小鼠骨髓染色体制备及观察
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作和观察-医学资料
可见中西医学，一个是以“功能人” 为概念 的独特 的哲学 医学理 论体系 ，一个 是以“ 解剖人 、肉体 人”为 概念的 新兴的 现代医 学科学 理论体 系，二 者都不 是以完 整人为 研究对 象的科 学，从 理论讲 二者都 不是科 学的， 势必影 响各自 发展。 事实也 证明这 一切， 中医长 期停滞 不前、 疗效也 不确实 。西医 尽管发 展到目 前的基 因分子 层次， 但疾病 发病率 居高不 下，对 绝大部 分疾病 发病原 因认识 不清、 发病机 理弄不 明白， 治疗受 到制约 ，在小 小SAR S、禽 流感面 前竟束 手无策 ，在糖 尿病、 癌症、 心脑血 管疾病 、尿毒 症等相 当多疾 病面前 更是不 得不求 助或借 助中医 治疗。 一个是 疗效不 确实， 一个是 有些甚 至相当 多疾病 无法治 疗，这 就是中 西医学 结合的 缘由。 然而， 由于二 者是两 套理论 、两股 道上跑 的车， 风马牛 不相及 ，从理 论上讲 就没有 结合的 可能， 只是形 式上的 融合罢 了。故 出现西 医对治 疗不了 的疾病 只好求 助中医 ，而中 医则往 往采用 西医诊 断中医 治疗， 以及中 西治疗 法一块 用的局 面。
遗传学实验
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考题
实验目的
掌握动物骨髓染色体标本制备基 本程，了解操作步骤的原理
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是 生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料， 通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到 许多处于分裂中期的染色体，可以进 行染色体组型分析。
实验用品
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的：
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。
实验原理：
染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。
在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。
为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。
实验步骤：
1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。
2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。
3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。
4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。
5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。
实验结果：
制备的染色体标本在显微镜下观察。
通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。
同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。
结论：
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。
观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。
同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察一、实验目的了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。
观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。
利用显微照相技术对所得切片进行照相。
二、实验原理染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。
因此通过染色体分析，可以了解某一物种最基本的遗传指标。
进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织，如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。
如将秋水仙素注射到动物的腹腔内，经肠系膜吸收并可转运到骨髓，结果使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，使得染色体停在中期状态，经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。
这种制片方法是属于侵害性的，因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。
对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓，在临床上用于一些血液疾病的研究分析。
对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片，方法基本一样。
人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。
三、实验用具及材料实验材料：体重20克左右的小鼠一只实验试剂：0.075mKCl低渗液、固定液（甲醇：醋酸＝3:1）、0.4%秋水仙素、改良苯酚品红溶液、二甲苯实验材料：恒温水浴槽、纱布、烧杯、离心管2支、刀片、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸光学显微镜、带数码相机的光学显微镜四、实验步骤1腹腔注射秋水仙素溶液：在做实验前2~3小时，对实验用小鼠按0.1ml/20g小鼠的量对其进行0.4％的秋水仙素注射。
2取材：实验时，用断颈法迅速将小鼠处死，通过解剖取出股骨，用注射器吸取在37℃下保温的低渗液2毫升，将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓，使冲洗液从股骨的另一端流出。
收集冲洗液到5ml刻度的离心管中。
3低渗：用吸管将冲洗液吹打几次，然后把离心管放在37℃恒温水浴槽内低渗20分钟。
4固定：之后取出并加1ml的固定液，吹打之后放入37℃恒温水浴槽内固定10分钟。
5离心：然后将1000rpm离心10分钟，弃去上清。
小鼠骨髓染色体标本的制备.
