实验一 小白鼠骨髓细胞染色体制片
小鼠骨髓细胞染色体
实验步骤
预处理——取股骨——冲洗骨髓——离 心——低渗——离心——固定——离心——
滴片——染色——观察
1. 取材及前处理：取健康小白鼠（约65-90天龄）， 腹腔注射0.1%秋水仙素溶液0.1ml，剂量为 4ml/Kg动物体重 2. 取骨髓：将已用秋水仙素前处理的小白鼠，经过 2-3小时后，用损伤脊椎法处死小白鼠，立即取出 两侧股骨，把肌肉刮净，然后从骨股两端关节处 剪下，用2%柠蒙酸钠溶液洗净骨股上的血污及肌 肉残渣，剪去骨股两端膨大的关节头，使其露出 骨髓，然后用吸有3-5ml2%柠檬酸钠溶液的注射 器，从股骨的一端插入针头，往骨髓内冲洗多次， 直至股骨断面变成粉白色为止，可多剪几个断面 反复冲洗，这样制备了骨髓细胞悬浮液，也可用 眼科镊子小心地取出骨髓，置于有少量柠檬酸钠 溶液培养皿中捣碎，然后再加入2%柠檬酸钠溶液 适量，制成3-5ml骨髓细胞悬液
骨髓细胞染色体的制备与观察
2010级生物技术专业——冯德
实验目的 实验原理
实验用品 实验方法
实验目的
初步掌握小白鼠骨随细胞染色体的制 备方法，计算骨髓细胞分裂中期的分裂相 的染色体数目并观察端着丝点的形态特 点．
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞能生成 各种血细胞和原始细胞，具有较高的分裂 能力。本实验采用这一材料，通过前处理， 低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色 体标本，可观察到许多处于分裂中期的染 色体
3.
பைடு நூலகம்1.
低渗处理：用吸管将骨髓细胞悬液移入带刻度离心管 内，1000rpm离心10分钟，吸去上清液。加入0.075M氯 化钾溶液5ml立即将细胞团吹打均匀，置37℃水浴25-30 分钟 4. 预固定、固定：经低渗处理后的细胞，加入卡诺氏 固定液5-6滴搅拌均匀进行预固定10分钟，然后以 1000rpm离心10分钟，此为第一次固定然后以同法离心， 弃上清液，仅留约0.2-0.3ml的细胞团与部分上清液，吹 均匀制成细胞悬浮液涂片观察。如果细胞分散的不好， 可再按上述方法再固定1-2次，使染色体进一步分散 气干法制片：取预先冰冻的载玻片，滴2-3滴细胞 悬浮液于其上，立即吹气均匀打散、过火、置室温中自 然干燥
小鼠骨髓瘤细胞染色体标本的制备实验目的：实验原理：
2．试剂 0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液 （甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶 液、Giemsa染液等。
3．材料：小鼠
方法与步骤：
1.取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动 物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断 在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。
2.腹腔内注射秋水仙素3～4小时后，断头处死小鼠。 3.取出小鼠的后肢骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造
成骨髓细胞的流失。Fra bibliotek 4.滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、肌肉等 组织清除干净。
5.加入适量低渗液，用剪刀将骨充分剪碎，并用吸管吹 打，使骨髓细胞全部释放出来。
6.用滤网将获得的液体过滤到离心管中，加低渗液至8ml 左右，室温下静置20～30分钟，进行低渗。低渗结束后， 加入1ml左右的Carnoy’s 固定液进行预固定，轻轻混匀 后，离心。
15分钟，弃去染液，水洗，镜检。
结果：
作业:
绘图表示动物染色体的典型形态。 说明在小鼠骨髓染色体的制备过程中的关键步
骤。
7. 1200转/分，离心5分钟，弃上清，加入固定液，混匀 后，室温放置30分钟，再次离心去上清，重复固定一次， 离心后，向沉淀中加入1ml预冷的固定液，将细胞重悬。
8.取洁净冰水中预冷的载玻片，稍作倾斜，用吸管吸取一 滴上述细胞悬浮液，于载玻片上方适当高度滴在载玻片 上；
9.滴片后，将片子晾干，滴加适量Giemsa染液染色10～
小鼠骨髓瘤细胞染色体标本的制备
实验目的：
掌握小鼠骨髓细胞染色体的原理和制备方法，识别小鼠染 色体的数目及特点。
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作和观察-医学资料
