抵抗能力,为水稻的抗病育种工作提供新的思路和方法。

希望未来能够通过更多的研究工作,进一步挖掘和利用PTI标记基因在水稻中的作用,为水稻的抗病育种做出更大的贡献。

第二篇示例:水稻是世界上最重要的粮食作物之一,也是许多人日常生活中的主要食物来源。

在水稻中,蛋白质磷酸化是一种常见的信号传导方式,可以调控植物对环境胁迫的响应。

PTI(PAMP-triggered immunity)是免疫响应的一种形式,可以帮助水稻植物抵御病原体入侵。

基因的表达+对应习题及解析

基因的表达+对应习题及解析

解析 过程①是转录,需要细胞质提供的 核糖核苷酸为原料,该过程在RNA聚合酶 的催化作用下合成mRNA,A项正确; 过程②是翻译,根据肽链的长度可判断, 核糖体的移动方向是从右向左,但翻译 需要rRNA、tRNA、mRNA三种RNA参 与,B项错误; 若基因突变导致终止密码子后移,则功能蛋白A的相对分子质量将增大,C项 正确; 由于基因的选择性表达,该个体的某些细胞内控制功能蛋白A的基因可能没有 表达,D项正确。
第二步:转换。即根据第一步做出的图,把题干给出的条件转换成数学等式。 第三步:计算。即根据题干的要求,结合第二步中的数学等式,求出相应的 数值。
命题示例
3.(2019·泰安质检)一个mRNA分子有m个碱基,其中G+C有n个;由该mRNA
合成的蛋白质有两条肽链。则其模板DNA分子的A+T数、合成蛋白质时脱去
(5)DNA复制和转录时,其模板都是DNA的一整条链( × )
(6)如图表示蓝藻DNA上遗传信息、密码子、反密码子间的对应关系,则①是β
链,完成此过程的场所是细胞核( × )
易错 警示
有关转录和翻译的6点提醒 (1)转录的产物不只是mRNA,还有tRNA、rRNA,但只有mRNA携带遗传信息, 3种RNA都参与翻译过程,只是作用不同。 (2)tRNA并非仅由 3个核糖核苷酸(碱基)构成,而是含有几十个至上百个核糖核 苷酸(碱基)。 (3)并不是所有的密码子都决定氨基酸,其中终止密码不决定氨基酸。 (4)转录和翻译过程中A不是与T配对,而是与U配对。 (5)翻译过程中mRNA并不移动,而是核糖体沿着mRNA移动,进而读取下一个 密码子。 (6)真核生物首先在细胞核转录,然后在细胞质中翻译,异地、先后进行;原 核细胞是边转录、边翻译,同地、同时进行。
RNA聚合酶

QPCR实验报告

QPCR实验报告

QPCR实验报告实验报告:QPCR技术在基因表达分析中的应用一、引言基因表达是指基因通过转录和翻译过程产生相应分子的过程,是维持生物体正常功能的关键步骤。

定量聚合酶链反应(Quantitative PCR,QPCR)是一种常用的检测和分析基因表达水平的方法。

该方法通过测量目标基因在不同时间点或条件下的转录水平,可以揭示基因调控机制、寻找新的治疗靶点以及评估药物治疗的效果。

本实验旨在熟悉和掌握QPCR技术的基本操作步骤,并通过示例实验,了解该技术在基因表达分析中的应用。

二、材料与方法2.1实验仪器-核酸提取仪-反转录仪-实时定量PCR仪2.2实验材料-被测样品:包括正常组织和疾病组织样本-细胞裂解缓冲液-细胞核酸提取试剂盒-反转录试剂盒-实时定量PCR试剂盒2.3实验步骤1.样品处理:将被测样品均匀切割后,加入细胞裂解缓冲液使细胞破裂,并离心去除细胞碎片。

