酸性α-醋酸萘酚酯酶染色液
α-醋酸萘酚酯酶染色
α-醋酸萘酚酯酶染色
α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）属于酯酶染色的一种。
（1）原理：血细胞内的α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）将基质液中的α-醋酸萘酚水解，产生α-萘酚，萘酚再与坚牢蓝B偶联，形成不溶性灰黑色或棕黑色沉淀，定位于胞质内。
属于非特异性醋酸染色。
（2）结果判断：染色阳性结果为胞质中出现棕黑色颗粒沉淀。
（3）正常血细胞的染色反应
1）单核细胞系统原始单核细胞为阴性反应或弱阳性反应；幼单核细胞和单核细胞为阳性反应，这种反应可被氟化钠抑制。
2）粒细胞系统各期粒细胞为阴性反应，有时少数粒细胞可呈弱阳性反应，此反应不被氟化钠抑制。
3）巨核细胞和血小板为阳性反应。
4）其他血细胞幼红细胞和淋巴细胞一般为阴性反应，有时少数细胞也可是弱阳性反应，此反应不被氟化钠抑制；浆细胞为阴性反应。
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（4）临床意义
1）帮助鉴别急性白血病的类型：单核细胞白血病时，白血病原始单核细胞可呈阳性反应，幼单核细胞和单核细胞大多呈阳性反应，此反应能被氟化钠抑制，抑制率在50%以上；急性粒细胞白血病时，白血病原始粒细胞为阴性反应，有时个别白血病原始粒细胞可呈阳性反应，但此反应不被氟化钠抑制；急性淋巴细胞白血病时，白血病原始淋巴细胞为阴性反应，有时原始淋巴细胞可出现阳性反应，主要见于T细胞型急淋；急性粒-单核细胞白血病时，部分原始白血病细胞呈阳性反应，并能被氟化钠抑制，这些白血病细胞可能是单核细胞系细胞，部分白血病细胞呈阴性反应，可能是粒细胞系细胞。
2）红血病和红白血病：异常幼红细胞可呈阳性反应。
3）巨幼细胞贫血：巨幼细胞也可呈阳性反应。
血液酸性α-醋酸萘酯酶染色方法改进
血液酸性α-醋酸萘酯酶染色方法改进
朱辛为;李质馨;窦肇华;蒙一纯;鲁质傅;文天秀
【期刊名称】《吉林医药学院学报》
【年(卷),期】1995(000)003
【摘要】1 方法用酸性α-醋酸萘酯酶法(简称ANAE法)检测血液中的T淋巴细胞及其亚群,以观察机体的细胞免疫功能,已广泛用于组织学中的细胞化学及相关的动物实验中.由于α-醋酸萘酯酶易受时间、温度及pH值等多种因素的影响,故作者在常规染色的基础上,对几个主要步骤进行了改进,效果较好.其方法是:(1)取末梢血制成涂片,室温干燥;(2)于4℃甲醛-丙酮固定液(pH6.0)固定45s;
【总页数】1页(P203-203)
【作者】朱辛为;李质馨;窦肇华;蒙一纯;鲁质傅;文天秀
【作者单位】空军医学高等专科学校!吉林市132011
【正文语种】中文
【中图分类】R446.113
【相关文献】
1.血清酸性α-醋酸萘酯酶的比色测定及初步临床应用 [J], 冯春来;黄兴富;范华
2.肝硬化患者血清和腹水中酸性α-醋酸萘酯酶的含量 [J], 王燕;周力;张永宏;张维;陈玉梅
3.酸性α-醋酸萘酯酶染色法的改良 [J], 卢曦;刘艳芬;刘铀
4.酸性α-醋酸萘酯酶染色法在鳜细胞免疫水平检测中的应用研究 [J], 张国军;王高
学;潘厚军;石存斌;吴淑勤
5.用酸性α—醋酸萘酯酶染色法测定儿童外周血T淋巴细胞 [J], 陈毓玲;葛桂秀因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
酸性α-醋酸萘酯酶染色法在鳜细胞免疫水平检测中的应用研究
ｎｔ ｅ ｅ ｎ ｉ ｉ ｌｖ ｌｉ ｍｍｕ ｉｅ ｉ ｉｅｃ ｈ ｕ ｔ ｗａ ｅ ｔｄ ｉ ｈ ｓｐ ｐ ｒ Ｆ ｃ ｌ —Ｕｒ ｇ ｆ ｒ ｄ ｅ ｔｓ ｌ ｔ ｎ ｗｉ ｉ ｅ ｅ ｔｄ ｎ ｉ ｙ ｎｚ ｄ Ｓ ｎｐ ｒａ ｃ ａ ｓｉ ｓｔｓｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｅ ． ｉｏｌ ａ ａ ｎ ｇａ ｉｎ ｏ ｕｉ ｔ ｄ ｆ ｒ ｎ ｅ ｓｔ ｉ ｏ ｈ ｆ ｙ
