奶牛胚胎移植技术
提高奶牛性控体外胚胎移植受胎率的关键技术
瘦 的牛不 可 用 ；对 于经 产 牛 ，要 求 ５～ ６产 阶段 的胚胎 。因此 ，胚 胎 的制作技 术 、冷 冻
林 松 ，王廷斌 ，刘 伟。 ，梁 坤
（ １ ．黑龙江省穆棱市畜牧技术 服务中心 １ ５ ７ ５ ０ ０；２ ． 佳 木斯 市家畜繁育指导站 １ ５ ４ ０ ０ ７ ； ３ ．富锦市种 畜场 １ ５ ６ １ ０ ６ ；４ ．黑龙江省家畜繁育指导站 １ ５ ０ ０ ６ ９ ）
中图分 类 号 ：￥ ８ ２ ３ ． ３
第 ４期
２ ０ １ ３年
胚 、死胚鉴定和等 级鉴定 ，不合 格 的胚 胎 移 那些有疾病但 能治愈 的受 体牛并 采取措 施治 植成功 率 很 低 ，不 予 以移 植 。在 批 量 移 植 愈 ，以增加受体 牛数量 。能确切 检查黄体 状 时 ，尤其受体牛分 散在农 户家 的时候 ，解 冻 态 、子宫状 态 和子 宫炎 症状 态 并 采 取措 施 。 后 的胚胎需要妥 善保存 与运输 ，因为不是 马 解冻要严谨科 学 准确 ，对 胚胎 鉴定要 做到 知 上就全部移植 到受体牛体 内的 ，胚 胎应 避免 道死活 、知道等级级别 ，移植 时要移 植到确 受到冷热打击 ，不能受 到有害气 体和射 线打 切位置 ，输胚时要卫 生 ，要减 少应激 和对 子 击 。不能超 长时间在细 管 中保存 ，否则会 大 宫 的损伤 。总之 ，娴熟 的技 能是 胚胎 移植 的 大降低受胎率。
MOET奶牛育种方案及胚胎移植技术试验
ＭＯ Ｔ 超 数 排 卵 和 胚 胎 移 植 技 术 ） 系 的 主 要 特 点 是 Ｅｆ 体 在 一 个 群 体 内 ． 巾 一 定 数 量 的优 秀母 牛 ． 成 一 个 相 对 的 集 形
奶牛 ＭＯ Ｔ育 种方案 中的应用进 行 了探索 Ｅ
１ 材 料
闭锁群体 ． 群体内完全通过 ＭＯ Ｔ技术进行 繁殖。由于借 助 Ｅ
项 目 （ 号 ：０ ８ Ｆ ３ ６ ０ — — “ 国 荷 斯 坦 奶 牛 在 乌 兹 编 ２０ Ｄ Ａ ０５ ） 中
１１ 供 体 牛 和 受 体 牛 河 南 花 花 牛 集 团 下 属 各 牧 场 优 选 ．
母牛。
１ ． 冻精 ２
北 京奶 牛 中心 １１０ １ １０ １ ３号 、１ ９ ０ ５号 公 牛 １ １９ ９
冻 精 １ ． 药物 ３ 促 卵 泡 素 （ Ｓ ：０ Ｕ 瓶 ； 前 列 腺 素 （ Ｇ） Ｆ Ｈ）５ ０Ｉ ／ 氯 Ｐ ： 支 ； Ｉ Ｒ（ 酮 ＣＤ 孕 ０５ｍ ， ； 排 卵 素 ３号 （ Ｒ Ａ ）２ ． ｇ支 促 Ｌ Ｈ— ３ ：５
２ 方 法
阴道 释放 装置 ） 。维 生 素 Ａ 维 生 素 Ｄ 维 生 素 Ｅ５ｍｌ 。 一 一 ／ 支 ２ｔ 胚 胎 移 植 操 作 步 骤 ． 奶牛胚胎移植 操作步骤见下表 。
超数 排 卵 和胚 胎 移 植 手 段 ．可 使 一 头 公 牛 除 了有 大 量 半 同 胞 外 ． 有 大 量 的 全 同胞 姐 妹 ： 心 群 育 种 的 基 本 特 点 是 主 还 核 要 的 育 种 措 施 集 中 在 较 小 的 高 产 牛 群 中 或 少 数 牛 场 中 实 施 它 便 于严 格 地 实 施 育 种 方 案 ． 行 准 确 的 性 能 测 定 ， 进 而 且 可 以测 定 一 些 在 大 群 体 中 无 法 测 定 的性 状 ． 如 采 食 量 例 河 南花 花牛 集团牧 业 有限公 司承担 了 ２０ ０ ９年 科 技 部
奶牛母牛的胚胎移植技术
奶牛母牛的胚胎移植技术俗称借腹怀胎，是提高良种母牛繁殖潜力、加快品种更新的一项实用高新技术。
