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葡萄酒的酿造实验报告及葡萄酒的生产工艺与设备

葡萄酒的酿造实验报告及葡萄酒的生产工艺与设备1.引言葡萄酒是一种世界广泛喜爱的酒类,其酿造工艺非常复杂。
本实验旨在研究葡萄酒的酿造工艺和评估不同酿造条件下葡萄酒的质量。
2.实验设计2.1材料准备选择优质葡萄作为原料,保证葡萄酒的质量。
选取不同的葡萄种类和酿造条件进行实验。
2.2酿造过程2.2.1榨汁将葡萄放入压榨机中,轻压使其释放汁液。
将汁液收集至发酵桶中。
2.2.2发酵将发酵桶中的汁液加入酵母,并控制温度在18-25摄氏度。
发酵过程中要注意搅拌,以保证酵母充分与葡萄汁接触。
2.2.3均质化发酵结束后,将酒液过滤以除去固体残渣,然后进行均质化处理以提高葡萄酒的品质。
2.2.4熟化将酿造好的葡萄酒装入木桶或不锈钢罐中进行熟化。
时间根据需要调整,一般在数月至数年之间。
熟化完成后,将葡萄酒瓶装并密封,以便陈年和销售。
3.结果与讨论根据不同葡萄品种和酿造条件的组合,我们制造了几种葡萄酒。
通过传统口感评估,我们对不同样品的质量进行了评估。
根据我们的实验结果,我们发现葡萄品种和酿造条件对葡萄酒的品质有着显著的影响。
一些葡萄酒样品具有更浓郁的果香和更柔和的口感,而其他样品则具有更鲜明的酸度和更清晰的口感。
这一差异可能是由葡萄的天然特点和酿造过程的细节所引起的。
葡萄酒的生产工艺需要一系列设备来进行实施。
4.1压榨机压榨机用于将葡萄轻压,使其释放汁液。
压榨机通常由不锈钢制成,以确保其卫生和耐用性。
4.2发酵桶发酵桶用于容纳葡萄汁和酵母,并提供一个适当的环境促进发酵。
4.3均质器均质器用于将葡萄酒液体过滤并进行均质化处理,以提高葡萄酒的品质和口感。
4.4熟化设备熟化设备可以是木桶或不锈钢罐。
木桶可以为葡萄酒提供更复杂的风味,而不锈钢罐则更容易控制温度和其他环境因素。
瓶装设备用于将葡萄酒瓶装,并进行密封,以便陈年和销售。
5.结论通过本实验,我们深入了解了葡萄酒的酿造工艺和评估方法。
葡萄品种和酿造条件对葡萄酒的品质有着重要的影响。
葡萄酒酿造实验报告

一、实验目的1. 了解葡萄酒的酿造过程,掌握葡萄酒的基本制作方法。
2. 学习葡萄酒发酵过程中的微生物学知识,观察酵母菌的繁殖和发酵现象。
3. 掌握葡萄酒的陈酿、过滤和装瓶等工艺流程。
二、实验材料1. 成熟、颜色深的葡萄(如巨丰、玫瑰香等)2. 冰糖或白糖3. 玻璃罐、玻璃坛、陶瓷坛、不锈钢瓶、塑料瓶等发酵容器4. 细塑料管5. 木棒或筷子6. 丝袜或细纱布7. 温度计8. pH试纸9. 酵母菌三、实验步骤1. 葡萄挑选:选择成熟、颜色深的葡萄,剔除病果、烂果和枝梗。
2. 葡萄清洗:将葡萄放入清水中,轻轻搓洗,去除表面的污垢和杂质。
3. 葡萄破碎:将葡萄放入发酵容器中,用木棒或筷子轻轻捣碎,使葡萄汁释放出来。
4. 添加辅料:根据葡萄和糖的重量比例(10:2),向发酵容器中加入适量的冰糖或白糖。
5. 调节pH值:用pH试纸检测发酵液pH值,若过高或过低,可适当添加醋酸或氢氧化钠进行调节。
6. 加入酵母菌:将酵母菌溶于少量温水中,搅拌均匀后加入发酵容器中。
7. 发酵:将发酵容器密封,置于阴凉通风处。
每天用木棒搅拌葡萄皮,并压入酒液中。
8. 发酵结束:6天后,品尝酒液基本没有甜味时,说明酒精发酵完成。
9. 过滤:将葡萄酒汁倒入矿泉水瓶,用细纱布过滤掉葡萄皮、籽、糟等残渣。
