淀粉、总糖、还原糖的测定方法
总糖和还原糖的测定
三、实验器材
1、材料：山芋粉 2、仪器：电子分析天平、水浴锅、V-1100 可见分光光度计、移液器 3、其他：试管、容量瓶、三角烧瓶、量筒、 吸管（移液管）、洗耳球、玻棒、洗瓶、 漏斗、离心管、六凹反应盘、pH试纸（1 ～14）
四、实验试剂
1、标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml） 2、DNS试剂 3、6mol/L HCl 4、6mol/L NaOH 5、I2-KI溶液
六、计算
C1V1 ω(还原糖)=——×100% m1
C2V2
ω(总糖)=——×0.9×100% m2
附：相关仪器使用 1、移液管的使用
2、移液器的使用
3、离心机的使用 注意配平，对称放 4、V-1100可见分光光度计的使用 比色皿
V-1100可见分光光度计
开机预热30min 测吸光度 选择波长（540nm） MODE键切换到T，将黑体放入光路中
2、样品中总糖的水解、提取
准确称取0.2g山芋粉置于100ml三角烧瓶中
加3ml蒸馏水，调成糊状
取1～2滴于六凹 反应盘中，加1滴 I2-KI溶液，如果 完全不显蓝色， 即可进行下面的 操作。
再加12ml蒸馏水，5ml 6mol/L HCl
沸水浴，30min (不时搅拌) 冷却至室温 用6mol/L NaOH调pH7.0（ pH试纸） 蒸馏水定容至100ml,混匀
合上盖，0键校零MODE键切换到A，参比 Nhomakorabea放入到光路中
合上盖，100键调零
将待测液依次放入到光路中，即可得出 待测液的吸光度。
比色皿的使用
管号
试剂
标准葡萄糖溶液 /ml
0
1
2
3
4
5
6
7
实验四 还原糖和总糖的测定
·在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正 比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度 值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖 的含量。
· 由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子 水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
7
0.5
0.5
1.5
1.5
8
9
1.5
1 1
1.5
1.5
10
1
1
Байду номын сангаас
1.5
五、结果与计算：
计算出7、8号管光密度值平均值和9、10管光密度值的的平
均值，在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数，按下式 计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。
六、思考题
3,5-二硝基水杨酸比色法是如何对总糖
进行测定的?
实验四 还原糖和总糖的测定
——3,5-二硝基水杨酸比色法
一、目的
掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测 定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是 还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽
糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度
定容至100mL 过 滤 取滤液10mL
定容至100mL
（3）显色和比色 取4支20mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入 待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。 加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
表2 样品还原糖测定
管 号 还原糖 待测液 （mL） 总糖待 测液 （mL） 蒸馏水 （mL） DNS （mL） 光密度值 （OD540nm） 查曲线 葡萄糖量 （mg）
食品中的还原糖、非还原糖、总糖测定
三、淀粉测定
淀粉的测定方法有多种， 淀粉的测定方法有多种，部是根据淀粉的理化 性质而建立的。常用的方法有： 性质而建立的。常用的方法有： 酸水解法 酶水解法 旋光法
淀粉测定
淀粉→还原糖 （测定方法如上） （酶水解或酸水解） 还原糖折算成淀粉含量
酸水解法
原理 样品经乙醚除去脂肪， 样品经乙醚除去脂肪，乙醇除去可溶 性糖类后，用盐酸水解淀粉为葡萄糖， 性糖类后，用盐酸水解淀粉为葡萄糖， 按还原糖测定方法测定还原糖含量， 按还原糖测定方法测定还原糖含量，再 折算为淀粉含量。 折算为淀粉含量。
食品中可溶性糖类通常是指葡萄糖、果 食品中可溶性糖类通常是指葡萄糖、 糖等游离单糖及蔗糖等低聚糖。 糖等游离单糖及蔗糖等低聚糖。一般须 将样品磨碎、浸渍成溶液（提取液）， 将样品磨碎、浸渍成溶液（提取液）， 经过滤后再测定
还原糖的测定——高锰酸钾法（费林试 液法） 还原糖+Cu2+→Cu2O↓ Cu2O +Fe3++H+→Cu2++ Fe2+ Fe2++KMnO4 → Fe3++Mn2+ 其过程：提取液的制备→氧化→过滤→ 溶解→滴定→空白试验→计算。 （计算得 Cu2O量查表→ 还原糖量）
高锰酸钾滴定法
