基因工程知识点总结归纳更新版14页word
生物基因工程知识点总结
生物基因工程知识点总结生物基因工程知识点总结一、基因工程及其应用基因工程概念：基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。
通俗的说，就是按照人们意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。
原理：基因重组结果：定向地改造生物的遗传性状，获得人类所需要的品种。
二、基因工程的工具1、基因的“剪刀〞—限制性核酸内切酶(简称限制酶)(1)特点：具有专一性和特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定切点。
(2)作用部位：磷酸二酯键(4)例子：EcoRI限制酶能专一识别GAATTC序列，并在G和A 之间将这段序列切开。
(黏性末端)(黏性末端)(5)切割结果：产生2个带有黏性末端的DN断。
(6)作用：基因工程中重要的切割工具，能将外来的DNA切断，对自己的DNA无损害。
注：黏性末端即指被限制酶切割后露出的碱基能互补配对。
基因的“针线〞——DNA连接酶作用：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。
连接部位：磷酸二酯键基因的运载体(1)定义：能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。
(2)种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。
三、基因工程的操作步骤1、提取目的基因2、目的基因与运载体结合3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测和鉴定四、基因工程的应用1、基因工程与作物育种：转基因抗虫棉、耐贮存番茄、耐盐碱棉花、抗除草作物、转基因奶牛、超级绵羊等等2、基因工程与药物研制：干扰素、白细胞介素、溶血栓剂、凝血因子、疫苗3、基因工程与环境保护：超级细菌五、转基因生物和转基因食品的安全性两种观点是：1、转基因生物和转基因食品不安全，要严格控制2、转基因生物和转基因食品是安全的，应该大范围推广。
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基因工程知识点总结归纳(更新版)
基因工程绪论1、克隆（clone）：作名词：含有目的基因的重组DNA分子或含有重组分子的无性繁殖。
作动词：基因的分离和重组的过程。
2、基因工程（gene engineering）：体外将目的基因插入病毒、质粒、或其他载体分子中，构成遗传物质的新组合，并使之掺入到原先没有这些基因的宿主细胞内，且能稳定的遗传。
供体、受体和载体是基因工程的三大要素。
3、基因工程诞生的基础三大理论基础：40年代发现了生物的遗传物质是DNA；50年代弄清楚DNA 的双螺旋结构和半保留复制机理；60年代确定遗传信息的遗传方式。
以密码方式每三个核苷酸组成一个密码子代表一个氨基酸。
三大技术基础：限制性内切酶的发现；DNA连接酶的发现；载体的发现3、基因工程的技术路线：切：DNA片段的获得；接：DNA片段与载体的连接；转：外源DNA片段进出受体细胞；选：选择基因；表达：目的基因的表达；基因工程的工具酶1、限制性内切酶（restriction enzymes）：主要是从原核生物中分离纯化出来的，是一类能识别双链DNA分子中某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链的核酸内切酶。
2、限制酶的命名：属名（斜体）+种名+株系+序数3、II型限制性内切酶识别特定序列并在特定位点切割4、同裂酶：来源不同，其识别位点与切割位点均相同的限制酶。
5、同尾酶：来源不同，识别的靶序列不同，但产生相同的黏性末端的酶形成的新位点不能被原来的酶识别。