主要包括供体、受体的准备，供体的超数排卵与配种，胚胎的收集、检查、冷冻保存和移植等几个基本环节。
1．供体、受体的准备供体、受体均要求为青壮年牛，膘情中等偏上，繁殖机能正常，一般应有2个以上正常的繁殖周期。
此外，供体应是良种，鲜胚移植时，供、受体发情要同步，数量比例要适当，一般为1:5-8为宜。
2．供体的超数排卵与配种牛每次发情后一般只排一个卵，利用外源性促性腺激素处理能使卵巢一次排出多个卵子，即为超数排卵技术。
通常在母牛发情周期的第9-14天肌肉注射FSH进行超排处理，连续注射4天，每日早晚各一次，总量为40-50毫克，剂量均等或递减，第三天的第五次注射时，同时注射PGF2a。
，一般在注射48小时后，母牛即发情排卵。
超排处理以后的发情供体母牛，用活率高、密度大的优良公牛精液配种，适当增加人工授精的次数，两次输精间隔8-10小时。
3．胚胎的收集牛胚胎移植通常用非手术法，利用双通式导管冲卵器多次向子宫角注入冲卵液，反复冲洗回收桑椹至囊胚期胚胎。
4．胚胎的检查在实体显微镜下从回收的冲卵液中检出胚胎，主要依据形态学进行分类，选发育阶段正常，外形匀称，卵裂球比较紧密的A、B级胚胎可供移植或冷冻保存。
目前，每头供体牛一般可获得8枚左右可用胚。
5．胚胎的冷冻保存胚胎冷冻保存可以克服鲜胚移植受时间、地点等因素的限制，为胚胎移植技术推广应用和充分发挥其优势提供了保证。
冷冻方法有缓慢降温法、快速冷冻法和一步冷冻法等3种。
快速冷冻法因胚胎解冻后存活率及移植成功率较高，为目前生产中最常用的方法。
简要介绍如下：室温条件下，先将胚胎加入1.4摩尔甘油冷冻液中脱水平衡20分钟，再装入0.25毫升细管，然后将装有胚胎的细管放入程控冷冻仪中，0℃平衡10分钟，以1℃/分的速度降至-6－-7℃，人工植冰并平衡10分钟，然后以0.3℃/分的速度降温至-35－-38℃，投入液氮保存。
胚胎移植牛脑部实验报告
一、实验背景随着生物技术领域的不断发展，胚胎移植技术已经广泛应用于畜牧业生产中。
近年来，关于胚胎移植后胚胎发育与受体母体相互作用的研究逐渐增多。
本研究旨在探讨胚胎移植过程中，胚胎与受体母牛脑部的相互作用及其对胚胎发育的影响。
二、实验材料与方法1. 实验动物：选取健康、发育正常的荷斯坦奶牛作为供体，选取年龄、体重、健康状况相似的荷斯坦奶牛作为受体。
2. 实验分组：将供体和受体奶牛随机分为三组，每组5头。
3. 胚胎采集：采用超排卵技术采集供体奶牛的卵母细胞，体外受精后培养至桑椹胚期，进行胚胎移植。
4. 脑部组织采集：在胚胎移植后第5天、第10天、第15天分别对受体奶牛进行麻醉，采集脑部组织样本。
5. 实验方法：a. 采用免疫组化技术检测受体奶牛脑部组织中与胚胎发育相关的基因表达。
b. 利用实时荧光定量PCR技术检测受体奶牛脑部组织中相关基因的mRNA表达水平。
c. 采用蛋白质印迹技术检测受体奶牛脑部组织中相关蛋白的表达水平。
三、实验结果1. 胚胎移植后，受体奶牛脑部组织中与胚胎发育相关的基因表达水平显著升高。
2. 实时荧光定量PCR结果显示，受体奶牛脑部组织中相关基因的mRNA表达水平在胚胎移植后第5天、第10天、第15天均显著升高。
3. 蛋白质印迹结果显示，受体奶牛脑部组织中相关蛋白的表达水平在胚胎移植后第5天、第10天、第15天均显著升高。
四、讨论与分析1. 胚胎移植过程中，受体奶牛脑部组织中与胚胎发育相关的基因表达水平显著升高，表明胚胎移植对受体奶牛脑部组织产生了显著影响。