3．预固定：加入固定液5滴吹打混匀。
4．离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
6、再离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
7、再固定：再加入固定液2－3滴，打匀。
8、制片：用滴管吸细胞悬液，从20－30cm高度滴在冰水预浸泡 的洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风 机吹干。
9、染色：Giemsa染液染色7 min、细水冲洗、晾干。
10、镜检：低倍镜下找到分散良好的分裂相后，换高倍镜、油 镜、认真观察。
四、作业 1 为什么要低渗处理？ 2 观察2-3个小鼠骨髓细胞染色体的分裂
相，数一数有几条。
小鼠骨髓染色体标本的制备
实验五、小鼠骨髓染色体标本的制备
一、实验目的： 掌握小鼠骨髓染色体标本的制备方法。
观察小鼠染色体的形态和数目。 二、实验原理
小鼠骨髓细胞用秋水仙素积累分裂相， 用0.075 mol/L-1KCI进行低渗后，经 固定、染色，可见到分散的染色体。
三、实验步骤：
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦 去附着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注 射器吸取KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗， 用离心管接收冲洗液。
实验九小鼠骨髓细胞染色体标本制备
四、实验步骤
1、预处理：实验 。作用：
2、处死动物：断颈处死小白鼠， 解剖小鼠内生殖器官，鉴别雌雄性别
3、取股骨：剥取股骨，剔去肌肉 组织，剪去两端的股骨头。
11、滴片：用吸管吸取细胞悬液， 滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰 上微微加热，室温晾干。预冷载玻片 的作用：
12、染色：10% Giemsa染液染色30分 钟。
13、镜检：低倍———高倍 。
五、作业
1、选择染色体清晰，分散好的 中期分裂相，计数染色体，显微摄影、 并打印出照片。
2、分析成功或失败的原因。
4、取骨髓：注射器吸取0.6ml生 理盐水, 针头插入股骨一端,反复冲 洗骨髓到10ml的离心管中。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用
6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定；
同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具：
注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品： 0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨 髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造 血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
24-小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察-教案
小鼠骨髓细胞染色体标本制备的原理和制备方法，小鼠骨髓细胞染色体的基本特征。
授课难点
小鼠骨髓细胞染色体标本制备的原理和制备方法。
授课形式
小班实验教学，分组操作
授课方法
查阅资料和预实验；板书、板图和PPT，口头讲述，操作示范，针对性辅导。
参考文献
1.翟中和，王喜忠，丁明孝.细胞生物学.高等教育出版社，2011
2.李虹.医学生物学与医学细胞生物学.科学出版社，2007
3.杨保胜，李晓文.医学形态学实验指导—细胞生物学与遗传学分册.人民卫生出版社，2005
4.张光谋，李延兰.医学细胞生物学实验技术.科学出版社，2013
思考题
1.简述小鼠骨髓细胞染色体标本制备的原理和操作过程。
2.绘制小鼠骨髓染色体核型示意图。
新乡医学院教案首页
课程名称
医学细胞生物学实验
授课题目
小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察
授课对象
生物医学各专业一年级本专科生
时间分配
讲解本次实验的目的、原理、方法、注意事项及作业30分钟；学生操作与辅导150分钟；总结20分钟。
课时目标
掌握小鼠骨髓细胞染色体标本制备的原理和方法，掌握小鼠骨髓细胞染色体的基本特征。
5.实验动物：3月龄左右小鼠一只。
