高二生物人教版选修一讲义专题二课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
一、研究思路
1．筛选菌株
(1)原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
(2)选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
2．统计菌落数目
(1)常用方法：稀释涂布平板法。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
(2)测定微生物数量的常用方法还有显微镜直接计数法。
3．设置对照：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
二、实验设计
土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察
1．土壤取样一般要铲去表层土，因为绝大多数细菌分布于距地表约 3～8_cm的土壤层。
2．样品的稀释：不同的微生物需要稀释的倍数不同。(填表)
微生物 细菌 放线菌
真菌
稀释倍数 104、105、106 103、104、105 102、103、104
3.微生物的培养与观察
(1)培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。
(2)观察：每隔24_h统计一次菌落数目，最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
三、操作提示
1．无菌操作：取土样用的小铁铲和盛土样的信封都要进行灭菌；称取土样要在火焰旁进行，稀释样品要在火焰旁操作。 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
2．做标记：对平板和试管进行标记，尤其进行系列稀释时要按照稀释度递增的顺序将试管排列成行。
3．制定计划：对于耗时较长的生物实验，要事先规划时间，以便提高工作效率。
四、菌种鉴定
1．原理：分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，使培养基的碱性增强。
2．方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
探究点一 筛选微生物的研究思路
[共研探究]
1．筛选菌株
分析下表所示培养基的配方，回答下列问题：
成分 含量
成分
含量
KH2PO4 1.4 g 葡萄糖 10.0 g
Na2HPO4 2.1 g 尿素 1.0 g
MgSO4·7H2O 0.2 g 琼脂 15.0 g
将上述物质溶解后，用自来水定容到1 000 mL
(1)在该培养基的配方中，为微生物提供碳源的物质是葡萄糖，提供氮源的物质是尿素。
(2)该培养基是否具有选择作用，为什么？
提示：是。绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，本培养基以尿素为唯一氮源，可以分离得到产生脲酶的微生物(即分解尿素的微生物)。 1．尿素能被尿素分解菌分解的原因是什么？
2．筛选菌落和统计菌落数目的方法及对照实验的设计方法是什么？
3．如何利用选择培养基分离细菌？
4．样品如何进行稀释？如何测定分解尿素的细菌数量？
5．脲酶的检测方法是什么？
2．统计菌落数目
(1)为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
(2)要设置对照实验，且一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。
(3)用此种方法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
(4)活菌数的计算方法(公式)：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M。C表示某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V表示涂布平板时所用的稀释液的体积；M表示稀释倍数。
3．设置对照
教材P22～23提供的案例中A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。如何设置对照实验来确定原因？
提示：方案一：其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A同学操作无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。
方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。
[总结升华]
1．微生物的筛选
(1)选择培养微生物的两种方法
①可利用该分离对象对某种营养物质有“嗜好”的原理，专门在培养基中加入该营养物质，并且使该营养物质成为培养基中某类基本营养物质的唯一供给者。如筛选能分解尿素的细菌，就可将尿素作为培养基中的唯一氮源。
②可利用该分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑菌物质，经培养后，其他微生物生长受到抑制，而该分离对象却可乘机大量增殖，在数量上占据优势。
(2)常见的选择培养基
①将培养基放在高温环境中培养，分离耐高温的微生物。
②以石油为唯一碳源的培养基，可以分离能消除石油污染的微生物。
③不含有机碳源的培养基可以分离自养型微生物。
④无氮源培养基可以分离固氮微生物。
⑤加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。
⑥加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。
2．统计菌落数目的方法
微生物生长量的测定有计数法、重量法、生理指标法等方法，但是一般使用计数法，计数法可分为直接计数法和间接计数法。二者的比较如表所示：
项目 直接计数法 间接计数法
原理 利用特定血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌
主要用具 显微镜、血细胞计数板 培养基
计数依据 菌体本身 培养基上菌落数
优点 计数方便、操作简单 计数的是活菌
缺点 死菌、活菌都计算在内 操作较复杂，有一定误差
计算公式 每毫升原液含菌数＝400×104×每小格平均菌体数×稀释倍数① 每毫升原液含菌数＝培养基上平均菌落数÷涂布液体积×稀释倍数
注：①400、104是常数。
3．实验设计原则
(1)单一变量原则。对照实验中除测试因素(自变量)不同外，其他因素要保证和实验组相同。
(2)平行重复原则。任一稀释度至少涂布3个平板，以增强实验结果的可信度与准确性。
(3)对照原则。
①判断培养基是否有杂菌污染，需要将未接种的相同培养基在相同条件下同时进行培养。
②判断培养基是否起到了筛选的作用，需要同时设立牛肉膏蛋白胨培养基进行同样接种后培养，观察两种培养基上的菌落数目是否有显著差异。
[对点演练]
1．下列关于统计菌落数目方法的叙述，错误的是( )
A．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落
B．为了保证结果准确，一般采用菌落密度较大的平板进行计数
C．采用稀释涂布平板法计数获得的菌落数往往少于实际的活菌数
D．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果
解析：选B 当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落；为了保证结果准确，一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数；采用稀释涂布平板法计数获得的菌
落有可能是由多个细菌形成的，所以往往少于实际的活菌数；在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果以减小实验误差。
2．(2017·全国卷Ⅰ)某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：
(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生__________。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是__________________。但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是_____________________(答出两点即可)。