可见中西医学，一个是以“功能人” 为概念 的独特 的哲学 医学理 论体系 ，一个 是以“ 解剖人 、肉体 人”为 概念的 新兴的 现代医 学科学 理论体 系，二 者都不 是以完 整人为 研究对 象的科 学，从 理论讲 二者都 不是科 学的， 势必影 响各自 发展。 事实也 证明这 一切， 中医长 期停滞 不前、 疗效也 不确实 。西医 尽管发 展到目 前的基 因分子 层次， 但疾病 发病率 居高不 下，对 绝大部 分疾病 发病原 因认识 不清、 发病机 理弄不 明白， 治疗受 到制约 ，在小 小SAR S、禽 流感面 前竟束 手无策 ，在糖 尿病、 癌症、 心脑血 管疾病 、尿毒 症等相 当多疾 病面前 更是不 得不求 助或借 助中医 治疗。 一个是 疗效不 确实， 一个是 有些甚 至相当 多疾病 无法治 疗，这 就是中 西医学 结合的 缘由。 然而， 由于二 者是两 套理论 、两股 道上跑 的车， 风马牛 不相及 ，从理 论上讲 就没有 结合的 可能， 只是形 式上的 融合罢 了。故 出现西 医对治 疗不了 的疾病 只好求 助中医 ，而中 医则往 往采用 西医诊 断中医 治疗， 以及中 西治疗 法一块 用的局 面。
遗传学实验
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考题
实验目的
掌握动物骨髓染色体标本制备基 本程，了解操作步骤的原理
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是 生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料， 通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到 许多处于分裂中期的染色体，可以进 行染色体组型分析。
实验用品
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子
小白鼠染色体标本的制作染色与观察
小白鼠染色体标本的制作染色与观察染色体是生物体内的遗传物质DNA和蛋白质的组合体，通过对染色体的观察可以了解生物种群的遗传信息和进化变化。
染色体观察在遗传学、病理学等领域具有重要的应用价值。
本文将介绍小白鼠染色体标本的制作方法以及染色和观察的步骤。
1.小白鼠染色体标本的制作方法制作小白鼠染色体标本的过程主要包括取材、处理和固定等步骤。
（1）取材选择健康的小白鼠，尤其是发育期的小白鼠，取得其骨髓或肝脏等组织。
取材时要注意卫生和无菌操作，以保证样品的质量。
（2）处理将取得的骨髓或肝脏等组织放入离心管中，加入等体积的生理盐水悬浮液，并在其中加入适量的KCl溶液进行渗透，使细胞膜变得脆弱，易于裂解释放染色体。
（3）固定将处理后的细胞悬浮液滴到已经消毒的玻璃片上，然后迅速将玻璃片倾斜，让细胞悬浮液自然扩散开来。
待其固定后，用甲醛进行固定处理，固定时间一般为5-10分钟。
2.小白鼠染色体染色的步骤（1）裂解将固定的标本玻璃片在室温下迅速加热至约60℃的热板上，使染色体细胞裂解释放出染色体。
裂解时间一般为5-10分钟。
（2）染色将裂解后的细胞标本浸泡在浓度适当的染色液中，常用的染色液有乔治染色液、甲酸-吡啶染色液和乙酸酒精染色液等。
对于小白鼠染色体标本的染色，乔治染色液是较为常用的选择。
（3）洗涤染色后的标本需要进行洗涤步骤以去除多余的染色液和固定剂。
使用生理盐水或磷酸缓冲液进行反复洗涤，直到洗涤液清澈。
3.小白鼠染色体观察的步骤在染色体标本制作和染色之后，我们可以通过显微镜进行小白鼠染色体的观察，并对染色体进行测量和特征描述。
（1）显微镜观察将染色后的标本玻璃片固定在显微镜载玻片上，使用显微镜进行观察。
观察过程中可以选择不同倍数的镜头以获得更详细的图像。
（2）测量和特征描述通过观察染色体在显微镜下的形态和结构，我们可以测量染色体的长度、形状等参数，并对染色体的特征进行描述，如染色体数量、着丝点的位置等。
总结：小白鼠染色体标本的制作染色与观察是一项重要的生物实验技术，可以帮助我们了解生物的遗传特征和疾病的发生机制。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的：
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。
实验原理：
染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。
在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。
为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。
实验步骤：
1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。
2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。
3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。
4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。
5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。
实验结果：
制备的染色体标本在显微镜下观察。
