糖的定量测定
实验八糖类的定量测定1
1
实验目的
1、了解3，5-二硝基水杨酸比色法测定糖的原 理。 2、掌握还原糖及总糖测定的操作方法。
糖类包括多糖、寡糖、单糖。还原糖是指含有 自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单 糖和某些双糖（如乳糖和麦芽糖）。多糖和蔗 糖等为非还原性糖。 糖类的测定方法有物理方法和化学方法两类。 物理法是通过糖的折光率、比旋度的变化、比 重计进行测定。化学测定法主要是利用自由醛 基或酮基的还原性质，与试剂（氧化剂）进行 氧化还原反应作为测定基础。由于化学方法比 较精确，常常用于还原糖和总糖的测定。
（3）砷钼酸比色法（Somogyi铜试剂比色法） 还原糖将铜试剂还原生成氧化亚铜，在浓硫酸存在 下，砷钼酸试剂可与氧化亚铜生成蓝色复合物，蓝色 产物砷钼酸在560nm下的吸光度与还原糖含量呈正比关 系，适用于测定测定范围为25-200ug的还原糖含量。 （4）蒽酮比色法 糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物，该衍生物 与蒽酮发生反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有 最大吸收。该法灵敏度高、简便快速，适用于测定动 物组织中糖原、葡萄糖的含量，也可用于测定植物材 料中可溶性糖的含量。 （5）3，5一二硝基水杨酸比色定糖法 该法是半微量定糖法，操作简便、快速，杂质干扰较 少，是糖定量测定的一种基本方法。
二、标准葡萄糖浓度梯度和样品待测液的测定
取10根25 ml比色刻度管，从0-9编号后，按下表顺序操作
空 白 管号 1mg/ml葡萄糖标 准液 样品待测液（ml） 蒸馏水（ml） DNS试剂 2.0 2.0 1.8 2.0 1.6 2.0 1.4 2.0 1.2 2.0 1.0 2.0 0 0 还原糖 （A） 5 1.0 1.0 1.0 2.0 1.0 1.0 2.0 1.0 1.0 2.0 1.0 1.0 2.0 6 7 总糖 （B2） 8 9
四种糖的测定方法
四种糖的测定方法
1. 莫尼酮试剂法（Benedict试剂法）
莫尼酮试剂法是测定还原性糖（如葡萄糖和果糖）的常用方法。
该方法利用莫尼酮试剂中的铜离子与还原性糖发生氧化还原反应，生成红色或黄色的沉淀。
根据沉淀的颜色来定量测定糖的含量。
2.酚硫酸法
酚硫酸法是测定非还原性糖（如蔗糖和乳糖）的一种方法。
该方法利用硫酸和酚的作用来将糖酸化，生成暗红色的化合物。
通过比色法来测定溶液的吸收值，然后通过标准曲线计算出糖的含量。
3.高效液相色谱法（HPLC）
高效液相色谱法是一种精确测定各种糖的含量和成分的方法。
该方法使用高效液相色谱仪来分离糖，并使用UV检测器来检测糖的吸收峰。
根据吸光度与浓度的关系，以及外部标准曲线，可以定量测定糖的含量。
4.旋光法
旋光法是一种测量光学活性糖（如葡萄糖和果糖）的方法。
光学活性糖分子可以使光线在通过时转动其振动平面。
旋光仪可以测量这种旋光现象，并根据旋转角度和样品底物的厚度来计算样品中的糖含量。
以上是四种常见的糖的测定方法。
根据不同的糖类和实验需求，可以选择适合的方法进行测定。
这些方法在食品工业、生化研究等领域起着重要作用，帮助人们更好地了解和利用糖的性质和功能。
实验二血糖定量测定
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分光光度技术
有色溶液对光线有选择性的吸收作用，不同物质由 于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同， 因此，每种物质都具有其特异的吸收光谱。有些无色溶 液虽对可见光无吸收作用，但所含物质可以吸收特定波 长的紫外线或红外线。分光光度法是利用物质特有的吸 收光谱来鉴别物质或测定其含量的技术。使用的仪器则 称为分光光度计 。
Cu2+( CuSO4 ) 还原糖 Cu2O +酸性钼酸试剂
Cu+(Cu2O) 蓝色钼化合物
