α-乙酸萘酚酯酶染色液(α-NAE法)
细胞化学染色
颗粒 什么关系
POX
如果原粒出现颗粒POX一定阳性吗？NO 如果幼淋出现颗粒POX一定阴性吗？YES
若POX阳性，肯定是髓系的。 有颗粒+POX阴性 做酯酶双染及免疫分型 （存在一部分是POX阴性的白血病，MDS转白，CML急变，HAL ） 无颗粒+POX阴性 +临床及形态 淋系 （1%做免疫分型，M0）
4.异常细胞MPO的变化 ①分化差的原始粒细胞及原始单核细胞MPO可为
阴性，如M2，并不是所有原始细胞均阳性。M5a， 原始单核细胞常阴性。 ②MDS：原始细胞POX常阴性，发育异常的下阶 段粒细胞POX可为阴性。 ③MDS转白，CML转白，HAL，原始粒细胞POX 可为阴性，但不能诊断为M0，因为原始粒细胞不 像幼稚淋巴细胞，且可能为发育异常，并不是分化 差。 ④反之，如果典型原始粒细胞POX阴性，应考虑到 是否为MDS转化而来。
急性白血病类型鉴别：
急性粒细胞白血病：阳性率常≥3%，呈现弥散 状，颗粒状或块状阳性；
急性单核细胞白血病：呈弱阳性（弥散状）或 阴性；
急性淋巴细胞、巨核细胞性白血病：阴性。
急性白血病MPO反应强弱顺序： M3>M2>M6(粒)，M4，M1>M5>HAL
2.嗜天青颗粒（紫红色，非特异性颗粒，阿氏颗粒）：
干 4、复染：E液20min
积分计算
据兰色颗粒所占胞浆面积、颗粒大小、多少及染色强度来判断。 阴性为胞浆内无兰色颗粒。 正常值：正常人积分一般为40－100分
级别
+ ++ +++ ++++
兰色颗粒占 颗粒大小 胞浆面积 （％）
SOP文件酯酶染色中性非特异性脂酶αNAE染色
SOP文件酯酶染色中性非特异性脂酶αNAE染色1. 引言本SOP文件旨在描述酯酶染色中使用的中性非特异性脂酶αNAE染色方法。
中性非特异性脂酶αNAE是一种酯酶，广泛存在于许多生物体中。
该酶在许多生理和病理过程中起着重要作用，因此其检测和定量对于研究和临床应用具有重要意义。
2. 实验材料•甲醇（CH3OH）•乙醇（C2H5OH）•碘酒（I2）•活化碳（C）•磷酸氢钾（KH2PO4）•污染物样品3. 实验步骤步骤1：制备甲醇和乙醇溶液1.取适量的甲醇和乙醇，分别加入两个容器中。
2.分别将甲醇和乙醇容器标记为“甲醇溶液”和“乙醇溶液”。
步骤2：制备碘酒溶液1.取适量的碘酒，加入一个容器中。
2.将该容器标记为“碘酒溶液”。
步骤3：制备活化碳溶液1.取适量的活化碳，加入一个容器中。
2.将该容器标记为“活化碳溶液”。
步骤4：制备磷酸氢钾缓冲液1.取适量的磷酸氢钾，加入蒸馏水中，搅拌至完全溶解。
2.将溶液调节至pH 7.0，并标记为“磷酸氢钾缓冲液”。
步骤5：制备实验样品1.取适量的污染物样品，加入离心管中。
2.加入适量的磷酸氢钾缓冲液，使样品浓度适宜。
步骤6：进行染色实验1.取一块载玻片，将其置于实验台上。
2.取一滴甲醇溶液，滴在载玻片上。
3.将样品与甲醇溶液混合，使其均匀分布于载玻片上。
4.将载玻片置于离心机中，进行离心，以去除残留液体。
5.取一滴乙醇溶液，滴在载玻片上。
6.将载玻片置于离心机中，进行离心，以去除残留液体。
7.取一滴碘酒溶液，滴在载玻片上。
8.将载玻片置于离心机中，进行离心，以去除残留液体。
9.取一滴活化碳溶液，滴在载玻片上。
10.将载玻片置于离心机中，进行离心，以去除残留液体。
步骤7：观察和分析结果1.取一滴适宜的显微镜油，滴在载玻片上。
2.取显微镜封片，将其覆盖在载玻片上。
3.使用显微镜观察载玻片下的染色结果。
4.记录观察结果，并进行结果分析。
4. 结论本实验SOP文件描述了酯酶染色中性非特异性脂酶αNAE染色的方法。
α-乙酸萘酚酯酶染色液(α-NAE法)
组成：
名称 试剂(A): NAE 固定液 试剂(B): α-NAE 孵育液 试剂(C): 甲基绿染色液 试剂(D): NaF solution 使用说明书
