总糖和还原糖的测定(费林试剂热滴定法)
总糖和还原糖的测定实验报告
总糖和还原糖的测定实验报告1. 引言总糖是指在食品和饮料中存在的所有糖类的总量，包括单糖、双糖和多糖。
而还原糖是其中可被还原剂还原为对应醛或酮的糖类的量。
测定总糖和还原糖的含量对食品工业以及食品安全监管有着重要的意义。
本实验旨在探究测定总糖和还原糖的方法，并对不同样品中的总糖和还原糖进行定量分析。
2. 实验步骤2.1 样品准备1.收集不同类型的食品样品，如果酱、蜂蜜、糖果等。
2.将收集到的样品进行标记，记录样品名称和来源。
2.2 总糖测定方法1.取适量的样品，加入适量的去离子水，使样品溶解。
2.将溶解后的样品经过滤，得到无悬浮物的溶液。
3.取一定体积的溶液，加入邻苯二甲酸溶液，制备还原糖试剂。
4.将还原糖试剂与溶液混合，加入含硫酸的试剂，进行硫酸铜法测定。
5.根据产生的蓝色沉淀的量，用标准曲线确定总糖的含量。
2.3 还原糖测定方法1.取适量的样品，加入适量的去离子水，使样品溶解。
2.将溶解后的样品经过滤，得到无悬浮物的溶液。
3.取一定体积的溶液，加入费林试剂，制备还原糖试剂。
4.将还原糖试剂与溶液混合，加热反应一段时间。
5.根据试剂的吸收光谱，用比色法测定还原糖的含量。
3. 结果与讨论3.1 总糖测定结果样品A：果酱样品B：蜂蜜样品C：糖果样品总糖含量（g/100g）样品A 50样品B 70样品C 803.2 还原糖测定结果样品A：果酱样品B：蜂蜜样品C：糖果样品还原糖含量（g/100g）样品A 30样品B 40样品C 50根据测定结果可以看出，不同样品的总糖和还原糖含量存在差异。
糖果样品的总糖和还原糖含量均高于果酱和蜂蜜样品。
这可能是因为糖果中添加了大量的糖分，而果酱和蜂蜜中含有的糖分相对较少。
4. 结论本实验使用了硫酸铜法和比色法测定了不同样品中的总糖和还原糖的含量，并得出了相应的测定结果。
通过此实验，我们可以了解食品样品中总糖和还原糖的测定方法，并获得样品中总糖和还原糖的定量分析结果。
5. 延伸应用1.此方法可以应用于食品行业的质量控制，帮助饮料、甜品等生产企业控制产品中糖分的含量。
总糖和还原糖的测定——斐林氏法
总糖和还原糖测定方法较多，如3，5—二硝基水杨酸法、碱性铜试剂法、蒽酮比色法、斐林氏法等。
这里只介绍斐林氏法。
一、目的学习掌握生产实践中常用的快速定糖方法。
二、原理还原糖在碱性溶液中能将Ag+，Hg+，Cu2+，Fe（CN）3-等金属离子还原，而糖本身则氧化成各种羟酸，利用这一特性可以对还原糖进行定量测定。
本实验采用斐林试剂热滴定法，氧化剂是斐林试剂，它是由甲乙两种溶液组成，甲液中含有硫酸铜、次甲基蓝；乙液中含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾（黄血盐）。
当甲乙两液混合时，硫酸铜和氢氧化钠作用形成氢氧化铜沉淀，由于溶液中存在酒石酸钾钠，它和氢氧化铜形成了可溶性络合物。
酒石酸络铜（Ⅱ）钾钠盐在与还原糖共热时，二价铜离子即被还原成一价的氧化亚铜红色沉淀。
此氧化亚铜与试剂中亚铁氰化钾反应生成可溶性的亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐。
Cu2O + K4Fe(CN)6 + 3 H2O →K2Cu2Fe(CN)6 + 2 KOH + 2 H2O亚铁氰化钾亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐斐林试剂中二价铜的还原力比次甲基蓝强，因此所滴入的标准葡萄糖溶液首先使二价铜还原，只有当二价铜被还原完毕后，才能使次甲基蓝（甲烯蓝）还原为无色，测定中以此作为滴定终点。
在测定时先做一对照管（不加样品），用标准葡萄糖滴定求知一定体积斐林试剂中二价铜和次甲基蓝的量，即测定对照管消耗的标准葡萄糖量（A）。
再做样品管，样品中还原糖消耗斐林试剂中一部分二价铜，剩余的量再用标准葡萄糖来滴定，即样品消耗的标准葡萄糖量（B）。
将（A）减去（B）就可求得样品中还原糖量。
三、器材及试剂：1．器材：①山芋粉②广范试纸pH1～12。
③吸管5毫升（×4），10毫升（×2）④容量瓶100毫升（×3）⑤烧杯150毫升（×1），100毫升（×1）⑥三角烧瓶250毫升（×6）⑦滴定管25毫升（×1）⑧双孔橡皮塞⑨电炉300W（×1）⑩天平。
葡萄酒酿制过程中糖酸和酒精度的检测
葡萄酒酿制过程中还原糖、总酸及酒精度的测定方法一、还原糖的测定在葡萄酒发酵前，测定葡萄的还原糖含量，以确定要添加的糖含量；发酵之后测定酒中的残糖含量。
1、测定方法：裴林试剂热滴定法（1）裴林氏A 、B 液标定预备试验：取裴林氏A 、B 液各5.00mL 于250mL 三角瓶中，加50mL 水，摇匀，在电炉上加热沸，在沸腾状态下用制备好的葡萄糖标准溶液滴定，当溶液的蓝色将消失呈红色时，加2滴甲基蓝指示液，继续滴至蓝色消失，记录消耗的葡萄糖标准溶液的体积(V1ml)。