原理 将样液与一定量过量的碱性酒石 酸铜溶液反应，还原糖将二价铜还原为 氧化亚铜，经过滤，得到氧化亚铜沉淀， 加入过量的酸性硫酸铁溶液将其氧化溶 解，而三价铁盐被定量地还原为亚铁盐， 用高锰酸钾标准溶液滴定所生成的亚铁 盐，根据高锰酸钾溶液消耗量可计算出 氧化亚铜的量，再从检索表中查出氧化 亚铜量相当的还原糖量，即可计算出样 品中还原糖含量。
试剂
碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜 （CuSO4·5H2O）及0.05 g次甲基蓝，溶于 水中并稀释至1000mL。 碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及 75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰 化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL，贮 存于橡皮塞玻璃瓶中。
食品中总糖的测定国标的方法
食品中总糖的测定国标的方法一、糕点、糖果中还原糖的测定1、直接滴定法1）原理：样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定经标定的碱性酒石酸铜溶液，还原糖将二价铜还原为氧化亚铜。
以亚甲基蓝为指示剂，在终点稍过量的还原糖将蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝，根据试样所消耗的体积计算还原糖的含量。
直接滴定法已经过多次改进，只要严格遵守实验条件，分析结果的准确度和重现性是能够满足定量分析的要求。
2）试剂①费林氏剂甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g四甲基蓝，溶于水中并稀释至1000ml。
②费林氏剂乙液：称取50g酒石酸钾钠及75gNaOH，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
③乙酸锌溶液：称取乙酸锌结晶21.9g，加3ml冰醋酸，加水溶解至100ml。
④106g/l亚铁氰化钾溶液。
⑤葡萄糖标准溶液：准确称取1.0000g经过96±2℃干燥2h的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mlHCl,并以水稀释至1000ml。
此溶液每1ml相当于1.0mg葡萄糖。
3）操作方法①样品处理：准确称取样品（粉碎后的）2.5~5.0g置于250ml容量瓶中，加水50ml，摇匀后慢慢加入5ml乙酸锌溶液，混匀后再慢慢加入5ml亚铁氰化钾溶液，振摇，加水定容并摇匀后静置30min，用干滤纸过滤，弃去初始滤液，过滤液备用。
②标定碱性酒石酸铜溶液：吸取 5.00ml碱性酒石酸铜甲液及5.00ml碱性酒石酸铜乙液，置于250ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠3粒，从滴定管加约9ml标准葡萄糖液，使其在2min内加热至沸。
趁热以0.5滴/s的速度继续滴加糖液，直至溶液颜色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖液的体积。
平行操作3次，得m平均消耗葡萄糖液的体积。
计算每10ml(甲、乙各5ml)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg），即m＝v×c式中m——10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）v——标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积c——葡萄糖标准溶液的浓度（mg/ml）③样品溶液的预测定：吸取费林氏甲、乙液各5ml，置于150ml 三角瓶中，加水10ml、玻璃珠2粒，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中加样液，趁沸以0.5滴/s的速度继续滴定至蓝色刚好褪去为终点，记录消耗样液的体积。
总糖和还原糖的测定
待测样品的OD540平均值在标准曲线上 查出相应的糖含量。
朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律
朗伯－比尔定律是比色分析的基本原理， 这个定律是有色溶液对单色光的吸收程度与 溶液及液层厚度间的定量关系。此定律是由 朗伯定律和比尔定律归纳而得。
A或D=㏒I0/I
A或D＝光吸收或光密度
I0 ＝入射光强度 I ＝透射光强度
职责：实验台面物品整理归位，水池边 的蓝色垃圾桶清理干净，教室里所用仪 器电源插销拔掉，关窗，最后把垃圾袋 丢到厕所外的垃圾桶里。
重要通知
下周实验－－维生素C的定量测定 为开放、设计型实验，撰写小论文，
实验主题由各组自己拟定，可以以温度 为主题，也可以以浸泡时间为主题，等 等……请各组提前设计实验主题，自己 准备特需实验水果、蔬菜（颜色浅）， 实验室提供卷心菜和桔子。
样品的透射比或吸光度值。样品读数三遍，取平均值。 7).使用分光光度计时带测定样品、洗瓶、废液杯、笔和本。
移液器的使用手法，两档位
吸液
放液
八、思考题
1.比色时为什么要设计空白管？
2.比较费林试剂比色法与3,5-二硝基水杨酸比色法 测定可溶性淀粉中还原糖和第5、6组同学
酸水解法使没有还原性的双糖与多糖，彻 底水解成具有还原性的单糖，再进行测定，这 样就可以求样品中总糖的含量。
测定方法－比色法
OH NO 2
HOOC
+ 还原 糖
NO 2 (DNS)
OH NH2
HOOC
NO 2
（3－氨基 －5－硝基 水 杨酸 ） ?