10. 陈酿:将清澈的酒液倒入另一个矿泉水瓶,装满后盖紧盖子,放置两至三周。
11. 装瓶:将陈酿好的葡萄酒倒入事先准备好的空瓶中,装满后密封。
四、实验现象1. 葡萄装入坛子后,半天内葡萄汁中产生较多气泡,说明酵母菌开始繁殖和发酵。
2. 6天后,坛中气泡减少,酒液颜色逐渐变深。
3. 经过陈酿和过滤,酒液变得清澈透亮。
五、实验结果分析1. 通过本次实验,掌握了葡萄酒的酿造过程,包括葡萄挑选、清洗、破碎、发酵、陈酿、过滤和装瓶等环节。
2. 观察到酵母菌在发酵过程中的繁殖和发酵现象,了解了葡萄酒发酵的微生物学知识。
3. 通过调整pH值,使酒液达到最佳发酵条件。
葡萄酿酒发酵实验报告

葡萄酿酒发酵实验报告实验标题:葡萄酿酒发酵实验报告实验目的:探究葡萄酿酒过程中的发酵过程及其对酒精含量的影响。
实验材料:1. 新鲜葡萄2. 尼氏培养基3. 发酵容器4. 酒厂用酵母菌5. 温度计6. 酒水密度计实验步骤:1. 将新鲜葡萄榨汁,去掉果皮和籽。
2. 将葡萄汁倒入发酵容器中,加入适量的尼氏培养基。
3. 在发酵容器中加入酒厂用酵母菌,搅拌均匀。
4. 在发酵容器上盖上气密的盖子,使其氧气无法进入。
5. 将发酵容器放置于恒定的温度环境中,并定期检测酒液的温度,并保持恒定。
6. 每天测量酒液的密度,记录发酵过程中的变化。
7. 大约发酵6-10天后,将酒液倒入定量瓶,使用酒水密度计测量酒液的酒精含量。
实验结果:经过6-10天的发酵,葡萄酒液逐渐变得浑浊,并有气泡产生。
实验期间,酒液的温度保持在25-30摄氏度。
通过记录每天的酒液密度,我们可以看到密度逐渐降低的趋势,从而说明了发酵的进行。
最终,我们测量了酒液的酒精含量,得出了一个准确的数值。
实验讨论:通过这次实验,我们可以得到以下几点结论:1. 发酵是由酵母菌产生的,酵母菌可以将糖转化为酒精和二氧化碳。
当酒液密度下降时,说明发酵进行的越来越充分。
2. 温度对发酵的速度和效果有很大的影响。
过高或过低的温度都会影响酵母菌的生长和发酵效果。
3. 在密封的条件下进行发酵,可以阻止氧气进入酒液,以免产生不好的气味。
4. 酒液的酒精含量可以通过使用酒水密度计进行测量,是一种简单且准确的方法。
实验总结:通过这次实验,我们成功地探究了葡萄酿酒的发酵过程及其对酒精含量的影响。
实验结果表明,葡萄经过发酵后可以转化为葡萄酒,并且酒精含量可以通过测量酒液密度来确定。
这次实验的结果对于了解酿酒过程以及酿酒技术的应用具有重要的意义。
葡萄酒酿造实验报告

葡萄酒酿造实验报告葡萄酒酿造实验报告一.实验过程1.葡萄挑选,发酵1.1 原理概述葡萄酒是指用纯葡萄汁发酵,经陈酿处理后生成的低酒精度饮料。
根据颜色分为红葡萄酒和白葡萄酒两种。
前者是红葡萄带皮浸渍发酵而成;后者是葡萄汁发酵而成的。
而按照酒内糖分的不同可以分为干葡萄酒(含糖量4g/L以下)、半干葡萄酒(含糖量在4~12g/L)、半甜葡萄酒(含糖量在12~45g/L)、甜葡萄酒(含糖量大于45g/L)。
另外根据是否含二氧化碳分为静酒或气酒。
红葡萄酒的成分相当复杂,它是经自然发酵酿造出来的果酒,它含有最多的是葡萄果汁,占百分之八十以上,其次是经葡萄里面的糖份自然发酵而成的酒精,一般在百分之十至百分之十三,剩余的物质超过1000种,比较重要的有300多种。
红葡萄酒其他重要的成分如酒酸,果性,矿物质和单宁酸等。
虽然这些物质所占的比例不高,却是酒质优劣的决定性因素。
