实验二总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定
三、实验器材
1、材料：山芋粉 2、仪器：电子分析天平、水浴锅、V-1100 可见分光光度计、移液器 3、其他：试管、容量瓶、三角烧瓶、量筒、 吸管（移液管）、洗耳球、玻棒、洗瓶、 漏斗、离心管、六凹反应盘、pH试纸（1 ～14）
四、实验试剂
1、标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml） 2、DNS试剂 3、6mol/L HCl 4、6mol/L NaOH 5、I2-KI溶液
六、计算
C1V1 ω(还原糖)=——×100% m1
C2V2
ω(总糖)=——×0.9×100% m2
附：相关仪器使用 1、移液管的使用
2、移液器的使用
3、离心机的使用 注意配平，对称放 4、V-1100可见分光光度计的使用 比色皿
V-1100可见分光光度计
开机预热30min 测吸光度 选择波长（540nm） MODE键切换到T，将黑体放入光路中
2、样品中总糖的水解、提取
准确称取0.2g山芋粉置于100ml三角烧瓶中
加3ml蒸馏水，调成糊状
取1～2滴于六凹 反应盘中，加1滴 I2-KI溶液，如果 完全不显蓝色， 即可进行下面的 操作。
再加12ml蒸馏水，5ml 6mol/L HCl
沸水浴，30min (不时搅拌) 冷却至室温 用6mol/L NaOH调pH7.0（ pH试纸） 蒸馏水定容至100ml,混匀
合上盖，0键校零MODE键切换到A，参比 Nhomakorabea放入到光路中
合上盖，100键调零
将待测液依次放入到光路中，即可得出 待测液的吸光度。
比色皿的使用
管号
试剂
标准葡萄糖溶液 /ml
0
1
2
3
4
5
6
7
实验二 总糖和还原糖的测定(DNS)
实验二总糖和还原糖的测定──3,5－二硝基水杨酸比色法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
三、试剂和器材1、试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取5.0g DNS溶于200ml 2mol/L NaOH溶液中（不适宜用高温促溶），接着加入到酒石酸甲钠的热溶液中（192g就是酸甲钠溶于500ml水中），再加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，摇匀溶解后，冷却定容至1000ml，暗处保存备用。
葡萄糖标准溶液：准确称取在105℃的温度下烘干至恒重的葡萄糖0.5g，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至1000ml。
6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
0.1% 酚酞指示剂：0.1g酚酞溶于100ml无水乙醇中。
1％淀粉2、材料淀粉。
3、器材WFJ UV－2000型分光光度计，水浴锅，电炉，10ml比色管。
四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取6支10ml 比色管并编号，按下表顺序加入各种试剂。
（表1）混匀后置沸水浴上加热5min 进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水4.0ml ，摇匀，在540nm 波长下，用0号管调零，分别读取各管的吸光度值A 540。
以葡萄糖含量（mg ）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2、淀粉水解及还原糖的提取取1％淀粉25ml ，放在100ml 烧杯中，加入6mol/L HCl 10ml ，然后加入蒸馏水15ml ，混匀，于沸水浴中保温30min ，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I 2-KI 溶液检查水解是否完全。
生化实验二--果蔬中总糖及还原糖含量的测定
一、目的 掌握总糖和还原糖含量的测定方法。 学习分光光度计的原理和操作方法。
二、原理 总糖是指样品中的还原单糖及在本实
验条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽 糖和可部分水解成葡萄糖的淀粉。