(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是____________________________________________________。
(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有________________________________________________(答出两点即可)。
解析：(1)土壤中的某些细菌之所以能够分解尿素，是因为它们能产生脲酶。尿素分解菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机物，必须利用现成的有机物(如葡萄糖)作为碳源；葡萄糖通过呼吸作用被分解时，能为细胞生命活动提供能量，同时，葡萄糖还可以转化成脂肪、某些氨基酸等物质，所以进入细菌体内的葡萄糖能为其他有机物的合成提供原料。(2)选择培养基只是允许特定种类的微生物(目的微生物)生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。本实验的目的菌是可分解尿素的细菌，因此配制的培养基应只允许尿素分解菌生长，NH4NO3可以作为所有细菌的氮源，培养基中如含有NH4NO3，将不能起到筛选作用。(3)KH2PO4和Na2HPO4能为细菌生长提供钾盐、钠盐和磷酸盐，而H2PO4－/HPO42－可作为缓冲剂，使培养基中pH保持相对稳定。
答案：(1)脲酶 分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机物 为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料 (2)尿素 其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用 (3)为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定
探究点二 实验设计与操作
[共研探究]
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数操作流程分析(填图)
下面是土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验流程示意图，请结合教材提供的资料分析：
[总结升华]
1．选择培养基与鉴别培养基
项目 选择培养基 鉴别培养基
特殊成分 加入某种化学物质 加入某种指示剂或化学药品
目的 抑制其他微生物生长，促进目的微生物生长 与微生物的代谢产物或培养基中的成分发生特定反应
用途 培养、分离出特定微生物 鉴别不同的微生物
举例 培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入可用伊红美蓝培养基鉴定饮用水或乳制
生物 土壤中分解尿素的细菌的分离及其计数
土壤中分解尿素的细菌的分离及其计数
一、筛选菌株
1、自然中目的菌株的筛选
实例：PCR技术
DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（93℃）的DNA聚合酶。
2、实验室中微生物的筛选原理
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。
3、选择培养基
二、统计菌落数目
1、稀释涂布平板法（活菌计数法）
为结果准确，一般选择菌落数在30--300的平板上进行计数。
计算公式：每克样品中的菌株数=（C÷V）×M
C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数
V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（ml）
M代表稀释倍数
2、显微镜直接计数（总菌计数法）
缺点：不能区分细菌的死活；不适于对运动细菌的计数；个体小的细菌在显微镜下难以观察。
Q：稀释涂布平板法和显微计数法对微生物计数产生的实验误差如何？试分析原因。
A:稀释涂布平板法计数的值比实际值偏小，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落;显微计数法计数的结果比实际值偏大，原因是显微镜下无法区分细胞的死活，计数时包括了死细胞。 三、设置对照
A、空白对照：将未接种的培养基同时进行培养。
B、条件对照：完全培养基（营养成分齐全）接种后培养观察菌落数目。
目的： 主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
实验设计
一、土壤取样
从富含有机质、酸碱度接近中性的潮湿土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。
二、制备培养基
1、制备以尿素为唯一氮源的选择培养基
（筛选出能分解尿素的细菌）
2、制备牛肉膏蛋白胨培养基
（与选择培养基做对照，检测选择培养基是否具有选择作用）
三、样品的稀释与涂布平板
分离不同的微生物要采用不同的稀疏度，测定土壤中细菌的数量，选用的稀释范围也不相同。
四、微生物的培养与观察
高中生物选修一学案14：2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
高中生物选修一
1 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
学习目标
利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。
重点与难点
对土样的选取和选择培养基的配制、对分解尿素的细菌的计数
学习过程
一、筛选菌株
1．尿素是一种重要的氮肥，农作物 （能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为 ，这是因为细菌能合成 。
2．科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来原理是 。
[思考1]本课题使用的培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是 ，提供氮源的是 ，琼脂的作用是 。
[思考2]本课题使用的培养基对微生物 （具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是 。
二、统计菌落数目
1．在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是 。除此之
外， 也是测定微生物数量的常用方法。
2．采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于 。通过统计 ，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。
[思考3]从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是 。
[思考4]利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是 。
3．统计的菌落数比活菌的实际数目 。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是 菌落。因此，统计结果一般用 来表示。
新人教版生物选修1课题2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》学案
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新人教版生物选修1课题2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》学案
学习目标
研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。
学习重点与难点
重点：对土样的选取和选择培养基的配制。
难点：对分解尿素的细菌的计数。
自主探究
1．尿素只有被 分解成 之后，才能被植物吸收利用。
2．以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是：
⑴ ；⑵ 。
3．PCR（ ）是一种在体外将 。此项技术的自动化，要求使用耐高温的DNA聚合酶。