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测定血糖含量时必须先除去其中的蛋白质，制成 无蛋白滤液，再行检验。向抗凝血中加入钨酸钠、 硫酸锌、氢氧化锌及三氯乙酸等均可制得无蛋白滤 液，现常用钨酸法。钨酸钠与硫酸作用，生成钨酸， 可使血红蛋白等变性、凝固、沉淀，离心或过滤除 去沉淀，即得无蛋白血滤液，此种滤液还适用于测 定非蛋白氮、肌酸和尿酸等
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754型操作规程
1. 开启电源，用可见光测定时打开钨灯即可，如使用紫外测定则还需打开氘灯， 指标灯亮，使仪器预热20min以上。
2. 按“Mod”键选择测试方式，使开关置于"T"。 3. 打开样品室盖（光门自动关闭），按"0％T"键进行机械调零，使数字显示为
２.０
２.０
２.０
混匀，室温放置２min，以蒸馏水定容至２５ml，混匀，倒入比色杯， 用７５４型分光光度计４４０nm波长比色（先以空白管调节零点，继测标准 管及样品管）。记录各管吸光度值。
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３、结果计算
根据比色结果计算每１００ml血液中所含葡萄糖的毫克数： １００ml全血含血糖毫克数＝OD1/OD2×C×10×100 其中C＝标准葡萄糖含量（mg/ml）； OD1＝样品液光密度 OD2＝标准液光密度
含糖量的测定方法
含糖量的测定方法含糖量的测定方法可以分为化学方法和物理方法两大类。
化学方法是利用化学反应或特定试剂来定量测定样品中糖分的含量。
最常用的化学方法包括酶法、显色反应法和滴定法。
酶法是一种利用特定的酶酶解糖类物质并产生可检测的产物的方法。
比较常用的酶法是葡萄糖酶法和差减光密度法。
葡萄糖酶法是通过加入葡萄糖氧化酶和辅酶使葡萄糖氧化成葡萄酮酸，再通过加入过氧化氢酶和过氧化氢将葡萄酮酸氧化成对苯二酚，最终通过测定对苯二酚的吸光度来确定葡萄糖的含量。
差减光密度法则是基于类似的原理，但将吸光度差异与糖含量进行比较。
显色反应法是通过特定试剂与糖发生反应从而产生比较明显的颜色变化，通过测定生成的色素的光密度来定量糖的含量。
例如，费林试剂与糖反应可以产生红色产物费林复合物，其光密度与糖的含量成正比。
还有亚甲蓝方法、硫酸铜试剂法等也是利用显色反应来测定糖含量的常用方法。
滴定法是通过滴定试剂与糖反应的化学计量关系来定量测定样品中糖的含量。
例如，利用硫酸铜滴定法来测定还原糖的含量。
首先，将硫酸铜试剂加入样品中，还原糖会将硫酸铜还原成无色的氧化铜。
当硫酸铜完全被还原后，加入淀粉试剂可以形成蓝色淀粉铜络合物，此时继续滴定亚硫酸钠直至蓝色消失，记录滴定所需的亚硫酸钠滴定液的体积，再根据化学计量关系计算糖的含量。
物理方法是通过物理性质的测定来间接推算糖含量。
常用的物理方法包括折光仪法和比旋光法。
折光仪法是利用糖溶液对光的旋光性质来测定糖的含量。
具体操作是用测色皿装满糖溶液，然后将折光仪的滤光片调节至最小旋光度，最后读取旋光计上的旋光度值，通过与标准曲线对照得出糖含量。
比旋光法是利用测得的旋光度值与标准溶液进行对比来测定糖含量的方法。
比旋光法是测定物质旋光度的一种量测方法。
它是通过化学同分异构体之间结晶形状或晶体双折射展现出来的旋光性质的差异进行测定。
将样品溶解成一定浓度的溶液，然后再根据旋光计的示值，参照标准曲线来测定样品中糖的含量。
食品中糖含量的测定方法研究
食品中糖含量的测定方法研究糖作为一种常见的食物成分，在食品中扮演着重要的角色。
然而，过多的糖摄入对健康有害。
因此，准确测定食品中糖的含量是非常重要的。
本文就食品中糖含量的测定方法进行研究。
一、高效液相色谱法高效液相色谱法是目前最常用的测定食品中糖含量的方法之一。
该方法通过将样品中的糖分离并使用色谱柱进行定性和定量分析。
高效液相色谱法有准确度高、分析速度快等优点，已经被广泛应用于食品质量检测。
二、酶法测定法酶法测定法是一种通过酶促反应来测定糖含量的方法。