多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的 多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，再 利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求 出总糖和还原糖的含量。
蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。 其原理：糖类在较高温度下可被硫酸脱水成糠 醛或糠醛衍生物，再与蒽酮缩合成蓝色化合物， 在620nm处有最大吸收。
三、实验器材
1、植物材料 2、吸管（1.0mL×2、5.0mL×2、
0.1mL×2 、0.2mL×2 、0.5mL×2 ） 3、试管（1.5cm×15cm×7） 4、分光光度计 5、水浴锅、电炉 6、电子分析天平 7、容量瓶（100mL×1）、玻璃漏斗 8、量筒、研钵、三角烧瓶
×0.9①×100%
① 乘0.9是为了从测定出的总糖水解成的单糖中扣除 水解时所消耗的水量。
式中：
W（还原糖）：还原糖质量分数（%） W（总糖）：总糖质量分数（%） C1：还原糖的质量浓度（mg/mL） C2：水解后还原糖的质量浓度（mg/mL） V1：样品中还原糖提取液的体积（mL） V2：样品中总糖提取液的体积（mL） m：样品质量
四、实验试剂
1、蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于1000mL体积分数为 80%的硫酸中，当日配制使用。 2、标准葡萄糖溶液（0.1mg/mL）：称取100mg 葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至1000mL（可加几 滴甲苯作防腐剂）。 3、6mol/L HCl溶液 4、20% NaOH溶液：称取20g NaOH固体，溶于 蒸馏水并稀释至100mL。
冬枣、柚子、梨：取滤液5mL用蒸馏 水定容至100mL。
02 实验二 还原糖和总糖的测定(3,5-二硝基水杨酸,DNS)(考核15%)
四、实验试剂
1. 葡萄糖标准液（1.0 mg/mL）：100 mg葡萄糖，
用水定容至100 mL，4℃保存。
2. DNS：6.3 g DNS和262 mL 2.0 mol/L NaOH溶
液，加到500 mL含有185 g酒石酸钾钠的热水溶液
中，加5.0 g结晶酚和5.0 g亚硫酸钠，搅拌，冷却后
用水定容至1000 mL，棕色瓶中存储。
水解完全。冷却至室温，加1滴酚酞指示剂，用6.0 mol/L
NaOH和至溶液呈微红色，转入100 mL容量瓶，用蒸馏水定 容。混匀后过滤，取滤液10 mL加入100 mL容量瓶中，用蒸 馏水定容。混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总 糖测定。
4.样品测定
管号 试剂 待测溶液（mL） 0 1.0 1.0 空白 还原糖待测液 总糖待测液
蒸馏水（mL）
DNS（mL）
1.0
2.0
0
2.0
0
2.0
沸水加热5 min，取出却至室温。
蒸馏水（mL） 5.0 5.0 5.0
A540 nm
六、结果计算
按照下列公式计算红薯还原糖的百分含量。
(还原糖)=
C×பைடு நூலகம்V
m
× 稀释倍数× 100%
：还原糖的质量分数（%） C：还原糖的质量浓度（mg/mL）
实验二
还原糖和总糖的测定 （3,5-二硝基水杨酸法）
一、实验目的
掌握还原糖和总糖的测定原理，学
习用3,5-二硝基水杨酸（DNS）测定还原
糖的方法。
二、实验原理
单糖和部分寡糖含有醛基或酮基，具 有还原性，属于还原糖；多糖和蔗糖属于 非还原性糖。
多糖能被酸水解为单糖，通过测定水
综合实验二大豆种子萌发后糖的分离提取及测定
2
2
2
2
2
2
沸水浴中准确煮沸 5min，取出，冷却至室温
蒸馏水∕ml
9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0
葡萄糖含量∕mg
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
A540nm
B.蒽酮比色法:取干净试管 6 支，依次加入葡萄糖标准液（1mg/ml）
0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml 和 80%乙醇 1.0、0.8、0.6、0.4、
馏水放 1.5ml 小管。 （4）0.1% 酚酞指示剂。 （5）3,5-二硝基水杨酸（DNS）：称取 0.32g DNS 溶于少量热蒸馏