质优味美的红葡萄酒,是因为它们能呈现一种组织结构的平衡,使人在味觉上有无穷的享受。
另外葡萄的营养很高,而以葡萄为原料的葡萄酒也蕴藏了多种氨基酸、矿物质和维生素,这些物质都是人体必须补充和吸收的营养品。
1.2 实验步骤1.2.1葡萄挑选挑选成熟完整没有伤口的葡萄,剔除烂掉的葡萄。
1.2.2 葡萄清洗逐颗清洗,注意不要过分冲洗,因为发酵所需的酵母,来源于葡萄皮上的野生酵母,过分冲洗会大量减少酵母的数量,不利于发酵。
1.2.3 压榨把葡萄捏碎放入准备好的陶罐中,使葡萄汁流出,挑出葡萄籽,不需要去皮。
1.2.4 葡萄汁改良根据自己所用葡萄的量添加适量的糖,五斤葡萄加一斤糖。
1.3 思考题葡萄酒中的酒精度,糖度如何检测?答:酒精度测定,经过蒸馏后用酒度计温度计读数,查表得准确酒精度,糖度用糖度计测定。
2.葡萄酒的二次发酵2.1 目的葡萄酒酒精发酵之后进行的苹果酸-乳酸发酵,降低酸度让葡萄酒柔和,使葡萄酒澄清。
2.2 原理残糖发酵:酒中的残糖继续发酵可以提高酒精度。
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葡萄酒的酿造及其中酵母菌对发酵过程的影响实验设计方案一、前言:葡萄酒是用新鲜的葡萄或葡萄汁经发酵酿成的酒精饮料。
通常分红葡萄酒和白葡萄酒两种。
前者是红葡萄带皮浸渍发酵而成;后者是葡萄汁发酵而成的。
我们所要酿造的是红葡萄酒。
葡萄酒有增进食欲,滋补作用的作用。
葡萄酒中含有糖、氨基酸、维生素、矿物质。
这些都是人体必不可少的营养素。
它可以不经过预先消化,直接被人体吸收。
非凡是对体弱者,经常饮用适量葡萄酒,对恢复-健康有利。
同时还有助于消化,葡萄酒能刺激胃酸分泌胃液,每60-100克葡萄酒能使胃液分泌增加120毫升。
自酿的葡萄酒,不用添加发酵剂,也不添加任何防腐剂和澄清剂。
家酿的葡萄酒利用葡萄皮上的野生酵母菌分解葡萄中的糖份转化为酒精,另加点糖提高酒精度。
一般保质期不超过两年,所以成酒后应在两年内喝光。
二、实验目的:1、熟悉酿造葡萄酒的过程和原理。
2、学会葡萄酒中酵母菌的分离纯化。
3、熟悉酵母菌形态观察和菌落计数法4、对比来说明,酵母菌对葡萄酒发酵的影响,杀菌剂(SO2)对发酵过程的影响。
三、材料和仪器:(一)材料:葡萄3斤(因葡萄还未上市,可用提子代替,苏果超市有,但比较贵)。
白糖半斤(二)仪器:1、主发酵器:玻璃罐(坛、瓶)、陶瓷坛、能耐受酒精又对人无害的塑料瓶罐等均可。
2、二次发酵容器及装酒的容器:可以用空酒瓶、饮料瓶、矿泉水瓶等都可3、一根细塑料管。
用来在发酵完成后利用虹吸法将葡萄酒从发酵容器中倒出。
4、木棒或筷子。
用来在发酵过程中搅拌葡萄皮和葡萄汁。
5、丝袜或细纱布。
用来过滤葡萄酒汁。
四、实验步骤:(一)葡萄酒的酿造1、清洗:将主发酵器(即玻璃坛等)充分洗干净,控干。
2、浸泡:将葡萄摘除蒂,把剪好的葡萄冲洗干净后用淡盐水浸泡十分钟左右,这是为了去掉葡萄皮上的农药和其他有害物质,再次冲洗,晾干至表面没有水珠。
3、装瓶:将葡萄捏破,葡萄肉连同葡萄皮挤到主发酵器中。
当把葡萄装到发酵器容量的70%左右时,停止装葡萄,盖上盖子,但不要完全拧紧。
酿葡萄酒的实验报告

一、实验目的1. 了解葡萄酒的酿制过程。
2. 掌握葡萄酒的基本制作方法。
3. 培养动手操作能力和实验观察能力。
二、实验器材1. 主发酵器:玻璃罐、玻璃坛、玻璃瓶、陶瓷坛、不锈钢瓶或能耐受酒精又对人无害的塑料瓶、塑料罐等。
