实验二 总糖和还原糖的测定

本实验是利用3， ～ 本实验是利用 ，5～二硝基 水杨酸溶液（ 水杨酸溶液（DNS法）与还 法 原糖溶液共热后被还原成棕 红色氨基化合物， 红色氨基化合物，在一定范 围内还原糖的量和棕红色物 质深浅的程度成一定比例关 可用于比色测定。 系，可用于比色测定。操作 简便，快速，杂质干扰较少。 简便，快速，杂质干扰较少。
三、实验步骤
1、葡萄糖标准曲线的制定 、 葡萄糖标准液的配制：准确称取 葡萄糖标准液的配制：准确称取100mg分 分 析纯的无水葡萄糖（预先在 析纯的无水葡萄糖（预先在105℃干燥至恒 ℃ 重），用少量蒸馏水溶解后，定量转移到 ），用少量蒸馏水溶解后， 用少量蒸馏水溶解后 100ml容量瓶中，再定容到刻度，摇匀。浓 容量瓶中，再定容到刻度，摇匀。 容量瓶中 度为1mg/ml。 。 度为
将各管溶液混合均匀，沸水浴加热 将各管溶液混合均匀，沸水浴加热5min，取出后立 ， 即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5ml蒸馏水， 蒸馏水， 即用冷水冷却到室温，再向每管加入 蒸馏水 摇匀。 波长处测定OD值 摇匀。于520nm波长处测定 值。以葡萄糖毫克数 波长处测定 为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。 为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品中总糖和还原糖含量的测定 、 还原糖的提取 （1）样品中还原糖的提取： ）样品中还原糖的提取： 准确称取10g新鲜材料（或2g材料干样粉 准确称取 新鲜材料（ 材料干样粉 新鲜材料 末），放在 烧杯中， ），放在100ml烧杯中，先以少量水调成糊 放在 烧杯中 蒸馏水， 状，然后加50～60ml蒸馏水，于50℃恒温水 然后加 ～ 蒸馏水 ℃ 浴中保温20min，过滤，将滤液收集在100ml ，过滤，将滤液收集在 浴中保温 容量瓶中，再定容至 容量瓶中，再定容至100ml。 。
加完试剂后， 加完试剂后，与制作标准曲线时 相同的操作测定样品糖含量。 相同的操作测定样品糖含量。
四、实验结果
在Excel绘制葡萄糖标准曲线，并求出标准线性方程。 Excel绘制葡萄糖标准曲线，并求出标准线性方程。 绘制葡萄糖标准曲线 以表格形式列出实验数据，取样品的OD 以表格形式列出实验数据，取样品的OD520平均值用标 准线性方程求出相应的糖量， 准线性方程求出相应的糖量，并用下式计算出待测样品 中还原糖与总糖的含量。 中还原糖与总糖的含量。
的试管， 取7支25×250mm的试管，分别按下表加入试剂： 支 × 的试管 分别按下表加入试剂：
管号 葡萄糖标准液（ ） 葡萄糖标准液（ml） 相当于葡萄糖量(mg) 相当于葡萄糖量 蒸馏水（ ） 蒸馏水（ml） 3,5二硝基水杨酸 二硝基水杨酸(ml) 二硝基水杨酸 0 0 0 2.0 1.5 1 0.2 0.2 1.8 1.5 2 0.4 0.4 1.6 1.5 3 0.6 0.6 1.4 1.5 4 0.8 0.8 1.2 1.5 5 1.0 1.0 1.0 1.5 6 1.2 1.2 0.8 1.5
二、实验原理
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是 指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖， 指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖， 双糖和多糖不一定是还原糖， 双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是 还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。 还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。 利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双 利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、 糖和多糖分别提取出来， 糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多 糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行 测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（ 测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还 原糖以葡萄糖含量计）。 原糖以葡萄糖含量计）。