2.核酸提取:使用核酸提取试剂盒从细胞裂解液中提取总RNA,按照试剂盒说明进行操作。

3.反转录:将提取的总RNA加入反转录试剂盒进行反转录反应,将RNA转录为cDNA。

4.实时定量PCR:根据目标基因和参比基因设计引物,并使用实时定量PCR试剂盒进行PCR反应,测量模板DNA的含量。

5.数据分析:根据实时定量PCR的结果,计算目标基因的相对表达量,并进行统计分析。

三、结果与讨论3.1实时定量PCR结果通过实时定量PCR测量得到各样品中目标基因的转录水平。

以CT值为指标,CT值越低代表目标基因的转录水平越高。

同时还可以通过计算相对定量,比较不同样品之间目标基因的表达变化。

3.2数据分析通过对实时定量PCR结果的数据分析,可以得到目标基因的相对表达量,并进行统计学分析。

通常可以通过t检验来判断不同样品之间目标基因的表达差异是否具有统计学意义。

3.3结果讨论根据实验结果,可以得出目标基因在不同样品之间的表达差异是否达到统计学意义,并进一步分析可能的原因。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

基因表达应用示例通过实时荧光定量PCR 技术实现对miRNA 靶向物mRNAs 的相对定量分析1 导言小RNA (miRNAs )是一种内源性非编码蛋白的小分子RNA ,它们是许多基础的细胞过程中基因表达的主要调节因子,这些过程包括细胞增殖、细胞分化以及细胞凋亡等。

miRNA 在肿瘤生长过程中也发挥着重要作用。

一般来说,miRNA 通过控制翻译过程来实现对目标蛋白表达的调控。

然而,在靶向mRNA 降解水平上的基因表达的调控已有报道。

因此,有证据显示miRNA 能够通过RNA 降解来实现对细胞内mRNA 浓度的直接调控,而且也会通过靶向作用于蛋白质级联来调控mRNA 水平,这些蛋白质级联能够调控下游转录或在转录后对mRNA 水平进行调控。

在当前的研究中,我们重点关注miRNA hsa (人)miR-21,研究发现在乳腺癌和其他肿瘤中miR-21水平上调。

更进一步的研究发现,miR-21在细胞凋亡和细胞生长过程中也发挥着功能性作用。

为了进一步对miR-21进行研究,我们研究了miR-21的水平对三个假定的miR-21靶向基因(PDCD4,PTEN 和TLR2)mRNA 表达的影响(见图1)。

2 材料和方法细胞培养DMEM培养基中补充1%的L-谷氨酰胺,1%的盘尼西林/链霉素,10%的FBS,在+37℃5%CO2条件下培养HeLa细胞。

用miRNA 21 miRIDIAN类似物,miRNA 类似物miRIDIAN对照,miRNA 21 mi RIDIAN抑制剂和miRNA miRIDIAN抑制剂对照siRNA (dhar-macon都为50nM),以及X-tremeGENE siRNA转染试剂(罗氏公司),按照生产商的方案进行转染。

RNA提取与逆转录在转染之后两天,使用High Pure RNA Isolation Kit(罗氏公司),按照生产商的建议从HeLa细胞中提取总RNA(每个类似物miRNA三个生物学复制)。

同时,使用High Pure miRNA Isolation Kit(罗氏公司),按照使用说明书上的指导,提取包含小分子量RNA在内的总RNA(两个生物学重复)(见图2)。

按照生产商的指导,使用Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit(罗氏公司)和oligo(dT)18与随机六聚体引物的混合物,按照每次反应500到1000ng总RNA的量进行第一链cDNA的合成。

用miRCURY LNA First-strand cDNA Kit(Exiqon)进行miRNA 第一链cDNA的合成,每次反应使用4ng含有小RNA在内的总RNA。

qRT-PCR基因表达分析在384孔板上11ul/孔的总反应体积中,使用荧光Universal ProbeLibrary(UPL)探针(罗氏公司)和ABI 7900HT 实时仪器(美国应用生物系统公司)以及2X FastStart Universal Probe Master (Rox)PCR试剂(罗氏公司)进行定量RT-PCR。