正式试验：取裴林氏A 、B 液各5.00mL 于250mL 三角瓶中，加50mL 水和比预备试验少1ml 葡萄糖标准溶液，加热至沸，并保持2min ，加2滴次甲基蓝指示液，在沸腾态下于1min 内用葡萄糖标准溶液滴至终点(消耗葡萄糖标准液，记录消耗的葡萄糖标准溶液的总体积。
（2）样品的测定预备试验：裴林试剂A 、B 液各5ml 250ml 三角瓶中 加水50ml 加入7.5ml 试样 在沸腾状态下用5g/l 的葡萄糖标液滴定至 蓝色消失成红色时 加2滴亚甲基兰指示剂 继续滴定至蓝色消失，记录体积。
正式试验：裴林试剂A 、B 液各5ml 250ml 三角瓶中 加水50ml 加入7.5ml 试样＋比预备试验少1ml 的葡标液，在沸腾状态下用5g/l 的葡萄糖标液滴定至 蓝色消失成红色时 加2滴亚甲基兰指示剂 继续滴定至蓝色消失，记录体积。
结果计算：总糖或还原糖含量g/l ＝稀释倍数）（取样体积测定试样消耗的葡标液标定消耗的葡标液葡标液⨯-⨯V V V C 2、试剂的配制及仪器需求（1）斐林试剂配制方法将36.4g CuSO4.5H2O 溶于200mL 水中，用0.5mL 浓硫酸酸化，再用水稀释到500mL 待用；取173g 酒石酸钾钠KNaC4H4O6.4H2O ，71g NaOH 固体溶于400mL 水中，再稀释到500mL ．使用时取等体积两溶液混合。
总糖和还原糖的测定实验报告
总糖和还原糖的测定实验报告一、实验目的本实验旨在通过测定总糖和还原糖的含量，了解不同食品中糖分的含量及其对人体健康的影响。
二、实验原理总糖是指食品中所有可溶性糖类的总和，包括单糖、双糖和多糖。
还原糖是指具有还原性的单糖和部分双糖。
测定总糖和还原糖的方法主要有蒸发法、显色法、高效液相色谱法等，本实验采用显色法测定。
三、实验步骤1.样品制备：将待测样品粉碎并过筛，取2g样品加入100ml锥形瓶中，加入40ml去离子水，振荡混合均匀。
2.制备还原剂：称取0.5g氢氧化钠加入50ml去离子水中，加温搅拌至完全溶解。
3.蒸发：将步骤1中制备好的样品放入沸水浴中加温蒸发至干固。
4.水解：将步骤3中得到的干固样品加入10ml 0.5mol/L盐酸中，加温水解30min。
5.冷却：将步骤4中的样品冷却至室温，加入50ml去离子水稀释。
6.显色：取10ml样品溶液加入试管中，加入2ml酚酞指示剂溶液和2ml还原剂溶液，振荡混合均匀后静置10min。
7.测定：用1mol/L氢氧化钠滴定至颜色变为淡粉色，记录滴定体积V1。
同时进行空白试验并记录滴定体积V0。
8.计算：总糖含量=（V1-V0）×0.01×1000/2g（mg/g），还原糖含量=（V1-V0）×0.01×1000/2g（mg/g）。
四、实验结果本次实验测得样品A的总糖含量为24.5mg/g，还原糖含量为8.7mg/g；样品B的总糖含量为18.3mg/g，还原糖含量为6.9mg/g；样品C的总糖含量为31.7mg/g，还原糖含量为12.4mg/g。
五、实验分析通过本次实验可以发现不同食品中的总糖和还原糖含量存在较大差异。
其中，样品C的总糖和还原糖含量均较高，而样品B的含量最低。
这提示我们在饮食中应该注意控制糖分的摄入，避免过多摄入对身体健康造成影响。
六、实验感想本次实验通过测定总糖和还原糖含量，让我对不同食品中糖分的含量有了更深入的了解。
总糖和还原糖的测定实验报告
总糖和还原糖的测定实验报告一、实验目的1、掌握总糖和还原糖含量测定的基本原理和方法。
2、熟练使用分光光度计进行比色分析。
3、培养实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理1、总糖的测定总糖是指样品中所有能够还原斐林试剂的糖类物质的总和，包括还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖等）和非还原糖（如蔗糖）。
在本实验中，首先将非还原糖通过酸水解转化为还原糖，然后利用还原糖与斐林试剂反应生成氧化亚铜沉淀的特性，通过比色法测定总糖的含量。
2、还原糖的测定还原糖能够直接与斐林试剂反应，生成氧化亚铜沉淀。
在碱性条件下，氧化亚铜沉淀与酒石酸钾钠反应，形成蓝色的络合物。
通过分光光度计测量溶液在特定波长下的吸光度，与标准曲线对比，即可计算出还原糖的含量。
三、实验材料与仪器1、实验材料（1）葡萄糖标准溶液（1mg/mL）：准确称取 100mg 无水葡萄糖，用蒸馏水溶解并定容至 100mL。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取 63g DNS 和 262mL2mol/L NaOH 溶液，加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加 5g 结晶酚和 5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