水中(45 度)，不停的搅拌溶解很慢,溶解后移入 50ml 容量 瓶中，加入 2mol/L 氢氧化钠溶液 16.25ml，再加入 2.25ml 丙三醇，摇匀，冷却后定容至 50ml,移入棕色瓶放冰箱待用。 （6） 80%乙醇
0
蒽酮试剂∕ml
5
5
5
5
5
5
沸水浴中准确煮沸 10min，冷却至室温放置 10min
葡萄糖含量∕mg 0
A625nm
④样品多糖的水解及提取：准确称萌发前后的大豆种子各 0.1g， 在研钵中磨成匀浆，转入置于烧杯中，加入 100ml 蒸馏水，9 0 ℃ 水浸提，浓缩为 10ml，转入离心管中加入 3 倍体积的无水乙醇沉 淀，离心( 5000 r/min，15min)得沉淀物，sevag 法去蛋白(氯仿: 正丁醇 5:1，即加入 5ml 氯仿 1ml 正丁醇洗沉淀去除蛋白)，用丙 酮 1ml、无水乙醇 1ml、乙醚 1ml 各洗两次，真快干燥得粗多糖固 体。 DNA 法多糖的测定：精密称取 1mg 粗多糖固体样品加入 10ml 80% 乙醇充分溶解，按照下表取 0.2 到 1ml 于试管中（空白中用 1ml80% 乙醇代替），加入 DNS 试剂 2ml，摇匀，于沸水浴中加热 5min，取 出后立即浸入冷水冷却至室温定容至 10ml，摇匀，然后在 540nm 波长处比色 。
总糖和还原糖的测定实验报告
总糖和还原糖的测定实验报告一、实验目的本实验旨在通过测定总糖和还原糖的含量，了解不同食品中糖分的含量及其对人体健康的影响。
二、实验原理总糖是指食品中所有可溶性糖类的总和，包括单糖、双糖和多糖。
还原糖是指具有还原性的单糖和部分双糖。
测定总糖和还原糖的方法主要有蒸发法、显色法、高效液相色谱法等，本实验采用显色法测定。
三、实验步骤1.样品制备：将待测样品粉碎并过筛，取2g样品加入100ml锥形瓶中，加入40ml去离子水，振荡混合均匀。
2.制备还原剂：称取0.5g氢氧化钠加入50ml去离子水中，加温搅拌至完全溶解。
3.蒸发：将步骤1中制备好的样品放入沸水浴中加温蒸发至干固。
4.水解：将步骤3中得到的干固样品加入10ml 0.5mol/L盐酸中，加温水解30min。
5.冷却：将步骤4中的样品冷却至室温，加入50ml去离子水稀释。
6.显色：取10ml样品溶液加入试管中，加入2ml酚酞指示剂溶液和2ml还原剂溶液，振荡混合均匀后静置10min。
7.测定：用1mol/L氢氧化钠滴定至颜色变为淡粉色，记录滴定体积V1。
同时进行空白试验并记录滴定体积V0。
8.计算：总糖含量=（V1-V0）×0.01×1000/2g（mg/g），还原糖含量=（V1-V0）×0.01×1000/2g（mg/g）。
四、实验结果本次实验测得样品A的总糖含量为24.5mg/g，还原糖含量为8.7mg/g；样品B的总糖含量为18.3mg/g，还原糖含量为6.9mg/g；样品C的总糖含量为31.7mg/g，还原糖含量为12.4mg/g。
五、实验分析通过本次实验可以发现不同食品中的总糖和还原糖含量存在较大差异。
其中，样品C的总糖和还原糖含量均较高，而样品B的含量最低。
这提示我们在饮食中应该注意控制糖分的摄入，避免过多摄入对身体健康造成影响。
六、实验感想本次实验通过测定总糖和还原糖含量，让我对不同食品中糖分的含量有了更深入的了解。
实验二总糖和还原糖的测定
六、改进实验建议
▪ 附：仪器和试剂
▪ 主要仪器：分光光度计，水浴锅，容量瓶，刻度试管， 移液管等。
▪ 3,5-二硝基水杨酸试剂：
▪ 甲液：溶解6.9g结晶酚于15.2ml 10%氢氧化钠溶液中， 并用水稀释至69ml，在此溶液中加6.9g亚硫酸氢钠。
▪ 乙液：称取255g酒石酸钾钠加到300ml 10%氢氧化钠溶 液中，再加入880ml 1% 3,5-二硝基水杨酸溶液。
▪
将甲乙二溶液混合即得黄色试剂，贮于棕色瓶中备用。
在室温放置7-10天后使用。
▪ 6 mol•L-1 盐酸
▪ 10%氢氧化钠溶液
▪ 酚酞指示剂
▪ 碘～碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏 水中。
▪ （2）样品中总糖的水解提取：
▪ 准确称取10g新鲜材料（或1g材料干样粉末）， 放在锥形瓶中，加入10ml 6 mol•L-1 盐酸，15ml 水，在沸水浴中加热30min，取出一、二滴置于 白瓷板上，加1滴碘～碘化钾溶液检查水解是否完 全。如已水解完全，则不呈现蓝色。冷却后加入1 滴酚酞指示剂，以10%氢氧化钠溶液中和至溶液 呈微红色，过滤并定容到100ml。再精确吸取上 述溶液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混 匀备用。