黄色
棕红色
首先制作葡萄糖标准曲线，以标准葡萄 糖样品进行测定，以葡萄糖含量（mg）为 横坐标，OD540读数为纵坐标，绘制标准曲 线。
还原糖的测定方法还原糖和总糖的测定
还原糖的测定方法还原糖和总糖的测定还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关1系，利用分光光度计，在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1( 实验材料小麦面粉;精密pH 试纸。
2( 主要仪器(1)具塞玻璃刻度试管:20mL×11(2)大离心管:50mL×2(3)烧杯:100mL×1(4)三角瓶:100mL×1(5)容量瓶:100mL×3(6)刻度吸管:1mL×1;2mL×2;10mL×1(7)恒温水浴锅(8)沸水浴(9)离心机(10)扭力天平(11)分光光度计3( 试剂(1)1mg/mL 葡萄糖标准液2准确称取80?烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4?冰箱中保存备用。
(2)3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定（3,5—二硝基水杨酸法）实验报告前言糖在我们日常生活中随处可见，我们吃的米饭、水果、零食中或多或少都含有一些糖类。
同时，糖也是我们维持机体运动所必不可少的物质，没有了它，就没有了能量的来源。
我们这次便走进实验室探索糖类的奥秘。
本次实验我们将用3,5—二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的含糖量。
本次实验中，我们除了要掌握还原糖和总糖的测定基本原理还要学习比色法测定还原糖的操作方法以及分光度法测定的原理和方法。
首先，让我们一起来了解一下它们的测定方法吧。
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法3、学习分光光度法测定的原理和方法二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
实验2 还原糖及总糖的测定
基础生物化学实验-实验2 还原糖及总糖的测定实验2 还原糖及总糖的测定（3、5——二硝水杨酸比色法）目的和要求：掌握3、5-二硝基水杨酸比色法测定糖量的原理及方法。
熟悉722分光光度计基本工作原理和操作方法。
原理：各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。
在碱性条件下，还原糖与3、5—二硝基水杨酸共热，3、5—二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其它物质。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，可在722型分光光度计540nm波长测定棕红色物质的消光值。
查标准曲线计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。
多糖水解时，在单糖残基上加了一分子水，因而在计算中须扣除已加入的水量，测得所得到的总糖量乘以0.9即为实际的总糖量。
该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。
试剂和材料：试剂（1）1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100ml分析纯葡萄糖（预先在105℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml容量瓶中，以蒸馏水定容到刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
（2）3、5—二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）；甲液——溶解6.9g结晶酚（苯酚）于15.2ml 10%NaOH中，并稀释至69ml，在此溶液中加入6.9g 亚硫酸氢钠。
乙液——称取22.5g酒石酸钾钠，加到300ml 10% NaOH中，再加入880ml 1%的3、5—二硝基水杨酸溶液。
将甲液和乙液相混合即得黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，放置7—10天使用。
（3）碘—碘化钾溶液（碘试剂）：称取5g碘和10g碘化钾，研匀后溶于100ml蒸馏水中。
（4）酚酞指示剂：称取0.1g酚酞溶于70%乙醇中。
（5）6 mol·L-1 HCl（6）6 mol·L-1NaOH（7）面粉2、器材大试管、大离心管、量筒、三角瓶、容量瓶、刻度吸管、玻璃漏斗、滤纸、白瓷板、电热恒温水浴槽、低速台式离心机、天平、722型分光光度计。
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淀粉、总糖、还原糖的测定方法
淀粉的测定方法---蒽酮法
一( 原理
用乙醇将烟叶中可溶性糖浸出并分离出去，而后烟叶中淀粉用适量Hcl，因淀粉在稀酸作用下被水解成葡萄糖，再按葡萄糖测定进行。
根据葡萄糖的含量从而算出淀粉含量。
二( 仪器设备
三角瓶50ml 容量瓶100ml 移液管10ml、1ml 漏斗圆底烧瓶1000ml 离心管和离心机水浴锅温度计烘箱滤纸天平分光光度计
三( 试剂
盐酸乙醇氢氧化钠蒽酮
四、试剂的配制和标准曲线的绘制