该方法通过将样品与特定的酶底物反应生成可测定的产物来测定糖的含量。
酶法测定法具有反应性强、准确性高等优点，但需要较长的分析时间。
三、红外光谱法红外光谱法是一种基于糖分子对红外光的吸收和散射的特性来测定糖含量的方法。
该方法具有快速、非破坏性等特点，可以对样品进行迅速的分析。
然而，红外光谱法在某些食品样品中存在干扰物质的问题，因此需要进一步改进。
四、核磁共振法核磁共振法是一种通过测定磁共振信号来确定糖含量的方法。
该方法具有高分辨率、非破坏性等特点，可以对样品进行准确的定量分析。
然而，核磁共振法的设备昂贵且复杂，不易在所有实验室中广泛应用。
五、电化学法电化学法是一种基于糖分子在电化学反应中的电子转移特性来测定糖含量的方法。
该方法具有高灵敏度、准确性高等优点，已经成为一种常用的食品中糖含量测定方法。
然而，电化学法在某些食品样品中存在样品处理和电极选择的问题。
综上所述，食品中糖含量的测定方法有多种选择，每种方法都有其特点和局限性。
在实际应用中，我们可以根据具体情况选择合适的测定方法。
随着科学技术的不断进步，未来可能会出现更加准确和快速的测定方法，为食品质量检测提供更大的便利和贡献。
血糖的定量测定(葡萄糖氧化酶法)
血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法）血糖是指血液中葡萄糖的含量。
葡萄糖是人体主要的能量来源，血糖的测定是检查人体内部能量代谢状态的重要项目之一。
这篇文章将介绍血糖定量测定的实验原理、方法以及实验注意事项。
一、实验原理血糖的定量测定方法主要是利用葡萄糖氧化酶将血液中的葡萄糖在催化反应下转化为过氧化氢和D-酮糖酸，利用过氧化氢的比色法来测定血糖的含量。
具体反应式为：(1)葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖氧化酶 D-酮糖酸+H2O2(2)2H2O2+Fe2+→2H2O+Fe3++O2(3)Fe3++TSC(三硝基苯胺)→FeTSC3（红色化合物）其中，TSC（三硝基苯胺）为过氧化氢的比色试剂，用Fe2+作催化剂促进反应进行，所生成的红色化合物FeTSC3与过氧化氢的浓度呈线性关系。
二、实验材料1.血糖标准品：10mmol/L2.葡萄糖氧化酶3.三硝基苯胺（TSC）、醋酸钠、乙二胺四醋酸盐二水合物（EDTA•2H2O）、氢氧化钠（NaOH）4.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.5）5.准确量杯、试管、离心管、吸光度计、恒温水浴器、移液管三、实验步骤1.制备血清样品：将血液放置静置后离心取血清，制成5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L的葡萄糖标准品。
2.实验组织：3个组别，每组3个试管。
A组：加1mL的10mmol/L葡萄糖标准品；B 组：加1mL的血清标本；C组：加入1mL的磷酸盐缓冲液作为对照组。
注意，每组要做三个平行实验。
3.反应体系准备：①将实验组织中的标准品、血清样本和磷酸盐缓冲液分别加入3毫升离心管中。
②分别加入1mL葡萄糖氧化酶。
③分别加入1mL EDTA全部气泡排除。
⑤每组混合后放置在37℃下反应20分钟。
⑥在上述反应过程中，加入2毫升0.1mol/L的NaOH溶液使溶液呈碱性，使催化反应更为稳定。
4.吸光测定：将反应充分混合后，吸取适量的样品，放到吸光度计槽，设定波长为505nm，用对照组值进行比较，计算出各组的吸光度，并根据标准曲线计算出各样本的葡萄糖含量。
糖类测定实验报告
一、实验目的1. 掌握糖类检测的基本原理和方法。
2. 学习使用化学试剂对糖类进行定量和定性分析。
3. 了解糖类在生物体中的重要性及检测方法在生物学研究中的应用。
二、实验原理糖类是一类生物大分子，广泛存在于自然界中，是生物体的重要营养物质。
本实验采用化学试剂法对糖类进行检测，主要利用糖类与特定试剂发生颜色变化的原理。