编号 DE0038 DE0038 3×10ml 3×20ml
Storage
10ml
20ml RT 避光
l
20ml -20℃ 避光
10ml
20ml RT 避光
0.2ml 0.4ml RT 避光
1份
操作步骤(仅供参考)：
1、 血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切入α-NAE 固定液固定。 2、 水洗，晾干。 3、 入配制好的α-NAE 孵育液，放入湿盒中，37℃避光孵育，水洗。 4、 入甲基绿染色液复染，水洗，镜检。
染色结果：
细胞质 细胞核
灰黑色或棕黑色弥漫性或颗粒状沉淀 绿色
注意事项：
1、 血液或骨髓细胞涂片应新鲜，薄厚适宜。
2、 α-NAE 孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。
相关：
产品编号 DC0032 PE0103
名称 Masson 三色染色液 Ac r -Bis (30%,29:1)
Leagene。com
北京雷根生物技术有限公司
α-乙酸萘酚酯酶染色液(α-NAE 法)
简介：
酯 酶 主要 分 为非 特异 性酯 酶 (non-specific esterase) 、 酯 酶(lipase) 、 胆 碱酯 酶 (choli-esterase)。α-乙酸萘酚酯酶染色液(α-NAE 法)又称非特异性酯酶染色液，其原理是 细胞中的非特异性酯酶将α -乙酸萘酚水解产生α -萘酚， α -萘酚再与重氮盐偶联，生成不溶 性有色沉淀，定位于细 胞质。本染色液对 酯酶染色无特异 性，故又称作非 特异性酯酶染色 液。
α-醋酸萘酚酯酶染色
α-醋酸萘酚酯酶染色
α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）属于酯酶染色的一种。
（1）原理：血细胞内的α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）将基质液中的α-醋酸萘酚水解，产生α-萘酚，萘酚再与坚牢蓝B偶联，形成不溶性灰黑色或棕黑色沉淀，定位于胞质内。
属于非特异性醋酸染色。
（2）结果判断：染色阳性结果为胞质中出现棕黑色颗粒沉淀。
（3）正常血细胞的染色反应
1）单核细胞系统原始单核细胞为阴性反应或弱阳性反应；幼单核细胞和单核细胞为阳性反应，这种反应可被氟化钠抑制。
2）粒细胞系统各期粒细胞为阴性反应，有时少数粒细胞可呈弱阳性反应，此反应不被氟化钠抑制。
3）巨核细胞和血小板为阳性反应。
4）其他血细胞幼红细胞和淋巴细胞一般为阴性反应，有时少数细胞也可是弱阳性反应，此反应不被氟化钠抑制；浆细胞为阴性反应。
酯酶染色医学��^育^网收集整理
（4）临床意义
1）帮助鉴别急性白血病的类型：单核细胞白血病时，白血病原始单核细胞可呈阳性反应，幼单核细胞和单核细胞大多呈阳性反应，此反应能被氟化钠抑制，抑制率在50%以上；急性粒细胞白血病时，白血病原始粒细胞为阴性反应，有时个别白血病原始粒细胞可呈阳性反应，但此反应不被氟化钠抑制；急性淋巴细胞白血病时，白血病原始淋巴细胞为阴性反应，有时原始淋巴细胞可出现阳性反应，主要见于T细胞型急淋；急性粒-单核细胞白血病时，部分原始白血病细胞呈阳性反应，并能被氟化钠抑制，这些白血病细胞可能是单核细胞系细胞，部分白血病细胞呈阴性反应，可能是粒细胞系细胞。
2）红血病和红白血病：异常幼红细胞可呈阳性反应。
3）巨幼细胞贫血：巨幼细胞也可呈阳性反应。
酸性α-醋酸萘酚酯酶染色液
酸性α-醋酸萘酚酯酶染色液（ANAE）预期用途：供骨髓细胞图片及血液细胞图片染色检查检验原理：盐酸副品红与亚硝酸钠反应生成六偶氮副品红（重氮盐），底物α-醋酸萘酚在酯酶的作用下水解α-萘酚，α-萘酚再与重氮盐偶联，生成棕红色沉淀，定位于细胞浆中，本染色液对酯酶染色无特异性，故又称作非特异性酯酶染色主要组成成分：储存条件及有效期：有效期：一年储存条件：本试剂盒应储存于2℃-8℃低温环境。