1. 葡萄糖标准液的配制称取无水葡萄糖(AR级)0.1g溶于蒸馏水中，定容至100毫升，用前取此液10毫升，再用水稀释至100毫升。
2. 标准曲线的绘制取6支干洁刻度试管，依次移入葡萄糖标准液
(100μg/ml)0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00ml后，再从1至6试管依次补加1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0ml蒸馏水后，再分别加入蒽酮试剂5毫升，于沸水中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录OD值，以吸光值为纵坐标，糖含量为横坐标，绘出标准曲线 3. 80%乙醇的配制取400毫升乙醇加水定容至
500ml
4. 1当量的盐酸配制 43毫升浓盐酸加水定容至500ml
5. 10%氢氧化钠配制 10g氢氧化钠溶于100ml水中
6. 蒽酮试剂:1克蒽酮溶于72%的HSO1000ml(98%的HSO+240的蒸馏水)，棕色瓶冰箱2424
保存2,3周。
五实验步骤
1. 分离出水溶性糖
0.1g样置于离心管中加入8毫升80%乙醇 80?水浴浸
提30分钟冷却后离心(3600转)5分钟残渣再加入
8ml80%乙醇。
重复三次
2. 水解
残渣用1当量的盐酸15ml洗入50ml三角瓶，摇匀后烘箱105度加热3.5小时，冷却后加10%氢氧化钠6ml中和，过滤，蒸馏水定容100ml。
3. 测定
取滤液1ml(空白用1ml蒸馏水代替)，加入蒽酮试剂5ml，摇匀，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色
六结果的计算与表述
C=AN*0.9/W
C—样品淀粉含量(μg/g) W—样品重量(g)
A—标准曲线查得的糖量(μg) N—样品提取液占样品反应液的倍数
蒽酮比色法测总糖:
实验步骤:
1、可溶性糖的提取:准确称取烟叶样品0.100克，置于离心管中，加入8毫升80%乙醇，于80?水浴浸提30分钟，冷却后于4000转离心5分钟，收集上清液，残渣再加入8毫升80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100毫升容量瓶中并定容至100毫升。
2、总糖的测定:取提取液1毫升于试管中(空白中用1毫升蒸馏水代替)，加入蒽酮试剂5毫升，摇匀，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色。
蒽酮试剂:1克蒽酮溶于72%的HSO1000ml(98%的HSO+2402424的蒸馏水)，棕色瓶冰箱保存2~3周。
3、标准曲线的绘制:取干洁试管6支，依次加入葡萄糖标准液(100μg/ml)0、0.2、0.
4、0.6、0.8、1.0ml和蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，再分别加入蒽酮试剂5毫升，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录OD值，绘出标准曲线。
4、计算:C=AN/W
C—样品总糖含量(μg/g)
W—样品重量(g)
A—标准曲线查得的糖量(μg)
N—样品提取液占样品反应液的倍数
总糖、还原糖、淀粉测定所需试剂
无水葡萄糖(AR级) 蒽酮乙醇浓盐酸氢氧化钠
3，5—二硝基水杨酸(DNS) 酒石酸钠结晶酚亚硫酸钠
滤纸，PH试纸，小标签纸
3，5—二硝基水杨酸(DNS)比色法测还原糖仪器与用具:
25ml刻度试管;离心管;100ml玻璃烧杯;100ml三角瓶;刻度吸管1ml、2ml、
10ml;沸水浴;离心机;电子天平;分光光度计。
试剂:
1. 1mg/ml葡萄糖标准液:准确称取100mg分析纯葡萄糖(预先在80?烘至恒
重)，在小烧杯中用蒸馏水溶解后定容至100ml，摇匀，冰箱中保存备用。
2. 3,5,二硝基水杨酸(DNS): 6.3g 3,5,二硝基水杨酸和262ml
2mol/lNaOH，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解。
冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶
备用。
实验步骤:
1(可溶性糖的提取:准确称取烟叶样品0.100g，置于离心管中，加入8ml80%乙醇，于80?水浴浸提30min，冷却后于4000转离心5min收集上清液，残渣再加入8ml80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100ml容量瓶中并定容至100ml。
2(还原糖的测定:取提取液1ml于试管中(空白中用1ml蒸馏水代替)，加入DNS 试剂1.5ml，摇匀，于沸水浴中加热5min，取出后立即浸入冷水冷却至室温定容至25ml，摇匀，然后在540nm波长处比色。
3(标准曲线的绘制:取干洁25ml试管6支，依次加入葡萄糖标准液
(1mg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml和蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，再分别加入DNS试剂1.5ml，于沸水浴中加热5min，取出后立即浸入冷水冷却至室温，再用蒸馏水定容至25ml刻度处，摇匀，然后在540nm波长处比色。
4(计算:还原糖(,)=〔(C×V/a)/(W×1000)〕×100
C—标准曲线方程求得的还原糖含量mg数;
V,提取液的体积(ml);
W—样品重量(g);。