2. 二次发酵容器及装酒的容器:空酒瓶、饮料瓶、矿泉水瓶等。
3. 细塑料管:用于虹吸法倒出葡萄酒。
4. 木棒或筷子:用于搅拌葡萄皮和葡萄汁。
5. 丝袜或细纱布:用于过滤葡萄酒汁。
6. 成熟、颜色深的葡萄。
7. 冰糖或白糖。
8. 温度计。
9. 计时器。
三、实验过程1. 准备材料:将葡萄洗净,去皮去籽,留下葡萄肉。
2. 装填发酵器:将葡萄肉挤入发酵器中,然后放入葡萄皮,装至70%容量,虚掩盖子。
3. 发酵初期:将发酵器放置在阴凉通风处,每天用木棒搅拌葡萄皮,并压入酒液中,确保葡萄皮与酒液充分接触。
4. 加入辅料:发酵过程中,每隔一段时间加入适量的冰糖或白糖,搅拌均匀。
5. 发酵过程:观察发酵情况,当酒液中气泡减少,酒液颜色逐渐变深时,说明发酵进入后期。
6. 完成发酵:当酒液基本无甜味时,说明酒精发酵完成。
7. 过滤:将葡萄酒汁倒入二次发酵容器,用细纱布过滤掉葡萄皮、籽、糟等固体物质。
8. 二次发酵:将过滤后的酒液倒入矿泉水瓶中,密封,放置一段时间进行二次发酵。
9. 储存:待酒液澄清后,倒入玻璃瓶中,密封储存。
四、实验现象1. 葡萄装入发酵器后,半天内,葡萄汁中产生较多气泡。
2. 发酵过程中,气泡逐渐减少,酒液颜色逐渐变深。
3. 发酵完成后,酒液基本无甜味,呈金黄色。
五、实验反思1. 酿制葡萄酒的过程中,发酵条件对酒的品质有很大影响,如温度、湿度、搅拌等。
2. 在发酵过程中,要密切关注发酵情况,及时调整发酵条件,以保证酒的品质。
3. 过滤是葡萄酒酿制过程中的重要环节,要选择合适的过滤材料,确保酒液的清澈度。
4. 储存过程中,要选择合适的容器,避免酒液受到污染。
六、实验总结本次实验成功制作了一瓶美味的葡萄酒,通过亲自动手操作,了解了葡萄酒的酿制过程,掌握了基本制作方法。
葡萄酒酿造实验报告

葡萄酒酿造实验报告一.实验过程1.葡萄挑选,发酵1.1 原理概述葡萄酒是指用纯葡萄汁发酵,经陈酿处理后生成的低酒精度饮料。
根据颜色分为红葡萄酒和白葡萄酒两种。
前者是红葡萄带皮浸渍发酵而成;后者是葡萄汁发酵而成的。
而按照酒内糖分的不同可以分为干葡萄酒(含糖量4g/L以下)、半干葡萄酒(含糖量在4~12g/L)、半甜葡萄酒(含糖量在12~45g/L)、甜葡萄酒(含糖量大于45g/L)。
另外根据是否含二氧化碳分为静酒或气酒。
红葡萄酒的成分相当复杂,它是经自然发酵酿造出来的果酒,它含有最多的是葡萄果汁,占百分之八十以上,其次是经葡萄里面的糖份自然发酵而成的酒精,一般在百分之十至百分之十三,剩余的物质超过1000种,比较重要的有300多种。
红葡萄酒其他重要的成分如酒酸,果性,矿物质和单宁酸等。
虽然这些物质所占的比例不高,却是酒质优劣的决定性因素。
质优味美的红葡萄酒,是因为它们能呈现一种组织结构的平衡,使人在味觉上有无穷的享受。
另外葡萄的营养很高,而以葡萄为原料的葡萄酒也蕴藏了多种氨基酸、矿物质和维生素,这些物质都是人体必须补充和吸收的营养品。
1.2 实验步骤1.2.1葡萄挑选挑选成熟完整没有伤口的葡萄,剔除烂掉的葡萄。
1.2.2 葡萄清洗逐颗清洗,注意不要过分冲洗,因为发酵所需的酵母,来源于葡萄皮上的野生酵母,过分冲洗会大量减少酵母的数量,不利于发酵。
1.2.3 压榨把葡萄捏碎放入准备好的陶罐中,使葡萄汁流出,挑出葡萄籽,不需要去皮。
1.2.4 葡萄汁改良根据自己所用葡萄的量添加适量的糖,五斤葡萄加一斤糖。