6、限制性内切酶的活性：在适当反应条件下，1小时内完全酶解1ug特定的DNA 底物，所需要的限制性内切酶的量为1个酶活力单位。
7、星号活性：改变反应条件，导致限制酶的专一性和酶活力的改变。
8、DNA连接酶的特点：具有双链特异性，不能连接两条单链DNA分子或闭合单链DNA，连接反应是吸能反应，最适反应温度是4至15度，最常用的是T4连接酶。
9、S1核酸酶：特异性降解单链DNA或RNA。
10、RNAH降解与DNA杂交的RNA，用于cDNA文库建立时除去RNA以进行第二链的合成。
基因工程重点总结（完整）
基因工程重点总结（完整）基因工程名词解释：基因工程：重组DNA技术或者基因转移技术，在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其他载体分子，构成遗传物质的新组合，并使之渗入到原先没有这类分子的宿主细胞内，而能持续稳定的传递和表达。
报告基因：其编码产物能够被快速测定，常用来判断外源基因是否成功地导入受体细胞（器官或组织）并检测其表达活性的一类特殊用途的基因。
双元载体：由两个分别含有T—DNA和Vir区的相容性突变Ti质粒构成的双质粒载体系统。
受体系统：用于转化的外植体通过组织培养途径或其他非组织培养途径，能高效、稳定地再生无性系，并能接受外源基因的整合，对转化选择抗生素敏感的再生系统。
正负选择法：哺乳动物细胞转染DNA发生随机整合的几率相当高，而同源重组的频率则相当低。
正是由于这种缘故，给哺乳动物细胞的基因定向插入事件的检测造成了很大困难。
用于富集同源重组事件的特殊试验体系，涉及正选择和负选择两个方面。
基因靶标：通过在转染细胞中发生的外源基因与核基因组目标基因之间的DNA同源重组，使外源基因定点地整合到核基因组的特定位置上，从而达到改变系把你遗传特性的目的。
密码子使用的偏爱性：无论是真核基因还是原核基因，一种特定的氨基酸并不是以同等频率使用所有的同义密码子，而主要使用其中的某一两种。
这种密码子使用的非随机性现象选择标记基因：用于鉴别目标DNA的存在，将成功转化了质粒的宿主挑选出来的基因。
主要是一类编码可使抗生素或除草剂失活的蛋白酶基因。
HA T选择法：由于选择TK+细胞的培养基含有次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷，所以称之为。
生殖细胞浸泡法：将供试外植体如种子、胚、胚珠、子房、花粉粒、幼穗悬浮细胞培养物等直接浸泡在外源DNA溶液中，利用渗透作用把外源基因导入受体细胞并稳定地整合、表达和遗传。
胚囊、子房注射法：使用微量注射器把外源DNA溶液注射到子房或胚囊中，由于卵细胞的吸收使外源DNA进入受精的卵细胞中，从而获得转基因的种子。
基因工程知识点总结
基因工程总结一．概念(1)原理：。
(2)优点：与杂交育种相比，；与诱变育种相比，。
（3）基因工程成功的原因：①成功拼接的原因：②成功表达的原因：二．基本工具1、两种酶：(1) ：作用特点：。
(2) ：E·coli DNA连接酶与T4 DNA连接酶的区别：2、一种运载体（1）条件：①；②；③具有特殊的标记基因（作用：）（2）种类：最常用；其他动植物病毒、三、操作程序(1) ：方法：①：不知道脱氧核苷酸序列②：已知目的基因两端一小段序列，便于③利用化学方法人工合成：知道全部序列，且基因比较小。
这种方法不需要模板。
(2) ——基因工程的核心基因表达载体的组成：(3)(4)①目的基因是否插入到转基因生物的染色体DNA上：②是否转录：③是否翻译：④个体水平鉴定：抗虫、抗病接种实验易错点说明：1、切割目的基因和运载体的要求：用限制酶。
目的是：。
同种的含义是：同一种或相同两种，即单酶切或双酶切。
选择双酶切的原因是。
2、工具≠工具酶；运载体≠质粒。
3、启动子≠起始密码子，终止子≠终止密码子起始密码子和终止密码子位于mRNA上，分别控制翻译过程的启动和终止。
启动子：。
终止子：一段有特殊结构的DNA短片段，位于基因的尾端，作用是使转录过程停止。