样本要求：新鲜骨髓细胞涂片及血液细胞涂片（切勿使用抗凝血）检验方法：一、工作液配制（一）、浸染工作液配制（一份浸染工作量是33ml,至少可同时放置8-10张涂片）1、重氮盐溶液的准备：B液1ml与C液1ml彻底混匀，静置2分钟；2、染缸（自备染液缸）内加入D液40ml；3、将重氮盐溶液倒入染缸内，混匀4、再加E液1ml入染缸内，轻轻混匀（二）滴染工作液配制（一份滴染工作液是1.65ml）使用器材：一次性塑料试管、微量移液器，一次性吸嘴，滴管。
操作：于试管内加B液50μL，C液50μL混匀，静置1分钟，再加D液1.5ml，E液50μl,混匀，静置2分钟备用（NaF抑制试验加NaF液1滴）。
二、染色步骤1、干燥涂片，直接滴加工作液做第二步或滴加A液（用前恢复室温，并充分摇匀）固定约30-60秒，蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干（涂片不固定直接做ANAE染色，阳性反应强于固定者）；2、滴加或浸入工作液布满涂片（37℃）孵育分钟，蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干3、F液复染1-2分钟，蒸馏水冲洗，干后镜检参考范围：1.单核细胞系统：呈阳性反应，其反应可被氟化钠抑制。
2.粒细胞系统：各期粒细胞多呈阴性反应，有时少数粒细胞可呈弱阳性反应，其反应不被氟化钠抑制。
3.巨核细胞及血小板为阳性。
4.淋巴细胞多呈点状阳性，部分淋巴细胞及浆细胞为阴性反应。
5.单核细胞源性的组织细胞、巨噬细胞呈强阳性反应，高雪氏细胞、海蓝组织细胞为阳性。
6.幼红细胞呈阴性反应。
血液酸性α-醋酸萘酯酶染色方法改进
血液酸性α-醋酸萘酯酶染色方法改进
朱辛为;李质馨;窦肇华;蒙一纯;鲁质傅;文天秀
【期刊名称】《吉林医药学院学报》
【年(卷),期】1995(000)003
【摘要】1 方法用酸性α-醋酸萘酯酶法(简称ANAE法)检测血液中的T淋巴细胞及其亚群,以观察机体的细胞免疫功能,已广泛用于组织学中的细胞化学及相关的动物实验中.由于α-醋酸萘酯酶易受时间、温度及pH值等多种因素的影响,故作者在常规染色的基础上,对几个主要步骤进行了改进,效果较好.其方法是:(1)取末梢血制成涂片,室温干燥;(2)于4℃甲醛-丙酮固定液(pH6.0)固定45s;
【总页数】1页(P203-203)
【作者】朱辛为;李质馨;窦肇华;蒙一纯;鲁质傅;文天秀
【作者单位】空军医学高等专科学校!吉林市132011
【正文语种】中文
【中图分类】R446.113
【相关文献】
1.血清酸性α-醋酸萘酯酶的比色测定及初步临床应用 [J], 冯春来;黄兴富;范华
2.肝硬化患者血清和腹水中酸性α-醋酸萘酯酶的含量 [J], 王燕;周力;张永宏;张维;陈玉梅
3.酸性α-醋酸萘酯酶染色法的改良 [J], 卢曦;刘艳芬;刘铀
4.酸性α-醋酸萘酯酶染色法在鳜细胞免疫水平检测中的应用研究 [J], 张国军;王高
学;潘厚军;石存斌;吴淑勤
5.用酸性α—醋酸萘酯酶染色法测定儿童外周血T淋巴细胞 [J], 陈毓玲;葛桂秀因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
酸性α-醋酸萘酯酶染色法在鳜细胞免疫水平检测中的应用研究
ｎｔ ｅ ｅ ｎ ｉ ｉ ｌｖ ｌｉ ｍｍｕ ｉｅ ｉ ｉｅｃ ｈ ｕ ｔ ｗａ ｅ ｔｄ ｉ ｈ ｓｐ ｐ ｒ Ｆ ｃ ｌ —Ｕｒ ｇ ｆ ｒ ｄ ｅ ｔｓ ｌ ｔ ｎ ｗｉ ｉ ｅ ｅ ｔｄ ｎ ｉ ｙ ｎｚ ｄ Ｓ ｎｐ ｒａ ｃ ａ ｓｉ ｓｔｓｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｅ ． ｉｏｌ ａ ａ ｎ ｇａ ｉｎ ｏ ｕｉ ｔ ｄ ｆ ｒ ｎ ｅ ｓｔ ｉ ｏ ｈ ｆ ｙ