1.3 思考题葡萄酒中的酒精度,糖度如何检测?答:酒精度测定,经过蒸馏后用酒度计温度计读数,查表得准确酒精度,糖度用糖度计测定。
2.葡萄酒的二次发酵2.1 目的葡萄酒酒精发酵之后进行的苹果酸-乳酸发酵,降低酸度让葡萄酒柔和,使葡萄酒澄清。
2.2 原理残糖发酵:酒中的残糖继续发酵可以提高酒精度。
后发酵期间必须将容器装满,并且严格密闭。
葡萄酒酿造车间实习报告

葡萄酒酿造车间实习报告一、实习背景与目的作为一名葡萄酒酿造专业的学生,为了更好地将理论知识与实践相结合,提高自己的专业技能,我于XXXX年XX月XX日至XXXX年XX月XX日,在XXXX葡萄酒酿造车间进行了为期一个月的实习。
实习期间,我深入了解了葡萄酒酿造的全过程,从葡萄的采摘、挑选、压榨,到发酵、澄清、过滤,最后到瓶装封口,亲身体验了葡萄酒生产的各个环节。
二、实习内容与过程1. 葡萄的采摘与挑选实习的第一天,我跟随工人们一起前往葡萄园进行采摘。
我了解到,葡萄的采摘时间一般选择在早晨或傍晚,此时气温较低,有利于保持葡萄的新鲜度。
在采摘过程中,我学会了如何正确地剪下葡萄,避免伤害到葡萄藤。
此外,我还学会了如何挑选优质的葡萄,将成熟度适中、无病虫害的葡萄挑选出来。
2. 葡萄的压榨与发酵采摘回来的葡萄经过去梗、清洗、压榨后,进入发酵罐进行发酵。
在发酵过程中,我了解到酵母菌在适宜的温度和湿度下能够将葡萄汁中的糖分转化为酒精和二氧化碳。
发酵过程中,我学会了如何监测发酵液的温度和酒精含量,以确保发酵过程的正常进行。
3. 葡萄酒的澄清与过滤发酵结束后,葡萄酒需要进行澄清和过滤,以去除杂质和残渣。
我学会了如何使用澄清剂使葡萄酒中的悬浮物沉淀,并通过过滤设备将澄清的葡萄酒过滤干净。
这一过程对于保证葡萄酒的口感和品质至关重要。
4. 葡萄酒的瓶装封口澄清过滤后的葡萄酒进入瓶装环节。
我学会了如何将葡萄酒倒入瓶中,并通过封口机将瓶口密封。
在瓶装过程中,我还学会了如何检查瓶装葡萄酒的质量,确保瓶口密封良好,无泄漏。
三、实习收获与反思通过这次实习,我对葡萄酒酿造的全过程有了更深入的了解,掌握了葡萄酒生产的基本技能。
同时,我也认识到葡萄酒酿造是一个严谨的过程,每一个环节都关系到葡萄酒的口感和品质。
在今后的学习和工作中,我将继续努力提高自己的专业素养,为我国葡萄酒产业的发展贡献自己的力量。
四、实习总结本次实习让我对葡萄酒酿造有了更直观的认识,使我更加热爱这个专业。
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葡萄酒的酿造及其中酵母菌对发酵过程的影响实验设计方案一、前言:葡萄酒是用新鲜的葡萄或葡萄汁经发酵酿成的酒精饮料。
通常分红葡萄酒和白葡萄酒两种。
前者是红葡萄带皮浸渍发酵而成;后者是葡萄汁发酵而成的。
我们所要酿造的是红葡萄酒。
葡萄酒有增进食欲,滋补作用的作用。
葡萄酒中含有糖、氨基酸、维生素、矿物质。
这些都是人体必不可少的营养素。
它可以不经过预先消化,直接被人体吸收。
非凡是对体弱者,经常饮用适量葡萄酒,对恢复-健康有利。
同时还有助于消化,葡萄酒能刺激胃酸分泌胃液,每60-100克葡萄酒能使胃液分泌增加120毫升。
自酿的葡萄酒,不用添加发酵剂,也不添加任何防腐剂和澄清剂。
家酿的葡萄酒利用葡萄皮上的野生酵母菌分解葡萄中的糖份转化为酒精,另加点糖提高酒精度。
一般保质期不超过两年,所以成酒后应在两年内喝光。