4、基因探针的要求：①单链②有③5、农杆菌转化法中的“2”次导入：第一次：将含有目的基因的T—DNA的质粒导入农杆菌；第二次（非人工操作）：将含有目的基因的T—DNA导入受体细胞并整合到植物细胞的染色体DNA上。
6、转化：。
7、（1）乳腺生物反应器与化学反应器比较,优点是：质量稳定，成本低廉，无污染，经济效益显著。
（2）乳腺生物反应器与膀胱生物反应器比较，或者优点是：①收集产物更容易，不必对动物造成伤害；②从动物一出生就可以收集；③与性别无关。
8、将目的基因导入植物细胞采用最多的方法;导入单子叶植物最常用且成本较高的方法；我国科学家独创且简便经济的方法。
巩固练习1、下图中的图1是Eco RⅠ限制酶的作用示意图。
高中生物基因工程知识点归纳
高中生物基因工程知识点归纳一、基因工程的概念和基本原理1. 基因工程是一种通过改变生物体遗传物质的方法，来创造新的生物体或改良现有生物体的技术。
2. 基因工程的基本原理是通过对DNA的操作，实现对生物体的遗传信息的改变。
3. 基因工程的主要操作包括DNA分离、DNA剪切、DNA连接和DNA转化等。
二、基因工程的应用领域1. 农业领域：基因工程可以用于改良作物，使其具有抗虫、耐病、耐旱等特性，提高农作物的产量和品质。
2. 医学领域：基因工程可以用于研究和治疗遗传性疾病，如基因诊断、基因治疗等。
3. 工业领域：基因工程可以用于生产重要的生物制品，如重组蛋白、生物燃料等。
三、基因工程常用的技术和方法1. DNA重组技术：通过将不同来源的DNA片段进行剪切和连接，构建出新的DNA分子。
2. 转基因技术：将外源基因导入到目标生物体中，使其具有新的特性。
3. 基因克隆技术：通过将目标基因插入到质粒中，然后将质粒导入到宿主细胞中，实现目标基因的复制和表达。
4. PCR技术：通过体外扩增目标DNA片段，从而获得足够的DNA 量进行进一步的研究和应用。
5. 基因测序技术：通过测定DNA序列，了解基因组结构和功能。
四、基因工程的伦理和安全问题1. 基因工程的应用可能引发一些伦理和道德问题，如基因歧视、基因改良人类等。
2. 基因工程的安全问题也备受关注，如基因流失、基因污染等。
五、基因工程的社会影响1. 基因工程的发展将对农业、医学和工业等领域产生深远影响，推动科技和经济的发展。
2. 基因工程的发展还将带来一系列的社会问题和挑战，需要政府、科研机构和公众共同关注和解决。
六、基因工程的前景和挑战1. 基因工程的快速发展为人类创造了更多的机会和可能性，但也带来了一系列的挑战和问题。
2. 未来，基因工程将继续在农业、医学和工业等领域发挥重要作用，为人类社会带来更多的福祉。
高中生物基因工程知识点主要包括基因工程的概念和基本原理、应用领域、常用技术和方法、伦理和安全问题、社会影响以及未来的前景和挑战等方面。
基因工程知识点整理
基因工程知识点整理1DNA技术，是指对不同生物的遗传基因，根据人们的意愿，进行基因的切割、拼接和重新组合，再转入生物体内，产生人们所期望的产物，或创造出具有新的遗传特征的生物类型。
2DNA片段，这种DNA片段被称为“目的基因”；二是将目的基因与质粒或病毒DNA连接成重组DNA（质粒和病毒DNA称为载体）；三是把重组DNA引入某种细胞（称为受体细胞）；四是把能表达目的基因的受体细胞挑选出来。
3“DNA→RNA→蛋白质”这一方向进行的，相反的信息传递即“RNA→DNA RNA为模板，反转录出一条DNA单链，再以互补的方式加倍成DNA双链。
56等动物）或其组成部分（器官、组织、细胞等）发展新工艺或新产品的一种科学技术体系。
7DNA（20世纪40年代）②搞清楚了DNA的双螺旋结构和半保留复制激励==机理（20世纪50年代）③确定了遗传信息的传递方式（20世纪60年代）。
8、①DNA切割和连接技术②基因工程载体的研究③DNA重组技术。
9DNA重组、细胞培养和DNA芯片三个平台取得的成果。
10基因组长达3×109碱基对的序列，发明所有的人类基因并阐明它们在染色体上的位置，从而揭示人类的遗传信息。