2. 实时荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示，受体奶牛脑部组织中相关基因和蛋白的表达水平在胚胎移植后第5天、第10天、第15天均显著升高，提示胚胎移植后受体奶牛脑部组织可能发生了适应性改变，以适应胚胎的发育需求。
3. 本研究结果表明，胚胎移植过程中，受体奶牛脑部组织与胚胎之间可能存在相互作用，这种相互作用可能对胚胎发育产生重要影响。
奶牛胚胎移植的优点及技术要点
及 发情 时 间 。
２５黄 体检 查 ．
在移植前 ， 要对受体牛进行检查 ， 确定黄体发育
情 况 。正 常 的黄体 凸 出卵巢 表 面 ， 地柔 软 ， 质 有弹性 ，
直 径在 １ 米 以上 ， 部充 实 。个 别 牛 卵 巢偏 小 ， 厘 底 所
１ ． 受精 障碍 中的应 用 ３在
液一 装 管一 装 枪 ，但 乙二 醇冷 冻 胚 胎解 冻 后 直 接装
枪 ， 行胚 胎 移植 时要严 格按 照 操作 程序 。 进
２７熟练 掌握胚胎移植技 术 ．
胚 胎 移 植 是将 早期 胚 胎 移 植 到 生理 状 态相 同 的
受 体 牛体 内 ， 之继续 发 育 。通 常 是在 胚胎 发 育第 ７ 使 天 进 行 移植 。移植 部 位 是黄 体 发育 较 好 那 侧 的子 宫
２２ 短 期 优 饲 ． 在移 植 前 ６ ８ 期 ， 对 受 体 牛进 行科 学补 饲 ， ￣星 要 使肌 体达 到 最佳 繁 殖状 态 。每 天 补饲 精 料 ２５千克 ， ．
２８ 胚 胎 质 量要 有保 证 ．
胚胎质量是决定移植是否成功的重要因素， 只有 好的胚胎才能保证较高的受胎率 。实践 中， 的胚 移植 胎质 量须 达到 Ｂ级 以上 ， 冻胚 胎要选 择 Ａ级胚胎 。 冷
胚胎移植技术对奶牛场的主要作用与应用技巧
胚胎移植技术 ，应该从 奶牛 的单 产和 牛场 的
长远发展后劲两个 方面考 虑。在东北 ，奶牛
场 的平均 单 产 若 低 于 ５ ｔ 本 无 利 润 可 言 ， 基 在北京 ，单 产低 于 ６ｔ 也无 法 生存 。在这 种
状况下 ，胚胎技术是 奶牛场应 该考虑 的，因
管理与胚胎技术 的应 用有机 地融 合起来 ，又 要使人工授精技术 与胚 胎移植 技术有 机地 结 合使用 。 ２ １ 供体母 牛的选择方法 ．
过 自然状态下几倍甚 至几十倍 的胚胎 ，然后 行人工授精技术就 足够 了。但从 保种 的角 度 把胚胎 移 植 给 同等 生 理 条 件 下 的低 产 母 牛 讲 ，还是可 以搞 一些 的。如何 把牛场 特别 优
（ 受体 ） 使其 妊娠 。俗称 为借 腹怀 胎技 术 。 秀 的高产奶 牛多 留后 代 ，胚胎移 植技 术是 最 并 该项技术是继人工授精 技术后 牛繁殖技术 的 成熟的方法 。通过超数排 卵把采 集 的胚胎 冷 第二次革命 ，它可 以一 步到位地 繁育高产 奶 冻保存 ，形 成 自己牛 场 的优 秀奶 牛 基 因库 ， 牛 ，是牛场必备和常用技术之一 。 即使 老母 牛因各种原 因被淘 汰 了 ，它 的优 秀
笔者从胚 胎移植各 主要 环节人 手 ，探讨 牛场应用该技术 的方法 ，目的是使 牛场恰 当 地应 用 各 环 节 中 的不 同方 法 。既 要 选 择 准 确 ，又要减少成本 和不必要 的损 失 ；既要 因 地制宜 ，又要 因时制 宜 ；既要 使牛 场 的生 产
对于 以鲜奶生产 为主的奶牛 场是否 应用
仅要求本身产奶量 高 ，也要看 其后代 是否 优
一
般 来讲 ，在 没 有冷 冻 条件 的情 况 下 ，
奶牛胚胎移植技术
奶牛胚胎移植技术上海交通大学农业与生物学院朱淑文一、概述牛胚胎移植的商业化应用开始于七十年代初期。