=
积（ml）×稀释倍数
测定用提取液体积（ml）× 样品重量（g）
样品水解后还原糖毫克数×提取液总体积（ml）×稀释倍数
总糖（mg•g-1）=源自测定用提取液体积（ml）×样品重量（g）
五、讨论分析
▪ 1、在被测样品中，还原糖可能是些什么糖？总糖 包括哪些？
▪ 2、用来测定总糖的样品，为什么要加盐酸水解？ 而在其测定前，又为何要用NaOH中和？
总糖和还原糖的测定实验
总糖和还原糖的测定实验一、实验目的1.掌握还原糖和总糖的测定原理。
2.学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验内容与原理用3，5－二硝基水杨酸比色法测定总糖和还原糖的含量。
在碱性条件下，黄色的3，5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定的浓度范围内，还原糖的含量与棕红色物质颜色的深浅成正比，利用分光光度计，在540nm波长下测定溶液的吸光度，查对标准曲线并计算，即可算出样品中还原糖的含量。
三、实验主要仪器设备及材料1. 3，5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000mL容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325mL，再加入45g 丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000mL。
2. 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100mL，即含葡萄糖为1.0mg/mL。
3. 6mol/L HCl：取250mL浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500m L。
4.碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100mL蒸馏水中。
5. 6mol/L NaOH：称取120g NaOH溶于500mL蒸馏水中。
6. 0.1% 酚酞指示剂。
7.藕粉，淀粉。
8.试管1.5×15cm（×13)，3.0×20cm（×1）；移液管0.2mL（×2），0.5mL（×2），1mL（×5），10mL（×1）；水浴锅、电炉、分光光度计。
四、实验步骤1.葡萄糖标准曲线制作取6支1. 5 cmm×1.5cm试管，按下表加入1.0mg/mL葡萄糖标准液和蒸馏水。
加完试剂后，于沸水浴中加热5min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0mL，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。
以葡萄糖含量（mg/mL）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
可编辑ppt
3
▪ 本实验是利用3，5～二硝基 水杨酸溶液（DNS法）与还 原糖溶液共热后被还原成棕 红色氨基化合物，在一定范 围内还原糖的量和棕红色物 质深浅的程度成一定比例关 系，可用于比色测定。操作 简便，快速，杂质干扰较少。
▪ 3、标准葡萄糖浓度梯度和样品含糖量的测定为什 么应该同步进行？比色时设0号管有什么意义？
六、改进实验建议
可编辑ppt
11
▪ 附：仪器和试剂
▪ 主要仪器：分光光度计，水浴锅，容量瓶，刻度试管， 移液管等。
▪ 3,5-二硝基水杨酸试剂：
▪ 甲液：溶解6.9g结晶酚于15.2ml 10%氢氧化钠溶液中， 并用水稀释至69ml，在此溶液中加6.9g亚硫酸氢钠。
▪ 乙液：称取255g酒石酸钾钠加到300ml 10%氢氧化钠溶 液中，再加入880ml 1% 3,5-二硝基水杨酸溶液。
▪
将甲乙二溶液混合即得黄色试剂，贮于棕色瓶中备用。
在室温放置7-10天后使用。
▪ 6 mol•L-1 盐酸
▪ 10%氢氧化钠溶液
▪ 酚酞指示剂
▪ 碘～碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏 水中。
=
积（ml）×稀释倍数
测定用提取液体积（ml）× 样品重量（g）
样品水解后还原糖毫克数×提取液总体积（ml）×稀释倍数
总糖（mg•g-1）=