每次反应的cDNA/RNA浓度为10ng。

ABI 7900HT实时仪器(美国应用生物系统公司)的PCR条件如下:+95℃下变性15分钟,+95℃下扩增15秒,最后在+60℃下延伸60秒。

miRNA定量使用LightCycler® 480实时荧光PCR仪(罗氏公司),在384孔板的模式下,设定反应体积为20ul,以1:10梯度稀释cDNA,在miRCURY LNA SYBR Green master mix,miRCURY LNA内源性对照SNORD44和miR-21的LNA PCR引物(Exiqon)的共同作用下进行miRNA qRT-PCR. LightCycler® 480仪的PCR条件如下:95℃变性10分钟,95℃变性10秒,60℃延伸20秒,反应设40个循环。

使用△△Ct方法(Livak 和Schmittgen,2001年),用HPRT1和GAPDH 作为参考(管家基因)基因,来反映假定的靶向基因表达水平上的成倍变化。

对于has miR-21,则用非靶向合成类似物-和抑制剂-miRIDIAN作为miRNA转染HeLa细胞的实验对照。

培养HeLa细胞用miRNA miRIDIAN类似物和miRNA类似物miRIDIAN 对照,以及miRNA 21miRIDIAN抑制剂和miRNA miRIDIAN抑制剂对照siRNA转染HeLa细胞。

提取miRNA提取总RNAqRT-PCR-miRNA定量qRT-PCR-基因表达分析图1:利用假定的miR-21靶向基因(PDCD4,PTEN 和TLR2)的表达水平分析从而对has miR21进行分析的工作流程。

图2:用指定试剂(miRIDIAN miRNA类似物或miRIDIAN miRNA抑制剂)转染HeLa细胞后,用Agilent生物分析仪对来自不同细胞集群的小分子量RNA 进行凝胶电泳。

3 结果和讨论为了分析miR-21水平升高对靶向基因(PDCE4,PTEN和TLR2)的mRNA水平的影响,我们使用UPL通用探针库探针(罗氏公司)和ABI 7900HT实时PCR仪(美国应用生物系统公司)对已经报道的能够被miR-21调控的一些mRNA的丰度进行了定量测定。

使用X-tremeGENE siRNA转染试剂(罗氏公司),用miR-21的类似物和抑制剂对HeLa细胞进行转染,并分别设置(miRNA 21 miRIDIAN类似物对照,miRNA miRIDIAN类似物对照,miRNA 21抑制剂和miRNA抑制剂对照siRNAs)。

miRIDIAN miRNA类似物是一种合成的双链结构,能够代表对靶向mRNAs进行调控的成熟miRNAs,与内源性miRNAs类似。

与之相反,miRIDIAN miRNA抑制剂是一种不可水解的成熟miRNA的反向互补单链,在转染细胞之后能够降低内源性miRNAs的活性。

这极有可能是由于抑制剂与成熟miRNA之间进行不可逆结合造成的(Meister, Landthaler等,2004)。

我们在LightCycler® 480(罗氏公司)上进行qRT-PCR,对miR-21的miRIDIAN类似物和抑制剂对成熟miR-21水平的影响进行了定量测定。

使用High Pure miRNA Isolation Kit (罗氏公司)提取miRNA,用qRT-PCR与miRCURY LNA进行定量检测,并用小分子量非编码核仁RNA SNORD44进行校准。

与用miRIDIAN类似物处理的对照细胞相比较,用50nM miR-21的miRIDIAN类似物转染细胞后,HeLa细胞中miR-21的浓度上升了7.3倍(见图3)。

与之相反,用50nM miR-21的miRIDIAN抑制剂转染HeLa细胞后,miR-21水平下降了77%(见图3)。

这表明,X-tremeGENE siRNA转染试剂(罗氏公司)是一种非常好的转染工具,能够有效地将miRIDIAN类似物和miRIDIAN抑制剂转染到目标细胞中。