6.试剂：
(1)100μg/ml秋水仙素：秋水仙素5mg，加5ml灭菌的生理盐水，即成1mg/ml秋水仙素溶液，于冰箱中闭光保存备用，使用时可用生理盐水稀释到100μg/ml固定液；
(2)固定液：甲醇：冰醋酸=3：1（时间过长会产生沉淀，现配现用）；
(3)低渗液：0.075mol/L KCl（提前37℃预热）；
3．低渗：将离心管置37℃恒温水浴箱中，低渗30 min后取出，使细胞充分吸水膨胀。低渗不好则在制片时细胞不易破裂，染色体不易分散开。
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察试验目的把握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理试验原理小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂力量，本试验采纳这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观看到很多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。
试验原理制备方法包括以下几个要点:1. 用肯定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观看到染色体的显微图象试验用品1．材料：小白鼠2．器具：注射器（1ml,5ml）剪刀镊子玻璃吸管10ml刻度的离心管离心机载玻片盖玻片显微镜滤纸擦镜纸纱布恒温水浴锅3．药品：0.01%秋水仙素0.075MKCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）2%柠檬酸钠改良石炭酸品红试验步骤预处理取股骨冲洗骨髓离心低渗离心固定离心滴片染色观看1．预处理：试验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙素。
2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组织，洗净3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取10ml 2%柠檬酸钠，注射器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到10ml的离心管中4 ．离心：1000r/min 离心10 min ,弃上清5 ．低渗：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗30 min ，中间（约15 min ）再吹散一次，使细胞分散，悬浮于溶液中6．离心：1000r/min离心10 min，弃上清7．固定：沉淀加8ml固定液，并用吸管轻轻吹匀，进行固定，中间（约15 min ）再吹散一次试验步骤8. 离心：1000r/min 离心10 min ,留1 ml 左右上清，轻轻吹打成细胞悬液9. 滴片：用吸管吸取细胞悬液，高度30-40 cm，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干10. 染色：改良石炭酸品红染色10-20 min11. 观看：低倍高倍。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察PPT
结果分析
实验过程中，细胞培养和染色环节是关键，需要 严格控制实验条件，以保证染色体制备的质量。
染色体观察需要经验丰富的实验员，以确保准确 识别染色体的数目和结构。
实验结果与预期相符，证明了实验方法的可靠性 和准确性。
结果讨论与展望
本实验为小鼠骨髓细胞染色体制备与观察提供了有益 的参考，但仍需进一步优化实验条件和操作步骤，以
04
其他必要的缓冲液和盐溶液
实验仪器
显微镜
01
02
细胞培养箱
离心机
03
04
染色设备（染色缸、染色架等）
恒温水浴锅
05
06
吸管和移液器等定量工具
02
CATALOGUE
实验步骤
小鼠骨髓细胞的采集
01
02
03
麻醉小鼠
使用麻醉剂将小鼠麻醉， 确保其在整个采集过程中 保持安静。
采集骨髓
使用注射器抽取小鼠的骨 髓，注意抽取时要避免混 入其他组织或血液。
染色体组型分析
将染色体制成中期片，进行染色体组型分析，可以观察到染色体的配对情况、 排列顺序等特征，有助于判断染色体的结构异常。
染色体畸变分析
染色体结构畸变
观察染色体的结构畸变，如染色体断裂、倒位、缺失等， 可以分析出细胞在分裂过程中可能遇到的异常情况。
染色体数目畸变
分析染色体数目畸变，如非整倍体、多倍体等现象，有助 于了解细胞分裂过程中的异常变化。