（3）6mol/L HCl 溶液。
（4）10% NaOH 溶液。
（5）待测样品：如水果汁、蔬菜汁等。
2、实验仪器（1）分光光度计。
（2）恒温水浴锅。
（3）电子天平。
（4）移液器。
（5）容量瓶（100mL、500mL）。
（6）具塞刻度试管（25mL）。
四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制（1）分别吸取 00、02、04、06、08、10、12mL 葡萄糖标准溶液（1mg/mL）于 25mL 具塞刻度试管中，用蒸馏水补足至 20mL。
（2）向各试管中加入 20mL DNS 试剂，摇匀后在沸水浴中加热5min，取出后立即用冷水冷却至室温。
（3）用蒸馏水定容至 25mL，摇匀。
（4）以空白管（00mL 葡萄糖标准溶液）为参比，在 540nm 波长下测定各管溶液的吸光度。
还原糖的测定方法还原糖和总糖的测定
还原糖的测定方法还原糖和总糖的测定还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关1系，利用分光光度计，在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1( 实验材料小麦面粉;精密pH 试纸。
2( 主要仪器(1)具塞玻璃刻度试管:20mL×11(2)大离心管:50mL×2(3)烧杯:100mL×1(4)三角瓶:100mL×1(5)容量瓶:100mL×3(6)刻度吸管:1mL×1;2mL×2;10mL×1(7)恒温水浴锅(8)沸水浴(9)离心机(10)扭力天平(11)分光光度计3( 试剂(1)1mg/mL 葡萄糖标准液2准确称取80?烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4?冰箱中保存备用。
(2)3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
生物化学实验预习及实验报告范例 还原糖和总糖的测定
实验还原糖和总糖的测定实验二：(Fehling试剂)直接(热)滴定定糖法一、实验目的和要求1．初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。
2．正确掌握滴定管的使用方法和热滴定终点的判断方法。
二、实验原理思考(一)基本原理还原糖是指含有自由醛基(如葡萄糖)或酮基(如果糖)的单糖和某些二糖(如乳糖、麦芽糖)。
在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)还原，而还原糖本身则被氧化成各种羟酸类化合物。
该特性常用于还原糖的定性和定量测定。
(二)本实验反应原理1、Fehling试剂（又称作酒石酸铜溶液）介绍：A液：由硫酸铜和次甲基蓝组成1、硫酸铜的作1、Cu2+用于将来被还原成Cu+是什么？2、次甲基蓝的作用是什么？2、氧化还原指示剂B液：由氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾组成3、氢氧化钠3、一、生成Cu(OH)2↓，二、创造碱性反应环境作用是什么？4、酒石酸钾钠的作用是什么？4、用以生成可溶性络合物酒石酸钠铜5、亚5、生成可溶性复盐，铁氰化钾的作用是什么？以便于观察滴定终点用前将A 、B 两液等体积混合时，依次反应：(1) 2NaOH + CuSO 4 = Cu(OH)2↓ （天蓝色）+ Na 2SO 4 (2) 在碱性溶液中：酒石酸钠铜为可溶性络合物。
2、酒石酸铜与还原糖热滴定时的反应： 红色氧化亚铜沉淀生成：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒Cu(OH)2 +COOK C O H COONaCOHCOOKC OH H COONaCOHHCu + 2H 2O石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解反应生成的氧化亚铜沉淀与斐林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐：6、为什么要生成可溶性复盐？6、便于观察滴定终点亚甲基蓝为氧化-还原指示剂指示滴定终点 7、为什么亚7、因为亚甲基蓝氧化能力比Cu 2+弱，因此Cu 2+会先COOK C O H COONaCOHCu 6H 2O3Cu 2O ↓H 2CO 3CHO(CHOH)4CH 2OH++COOK C OH H COONaCOHH+(CHOH)4CH 2OHCOOH++CuO 2 + K 4Fe(CN)6 + H 22 Cu 2Fe(CN)6 + 2KOH甲基蓝可为滴定终点指示剂？被还原。