11品毒性②食品过敏性③产生抗生素抗性④导致食物营养价值下降或体内营养素紊乱。
1213离心法、碱变性法和微量碱变性法。
14、基因工程涉及一系列作用于DNA或RNA的酶催化反应，包括核酸的切割、连接、聚合、转录及反转录等，这些酶均是基因工程不可或缺的工具。
15DNA切割成大小不同的片段，然而要将不同的片段连接起来组成新的杂种DNA片段，则需要连接酶的作用。
目前有三种方法可将体外DNA连接起来：其一是用DNA连接酶连接具有互补黏性末端的DNA片段；其二是用T4 DNA连接酶直接将平末端的DNA连接起来，或是用末端核苷转移酶给平末端的DNA片段加上poly（dA）—poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；其三是先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成黏性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。
基因工程知识点总结
基因工程知识点总结基因工程是一门现代生物学领域的重要学科，它通过改造生物体的遗传物质，实现对生物体基因的精确操控和改良。
下面将对基因工程的相关知识点进行总结，以帮助读者更好地了解该领域的基本概念和技术应用。
一、基因工程的基本概念和原理基因工程是指通过人为手段修改生物体的基因组，以改变其性状和功能的技术。
其实现的基本原理包括基因定位、基因克隆和基因传递。
1. 基因定位：基因定位是指确定感兴趣的基因在基因组中的位置。
常用的方法有FISH（荧光原位杂交）和PCR（聚合酶链反应）等。
2. 基因克隆：基因克隆是指将感兴趣的基因从一个生物体中复制到另一个生物体中，使其在目标生物体中表达。
常用的方法有限制酶切、连接酶切和DNA合成等。
3. 基因传递：基因传递是指将经过克隆的基因导入到目标生物体中，并使其在目标生物体中稳定遗传。
常用的方法有基因枪、电穿孔和冷冻贮存等。
二、基因工程的应用领域基因工程技术在农业、医学和工业等领域有着广泛的应用，下面将分别介绍其主要应用领域。
1. 农业应用：基因工程技术在农业领域的应用主要包括转基因作物的培育和遗传改良。
通过导入特定基因，转基因作物可以获得抗病虫害、耐逆性或提高产量等特点，从而增加农作物的产量和质量。
2. 医学应用：基因工程技术在医学领域的应用主要包括基因诊断、基因治疗和生物药物的生产。
通过基因诊断，可以准确检测遗传病的基因突变，为疾病的早期预测和治疗提供依据。
基因治疗则通过修复或替代患者体内的异常基因，治疗遗传性疾病。
此外，基因工程技术还被用于生产重组蛋白和抗体等生物药物。
3. 工业应用：基因工程技术在工业领域的应用主要包括酶的生产和环境修复。
通过基因工程技术，可以大量生产具有特定功能的酶，用于工业生产和制药领域。
此外，基因工程技术还可以改造微生物，使其能够降解有机物污染物，用于环境修复和生物能源开发。
三、基因工程的伦理和安全问题尽管基因工程技术具有重要的应用前景，但也带来了一些伦理和安全问题。
基因工程知识点总结
基因工程知识点总结基因工程，这个在现代生物学中熠熠生辉的领域，正以惊人的速度改变着我们的生活和对生命的认知。
它就像是一把神奇的钥匙，开启了无数未知的大门，为解决人类面临的诸多问题带来了前所未有的希望和可能。
一、基因工程的定义与基本原理基因工程，简单来说，就是按照人们的意愿，将一种生物的基因在体外进行切割、拼接和重组，然后导入另一种生物的细胞内，使之稳定遗传并表达出相应产物的技术。
其基本原理基于三个重要的步骤：首先是获取目的基因，这就像是在茫茫基因海洋中找到我们想要的那一颗珍珠；其次是构建基因表达载体，相当于给这颗珍珠打造一个合适的盒子，使其能够安全、有效地传递；最后是将重组 DNA 分子导入受体细胞，并使其在受体细胞中稳定存在和表达。
二、获取目的基因的方法1、从基因文库中获取基因文库就像是一个巨大的基因仓库，里面存储着各种各样的基因。
我们可以根据已知的信息，从这个文库中筛选出我们需要的目的基因。