小鼠骨髓细胞染色 体制备与观察
目录
• 实验准备 • 实验步骤 • 实验结果 • 结论与讨论
01
CATALOGUE
实验准备
实验材料
小鼠骨髓细பைடு நூலகம்胞样本
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腹腔内注射秋水仙素3~4小时后， 断头处死小鼠。
取出小鼠的后肢骨，注意不要将股骨剪断，否 则容易造成骨髓细胞的流失。
滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、 肌肉等组织清除干净。
加入适量低渗液，用剪刀将骨充分剪碎，并 用吸管吹打，使骨髓细胞全部释放出来。
亦可用注射器抽取柠檬酸铵溶液冲洗骨髓，效果佳
预冷的玻片
滴片后，将片子晾干，滴加适量Giemsa染液染色 10~15分钟，弃去染液，水洗，镜检。
实验结果
苯酚品红染色效果
结果显示
在显微镜寻找分散良好的 中期分裂相。小白鼠染色 体一般呈“U”形，都为近 端着丝粒染色体。染色体 数2n=40。 图示为吉姆萨染色效果
5、实验结果与分析讨论
绘制小鼠骨髓细胞染色体图 统计小鼠染色体数目 如果有条件时，要进行显微摄影，然后进行 组型分析
实验三 小白鼠骨髓染色体制备及观察
1、实验目的与要求
⑴ 掌握动物骨髓细胞染色体制备技术 ⑵ 学会动物细胞的滴片方法 ⑶ 观察小白鼠染色体的形态特征和染色体数目
2、实验原理
⑴ 小鼠骨髓细胞 ⑵ 秋水仙素可破坏骨髓细胞分裂过程中纺锤 体的形成，把分裂细胞阻截在中期。 ⑶ 通过对小鼠骨髓细胞的低渗、固定、滴片、 染色等处理，可观察到小鼠染色体。 ⑷ 这种骨髓染色体制片方法简单，取材容易， 不需无菌条件，方便易行。
将获得的液体收集到离心管中，离心后去上清液， 加低渗液至8ml左右，室温下静置20~30分钟，进行 低渗。低渗结束后，加入1ml左右的Carnoy’s固定液 进行预固定，轻轻混匀后，离心。
1000转/分，离心10分钟，弃上清，加入固定液， 混匀后，室温放置25分钟，再次离心去上清，重 复固定一次，离心后，向沉淀中加入1ml固定液， 将细胞重悬。
3、实验材料
实验动物
健康小鼠(Mus muቤተ መጻሕፍቲ ባይዱculus 2n=40)，体重约18～ 20g，雌雄不限。
试剂
甲醇、冰乙酸、石炭酸品红、秋水仙素、KCl、 生理盐水
3、实验材料
实验器材
恒温培养箱、普通离心机、显微镜、分析天平、 离心管(5～10 mL)、吸管注射器(5 mL)、100 mL 烧杯、 载玻片 （冰片）
思考题
1．KCl溶液低渗处理与滴片过程在染色体制 ． 溶液低渗处理与滴片过程在染色体制 片中有何联系，对制片结果各有何影响？ 片中有何联系，对制片结果各有何影响？ 2．骨髓细胞染色体标本制作时，为什么要采 ．骨髓细胞染色体标本制作时， 用冰片滴片？ 用冰片滴片？冰片滴片时滴液高度有什么要 为什么滴片后要马上吹散？ 求？为什么滴片后要马上吹散？冰片温度为 什么越冰越好？ 什么越冰越好？
在临床上采取新鲜血液时,需要加入一些消毒 过的柠檬酸钠,就能起到防止血液凝固的作用,所 以柠檬酸钠被称为抗凝血剂。 枸橼酸根与血中钙离子形成难解离的络合物， 钙离子是凝血过程中所需的物质之一，血液中 钙离子减少，而使血液凝固受阻。
使用柠檬酸钠的原因：
低渗的作用： 低渗液是指渗透压和离子强度均低于正常细胞生理条件的 溶液，例如水、低渗的柠檬酸钠或氯化钠、甘油磷酸钾 （0.65M）、氯化钾（0.075M）等。低渗效果取决于低 渗液的化学组成、低渗的温度和处理时间。低渗处理是凭 借反渗透作用使细胞膨胀染色体铺展，同时可使粘附于染 色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察所有染色 体形态。实验室中一般选用0.075M KCl为低渗液（具体 情况取决于实际操作），其优点有：①染色体轮廓清楚， 可染色性强，染色时间短，②用于显带染色时能充分显示 带型特点。低渗处理为37℃，15－25分钟，以预实验条 件为准。
⑴ 秋水仙素注射 ⑵ 解剖小鼠 ⑶ 离心 ⑷ 低渗 ⑸ 固定 ⑹ 制备细胞悬浮液 ⑺ 滴片 ⑻ 空气干燥 ⑼ 染色 ⑽ 水洗 ⑾ 显微镜观察结果
方法与步骤
取材前3～4 h，向腹 腔内注射秋水仙素。注 射浓度随动物种类不同 而异。秋水仙素的主要 作用是使分裂细胞阻断 在有丝分裂中期，增加 中期分裂相的比例。
3、实验材料
溶液配制：
(1)0.01％秋水仙素：称10 mg秋水仙素，溶于 100 mL生理盐水中。 (2)低渗溶液：称5.59克KCl溶于1,000 mL蒸馏水 中，其浓度为0.075M。 2%柠檬酸钠溶液：：称2.28克柠檬酸钠溶于 100ml蒸馏水中。 Giemsa溶液
4、实验方法
主要实验步骤