二、实验目的:1、熟悉酿造葡萄酒的过程和原理。
2、学会葡萄酒中酵母菌的分离纯化。
3、熟悉酵母菌形态观察和菌落计数法4、对比来说明,酵母菌对葡萄酒发酵的影响,杀菌剂(SO2)对发酵过程的影响。
三、材料和仪器:(一)材料:葡萄3斤(因葡萄还未上市,可用提子代替,苏果超市有,但比较贵)。
白糖半斤(二)仪器:1、主发酵器:玻璃罐(坛、瓶)、陶瓷坛、能耐受酒精又对人无害的塑料瓶罐等均可。
2、二次发酵容器及装酒的容器:可以用空酒瓶、饮料瓶、矿泉水瓶等都可3、一根细塑料管。
用来在发酵完成后利用虹吸法将葡萄酒从发酵容器中倒出。
4、木棒或筷子。
用来在发酵过程中搅拌葡萄皮和葡萄汁。
5、丝袜或细纱布。
用来过滤葡萄酒汁。
四、实验步骤:(一)葡萄酒的酿造1、清洗:将主发酵器(即玻璃坛等)充分洗干净,控干。
2、浸泡:将葡萄摘除蒂,把剪好的葡萄冲洗干净后用淡盐水浸泡十分钟左右,这是为了去掉葡萄皮上的农药和其他有害物质,再次冲洗,晾干至表面没有水珠。
3、装瓶:将葡萄捏破,葡萄肉连同葡萄皮挤到主发酵器中。
当把葡萄装到发酵器容量的70%左右时,停止装葡萄,盖上盖子,但不要完全拧紧。
4、发酵:将装好葡萄的发酵器放在28℃恒温培养箱内。
葡萄装入发酵器后,大约会在12个小时以内启动发酵,表现为葡萄汁中有较多气泡产生。
在发酵启动后,每天两次用木棒或筷子将葡萄皮压入酒液中,然后盖上盖子。
5、加糖:发酵启动后一到两天内,放入250g白糖,作用是提高酒精度。
发酵启动后三到四天时,再次放入白糖250g,将糖浸入葡萄汁中搅拌均匀。
6、二次发酵:当酒精发酵完成后,首先利用虹吸法,将葡萄酒汁倒入二次发酵器,然后将剩下的葡萄皮、籽、糟等用丝袜或细纱布过滤,过滤后的酒液也混入二次发酵器中。
葡萄皮、籽、糟扔掉。
注意二次发酵器留有1/10空隙,盖子也不要拧的很紧。
放在阴凉处。
二次发酵主要是苹果酸-乳酸发酵,不再产生酒精。
7、加入澄清剂,加入少量酒精。
二次发酵完成,即得到葡萄酒原酒。
8、口味:自酿出的葡萄酒是酸的,还有一些的刺激性味。
附:葡萄酒的质量检测葡萄酒的质量指标是现行国家标准GB/T15037-94中规定的检验指标;色泽:紫红、深红、宝石红、红微带棕色澄清程度:澄清透明、有光泽、无明显悬浮物(使用软木塞封口的酒允许有3个以下不大于1mm的软木渣)。
葡萄酒应是澄清的,若酵母菌生长,则会出现浑浊,所以要检测出我们自酿的葡萄酒中酵母菌的含量是否合格。
香气:具有纯正、优雅、怡悦、和谐的果香甜味:具有纯净、幽雅、爽怡的口味和新鲜(二)酵母菌的分离纯化1、制备葡萄酒稀释液取发酵2-3天时的葡萄酒液,称量1g于盛有99mL无菌水的三角瓶中,充分振荡,此即为10-2浓度的菌悬液。
用无菌移液管吸取悬液0.5mL于4.5mL无菌水试管中,用移液管吹吸三次,摇匀,此即为10-3浓度。
同样方法,依次稀释到10-7。
稀释过程需在无菌室或无菌操作条件下进行。
(稀释倍数是根据微生物的数量进行选择,不固定。
可以直接涂布、或划线法分离纯化。
)2、涂布法分离(酵母菌定量分离用)依前法向无菌培养皿中倾倒已融化并冷却至45~50℃的马铃薯葡萄糖培养基,待平板冷凝后,用无菌移液管分别吸取三个不同稀释度(10-4,10-5,10-6)菌悬液0.1mL-0.2,依次滴加于相应编号已制备好的马铃薯葡萄糖培养基平板上,右手持无菌玻璃涂棒,左手拿培养皿,并用拇指将皿盖打开一缝,在火焰旁右手持玻璃涂棒于培养皿平板表面将菌液自平板中央均匀向四周涂布扩散,切忌用力过猛将菌液直接推向平板边缘或将培养基划破。