当时，必须通过手术方法才能采集胚胎，由于奶牛的乳房影响手术的顺利进行，手术后往往还会影响奶牛以后的繁殖性能，因此，胚胎移植主要在肉牛中应用。
1976年，一些研究小组报道了应用导管高效采集胚胎的非手术方法。
随后，胚胎移植在奶牛中的应用得到了飞速发展。
1974年，第一头胚胎移植登记荷斯坦奶牛在美国出生。
七十年代后期，胚胎移植（ET）登记荷斯坦奶牛的数量每年以100%以上的速度增长，1980年达到8298头年。
进入80年代后，随着非手术采胚法和移植技术的改进以及胚胎冷冻保存技术的发展，每年（ET）登记奶牛的数量在稳步增长，至1990年达到18727头年。
截止1991年，美国登记的胚胎移植荷斯坦奶牛总数量已达到142598头。
目前，44%的荷斯坦优秀种公牛是由胚胎移植培育的。
九十年代以来，胚胎移植在发达国家中的增长速度有所减缓，但是技术含量越来越高，例如体外受精胚胎生产技术、转基因技术以及克隆技术的应用和研究得到加强。
近几年来，胚胎移植在亚洲和南美一些国家中增长速度很快。
从整个世界范围来看，牛胚胎移植的增长速度仍然很快。
二、胚胎移植技术（一）体内受精胚的移植1 超数排卵在常规胚胎移植技术中，获得大量可用胚胎的主要途径是超数排卵（简称超排），因此，高效率的超排技术是胚胎移植技术能否在生产中推广应用的关键。
应用于奶牛的超排激素主要有PMSG（孕马血清促性腺激素）和FSH（促卵胞素）。
PMSG尽管只需一次性注射，省时省力，但是半衰期过长，可以导致卵巢的过度刺激以及对排卵、受精和随后的胚胎发育产生不利的影响，因此现在一般已不采用PMSG对奶牛进行超排处理。
目前广泛应用于母牛的超排激素是FSH。
用于奶牛超排的商品FSH均是从屠宰家畜的脑垂体中提取的，脑垂体不但能够分泌FSH，而且还能分泌LH，因此商品FSH制剂中都含较高水平的LH，不同厂家或同一厂家不同批次FSH制剂中的LH含量差异很大，所以商品FSH制剂的超排效果很不稳定。
奶牛性控胚胎移植技术规程
奶牛性控胚胎移植技术规程1范围本文件规定了奶牛性控胚胎生产和移植技术的术语和定义、技术操作要求和方法。
本文件适用于奶牛性控胚胎生产、移植技术推广应用的规范化操作。
2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T3157-2008中国荷斯坦牛GB/T31582-2015牛性控冷冻精液NY/T34-2004奶牛饲养标准NY/T815—2004肉牛饲养标准NY/T1445-2007奶牛胚胎移植技术规程DB64/T528-2008奶牛性控冷冻精液人工授精技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1性控胚胎sexed embryos选择生产性能优良、遗传性能稳定的供体牛进行超数排卵处理，发情后用性别控制精液进行人工授精，供体牛在配种后6d～7d回收的早期胚胎。
3.2胚胎移植embryo transplantation选择与供体牛生理状况相近的受体牛，用非手术方法将胚胎移植到受体牛子宫角内，以便胚胎继续发育。
4性控胚胎生产4.1供体牛的选择与饲养管理4.1.1供体牛符合GB/T3157-2008中荷斯坦奶牛标准，系谱档案完整，体型线性评分良好。
成年母牛选择参加奶牛生产性能测定（DHI）,生产性能优良的牛只，或经遗传评估（EBV），具有较好育种价值的牛只；青年母牛选择全基因组检测（GEBV）,具有较好育种价值，或其父母生产性能优良的牛只。
4.1.2供体牛要求体格健壮，无遗传缺陷。
饲养环境的舒适、稳定，避免出现疫苗注射等应激反应。
保证科学、合理、平衡的日粮营养。
超数排卵前一个月，适量补充复合维生素、微量元素，适量增加精料，保证超排期间体重处于增重状态。