还原糖毫克数×提取液总体积（ ） 还原糖毫克数×提取液总体积（ml）×稀释倍数 还原糖（ 还原糖（mg•g-1）= 测定用提取液体积（ ） 样品重量（ ） 测定用提取液体积（ml）×样品重量（g）
样品水解后还原糖毫克数×提取液总体积（ ） 样品水解后还原糖毫克数×提取液总体积（ml）×稀释倍数 总糖（ 总糖（mg•g-1）= 测定用提取液体积（ ） 样品重量（ ） 测定用提取液体积（ml）×样品重量（g）
六、改进实验建议
附：仪器和试剂
主要仪器：分光光度计，水浴锅，容量瓶，刻度试管， 主要仪器：分光光度计，水浴锅，容量瓶，刻度试管， 移液管等。 移液管等。 3,5-二硝基水杨酸试剂： 二硝基水杨酸试剂： 二硝基水杨酸试剂 甲液：溶解6.9g结晶酚于 结晶酚于15.2ml 10%氢氧化钠溶液中， 氢氧化钠溶液中， 甲液：溶解 结晶酚于 氢氧化钠溶液中 并用水稀释至69ml，在此溶液中加 亚硫酸氢钠。 并用水稀释至 ，在此溶液中加6.9g亚硫酸氢钠。 亚硫酸氢钠 乙液：称取255g酒石酸钾钠加到 酒石酸钾钠加到300ml 10%氢氧化钠溶 乙液：称取 酒石酸钾钠加到 氢氧化钠溶 液中，再加入880ml 1% 3,5-二硝基水杨酸溶液。 二硝基水杨酸溶液。 液中，再加入 二硝基水杨酸溶液 将甲乙二溶液混合即得黄色试剂，贮于棕色瓶中备用。 将甲乙二溶液混合即得黄色试剂，贮于棕色瓶中备用。 在室温放置7-10天后使用。 在室温放置 天后使用。 天后使用 6 mol•L-1 盐酸 10%氢氧化钠溶液 氢氧化钠溶液 酚酞指示剂 碘化钾溶液：称取5g碘 碘化钾溶于100ml蒸馏 碘～碘化钾溶液：称取 碘，10g碘化钾溶于 碘化钾溶于 蒸馏 水中。 水中。
（3）样品中糖含量的测定： ）样品中糖含量的测定： 试管分别按下表加入试剂： 取7支25×250mm试管分别按下表加入试剂： 支 × 试管分别按下表加入试剂
管号 样品溶液（ ） 样品溶液（ml） 蒸馏水（ml） 蒸馏水（ ） 3,5二硝基水杨酸 二硝基水杨酸 (ml) OD 空白 0 0 2 1.5 1 1.0 1.0 1.5 还原糖 2 1.0 1.0 1.5 3 1.0 1.0 1.5 总糖 1 1.0 1.0 1.5 2 1.0 1.0 1.5 3 1.0 1.0 1.5
的水解提取： （2）样品中总糖的水解提取： ） 准确称取10g新鲜材料（或1g材料干样粉末）， 新鲜材料（ 材料干样粉末）， 准确称取 新鲜材料 材料干样粉末 放在锥形瓶中，加入10ml 6 mol•L-1 盐酸，15ml 盐酸， 放在锥形瓶中，加入 在沸水浴中加热30min，取出一、二滴置于 水，在沸水浴中加热 ，取出一、 白瓷板上， 滴碘～ 白瓷板上，加1滴碘～碘化钾溶液检查水解是否完 滴碘 如已水解完全，则不呈现蓝色。冷却后加入1 全。如已水解完全，则不呈现蓝色。冷却后加入 滴酚酞指示剂，以10%氢氧化钠溶液中和至溶液 滴酚酞指示剂， 氢氧化钠溶液中和至溶液 呈微红色，过滤并定容到100ml。再精确吸取上 呈微红色，过滤并定容到 。 述溶液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混 容量瓶中， 述溶液 于 容量瓶中 定容至刻度， 匀备用。 匀备用。
五、讨论分析
1、在被测样品中，还原糖可能是些什么糖？总糖 、在被测样品中，还原糖可能是些什么糖？ 包括哪些？ 包括哪些？ 2、用来测定总糖的样品，为什么要加盐酸水解？ 、用来测定总糖的样品，为什么要加盐酸水解？ 而在其测定前，又为何要用NaOH中和？ 中和？ 而在其测定前，又为何要用 中和 3、标准葡萄糖浓度梯度和样品含糖量的测定为什 、 么应该同步进行？比色时设0号管有什么意义 号管有什么意义？ 么应该同步进行？比色时设 号管有什么意义？
实验二 总糖和还原糖的测定
(3， (3，5～二硝基水杨酸法) 二硝基水杨酸法)
《食品生物化学实验》课程 食品生物化学实验》
一、实验目的
掌握3， ～ 掌握 ，5～二硝基水杨酸法测定待测 样品的总糖和还原糖含量的基本原理， 样品的总糖和还原糖含量的基本原理， 学会处理721型或 型分光光度计出 型或722型分光光度计出 学会处理 型或 现的问题