3 培养观察接种后的所有平板倒置与适宜温度培养箱中培养。
大约28-30度,时间两到三天。
将葡萄分为两组发酵,一组为空白对照,另一组加入提取出的酵母菌,观察其在发酵过程中酵母菌的生长对葡萄酒发酵时间的影响。
4、酵母菌形态观察将每个发酵阶段的葡萄汁用显微镜观察其中酵母菌的菌体特征(三)酵母菌的检测利用血球计数法测定材料与仪器:葡萄酒汁,血球计数板,显微镜,盖玻片,无菌毛细管。
操作步骤:1、镜检计数室在加样前,先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物,则需清洗后才能进行计数。
2、加样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片,再用无菌的细口滴管将稀释的葡萄酒汁由盖玻片边缘滴一小滴(不宜过多),让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室,一般计数室均能充满菌液。
注意不可有气泡产生。
3.显微镜计数静止5分钟后,将血球计数板置于显微镜载物台上,先用低倍镜找到计数室所在位置,然后换成高倍镜进行计数。
在计数前若发现菌液太浓或太稀,需重新调节稀释度后再计数。
一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜。
每个计数室选5个中格(可选4个角和中央的中格)中的菌体进行计数。
位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。
如遇酵母出芽,芽体大小达到母细胞的一半时,即作两个菌体计数。
计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。
4.清洗血球计数板使用完毕后,将血球计数板在水笼头上用水柱冲洗,切勿用硬物洗刷,洗完后自行晾干或用吹风机吹干。
镜检,观察每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。
若不干净,则必须重复洗涤至干净为止。
实验结果:注意事项:1、各类容器一定要洗干净,葡萄在酿制过程中不能碰到油污、铁器、铜器、锡器等,但可以接触干净的不绣钢制品。
2、在发酵时,发酵器的盖子一定不要盖死,防止爆炸。
3、糖不要多放,那样会影响发酵过程,产生我们不希望的成分,如果想喝甜葡萄酒,可以在发酵完成后饮用时加糖。
五、具体操作过程和实验现象及分析(一)第一次发酵:葡萄的清洗,捏碎,装罐,加盖(稍微透氧)做成两个瓶葡萄酒,一瓶对照(加入分离纯化后的酵母菌),一瓶空白。
将两个发酵罐放在28恒温培养箱中发酵。
注意不要太用力搓洗葡萄,以防把葡萄皮上的野生酵母菌洗掉。
每天都到实验室里,将浮在上面的葡萄按下去,以便皮上的酵母菌得到充分的利用。
加糖:第一次加糖发酵两天后,第二次发酵五天后。
每次每瓶加75克糖。
(二)第一次培养和观察:(1-3天)实验准备:制备PDA培养基,灭菌,低温保存;培养皿灭菌,制备无菌水并保存。
1、据实验方案,12小时后酒精发酵启动,所以1天后,我们提取了适量葡萄汁,进行酵母菌的分离培养。
取0.5ml的葡萄汁,梯度稀释成10-1,10-2……10-6,采用平板涂布的方法,进行第一次培养。
取10-4,10-5 10-6的三个梯度的稀释菌液进行涂布接种,每个梯度三个培养皿。