饲养标准按照NY/T34-2004执行。
具体要求按照NY/T1445-2007中5.1.1和5.1.2的规定执行。
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奶牛胚胎移植技术上海交通大学农业与生物学院朱淑文一、概述牛胚胎移植的商业化应用开始于七十年代初期。
当时，必须通过手术方法才能采集胚胎，由于奶牛的乳房影响手术的顺利进行，手术后往往还会影响奶牛以后的繁殖性能，因此，胚胎移植主要在肉牛中应用。
1976年，一些研究小组报道了应用导管高效采集胚胎的非手术方法。
随后，胚胎移植在奶牛中的应用得到了飞速发展。
1974年，第一头胚胎移植登记荷斯坦奶牛在美国出生。
七十年代后期，胚胎移植（ET）登记荷斯坦奶牛的数量每年以100%以上的速度增长，1980年达到8298头年。
进入80年代后，随着非手术采胚法和移植技术的改进以及胚胎冷冻保存技术的发展，每年（ET）登记奶牛的数量在稳步增长，至1990年达到18727头年。
截止1991年，美国登记的胚胎移植荷斯坦奶牛总数量已达到142598头。
目前，44%的荷斯坦优秀种公牛是由胚胎移植培育的。
九十年代以来，胚胎移植在发达国家中的增长速度有所减缓，但是技术含量越来越高，例如体外受精胚胎生产技术、转基因技术以及克隆技术的应用和研究得到加强。
近几年来，胚胎移植在亚洲和南美一些国家中增长速度很快。
从整个世界范围来看，牛胚胎移植的增长速度仍然很快。
二、胚胎移植技术（一）体内受精胚的移植1 超数排卵在常规胚胎移植技术中，获得大量可用胚胎的主要途径是超数排卵（简称超排），因此，高效率的超排技术是胚胎移植技术能否在生产中推广应用的关键。
应用于奶牛的超排激素主要有PMSG（孕马血清促性腺激素）和FSH（促卵胞素）。
PMSG尽管只需一次性注射，省时省力，但是半衰期过长，可以导致卵巢的过度刺激以及对排卵、受精和随后的胚胎发育产生不利的影响，因此现在一般已不采用PMSG对奶牛进行超排处理。
目前广泛应用于母牛的超排激素是FSH。
用于奶牛超排的商品FSH均是从屠宰家畜的脑垂体中提取的，脑垂体不但能够分泌FSH，而且还能分泌LH，因此商品FSH制剂中都含较高水平的LH，不同厂家或同一厂家不同批次FSH制剂中的LH含量差异很大，所以商品FSH制剂的超排效果很不稳定。
从理论上讲，在卵泡发育的早期，只有FSH对卵泡生长起启动和刺激作用，LH不起作用。
只有在卵泡发育的晚期，卵泡颗粒细胞才开始出现LH受体，此时LH和FSH才起协同作用，共同促进卵泡的进一步生长和类固醇激素的合成。
LH和FSH的协同促卵泡生长作用必须有一个合适的比例，LH 含量过高可以导致生长卵泡的闭锁或黄体化。
这一机理就是商品FSH制剂超排效果不理想的重要原因之一，国内外的许多报道事例已经证明了这一点。
目前，加拿大生产的超纯度FSH（商品名Follrtropin）是世界公认的最理想的牛用超排药物。
用Follrtropin进行的大规模商业超排处理结果显示，平均A、B级胚胎数为8.8/枚头次，我们利用中科院动物所提纯生产的FSH，在北京十三个奶牛育种场进行了大规模超排试验，试验结果表明：该激素的超排效果有些批次的效果很好；有些批次效果不理想。
另据报道，牛的超排效果和摄入的营养水平有很大关系。
奶牛为产奶目的而饲喂的日粮一般为高蛋白低能量日粮，即蛋白水平一般为17%；但这种日粮不利于奶牛多出胚胎。
为了使奶牛多出胚胎，应降低日粮的蛋白水平，增加能量水平，最理想的办法是在超排处理前两周时，将蛋白水平降至12%，同时补饲大麦、玉米等高能量饲料。