张国 ， 学 ， 军 ， 存 吴 军 王高 潘厚 石 斌 ， 淑勤
（．西北农林科技 大学 ，陕西杨凌 ７ ２０ ； １ １１０ ２ ．中国水产科学研 究院珠江水产研究所 ，广州 ５０ ８ ） １３ ０
摘 要 ：研究 了酸性 一醋酸萘 酯酶染 色法在鳜 细胞 免疫水 平检测 中应 用 的可行性 。用不 同 比重 的淋 巴细胞 分
ｔ ｅ ｂ ｓ ｒ ｓ ｌ ｉ ｓ ｌ ｔ ｎ ＡＮ ｓｕ ｅ ｏ ｓ ｉ ｈ ｓ ｌｔ ｄ ｌｍｐ ｏ ｙｅ ｎ ｔｉｄ ｃ ｔｄ ｔ ａ ｅ ｏ ｔ ｌ ｔ ｉ ｉ ｇｃ ｎ ｈ ｅ ｔ ｅ ｕ ｔ ｎ ｉｏａ ｉ ． ｏ ＡＥ ｗａ ｓ ｄ ｔ ｔ ｎ ｔ ｅ ｉ ａｅ ａ ｏ ｙ ｈ ｃ ｔｓａ ｄ ｉ ｎ ｉａｅ ｈ ｔｔ ｐ ｉ ｈ ｍａ ｓａ ｎｎ ｏ —
维普资讯
第３ ６卷 第 ３期
Ｖ０＿ ６ ｌ３
Ｎｏ ３ ．
淡
水
酶类染色液
酶类染色液北京华越洋生物------------------------------------------------------碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法) 3×50ml 酶类染色40% 4℃,避光,3个月碱性磷酸酶染色，适用于石蜡切片属于金属沉淀法,碱性磷酸酶活性出呈棕黑色,可能出现假阳性,采用阴性对照。
二甲苯应采用AR以上级别。
碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法) 3×100ml 酶类染色40% 4℃,避光,3个月碱性磷酸酶染色，适用于石蜡切片属于金属沉淀法,碱性磷酸酶活性出呈棕黑色,可能出现假阳性,采用阴性对照。
二甲苯应采用AR以上级别。
碱性磷酸酶-PAS联合染色液6×50ml 酶类染色40% 4℃,避光,3个月碱性磷酸酶染色与过碘酸雪夫试剂合用,同时显色碱性磷酸酶和PAS阳性物质。
适用于冰冻切片、石蜡切片,碱性磷酸酶活性部位呈黑色,PAS阳性物质呈紫红色。
染色过程中注意控制过碘酸处理的时间,否则容易褪色。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP) 4×2ml 酶类染色40% 4℃,避光,6个月专门用于血液或骨髓细胞涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶染色,又称同时偶联法。
碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨中。
油镜下计数100个中性粒细胞,求出百分比和积分。
非特异性反应少，结果可靠。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP) 4×10ml 酶类染色40% 4℃,避光,6个月专门用于血液或骨髓细胞涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶染色,又称同时偶联法。
碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨中。
油镜下计数101个中性粒细胞,求出百分比和积分。
非特异性反应少，结果可靠。
碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法) 4×2ml 酶类染色40% —20℃,避光,6个月用于石蜡切片、冰冻切片、骨髓细胞涂片、血液涂片等的碱性磷酸酶染色,又称同时偶联法碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨中。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