通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。
同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。
结论：
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。
观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。
同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。
实验一 小白鼠骨髓细胞染色体制片
一、原理
• 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分 裂的组织和细胞悬液中得到。最常用的途径是 从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中 制备染色体。在骨髓细胞中，有丝分裂的指数 是相当高的，因此可以直接得到中期细胞而不 必象血淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培 养，主要的中期相来自于细胞系统，也来自于 各种骨髓细胞。以骨髓为材料进行染色体研究 的优点是不需要培养，细胞数目越多，分裂数 目高，并能真实反映体内真实情况。
四、实验步骤与方法
四、实验步骤与方法
5.固定：沿管壁加５毫升新鲜卡尔诺固定液，马 上散细胞团，使其在固定液中悬浊均匀。 1000rmp离心５分，去上清液，即第一次固定。 同样方法固定三次，留沉淀。 6.滴片： • (1)在离心管底细胞团中再加少量（0.5ml）新 鲜固定液，搅匀制成细胞悬浊液。 • (2)将预先泡在75%酒精的广口瓶里的载玻片取 出，火焰烤干后，置于4℃冰箱中冷藏备用。 取出时轻甩玻片上的水，立即滴悬浊液2~3滴， 空气干燥。
四、实验步骤与方法
7.姬姆萨染色 • (1)配制染液：用缓冲液PBS（1升蒸馏水 加磷酸二氢钾9.08克、磷酸氢二钠 9.50 克 PH=6.8）配成2%姬姆萨染色液。 • (2)待玻片干燥后，迅速移到盛有染液的 染色缸中放置10分，然后水洗。
四、实验步骤与方法
8.镜检：先用低倍镜（×200-×400）找出比较 清晰而分裂相较好的染色体，然后用高倍油 浸镜下详细观察染色体的数目、形态等。拍 照，洗相。 9.核型分析：按同源染色体的相对长度、着丝 点位置等特征依次排常染色体，最后排是直接从骨髓中取出细胞，经压 片法或空气干燥法制片。为了提高有丝分裂的 指数，在动物实验时，可在取材前经腹胚注射 有丝分裂的抑制剂，一般常用秋水仙素。
小鼠骨髓细胞染色体制备
小鼠骨髓细胞染色体制备染色体制备是生物学研究中常用的实验技术之一，通过染色体制备可以获得染色体的形态和结构信息，从而进一步研究其功能和遗传特性。
本文将介绍小鼠骨髓细胞染色体制备的方法和步骤。
一、材料准备1. 小鼠骨髓细胞2. 10% 碘酒3. 0.075M KCl 溶液4. 甲醛溶液（4%）5. 甲基绿染液6. 预热37°C恒温水浴7. 玻片和载玻片夹二、实验步骤1. 将小鼠安乐死并取出骨髓，将骨髓切碎并转移到15ml离心管中。
2. 加入适量的10%碘酒，使得骨髓完全被浸泡，放置室温下静置15分钟，使细胞均匀染色后固定。
3. 使用离心机以1000rpm离心10分钟，将碘酒倒掉。
4. 加入适量的0.075M KCl 溶液，使骨髓细胞悬浮，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
5. 再次加入适量的0.075M KCl 溶液，使骨髓细胞悬浮，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
6. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
7. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
8. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
9. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
10. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
11. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
12. 将悬浮的骨髓细胞滴于预热的玻片上，并用载玻片夹轻轻压平。
13. 将载玻片夹放入预热37°C的恒温水浴中，静置10分钟。
14. 将载玻片夹取出，用甲醛固定液稍微洗净，并用酒精进行脱水。
15. 将载玻片夹放入洗净过的甲醛固定液中浸泡10分钟，然后用酒精进行脱水。
小鼠骨髓细胞染色体标本制备
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具： 注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品：