2、利用 PCR 技术扩增目的基因PCR 技术就像是一个基因的复印机，能够以极少量的基因片段为模板，快速大量地复制出我们想要的基因。
3、人工合成法如果已知目的基因的核苷酸序列，或者其氨基酸序列，我们可以通过化学方法直接人工合成目的基因。
三、基因表达载体的构建基因表达载体是基因工程的核心部分，它就像是一辆专门运输基因的列车，需要具备多个关键组件。
1、启动子启动子是基因表达的“开关”，它能够控制基因在何时何地开始表达。
2、终止子终止子则是基因表达的“刹车”，告诉基因在何处停止表达。
3、标记基因标记基因就像是一个个小标签，帮助我们筛选出成功导入目的基因的受体细胞。
4、目的基因这是我们最终想要表达的基因片段。
四、将目的基因导入受体细胞1、导入植物细胞（1）农杆菌转化法农杆菌就像是一个天然的基因运输工具，能够将其携带的基因转移到植物细胞中。
（2）基因枪法通过高速的微粒将目的基因直接打入植物细胞。
（3）花粉管通道法利用花粉管通道将目的基因导入植物的受精卵中。
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基因工程绪论1、克隆（clone）：作名词：含有目的基因的重组DNA分子或含有重组分子的无性繁殖。
作动词：基因的分离和重组的过程。
2、基因工程（gene engineering）：体外将目的基因插入病毒、质粒、或其他载体分子中，构成遗传物质的新组合，并使之掺入到原先没有这些基因的宿主细胞内，且能稳定的遗传。
供体、受体和载体是基因工程的三大要素。
3、基因工程诞生的基础三大理论基础：40年代发现了生物的遗传物质是DNA；50年代弄清楚DNA的双螺旋结构和半保留复制机理；60年代确定遗传信息的遗传方式。
以密码方式每三个核苷酸组成一个密码子代表一个氨基酸。
三大技术基础：限制性内切酶的发现；DNA连接酶的发现；载体的发现3、基因工程的技术路线：切：DNA片段的获得；接：DNA片段与载体的连接；转：外源DNA片段进出受体细胞；选：选择基因；表达：目的基因的表达；基因工程的工具酶1、限制性内切酶（restriction enzymes）：主要是从原核生物中分离纯化出来的，是一类能识别双链DNA分子中某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链的核酸内切酶。
2、限制酶的命名：属名（斜体）+种名+株系+序数3、II型限制性内切酶识别特定序列并在特定位点切割4、同裂酶：来源不同，其识别位点与切割位点均相同的限制酶。
5、同尾酶：来源不同，识别的靶序列不同，但产生相同的黏性末端的酶形成的新位点不能被原来的酶识别。
6、限制性内切酶的活性：在适当反应条件下，1小时内完全酶解1ug特定的DNA底物，所需要的限制性内切酶的量为1个酶活力单位。
7、星号活性：改变反应条件，导致限制酶的专一性和酶活力的改变。
8、DNA连接酶的特点：具有双链特异性，不能连接两条单链DNA分子或闭合单链DNA，连接反应是吸能反应，最适反应温度是4至15度，最常用的是T4连接酶。
9、S1核酸酶：特异性降解单链DNA或RNA。
10、RNAH降解与DNA杂交的RNA，用于cDNA文库建立时除去RNA以进行第二链的合成。
11、DNA聚合酶：(1)、DNA聚合酶I：5’—3’外切酶活性、3’—5’外切酶活性，5’—3’聚合酶活性，用途：除去3’端突起。
补齐5’端突起。
合成cDNA第二链。
切口移位探针的制备。
(2)、Klenow大片段：没有5’→3’外切酶活性，而保留了5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’外切酶活性。
用途:用同位素标记具5’端突起的DNA 片段末端。
补平5’粘性末端。
DNA序列测定。
合成cDNA第二链。
(3)、Taq酶：75度为最适反应温度，95度仍具有稳定性，不具有外切酶活性，主要用于PCR。
12、主要修饰酶：(1)碱性磷酸酶：除去核酸分子3’和5’端的磷酸基团。