张国 ， 学 ， 军 ， 存 吴 军 王高 潘厚 石 斌 ， 淑勤
（．西北农林科技 大学 ，陕西杨凌 ７ ２０ ； １ １１０ ２ ．中国水产科学研 究院珠江水产研究所 ，广州 ５０ ８ ） １３ ０
摘 要 ：研究 了酸性 一醋酸萘 酯酶染 色法在鳜 细胞 免疫水 平检测 中应 用 的可行性 。用不 同 比重 的淋 巴细胞 分
ｔ ｅ ｂ ｓ ｒ ｓ ｌ ｉ ｓ ｌ ｔ ｎ ＡＮ ｓｕ ｅ ｏ ｓ ｉ ｈ ｓ ｌｔ ｄ ｌｍｐ ｏ ｙｅ ｎ ｔｉｄ ｃ ｔｄ ｔ ａ ｅ ｏ ｔ ｌ ｔ ｉ ｉ ｇｃ ｎ ｈ ｅ ｔ ｅ ｕ ｔ ｎ ｉｏａ ｉ ． ｏ ＡＥ ｗａ ｓ ｄ ｔ ｔ ｎ ｔ ｅ ｉ ａｅ ａ ｏ ｙ ｈ ｃ ｔｓａ ｄ ｉ ｎ ｉａｅ ｈ ｔｔ ｐ ｉ ｈ ｍａ ｓａ ｎｎ ｏ —
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第３ ６卷 第 ３期
Ｖ０＿ ６ ｌ３
Ｎｏ ３ ．
淡
水
酶类染色液
酶类染色液北京华越洋生物------------------------------------------------------碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法) 3×50ml 酶类染色40% 4℃,避光,3个月碱性磷酸酶染色，适用于石蜡切片属于金属沉淀法,碱性磷酸酶活性出呈棕黑色,可能出现假阳性,采用阴性对照。
二甲苯应采用AR以上级别。
碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法) 3×100ml 酶类染色40% 4℃,避光,3个月碱性磷酸酶染色，适用于石蜡切片属于金属沉淀法,碱性磷酸酶活性出呈棕黑色,可能出现假阳性,采用阴性对照。
二甲苯应采用AR以上级别。
碱性磷酸酶-PAS联合染色液6×50ml 酶类染色40% 4℃,避光,3个月碱性磷酸酶染色与过碘酸雪夫试剂合用,同时显色碱性磷酸酶和PAS阳性物质。
适用于冰冻切片、石蜡切片,碱性磷酸酶活性部位呈黑色,PAS阳性物质呈紫红色。
染色过程中注意控制过碘酸处理的时间,否则容易褪色。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP) 4×2ml 酶类染色40% 4℃,避光,6个月专门用于血液或骨髓细胞涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶染色,又称同时偶联法。
碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨中。
油镜下计数100个中性粒细胞,求出百分比和积分。
非特异性反应少，结果可靠。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP) 4×10ml 酶类染色40% 4℃,避光,6个月专门用于血液或骨髓细胞涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶染色,又称同时偶联法。
碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨中。
油镜下计数101个中性粒细胞,求出百分比和积分。
非特异性反应少，结果可靠。
碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法) 4×2ml 酶类染色40% —20℃,避光,6个月用于石蜡切片、冰冻切片、骨髓细胞涂片、血液涂片等的碱性磷酸酶染色,又称同时偶联法碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨中。