还原糖和总糖的测定实验报告
还原糖和总糖的测定实验报告实验目的，通过化学方法测定食品中还原糖和总糖的含量，了解不同食品中糖的含量差异。
实验原理，还原糖是指能够还原铜离子的糖类物质，如葡萄糖、果糖等；总糖是指食品中所有的糖类物质的总和，包括还原糖和非还原糖。
在本实验中，我们将利用费林试剂将还原糖氧化成酸，然后用氢氧化钠将酸中和，再用硫酸将非还原糖氧化，最后用费林试剂滴定还原糖。
实验步骤：1. 样品制备，取不同食品样品，如蜂蜜、果酱等，分别称取适量样品。
2. 提取糖液，将样品加水稀释，加热至沸腾，过滤得到糖液。
3. 还原糖的测定，取一定量糖液，加入费林试剂，滴定至蓝色消失，记录滴定所需费林试剂的体积V1。
4. 总糖的测定，取一定量糖液，加入硫酸，再加入氢氧化钠，加热至沸腾，冷却后加入费林试剂，滴定至蓝色消失，记录滴定所需费林试剂的体积V2。
实验数据：样品 | V1（mL） | V2（mL） | 。
蜂蜜 | 12.3 | 15.6 | 。
果酱 | 8.7 | 10.5 | 。
实验结果：1. 蜂蜜中还原糖的含量为12.3mL，总糖的含量为15.6mL。
2. 果酱中还原糖的含量为8.7mL，总糖的含量为10.5mL。
实验分析：通过实验数据可以看出，蜂蜜的总糖含量明显高于果酱，说明蜂蜜中含有更多的糖类物质。
而果酱中的还原糖含量略高于蜂蜜，这可能是因为果酱中的果糖含量较高。
通过本实验，我们可以初步了解不同食品中糖的含量差异，为食品质量的评价提供了一定的依据。
实验结论：本实验通过测定不同食品中的还原糖和总糖含量，初步了解了食品中糖的含量差异。
蜂蜜中总糖含量明显高于果酱，而果酱中的还原糖含量略高于蜂蜜。
这为我们对食品质量的评价提供了一定的依据。
实验注意事项：1. 实验中需要注意操作的精确性，尤其是在滴定过程中需要小心操作，避免误差的产生。
2. 实验中的废液需要妥善处理，不可直接倒入下水道，以免对环境造成污染。
结语：通过本次实验，我们初步了解了食品中还原糖和总糖的测定方法，以及不同食品中糖的含量差异。
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总糖和还原糖的测定──费林试剂热滴定法
目的要求：
掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。
实验原理：
还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。
在碱性溶液中，还原糖能将Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化成糖酸及其他产物。
糖类的这种性质常被用于糖的定性和定量测定。
本实验采用费林试剂热滴定法。
费林试剂由甲、乙两种溶液组成。
甲液含硫酸铜和亚甲基蓝（氧化还原指示剂）；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
将一定量的甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH + CuSO4 = Cu(OH)2+ Na2SO4在碱性溶液中，所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的络合物酒石酸钾钠铜：
反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。
Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2OCu2O + K4Fe(CN)6 + H2OK2Cu2Fe(CN)6 + 2KOH
滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。
因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。
根据样液量可计算出还原糖含量。
试剂和器材：
一、试剂
费林试剂：
甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000mL。
乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe （CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000mL，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。
0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入1000mL容量瓶中，加入5mL浓HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000mL。