此外，在超排前适当补充复合维生素制剂也有利于提高牛的超排效果。
超数排卵方法超数排卵（超排）的目的时为了增加有活力卵子的数量。
通常在供体牛发情周期的功能性黄体期，一般在母牛发情周期的9～14天，肌肉注射PMSG或者FSH，以刺激卵巢产生额外的卵泡。
待处理后供体牛再次发情时静脉注射LH或者HCG，以诱导卵泡排卵。
但对成年母牛一般不需要外源LH或者HCG。
近年来，由于前列腺素F2α及其类似物如前列烯醇在超排方法上的应用，增加了超排处理的机动性，可在供体母牛发情周期的功能性黄体期的任何一天处理，而且增加了可用胚胎的比例。
母牛在PG注射后的2～3天大多出现发情。
对超排处理的供体牛输精需2～3次，间隔12h，每次的输精量要大于正常的输精量，应保证有足够的有效精子。
2．供体和受体牛的准备供体牛选择的首要条件是其遗传学价值及其健康和繁殖情况，所以，确定供体前需作必要的检查，经确定后要加强饲养管理，观察发情，确定正确的发情周期。
每头供体牛需要准备5头受体牛，两者的发情开始时间前后相差不超过一天。
在一般情况下，不易找出若干头自然发情与供体牛发情时间相同的受体牛，所以在胚胎移植时往往采用对供体与受体牛进行同期发情处理。
同时对供体牛进行超数排卵处理。
3 胚胎移植在胚胎移植中，胚胎最终必须移植到合适的受体牛中才能受胎妊娠，产下优秀后代，因此受体牛的准备非常重要。
在准备受体牛时，除了无繁殖疾病等一般要求外，重点应该考虑发情同期性问题。
一般来说，受体牛与供体牛发情同期差在4!"天内时，即发情后第563天的受体牛受胎效果比较理想。
许多研究结果证明，发情时间早于供体牛的受体牛，其移植受胎率高于发情时间晚于供体的受体牛，如发情后第3天的受体牛，其移植受胎率高于发情后第5天的受体牛。
其原因可能是发情后第3天的受体牛，其黄体功能更完善。
综上所述，要提高胚胎移植受胎率必须人同期性上选择合适的受体牛。
此外，对于发情时间稍晚于供体胚胎日龄的受体（即不到发情后第七天的受体），注射孕酮有利于受胎。
4 妊娠诊断（1）直肠检查法通常在移植后1.5～3.0个月进行直肠检查,此时子宫继续增大，落入腹腔，可感觉到胎儿的浮动，子宫角出现孕脉,子宫壁可以触到子叶。
（2）超声波诊断一般可在移植２５天后检查,利用探头通过直肠轻轻的在子宫角上滑动，在荧光屏上可观察到中间灰白色周围黑色的图象———胎儿。
（3）妊娠后的饲养管理在移植后70～90天对受体牛进行妊娠检查，对已妊娠的受体要加强饲养管理,避免应激反应。
妊娠受体在产前3个月要补充足量的维生素、微量元素，适当限制能量摄入，既要保证胎儿的正常发育，又要避免难产。
根据当地的疾病发生情况，有目的地注射一些疫苗，以防胎儿流产或传染病发生。
（二）体外受精胚的移植1 卵母细胞采集和体外成熟培养将屠宰后的奶牛卵巢用灭菌生理盐水将卵巢洗涤3-5次，除去表面血迹，盛于大烧杯中。
用吸水纸将表面擦干。
然后用吸有少量采卵液的5ml一次性注射器和18号针头，从卵巢表面2－6mm的卵泡内抽吸卵泡液及卵丘-卵母细胞复合体（Cumulus oocyte complexes，COCs），注意不要将血液混入卵泡液中，以免影响卵母细胞的体外成熟和受精。
将抽取的卵泡液和COCs注入灭菌试管内，于38.5℃恒温水浴锅内静置15min，弃取上清液，将下层液体倒入直径690mm的灭菌培养皿内，在体视显微镜下采卵。
2体外受精和胚胎发育将冷冻精液在38℃恒温水浴锅中溶解，用灭菌吸水纸擦干精液管外水分，置于10ml灭菌离心管中，缓慢加获能液至8ml，用2000转/分速度离心5min，去除上清。