而且我们还发现,High Pure miRNA Isolation Kit(罗氏公司)能够有效地提取miRNA,并用于之后miRNA浓度的分析。

在使用miRIDIAN类似物和抑制剂上调和下调细胞内miR-21浓度之后,我们对miR-21公认的靶向mRNAs(PDCD4,PTEN 和TLR2)的表达水平进行了研究。

在用miR-21的类似物和抑制剂以及各自的对照物感染HeLa细胞两天之后,用High Pure RNA Isolation Kit(罗氏公司)提取总RNA。

在ABI 7900HT(美国应用生物系统公司)上使用qRT-PCR和UPL通用探针库探针对mRNA 水平进行定量测定,并与对照基因(管家基因)HPRT1和GAPDH正常的基因表达水平进行比较。

我们发现,与对照组相比,miR-21的过度表达导致PDCD4(编码人致瘤性转化抑制物)的mRNA水平显著下降了29%(见图4)。

最近的研究发现,mi-R-21过度表达能够在蛋白质水平和mRNA水平上对PDCD4基因造成影响(Frankel,Christoffersen 等人,JBC,2008,283),该实验的结果进一步证实了这一发现。

与之相反,在PTEN 的mRNA(编码人同源性磷酸酶-张力蛋白)水平上没有观察到miR-21的影响。

在上调或下调miR-21水平之后都是这种情况(见图5)。

最近的研究发现miR-21能够通过影响翻译过程而在蛋白质水平上对PTEN产生影响,而PTEN mRNA 水平则不发生变化(Wickramasinghe 等人,2009,NAR)。

我们的研究与这一发现相符。

有意思的是,与抑制剂转染对照细胞相比,在用miR-21抑制剂转染细胞之后,TLR2(编码toll样受体2)mRNA水平显著下降了57%(见图6)。

miR-21和TLR2都在细胞凋亡调控过程中发挥作用,TLR2可能是miR-21抗细胞凋亡活动的重要介质。

TLR2是miR-21活性的直接还是间接靶向基因尚不清楚,仍有待研究。

miR21抑制剂miR21类似物miR21抑制剂miR21类似物图3:miR-21表达的高水平变化。

图中显示的是在miR-21抑制(黄色条)或过表达(蓝色条)之后的miR-21水平,分别与各自的抑制剂和类似物对照转染细胞(红色虚线=1.0)进行比较。

图4:miR21对PDCD4基因表达的调控。

mRNA-21过表达(蓝色条)导致PDCD4 mRNA 水平下降,而miRNA-21下调(黄色条)并不影响PDCD4的mRNA水平,分别与各自的抑制剂和类似物对照转染细胞(红色虚线=1.0)进行比较。

miR21抑制剂miR21类似物miR21抑制剂miR21类似物图5:miR21水平调节对PTEN基因表达的影响。

当细胞内miRNA-21浓度发生变化时,PTEN RNA的mRNA水平并不发生变化。

图中显示的是分别在miRNA-21过表达(黄色条)和miRNA-21抑制(蓝色条)之后PTEN基因mRNA 的表达水平,分别与各自对照的抑制剂和类似物转染细胞(红色虚线=1.0)进行比较。

图6:miR-21水平调节对TLR2基因表达的影响。

miRNA-21抑制(黄色条)并不会影响TLR2 mRNA水平,而miR-21过表达(蓝色条)会导致TLR2 mRNA水平下降,分别与各自对照的抑制剂和类似物转染细胞(红色虚线=1.0)进行比较。

表达倍数变化表达倍数变化表达倍数变化表达倍数变化4 结论在该研究中,我们分析了hsa miR-21对三个公认的靶向基因(PDCD4,PTEN 和TLR2)在mRNA表达水平上的影响。

相关文档
最新文档