(2)T4多聚核苷酸磷酸激酶：催化ATP中的γ位的磷酸基转移5’-OH上(3)末端脱氧核苷酸转移酶：在3’端高效添加脱氧核苷酸。
分子克隆载体1、分子克隆载体：是一类可供外源DNA片段插入并携带重组分子进入宿主细胞进行扩增或表达的DNA分子。
2、分子克隆载体的功能：（1）为外源基因提供进入受体细胞的转移能力（2）为外源基因提供在受体细胞中复制或整合的能力（3）为外源基因提供在受体细胞中扩增和表达的能力3、载体的分类：(1)按用途分：克隆载体、表达载体、整合载体(2)按来源分：原核生物载体：质粒载体、λ噬菌体载体、M13噬菌体载体、cosmid载体、phagemid载体；真核病毒载体4、载体的特点：（1）至少有一个复制起点，因而至少可在一个生物体中自主复制（2）至少有一个克隆位点，可供外源DNA插入（3）至少有一个标记基因，以知识载体或重组DNA分子是否进入受体细胞（4）具有较小的分子量和较高的拷贝数5、标记基因的作用：外源基因是否插入载体分子形成重组子；外源载体是否进入宿主细胞6、标记基因的种类：抗性标记基因；营养标记基因；生化标记基因；噬菌斑7、常用的遗传标记基因：四环素抗性基因（Tc）；氨苄青霉素抗性基因（Ap）；氯霉素抗性基因（Cm）；卡那霉素（Kan）；新霉素（Neo）；β—半乳糖甘酶基因（LacZ)；葡萄糖苷酸酶基因（Gus）；荧光素酶基因；发光蛋白质基因。
8、按复制起点划分克隆载体：1）质粒复制型—复制起点来自质粒或线粒体和叶绿体（有低拷贝和高拷贝）2）ARS复制型—染色体复制型（一般拷贝数比较高）3）病毒复制型—复制起点来自病毒，若为RNA必须反转录为cDNA（高拷贝）4）混合复制型：不同种生物复制起点混合（穿梭载体）9、根据载体的分子生物学特性划分：质粒载体、病毒型载体、混合型载体10、根据载体功能分类：1）普通型载体：至少有一个以上的克隆位点和两个标记基因。
如PBR322和pUC载体2）表达型载体：3类：Ⅰ型：转录起始区（调控序列+启动子）+终止子；Ⅱ型：转录起始区+翻译起始区（核糖体结合序列和起始密码子）+终止子；Ⅲ型: 转录起始区+ 翻译起始区+ 信号肽链编码区+ 终止子（常称之为表达分泌型载体）3）失控型质粒载体(Run-away plasmid vector)：是一些低拷贝质粒，其复制控制是温度敏感型或药物敏感型，在不同温度或不同药物浓度下，质粒拷贝数会显著变化。
4）探针型载体：该类载体主要特点是含有一些特殊的DNA序列，用于特定的研究目的，如分离基因启动子、终止子、DNA复制起点等。
5)定序型载体：主要用于核苷酸的序列测定6)整合型载体：主要用于基因治疗，稳定表达外源基因。
9、标记基因与拷贝的关系：若标记基因的表达效率较高，宿主细胞可能不大量表达标记基因以满足选择压力的要求，因而载体的拷贝数会降低，可采取相应方法提高拷贝数。
如：对于药物抗性标记基因，可提高药物的浓度。
对于营养标记基因，可降低该基因的表达效率。
大肠杆菌分子克隆载体1、E.coli克隆载体的种类1）质粒载体—复制起点来自一些天然质粒。
2）噬菌体载体—λ，P1和M13、fd载体，复制起点来自噬菌体。
3）COS质粒载体—质粒载体中插入λcos片段，以利于体外包装4）噬粒载体（phagemid）—有质粒和M13、fd的复制起点，以质粒或噬菌体方式复制。
2、质粒的特点：1）质粒DNA的复制与染色体复制无关2）质粒DNA以超螺旋形式存在3）质粒DNA可以结合转移4）质粒的不相容性和不相容群5）质粒DNA的消除6）质粒的整合3、大肠杆菌质粒的复制：以RNAⅡ为引物合成，RNAⅠ与RNAⅡ结合可减少质粒的拷贝数，使RNAⅠ复制起点上游一个核苷酸处G突变为T，使得拷贝数增多。
4、质粒的不亲和性：在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能够在同一宿主细胞中稳定共存的现象。
主要是由于他们在复制功能之间的相互干扰造成。