重复定容离心一次，弃去上清，留置1ml，用血球计数板检测精子浓度，用受精液将精子浓度稀释至5－7×105个/ml。
观察精子活力，并制成0.4ml 的浮游小滴。
将体外成熟的卵母细胞，在受精液中洗2次，每个受精小滴中移入20-25枚卵母细胞，在CO2培养箱中（38.5℃，5%CO2，95%空气）体外受精5h后。
用成熟培养液将受精卵洗2次，然后将受精卵转移含卵丘细胞的成熟培养基中，继续培养（38.5℃，5% CO2，95%空气）43h。
观察卵裂率，继续培养至囊胚，用于移植或冷冻。
三、开展牛胚胎移植需要做的准备工作和效益1 胚胎移植人员的准备：在牛的胚胎移植中, 供体的超数排卵、采胚、受体的选择、同期发情、发情鉴定、非手术移植、胚胎的冷冻和解冻、胚胎的质量评定和分级等, 都需要实践的积累, 尤其是直肠检查等需靠手感觉的技术。
培养一个熟的技术人员需要2-3年的时间。
本项技术的操作对卫生和无菌要求也较高。
由于技术环节多,环环相连,一个环节的失误将导致整个操作过程的效率下降和失败。
操作过程中的质量控制和技术把关十分重要。
2 胚胎移植的环境问题：要有一个能满足胚胎离体条件下短时间内不被污染和生活能力不受影响的环境条件,配备相应的仪器设备,适宜而稳定的温度条件等。
这些条件虽然不甚复杂,投入也不算大,但必须按要求认真设计,购置和安排。
3 胚胎来源：胚胎移植产业化中,最关键的条件之一是要有稳定的胚胎来源。
目前, 国外平匀每次每头供体可生产可用胚6-8枚, 国内一般在6枚左右。
只有建立或确定相应的供体群才能保证胚胎的供应。
其次，可利用胚胎切割和其他胚胎生物技术, 如胚胎卵裂球和分离培养、性别鉴定等, 增加胚胎的利用率和扩大胚胎的来源。
4 受体母牛选择的策略：受体牛与供体牛在遗传和生产性能上相差越大，在牛改良上意义越大，两者市场价格相差越大,牛胚胎移植技术的经济汇报越好。
在选择受体母牛时，我们还需要考虑总体效益。
利用当地土杂种母牛作受体，一代换种，改良效果显著，在农牧区农户饲养时，成本低,投入少，但是如果是舍饲集中饲养，则成本较高。
受体牛必须健康,有正常的繁殖力和发情周期，并且发情天数与供体牛或胚龄相同。
在我国农牧区的条件下，由于营养状况和饲养管理条件的影响，利用当地黄牛作受体,受胎率通常低约5-10%。
5 有效的组织工作：胚胎移植要求各环节的时间及处理程序十分严格，在产业化的实际操作中组织工作非常重要，在某种程度上讲,往往组织工作比技术工作的难度更大，不重视这个问题很可能是事倍功半或前功尽弃。
工作条件和组织工作，从技术实施的角度来说，开展胚胎移植工作只要有供体母牛制作好的胚胎，一定数量的受体母畜，技术人员和设备即可。
目前多数地方的组织工作并不理想，工作点分散，可用牛只少，工作效率低，非完善不可。
6 利用胚胎移植技术，提高土种牛养殖的经济效益：胚胎移植可最大限度地发挥良种母牛的繁殖潜力。
母犊卵巢上约有12万个原始卵泡以上，10岁左右的母牛卵巢上仍有约25000个卵泡。
牛的繁殖周期较长,依靠自然繁殖，无论多么优秀的母牛，一生只能产10头左右。
利用胚胎移植技术优秀母牛每年可获得5—16头后代，技术水平高者可获得30-50头后代，超过它一生的繁殖成绩，迅速扩大良种的数量。
用胚胎移植技术可以扩繁良种牛。
从国外或国内购买优秀良种胚胎，直接移植给本地黄牛，每枚胚胎的价格约1500元左右，以50% 的成功率计算，每出生一头良种，胚胎费用为3000元，母牛饲养费和犊牛饲养费用约为2000元，总成本约为5000元，而到一岁左右的良种牛市场售价约在2万元左右。
如果把母牛犊继续培养至18月年龄,进行超数排卵生产胚胎,每年可生产胚胎10-20枚,收入约在2万元左右。