测定用提取液体积（ml）×样品重量（g）
可编辑ppt
10
五、讨论分析
▪ 1、在被测样品中，还原糖可能是些什么糖？总糖 包括哪些？
▪ 2、用来测定总糖的样品，为什么要加盐酸水解？ 而在其测定前，又为何要用NaOH中和？
实验二 总糖和还原糖的测定
(3，5～二硝基水杨酸法)
《食品生物化学实验》课程
可编辑ppt
1
一、实验目的
▪ 掌握3，5～二硝基水杨酸法测定待测 样品的总糖和还原糖含量的基本原理， 学会处理721型或722型分光光度计出 现的问题
可编辑ppt
2
二、实验原理
▪ 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是 指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖， 双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是 还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
可编辑ppt
7
▪ （2）样品中总糖的水解提取：
▪ 准确称取10g新鲜材料（或1g材料干样粉末）， 放在锥形瓶中，加入10ml 6 mol•L-1 盐酸，15ml 水，在沸水浴中加热30min，取出一、二滴置于 白瓷板上，加1滴碘～碘化钾溶液检查水解是否完 全。如已水解完全，则不呈现蓝色。冷却后加入1 滴酚酞指示剂，以10%氢氧化钠溶液中和至溶液 呈微红色，过滤并定容到100ml。再精确吸取上 述溶液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混 匀备用。
可编辑ppt
4
三、实验步骤
1、葡萄糖标准曲线的制定 葡萄糖标准液的配制：准确称取100mg分 析纯的无水葡萄糖（预先在105℃干燥至恒 重），用少量蒸馏水溶解后，定量转移到 100ml容量瓶中，再定容到刻度，摇匀。浓 度为1mg/ml。
可编辑ppt
5
取7支25×250mm的试管，分别按下表加入试剂：
可编辑ppt
8
（3）样品中糖含量的测定： 取7支25×250mm试管分别按下表加入试剂：
管号
空白
还原糖
总糖
Hale Waihona Puke 0 123 1 23样品溶液（ml） 0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
蒸馏水（ml） 2 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
3,5二硝基水杨酸 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 (ml)
将各管溶液混合均匀，沸水浴加热5min，取出后立
即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5ml蒸馏水，
摇匀。于520nm波长处测定OD值。以葡萄糖毫克数
为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。
可编辑ppt
6
▪2、样品中总糖和还原糖含量的测定
▪ （1）样品中还原糖的提取： ▪ 准确称取10g新鲜材料（或2g材料干样粉 末），放在100ml烧杯中，先以少量水调成糊 状，然后加50～60ml蒸馏水，于50℃恒温水 浴中保温20min，过滤，将滤液收集在100ml 容量瓶中，再定容至100ml。
可编辑ppt
12
OD
加完试剂后，与制作标准曲线时
相同的操作测定样品糖含量。
可编辑ppt
9
四、实验结果
在Excel绘制葡萄糖标准曲线，并求出标准线性方程。 以表格形式列出实验数据，取样品的OD520平均值用标 准线性方程求出相应的糖量，并用下式计算出待测样品 中还原糖与总糖的含量。
还原糖毫克数×提取液总体
还原糖 （mg•g-1）
管号
0
1
2
3
4
5
6
葡萄糖标准液（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
相当于葡萄糖量(mg) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
蒸馏水（ml）
2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8
3,5二硝基水杨酸(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5