0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、 Giemsa染液、0.01M磷酸缓冲液 (PH6.8)，0.85%生理盐水。
实验九
小鼠骨髓
细胞染色体标本制备
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨
髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造
血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
2、适当浓度秋水仙素处理分裂 增殖的骨髓细胞，能抑制细胞分裂 时纺锤丝、纺锤体的形成，而染色 体不分裂成为子染色体，使细胞不 向后期过渡，从而收集到更多的中 期分裂相。 同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用 6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定； 1000rpm离心10分钟后，弃去上清液。
7、固定：沿管壁慢慢加入固定液 5ml，用吸管吹打成细胞悬液后，室 温下静置15分钟，5分钟时轻轻吹打， 使细胞充分固定。 8、离心：1000rpm离心10分钟， 弃上清液。 9、再固定：同固定I。 10、再离心：同8，离心后加 0.1ml固定液，吸管吹打成细胞悬液。
四倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=32）
二倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=16）
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四、实验步骤与方法
四、实验步骤与方法
5.固定：沿管壁加５毫升新鲜卡尔诺固定液，马 上散细胞团，使其在固定液中悬浊均匀。 1000rmp离心５分，去上清液，即第一次固定。 同样方法固定三次，留沉淀。 6.滴片： • (1)在离心管底细胞团中再加少量（0.5ml）新 鲜固定液，搅匀制成细胞悬浊液。 • (2)将预先泡在75%酒精的广口瓶里的载玻片取 出，火焰烤干后，置于4℃冰箱中冷藏备用。 取出时轻甩玻片上的水，立即滴悬浊液2~3滴， 空气干燥。
四、实验步骤与方法
7.姬姆萨染色 • (1)配制染液：用缓冲液PBS（1升蒸馏水 加磷酸二氢钾9.08克、磷酸氢二钠 9.50 克 PH=6.8）配成2%姬姆萨染色液。 • (2)待玻片干燥后，迅速移到盛有染液的 染色缸中放置10分，然后水洗。
四、实验步骤与方法
8.镜检：先用低倍镜（×200-×400）找出比较 清晰而分裂相较好的染色体，然后用高倍油 浸镜下详细观察染色体的数目、形态等。拍 照，洗相。 9.核型分析：按同源染色体的相对长度、着丝 点位置等特征依次排常染色体，最后排列出 性染色体。
Байду номын сангаас
四、实验步骤与方法
1.秋水仙素处理： 先给小白鼠腹 膛内注射秋水仙素 (0.5μg/ml)0.2毫 升经1~2小时后致 死。
四、实验步骤与方法
2.摘取组织：用眼科剪子摘取股骨，剥离肌肉后 剪掉股骨两端膨大的关节头，使其露出骨髓腔。
四、实验步骤与方法
四、实验步骤与方法
3.采集细胞：先用镊子夹住股骨，放在离 心管口上方，然后用已抽吸少量0.075M 氯化钾的卡介苗注射器，由上端轻轻地 注入给骨髓腔，冲净细胞，再加入氯化 钾至５毫升刻度为止。 4.低渗处理：用吸管充分搅匀后，静置１ ５分钟进行低渗处理。1000rpm离心５分， 吸去上清液。
一、原理
• 直接制片法，是直接从骨髓中取出细胞，经压 片法或空气干燥法制片。为了提高有丝分裂的 指数，在动物实验时，可在取材前经腹胚注射 有丝分裂的抑制剂，一般常用秋水仙素。
二、目的
• 掌握采用直接法制作动物染色标本的步骤与方 法。
三、器材、试剂
• 卡介苗注射器、针头（5号）、V型离心管、吸 管、试管、试管架、显微镜、小白鼠、解剖器 具（剪刀、镊子）、酒精灯。秋水仙素、 0.075M氯化钾、甲醇、乙醇、冰醋酸、磷酸氢 二钠、磷酸二氢钠、盐酸、姬姆萨染色液、二 甲苯、香柏油、加拿大树胶。
实验一 小白鼠骨髓细胞染色体制片（直接法）
一、原理
• 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分 裂的组织和细胞悬液中得到。最常用的途径是 从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中 制备染色体。在骨髓细胞中，有丝分裂的指数 是相当高的，因此可以直接得到中期细胞而不 必象血淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培 养，主要的中期相来自于细胞系统，也来自于 各种骨髓细胞。以骨髓为材料进行染色体研究 的优点是不需要培养，细胞数目越多，分裂数 目高，并能真实反映体内真实情况。