涂布完成后,放入28℃恒温培养箱倒置培养,一到两天。
2、葡萄汁的制片观察:取适量葡萄汁和无菌水混合,再附上载玻片,置于十倍镜下观察现象:由于葡萄汁成分非常多,所以镜头里背景很模糊,而且,只能观察到很少的类似于酵母菌的单个细胞,放置于40倍镜下,观察也不是很清楚,其他大多是杂菌和杂物在乱跑。
(分析,发酵未真正启动,葡萄皮上的酵母菌,还未在葡萄汁中大量繁殖,所以是视野里的现象模糊,酵母菌很少)3、葡萄酒的观察现象从之前强烈的果香味转变为有淡淡的酒香味,而且3-4天时,发酵罐中有大量的气泡,葡萄皮颜色变暗,葡萄汁增多,且颜色更深。
葡萄酒中的酵母菌的观察,此时,由于,酵母菌的大量繁殖,在显微镜的视野里已经能,观察到很清晰的酵母菌个体,而且数量较多,图像背景亮了很多,(可能是酵母菌的生长抑制了其他杂菌的生长,是的葡萄之中的杂质变得很少了。
)4、三天后,去取培养好的九个培养基,观察其中菌落的生长情况现象:实验结果似乎没有那么理想,培养基中的菌落,可谓五彩缤纷,有白色的菌落,有黄色的粉状的菌落,有绿色的干燥的菌落,最多的就是黑色霉菌的菌落,散发出来的味道更偏于霉菌的味道,而且,大多的菌落干燥,且成绒毛丝状。
显微镜观察:尽量挑取一些,纯净的白色菌落的菌种,和无菌水混合置于显微镜下观察,发现,菌种不纯,有一些清晰可见的酵母菌细胞,但也参杂着一些霉菌的特征结构。
结果处理方案:挑取一些疑似的白色菌种,进行涂布培养,方法同上,培养1-2天。
同时,也要再做一个备份,万一,白色的菌落不是酵母菌,所以,再取此时的葡萄汁,再做六个培养基,进行培养,原理同上。
(三)第二次培养观察:(4-5天)葡萄酒里发酵现象的观察:葡萄酒里产生了浓郁的酒精味到,而且葡萄酒里有很多泡沫。
疑似菌落的观察:观察上次疑似菌种培养基的培养结果,发现效果还是不佳,虽然有很少的的黑色霉菌生长,但是通过显微镜观察,发现,它应该是霉菌的一种,而不是酵母菌备份培养基的观察:有意外的收获,发现,备份的六个培养基,酵母菌生长的都很好,有很多的乳白色的圆形斑点,湿润且光滑,闻起来有酒香味,且没有其他的杂菌,很符合,酵母菌的菌落培养特征。
且通过显微镜的观察,观察到了很清晰的酵母菌细胞。
对比分析:第一次培养的失败的原因:1、可能是刚一开始,葡萄汁中的酵母菌很少,而稀释的倍数太大,导致涂布培养时,其他杂菌的数量优势甚于酵母菌,所以才会出现那样的结果。
2、也有可能在超净工作台进行涂布操作时,没有严格做到无菌,培养基被污染。
3、而备份成功的缘由是3-4天时,酵母菌生长旺盛,抑制了其他杂菌的生长,使得生长出来的菌落,很纯净。
(四)第三次培养观察:(6-7天)准备工作:PDA培养基的制备,麦芽汁培养基的制备,培养皿的灭菌。
将备份培养基中长出的酵母菌,进行涂布接种,在10-4、10-5、10-6三个稀释度,每组做四个培养基(两个PDA,两个麦芽汁),做好后放入28度恒温的培养箱内进行培养。
观察:两天后取出观察,PDA培养基上菌落长势良好,10-4的两个培养基上菌落数过多,无法计数,而10-5、10-6的培养基上,菌落分布均匀,可以计数。
可能是由于涂布不均匀的问题,麦芽汁培养基上菌落,太过集中,没有PDA上生长的好。
由于时间的有限,我们将此组培养基的菌种接种到对照的葡萄酒中。
由于7天左右已经是酒精发酵的后期,我们发现在空白的葡萄酒中,已经几乎看不到气泡,而在对照的试验中,我们发现还有很多的泡沫,而且酒精味更浓。