酸性α醋酸萘酯酶染色法
酸性α 醋酸萘酯酶染色法一、原理淋巴细胞内含有许多种酶，如α 醋酸萘酯酶(ANAE)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、β 葡萄糖苷酸酶等。
不同的淋巴细胞细胞亚群所含酶类及其含量各异，如淋巴母细胞富含ACP，而成熟的T淋巴细胞则显示ANAE活性，因此可利用化学反应作检测。
T淋巴细胞浆内含有的酸性α 醋酸萘酯酶(acid α naphthyl acetate esterase，ANAE) ，在弱酸性条件下，能使底物酸性α 醋酸萘酯水解成醋酸和α 萘酚，后者与六偶氮副品红偶联，生成不溶性的红色沉淀物，沉积在T淋巴细胞胞浆内酯酶所在的部位，经甲基绿复染，反应呈现单一或散在的颗粒或斑块，显棕红色。
B淋巴细胞则无此种反应。
因此ANAE染色法可作为鉴别T淋巴细胞的一种非特异性方法。
此外，单核细胞、中性粒细胞、酸性粒细胞及血小板等也可呈现酯酶染色阳性反应，应当注意区分。
二、材料和方法(一) 材料1 2 5%戊二醛溶液(固定液)在0 1mol/L pH值7 4磷酸盐缓冲液9ml中加入25%戊二醛溶液1ml，混和，置4℃冰箱保存备用。
2 副品红液将副品红4g加入2mol/L盐酸100ml中，37℃溶解过滤，4℃冰箱保存备用。
3 4%亚硝酸钠溶液取亚硝酸钠400mg，溶于蒸馏水10ml中，临用前配制。
4 六偶氮副品红溶液取新配制的亚硝酸钠溶液3ml，慢慢滴入副品红溶液3ml中，边滴边搅拌，此时有刺激性气体产生。
充分混合，1min后备用。
5 α 醋酸萘酯溶液：α 醋酸萘酯2g乙二醇单甲醚100ml也可用丙酮100ml代替乙二醇单甲醚。
6 0 067(1/15)mol/L pH值7 6磷酸盐缓冲液：甲液KH 2PO 4 9 08g加蒸馏水至1，000ml乙液Na 2HPO 4 9 74g加蒸馏水至1，000ml。
(如为Na 2HPO 4·12H 2O则称取2322g)取甲液13ml，加入乙液87ml，即为0 067mol/L pH值7 6磷酸盐缓冲液。
一种α-醋酸萘酚酯酶染色试剂盒[发明专利]
![一种α-醋酸萘酚酯酶染色试剂盒[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1b2ae403172ded630a1cb6d3.png)
专利名称：一种α-醋酸萘酚酯酶染色试剂盒专利类型：发明专利
发明人：谢永华,朱美萍,许付
申请号：CN201510894398.2
申请日：20151207
公开号：CN105648035A
公开日：
20160608
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及生物技术领域，公开了一种α-醋酸萘酚酯酶染色试剂盒。
本发明所述试剂盒包括固定液、α-醋酸萘酚酯溶液、偶氮染料溶液、缓冲液及漂洗液，所述偶氮染料溶液为碱性蓝54水溶液。
本发明试剂盒以碱性蓝54替代现有α-NAE染色方法中的坚固蓝B盐、固紫盐等重氮染料，将染色时间缩短到20分钟左右，染色后即可通过镜检区分单核细胞和未成熟及成熟粒细胞、淋巴细胞、红细胞，省去细胞核复染步骤，且无需NaF抑制试验辅助即可快速诊断出单核细胞白血病和粒细胞白血病，相比现有方法更加简便、快捷。
申请人：上海太阳生物技术有限公司
地址：201108 上海市闵行区金都路3419号
国籍：CN
代理机构：北京集佳知识产权代理有限公司
代理人：赵青朵
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医院检验中心酯酶染色中性非特异性脂酶染色操作规程