思考：怎样找耐高温的酶呢？
4．实验室中微生物的筛选应用的原理是：人为提供有利于 生长的条件（包括
等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
5．选择培养基是指 。
6．常用来统计样品中活菌数目的方法是 。即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在
的平板进行计数。另外， 也是测定微生物数量的常用方法。
7．比较教材中两位同学的操作方法，哪位同学的结果接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进呢？如需要，如何改进？
8．一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目 。这是因为
高中生物选修一课时作业5：2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
高中生物选修一
1 专题2 微生物的培养与应用
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1. 在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用只含尿素作氮源的培养基，乙组实验用另加入硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作、培养与观察，则乙组实验属于（ ）。
A．空白对照 B．标准对照
C．相互对照 D．条件对照
2. 下列有关微生物培养与应用的说法正确的是（ ）
A. 分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源
B. 大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配置和纯化大肠杆菌两个阶段
C．平板划线接种法中划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连
D．稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养
3. 若将酵母菌的线粒体DNA进行诱变，使其线粒体DNA不再具有自我复制能力，再将此突变的酵母菌接种在含有葡萄糖的培养基上培养，可观察到的现象是（ ）
A．因为子代中没有线粒体，所以无菌落形成
B．酵母菌仍能进行有机物的氧化分解，所以有小菌落形成
C．因为线粒体DNA对真核细胞不重要，所以有正常大小的菌落形成
D．因为酵母菌对糖类的彻底氧化分解可不依赖线粒体，所以有正常大小的菌落形成
4. 下列关于生物技术实践的说法正确的是（ ）
A．蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较大的移动速度较慢
B．细菌能在液体培养基中以有丝分裂方式扩增
C．自养微生物能在缺少有机碳源的培养基上生长
D．参与果酒和果醋发酵的微生物都含有多种细胞器
5. 下列关于微生物的培养和应用的叙述，错误的是（ ）
A．通过消毒不能杀死物体内所有的微生物
B．根据培养皿中菌落数可以准确计算样品中含有的活菌实际数目
C．平板划线法不可用于微生物的计数
D．使用过的培养基及培养物必须经过灭菌后才能丢弃 高中生物选修一
2 6. 鉴定分解纤维素的微生物要用刚果红染色，加入刚果红的操作可在（ ）
高中生物选修1学案1：2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
高中生物选修一
1 专题2 微生物的培养与应用
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
[教学目标]
研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。
[重点难点]
重点：对土样的选取和选择培养基的配制。
难点：对分解尿素的细菌的计数。
读书指导法、启发式教学
[教学流程]
一、基础知识：
自主预习
1．尿素只有被 分解成 之后，才能被植物吸收利用。
2．以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是：
⑴ ；⑵ 。
3．PCR（ ）是一种在体外将 。此项技术的自动化，要求使用耐高温的DNA聚合酶。
思考：怎样找耐高温的酶呢？
4．实验室中微生物的筛选应用的原理是：人为提供有利于 生长的条件（包括
等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
5．选择培养基是指 。
6．常用来统计样品中活菌数目的方法是 。即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在
的平板进行计数。另外， 也是测定微生物数量的常用方法。
7．比较教材中两位同学的操作方法，哪位同学的结果接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进呢？如需要，如何改进？
8．一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目 。这是因为
人教版高中生物选修一练习：专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 含解析
人教版高中生物选修一
1 专题2 微生物的培养与应用
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养细菌后，指示剂将( )
A．变蓝色 B．变红色
C．变黑色 D．变棕色
[解析]细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，加入酚红指示剂将变红。
[答案]B
2．测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是( )
A．细菌个体小，真菌个体大
B．细菌易稀释，真菌不易稀释
C．细菌在土壤中数量比真菌多
D．随机的，没有原因
[解析]土壤中的微生物大约70%～90%是细菌，真菌的数量要比细菌少。样品的稀释度越高，在平板上生成的菌落数目就越少。在实人教版高中生物选修一
2 际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300，适于平板计数，所以细菌的稀释倍数要高于真菌的稀释倍数。
[答案]C
3．用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。原因是( )
A．平板上的一个菌落就是一个细菌
B．菌落中的细菌数是固定的
C．此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌
D．此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同
[解析]用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌，但偶尔也能来自两个细菌，所以此方法统计的菌落数可能与活菌的实际数不相同。
[答案]C
4．土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成一种( )
A．尿素酶 B．脲酶
C．蛋白酶 D．肽酶
[解析]能够分解利用尿素的细菌，其细胞内含有脲酶，可以把尿素分解成氨，然后进一步利用。
[答案]B
5．(2016·四川卷)图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。 人教版高中生物选修一
2020-2021高二生物1学案：专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数含解析
学必求其心得，业必贵于专精
2020-2021学年高二生物人教版选修1学案：专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数含解析
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
知识点一 菌株的筛选与选择培养基
1．筛选菌株
(1）原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