1. 斐林试剂法：还原糖在斐林试剂的作用下，加热后生成砖红色沉淀，根据沉淀的量可以定量分析还原糖的含量。
2. 苏丹Ⅲ/Ⅳ试剂法：脂肪在苏丹Ⅲ/Ⅳ试剂的作用下，呈现红色或橙色，可以定性检测脂肪的存在。
3. 双缩脲试剂法：蛋白质与双缩脲试剂反应，产生紫色复合物，可以定性检测蛋白质的存在。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：待测生物组织样品、斐林试剂、苏丹Ⅲ/Ⅳ试剂、双缩脲试剂、蒸馏水、移液器、试管、酒精灯、烧杯、显微镜等。
2. 实验仪器：分析天平、恒温水浴锅、显微镜、电子天平等。
四、实验步骤1. 糖类检测（1）取待测生物组织样品，研磨成匀浆。
（2）取2 mL匀浆于试管中，加入2 mL斐林试剂，混合均匀。
（3）将试管放入50-65℃的恒温水浴锅中加热2分钟。
（4）观察试管中溶液的颜色变化，记录结果。
2. 脂肪检测（1）取待测生物组织样品，研磨成匀浆。
（2）取2 mL匀浆于试管中，加入3滴苏丹Ⅲ/Ⅳ试剂，混合均匀。
（3）观察试管中溶液的颜色变化，记录结果。
3. 蛋白质检测（1）取待测生物组织样品，研磨成匀浆。
（2）取2 mL匀浆于试管中，加入1 mL双缩脲试剂A液，摇匀。
（3）加入4滴双缩脲试剂B液，摇匀。
（4）观察试管中溶液的颜色变化，记录结果。
五、实验结果与分析1. 糖类检测实验结果显示，待测生物组织样品在斐林试剂的作用下，溶液呈现砖红色沉淀，说明其中含有还原糖。
2. 脂肪检测实验结果显示，待测生物组织样品在苏丹Ⅲ/Ⅳ试剂的作用下，溶液呈现红色，说明其中含有脂肪。
3. 蛋白质检测实验结果显示，待测生物组织样品在双缩脲试剂的作用下，溶液呈现紫色，说明其中含有蛋白质。
糖的定量实验报告
实验目的：1. 掌握糖类物质的定量分析方法。
2. 熟悉3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量的原理和操作步骤。
3. 了解糖类物质在食品、医药等领域的应用。
实验原理：还原糖是一类具有游离醛基或酮基的单糖和二糖，如葡萄糖、果糖、麦芽糖等。
它们在碱性条件下能与3,5-二硝基水杨酸反应，生成棕红色的复合物。
在一定浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，通过比色法可以测定样品中的还原糖含量。
实验材料：1. 样品：不同浓度和种类的糖溶液。
2. 试剂：3,5-二硝基水杨酸、氢氧化钠、硫酸铜、苯酚、亚硫酸钠、酒石酸钾钠、葡萄糖、蒸馏水等。
3. 器材：可见分光光度计、电子天平、水浴锅、移液器、试管、容量瓶等。
实验步骤：1. 标准曲线的制作：- 配制一系列已知浓度的葡萄糖标准溶液。
- 按照实验方法测定各标准溶液的光吸收值。
- 以葡萄糖浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：- 配制样品溶液，按照实验方法测定其光吸收值。
- 根据标准曲线，计算样品中还原糖的含量。
3. 实验方法：- 准确移取一定量的样品溶液和3,5-二硝基水杨酸试剂，混合均匀。
- 将混合液置于水浴锅中加热煮沸5分钟。
- 冷却后，用比色法测定光吸收值。
实验结果：1. 标准曲线的制作：- 通过实验得到的标准曲线，线性关系良好，相关系数R²>0.99。
2. 样品测定：- 根据标准曲线，计算出样品中还原糖的含量。
实验讨论：1. 影响还原糖测定结果的因素：- 样品溶液的浓度：样品溶液浓度越高，光吸收值越大，但过高的浓度会导致吸光值超出仪器的测量范围。
- 实验操作：实验操作过程中，需严格控制温度、时间等条件，以保证实验结果的准确性。
2. 糖类物质的应用：- 糖类物质在食品、医药、化工等领域具有广泛的应用，如：食品添加剂、药物辅料、化工原料等。
结论：通过本实验，掌握了糖类物质的定量分析方法，熟悉了3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量的原理和操作步骤。