5、λ噬菌体的结构特点：线性双链DNA病毒，具有末端互补的12个核苷酸，感染细菌后粘端互补成双链环状。
全长48.5kb。
6、热诱导表达：λcl ts857 ，可作为组件插入质粒 DNA 内。
目的基因插在λcl ts857 下游，重组体的目的基因在42 ℃表达，30 ℃不表达。
7、λ噬菌体载体的缺点：基因组太大；酶切点太多；野生型只能接纳一定长度的DNA。
8、λ噬菌体载体的改造：切去非必须片段，加载目的基因去掉太多的酶切位点增加标记基因9、COS质粒载体的特点：在普通质粒载体中插入一个或两个来自λ的cos 位点片段，双cos载体比单cos载体易于重组。
10、COS质粒载体的优点：容量大，用于基因簇的克隆；形成的重组DNA分子可进行体外包装，并能感染大肠杆菌细胞；操作简单，易于转化细胞；对重组DNA分子长度具有选择性包装。
11、噬粒载体（phagemid）：在质粒载体中插入一段M13或fd的复制起点，其插入方向决定在噬菌体颗粒中形成正链还是负链。
基因操作的主要技术原理1、核酸分离提取的原则：保证核算的一级结构的完整性；排除其他分子的污染2、质粒载体分离的关键：如何使质粒与DNA与宿主染色体DNA分开依据：质粒DNA比染色体DNA小得多，在DNA提取过程中，染色体断裂成片段，而质粒DNA仍保持超螺旋构型3、变性法提取质粒DNA的原理：在变性条件（碱性或高温)下，线状染色体DNA变性成为单链而完全分开，而cccDNA虽然互补链之间的氢键断裂，但双螺旋主链骨架仍彼此缠绕在一起。
当变性条件恢复时，质粒DNA迅速复性恢复天然构型，染色体DNA难以复性，交联形成不溶性网状结构，与变性的蛋白质和RNA缠绕在一起，通过离心沉淀下来，而质粒DNA存在于上清液中。
4、RNA分离纯化的关键：防止内外源RNase的作用5、RNase的特点：抗酸抗碱；抗高温严寒；抗变性剂，酶活性不需要辅助因子，存在范围广。
因此操作时要进行高温灭菌或用焦碳酸二乙酯处理或强蛋白质变性剂等。
6、核酸的浓缩：沉淀法：可以除去溶液中某些可溶的盐离子和杂质。
7、核酸凝胶电泳的基本原理：核酸分子中的磷酸基团带负电荷，在电场中将向正极移动，通过凝胶的分子筛作用可以将不同大小和构型的核酸分子分离，分子量小的DNA，具有较紧密的构型，在凝胶中移动快；反之，分子量大的DNA移动慢。
8、核酸凝胶电泳常使用溴酚蓝作为指示剂、溴化乙锭作为染色剂9、脉冲场凝胶电泳原理：加在凝胶上至少有两个电场方向，使得DNA分子要不断地调整泳动方向，不同分子量大小的DNA分子用于改变泳动方向的时间不同，则可以得到分离10、双脱氧核苷酸终止法的原理：双脱氧（2'，3'）-核苷酸可以象2'-脱氧核苷酸那样直接掺入新合成的DNA链中，但因3’端不具OH基，DNA链合成至此中断。
由于双脱氧核苷酸在每个DNA分子中掺入的位置不同，故可根据不同长度的DNA片段测定出核苷酸序列11、双脱氧核苷酸终止法的过程：制备单链DNA，与引物退火，分为4个反应体系，每个体系中加入dNTP和一种双脱氧核苷酸，DNA聚合酶定序反应，反应产物变性后电泳，凝胶干燥，放射自显影，根据条带读出碱基序列，再根据碱基互补配对原则写出DNA链的序列。
（注意：要自己写一个序列，然后写上每个体系中出现片段的序列，然后根据序列画出电泳图，考试考的可能性大，书上有步骤）12、Maxam-Gilbert化学法原理：DNA链上的不同碱基可以和碱基修饰剂发生反应，在碱性环境下硫酸二甲酯能使碱基G发生甲基化，在酸性环境下哌啶甲酸使A和G脱嘌呤，碱性环境下肼使C和T发生开环，在高盐浓度下肼只使C开环。
然后发生1~2个碱基的脱落或取代，最后发生链断裂，不同位置断裂的DNA分子经凝胶电泳就可确定其核苷酸序列13、化学法测序的优点、不需要模板、引物和DNA聚合酶。
14、Southern杂交（Southern blot）：用一种或多种限制性内切酶对基因组DNA加以切割，通过琼脂糖凝胶电泳分离酶切片段，随后，使DNA在原位变性，并从凝胶转移至固相膜，用已知核苷酸片段加以标记作为探针，通过分子杂交来检测待测样品中是否存在互补的核酸序列。