（2）实例：从热泉中筛选出Taq细菌。热泉70～80 ℃的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而使耐热的Taq细菌脱颖而出。
（3）方法:利用选择培养基分离。
归纳总结：选择培养微生物的方法通常有两种：(1)可利用该分离对象对某一营养物质有“嗜好"的原理，专门在培养基中加入该营养物质，从而使它成为一种加富培养基；（2)可利用该分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑菌物质,经培养后，其他微生物生长受抑制,而分离对象却可乘机大大繁殖，在数量上占优势. 学必求其心得，业必贵于专精
2．选择培养基
(1)概念：选择培养基指允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
（2）选择培养基的制备原理：根据不同微生物的特殊营养要求或其对某一化学、物理因素的抗性不同而制备培养基。
(3)选择培养基的制备方法：在培养基中加入某种允许特定种类微生物生长，抑制或阻止其他种类微生物生长的化学成分。
（4)选择培养基的用途：使混合菌株中的目的菌变成优势菌，提高该菌的筛选率。
（5)实例:在培养基中以尿素为唯一的氮源可得到能利用尿素的微生物；在培养基中加入青霉素可分离得到酵母菌和霉菌。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基配方
培养基组成 提供的营养或作用
KH2PO4 1.4 g、Na2HPO4 2。1
g、MgSO4·7H2O 0。2 g 无机盐
葡萄糖10.0 g 碳源
尿素1.0 g 氮源、碳源
琼脂15.0 g 凝固剂
用蒸馏水定容至1 000 mL 氢元素、氧元素
人教版高中生物选修1-2.2疑难点拨：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1.选择培养基
选择培养基的含义是：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。
在培养基中加入某种化学物质可以做到这一点，如加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在培养的培养成分的基础上加入的。
培养基中的营养成分的改变也可达到分离微生物的目的。如培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。改变微生物的培养条件， 也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。
2.如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？
统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。
3.为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？
这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧型细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。
高中生物选修1练习：专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 含解析
人教版高中生物选修一
- 1 - 专题2 微生物的培养与应用
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养细菌后，指示剂将( )
A．变蓝色 B．变红色
C．变黑色 D．变棕色
[解析]细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，加入酚红指示剂将变红。
[答案]B
2．下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是( )
A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上
C．将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48 h
D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数
[解析]检测细菌总数，用蒸馏水配制培养基，常用高压蒸汽灭菌法人教版高中生物选修一
- 2 - 灭菌后，取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上，将实验组和对照组放置在适宜条件下培养，在确定对照组无菌后，选择菌落在30～300的平板为代表进行计数，D错误；A是培养基的灭菌方法，B设置了一系列对照实验，C是细菌的培养方法。
[答案]D
3．用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。原因是( )
A．平板上的一个菌落就是一个细菌
B．菌落中的细菌数是固定的
C．此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌
D．此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同
[解析]用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌，但偶尔也能来自两个细菌，所以此方法统计的菌落数可能与活菌的实际数不相同。
[答案]C
4．分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是( )
①加尿素 ②不加尿素 ③加琼脂 ④不加琼脂 ⑤加葡萄糖
人教版高中生物选修一专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学案含解析
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. 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
一、研究思路
1．筛选菌株
(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
(2)选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
2．统计菌落数目
(1)活菌计数法：常用稀释涂布平板法。
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M。
C：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。
V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)。
M：代表稀释倍数。
③统计方法：为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取其平均值。 .1.实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)同时抑制或阻止其他微生物的生长。
2．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
3．测定微生物数量的常用方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比活菌的实际数目低。
4．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作为唯一氮源的选择培养基分离能分解尿素的细菌。
5．鉴定分解尿素细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，依据是否变红进行判断。
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. (2)显微镜直接计数法：在显微镜下直接观察和计数微生物的数量。
3．设置对照
(1)对照实验：指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。
(2)主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
二、实验设计
1．土壤取样
从富含有机质、酸碱度接近中性且潮湿的土壤取样。先铲去表层土，在距地表约3～8.cm的土壤层取样。