医院检验中心酯酶染色---中性非特异性脂酶(α—NAE)染色操作规程[方法学]酯酶染色的方法很多，根据与pH底物等不同作用，将常用的酯酶染色法分为两大类，即特异性酯酶染色和非特异性酯酶染色。
后者又可分为3类：①中性非特异性酯酶染色法：α—乙酸菜酚酯酶、乙酸菜酚酯酶和乙酸菜酚AS-D酯酶。
②酸性非特异性酯酶染色法：α—乙酸菜酯酶和α—丁酸菜酯酶。
②碱性非特异性酯酶染色法：α—丁酸菜酯酶。
中性非特异性酯酶染色是单核细胞与粒细胞白血病区别的重要方法，一般实验室可选用此法。
[原理]α—乙酸萘酚经酯酶水解产生萘酚，萘酚与重氮盐偶联，生成灰黑或棕黑色沉淀物，定位于胞浆中。
[试剂]1．α—醋酸萘酯丙酮液：α—醋酸萘酯1g，加丙酮和蒸馏水混合液100m1，溶解后贮于磨口带塞三角瓶内，4℃保存，可使用半年。
2.pH7．4磷酸盐缓冲液：0．07MNa2HPO4(即Na2HPO4)3．基质液：磷酸盐缓冲液82ml，缓慢滴加α-醋酸萘酯丙酮液1．6ml(滴速约每分钟40滴)，边加边用力振摇。
根据5分钟后，加坚牢蓝B80mg，剧烈振摇10分钟，立即过滤，滤液两杯，各40ml。
4．氟化钠基质液：称取氟化钠(NaF)61mg加入上述其中基质液1杯内，混匀后，标上标记。
[操作](1)新鲜涂片两张，分别标上NSE和NaF记号，滴加10％甲醛生理盐水，固定5分钟，用自来水轻轻冲洗，当心血膜脱落，晾干。
(2)两张涂片同时放入各自染色杯内，37℃水浴1小时。
(3)取出后水洗，晾干后镜检。
不用复染。
[结果观察]在胞浆内若有棕黑色或灰黑色弥漫性颗粒沉淀者为阳性，细胞脑浆为黄色者为阴性。
[临床意义]1．阳性：单核细胞和组织细胞呈强阳性，但可被氟化钠抑制；巨核细胞及血小板呈阳性；早幼粒细胞白血病时早幼粒细胞可阳性，且不受氟化钠抑制。
2．弱阳性及阴性：粒细胞、淋巴细胞一般为阴性，若有弱阳性也可被氟化钠抑制。
3．临床鉴别：主要用于鉴别急性单核细胞性白血病与急性粒细胞性白血病，前者NSE阳性，且受氟化钠(NaF)抑制；而后者NSE阴性，若有阳性也不受氟化钠抑制。
α-茶酚醋酸酯酶染色
α-茶酚醋酸酯酶染色文章目录*一、α-茶酚醋酸酯酶染色的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、α-茶酚醋酸酯酶染色的正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、α-茶酚醋酸酯酶染色的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、α-茶酚醋酸酯酶染色的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、α-茶酚醋酸酯酶染色的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应α-茶酚醋酸酯酶染色的基本信息1、定义α醋酸萘酚酯酶为白细胞中的非特异性酯酶,能将基质液中的α醋酸萘酚水解,产生α萘酚,再与重氮盐偶联,生成灰黑色不溶性沉淀,定位于酶活性所在的胞质内。
2、专科分类肿瘤科3、检查分类生化检查4、适用性别男女均适用5、是否空腹空腹α-茶酚醋酸酯酶染色的正常值和临床意义1、正常值原单核细胞、幼单核细胞、单核细胞、巨核细胞、血小板为阳性反应;各期粒细胞、幼红细胞、淋巴细胞、浆细胞为阴性反应。
2、临床意义阳性可见于单核细胞白血病、组织细胞白血病、网状细胞肉瘤、粒细胞-单核细胞性白血病、红血病、红白血病、早幼粒细胞性白血病等的细胞。
阴性见于多发性骨髓瘤的细胞。
α-茶酚醋酸酯酶染色的检查过程及注意事项1、检查过程骨髓取材:取材部位有胸骨、棘突、髂骨前嵴或后嵴等。
两岁以内小孩最好用胫骨,成人常取髂后上棘,此部位穿刺方便,病人也易接受。