6mol/L HCl：取250mL浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500mL。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100mL蒸馏水中。
6mol/L NaOH：称取120gNaOH溶于500mL蒸馏水中。
0.1%酚酞指示剂。
二、材料
藕粉，淀粉。
三、器材
试管3.0×20cm（×1）；移液管5mL（×2）；烧杯100m L(×1); 250mL锥形瓶; 调温电炉; 滴
定管25mL(×1)。
操作方法：
一、样品中还原糖的提取
准确称取1g藕粉，放在100mL烧杯中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加入约40mL蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。
过滤，将滤液全部收集在50mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。
二、样品中总糖的水解及提取
准确称取1g淀粉，放在大试管中，加入6mol/L HCl 10mL，蒸馏水15mL，在沸水浴中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。
如已水解完全，则不呈现蓝色。
水解毕。
冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6mol/L NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100mL，过滤取滤液10mL于100mL容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。
三、空白滴定
准确吸取费林试剂甲液和乙液各5.00mL，置于250mL锥形瓶中，加蒸馏水10mL。
从滴定管滴加约9mL葡萄糖标准溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以每
2s 1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。
记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。
平行操作3次，取其平均值，按下式计算：
式中：F──10mL费林试剂（甲液和乙液各5.00mL）相当于葡萄糖的量，mg；
C──葡萄糖标准溶液的浓度，mg/mL；
V──标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积，mL。
四、样品糖的定量测定
(1) 样品溶液预测定：吸取费林试剂甲液及乙液各5.00mL，置于250mL锥形瓶中，加蒸馏水10mL，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液，滴定时要保持溶液呈沸腾状态。
待溶液由蓝色变浅时，以每2s 1滴的速度滴定，直至溶液的蓝色刚好褪去为终点。
记录样品溶液消耗的体积。
(2) 样品溶液测定：吸取费林试剂甲液及乙液各5.00mL，置于锥形瓶中，加蒸馏水10mL，加玻璃珠3粒，从滴定管中加入比与测试样品溶液消耗的总体积少1mL的样品溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以每2s 1滴的速度继续滴加样液，直至蓝色刚好褪去为终点。
记录消耗样品溶液的总体积。
平行操作3次，取其平均值。
五、结果处理
其中：m──样品重量，g；
式中：F──10mL费林试剂（甲液和乙液各5.00mL）相当于葡萄糖的量，mg；
V──标定时平均消耗还原糖或总糖样品溶液的总体积，mL；（100ml）
V1──还原糖或总糖样品溶液的总体积，mL；
1000──mg换算成g的系数。
注意事项
（1）费林试剂甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。
（2）滴定必须是在沸腾条件下进行，其原因一是加快还原糖与Cu2＋的反应速度；二是亚甲基蓝的变色反应是可逆的，还原型的亚甲基蓝遇空气中的氧时会再被氧化为氧化型。
此外，氧化亚铜也极不稳定，易被空气中的氧所氧化。
保持反应液沸腾可防止空气进入，避免亚甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加消耗量。
（3）滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热源上取下来滴定，以防止空气进入反应溶液中。