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三、试剂与器材
1. 试剂 蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于1000ml 80％(V／ 蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于1000ml 80％(V／ V)硫酸（!）中，当日配制使用。 V)硫酸 硫酸（ 标准葡萄糖溶液：(0．1mg／m1)100ml葡萄 标准葡萄糖溶液：(0．1mg／m1)100ml葡萄 糖用蒸馏水定容至1000ml(可滴加几滴甲苯作防 糖用蒸馏水定容至1000ml(可滴加几滴甲苯作防 腐剂) 腐剂)。 2. 器材 样品、移液器、试管、分光光度计、水浴锅。
实验一 糖的定量测定--蒽 糖的定量测定--蒽 酮比色法
一、目的要求
掌握蒽酮比色法定糖的原理和方法。 掌握蒽酮比色法定糖的原理和方法。
二、原理
蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。 蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。 糖在浓硫酸作用下， 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲 基糠醛, 基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成 蓝绿色糠醛衍生物， 620nm处有最大吸收 处有最大吸收。 蓝绿色糠醛衍生物，在620nm处有最大吸收。在一 定范围内,颜色深浅与糖含量成正比， 定范围内,颜色深浅与糖含量成正比，故可用于糖的 定量。 定量。 蒽酮可与其他一些糖类发生反应， 蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜 色不同。当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时， 色不同。当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时， 反应不稳定，呈现红色。 反应不稳定，呈现红色。 本法多用于测定糖原含量， 本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄 糖含量。 糖含量。
四、操作步骤
1、标准曲线的制作 取6只试管，按照下表的次序加入试剂。 只试管，按照下表的次序加入试剂。
管号 步骤 标准葡萄糖溶液/ml 标准葡萄糖溶液/ml 蒸馏水/ml 蒸馏水/ml 0 1.0 0.1 0.9 0.2 0.8 0.3 0.7 0.4 0.6 0.5 0.5 0 1 2 3 4 5
七、思考题
1、本法多用于测定什么样品？ 本法多用于测定什么样品？ 2、加蒽酮试剂时为什么要冰浴中冷却？ 加蒽酮试剂时为什么要冰浴中冷却？ 3、分光光度计的操作步骤及注意事项？ 分光光度计的操作步骤及注意事项？
五、计算
1、从标准曲线上查得样品浓度 、 2、利用直线方程，计算得样品浓度 、利用直线方程，
六、注意事项
1、各试管的处理应一致，测定溶液应同时放入沸水 各试管的处理应一致， 中，再同时从沸水浴中取出。 再同时从沸水浴中取出。 2、加样要精确，否则测出的值会有很大的误差。 加样要精确，否则测出的值会有很大的误差。 3、测A620时，应该要等试管冷却之后才能进行测 A620时 定。
混匀，冰浴5min 混匀，冰浴5min 蒽酮试剂/ml 蒽酮试剂/ml 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
沸水浴中10min，取出，自来水冷却， 沸水浴中10min，取出，自来水冷却，室温放置 10min， 620nm处比色 10min，在620nm处比色 A620nm
2、样品浓度的测定——取1ml待测糖，步骤同上 、样品浓度的测定 待测糖， 取 待测糖