穿刺前要求严格消毒,杜绝细菌感染,除穿刺室紫外线消毒和皮肤消毒外,还应注意穿刺包和手套消毒时间有否过期。
戴手套要熟练,避免手套接触未消毒物品。
穿刺针进入髓腔时常有脱空感,吸取前针筒内应留有1ml左右的空隙,否则髓液很快进入针筒空隙而无法取出。
针筒内若有水份也要用消毒纱布擦干,以免溶解细胞。
吸液量一般控制在0.2ml左右,因吸量过多,易被外周血稀释。
部分病人干抽或吸出量太少时,不要将针头立即拔出,可边抽边调节针头深浅,或边抽边缓慢外移针头,最后将针头内可能残留的髓液尽量推出、制片,以减少病人痛苦。
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酸性α-醋酸萘酚酯酶染色液（ANAE）
预期用途：供骨髓细胞图片及血液细胞图片染色检查
检验原理：盐酸副品红与亚硝酸钠反应生成六偶氮副品红（重氮盐），底物α-醋酸萘酚在酯酶的作用下水解α-萘酚，α-萘酚再与重氮盐偶联，生成棕红色沉淀，定位于细胞浆中，本染色液对酯酶染色无特异性，故又称作非特异性酯酶染色
主要组成成分：
储存条件及有效期：有效期：一年
储存条件：本试剂盒应储存于2℃-8℃低温环境。
样本要求：新鲜骨髓细胞涂片及血液细胞涂片（切勿使用抗凝血）
检验方法：
一、工作液配制
（一）、浸染工作液配制（一份浸染工作量是33ml,至少可同时放置8-10张涂片）
1、重氮盐溶液的准备：B液1ml与C液1ml彻底混匀，静置2分钟；
2、染缸（自备染液缸）内加入D液40ml；
3、将重氮盐溶液倒入染缸内，混匀
4、再加E液1ml入染缸内，轻轻混匀
（二）滴染工作液配制（一份滴染工作液是1.65ml）
使用器材：一次性塑料试管、微量移液器，一次性吸嘴，滴管。
操作：于试管内加B液50μL，C液50μL混匀，静置1分钟，再加D液1.5ml，E液50μl,混匀，静置2分钟备用（NaF抑制试验加NaF液1滴）。
二、染色步骤
1、干燥涂片，直接滴加工作液做第二步或滴加A液（用前恢复室温，并充分摇匀）固定
约30-60秒，蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干（涂片不固定直接做ANAE染色，阳性反
应强于固定者）；
2、滴加或浸入工作液布满涂片（37℃）孵育分钟，蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干
3、F液复染1-2分钟，蒸馏水冲洗，干后镜检
参考范围：1.单核细胞系统：呈阳性反应，其反应可被氟化钠抑制。
2.粒细胞系统：各期粒细胞多呈阴性反应，有时少数粒细胞可呈弱阳性反应，其反应不被氟化钠抑制。
3.巨核细胞及血小板为阳性。
4.淋巴细胞多呈点状阳性，部分淋巴细胞及浆细胞为阴性反应。
5.单核细胞源性的组织细胞、巨噬细胞呈强阳性反应，高雪氏细胞、海蓝组织细胞为阳性。
6.幼红细胞呈阴性反应。
检验结果的解释
细胞浆内红色或棕红色颗粒为阳性。
①点样型：主要见于成熟T淋巴细胞，阳性反应呈棕色或棕红色1-4个圆形、团块、边界清楚的大点状颗粒定位于细胞浆中。
②弥散型：阳性
反应呈棕红色尘粒状、弥散分布，可位于细胞浆的某一局部，边界不清。
③单核细胞型：阳性反应为均匀棕红色弥漫性遍布整个细胞浆。
检验方法的局限性
仅限于形态学染色观察使用
注意事项
1、5Tests只限滴染使用
2、本染色又名酸性非特异性酯酶染色。
3、使用前应恢复室温，用前请摇匀试剂；B,C液请充分混匀，所用容器必须洁净。
4、工作液临用前新鲜配制，应采用新鲜涂片染色。
5、每次试剂使用后，请迅速盖好密封保存，以免挥发及影响效果
6、本品应由专业人士使用及进行结果的判读
7、使用前应详细阅读使用说明书及产品包装标识，在有效期内使用，并做好个人卫生防护
8、生产批号、效期见外包装
9、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。