α-乙酸萘酚酯酶染色液(α-NAE 法)
简介：
酯酶主要分为非特异性酯酶(non-specific esterase)、酯酶(lipase)、胆碱酯酶(choli-esterase)。
每一种酯酶常能水解许多不同的底物，多种不同的酯酶又能水解相同的底物，因此这一系列酯酶被称为非特异性酯酶。
非特异性酯酶的最适pH 为5.0～8.0，定位于溶酶体和内质网，在肝脏、肾脏、胰和小肠具有较高的酶活性。
单核-吞噬细胞系统的单核巨噬细胞、树突细胞也含有丰富的非特异性酯酶。
Leagene α-乙酸萘酚酯酶染色液(α-NAE 法)又称非特异性酯酶染色液，其原理是细胞中的非特异性酯酶将α-乙酸萘酚水解产生α-萘酚，α-萘酚再与重氮盐偶联，生成不溶性有色沉淀，定位于细胞质。
本染色液对酯酶染色无特异性，故又称作非特异性酯酶染色液，可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片的非特异性酯酶染色，亦可作氟化钠抑制试验。
该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、 载玻片、湿盒
2、 显微镜
操作步骤(仅供参考)：
1、 血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切入α-NAE 固定液固定。
2、 水洗，晾干。
3、 入配制好的α-NAE 孵育液，放入湿盒中，避光孵育，水洗。
4、 入甲基绿染色液复染，水洗，镜检。
编号 名称
DE0038 3×10ml DE0038 3×20ml Storage 试剂(A): NAE 固定液 10ml 20ml RT 避光 试剂(B):
α-NAE 孵育液 B1: α-NAE solution
0.2ml 0.4ml 4℃ 避光 B2: FBB solution
5ml 10ml -20℃ 避光 B3: α-NAE buffer
5ml
10ml
RT
临用前，B1:B2:B3混合，即为α-NAE 孵育液，即配即用。
试剂(C): 甲基绿染色液 10ml 20ml RT 避光 试剂(D): NaF solution 0.2ml
0.4ml RT 避光
使用说明书
1份
染色结果：
细胞质灰黑色或棕黑色弥漫性或颗粒状沉淀
细胞核绿色
氟化钠抑制实验：
按NaF solution：α-NAE孵育液=1：25的比例，在α-NAE孵育液中加入NaF solution，其余按上述染色法进行。
注意事项：
1、血液或骨髓细胞涂片应新鲜，薄厚适宜，一般2天内染色，否则会影响酶的活性。
2、α-NAE孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。
3、α-NAE孵育液配制后易出现浑浊，但不会影响染色效果。
4、每次染色时，应有阳性对照片。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关：
编号名称
DC0032 Masson三色染色液
DE0004 碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)
DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)
DG0005 糖原PAS染色液
PE0018 SDS-PAGE凝胶配制试剂盒
PE0103 Acr-Bis(30%,29:1)
PW0082 丽春红S染色液(1×Ponceau S)
TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。