小鼠骨髓染色体制备及观察
合集下载
小鼠骨髓细胞染色体
实验步骤
预处理——取股骨——冲洗骨髓——离 心——低渗——离心——固定——离心——
滴片——染色——观察
1. 取材及前处理：取健康小白鼠（约65-90天龄）， 腹腔注射0.1%秋水仙素溶液0.1ml，剂量为 4ml/Kg动物体重 2. 取骨髓：将已用秋水仙素前处理的小白鼠，经过 2-3小时后，用损伤脊椎法处死小白鼠，立即取出 两侧股骨，把肌肉刮净，然后从骨股两端关节处 剪下，用2%柠蒙酸钠溶液洗净骨股上的血污及肌 肉残渣，剪去骨股两端膨大的关节头，使其露出 骨髓，然后用吸有3-5ml2%柠檬酸钠溶液的注射 器，从股骨的一端插入针头，往骨髓内冲洗多次， 直至股骨断面变成粉白色为止，可多剪几个断面 反复冲洗，这样制备了骨髓细胞悬浮液，也可用 眼科镊子小心地取出骨髓，置于有少量柠檬酸钠 溶液培养皿中捣碎，然后再加入2%柠檬酸钠溶液 适量，制成3-5ml骨髓细胞悬液
骨髓细胞染色体的制备与观察
2010级生物技术专业——冯德
实验目的 实验原理
实验用品 实验方法
实验目的
初步掌握小白鼠骨随细胞染色体的制 备方法，计算骨髓细胞分裂中期的分裂相 的染色体数目并观察端着丝点的形态特 点．
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞能生成 各种血细胞和原始细胞，具有较高的分裂 能力。本实验采用这一材料，通过前处理， 低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色 体标本，可观察到许多处于分裂中期的染 色体
3.
பைடு நூலகம்1.
低渗处理：用吸管将骨髓细胞悬液移入带刻度离心管 内，1000rpm离心10分钟，吸去上清液。加入0.075M氯 化钾溶液5ml立即将细胞团吹打均匀，置37℃水浴25-30 分钟 4. 预固定、固定：经低渗处理后的细胞，加入卡诺氏 固定液5-6滴搅拌均匀进行预固定10分钟，然后以 1000rpm离心10分钟，此为第一次固定然后以同法离心， 弃上清液，仅留约0.2-0.3ml的细胞团与部分上清液，吹 均匀制成细胞悬浮液涂片观察。如果细胞分散的不好， 可再按上述方法再固定1-2次，使染色体进一步分散 气干法制片：取预先冰冻的载玻片，滴2-3滴细胞 悬浮液于其上，立即吹气均匀打散、过火、置室温中自 然干燥
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作和观察-医学资料
可见中西医学，一个是以“功能人” 为概念 的独特 的哲学 医学理 论体系 ，一个 是以“ 解剖人 、肉体 人”为 概念的 新兴的 现代医 学科学 理论体 系，二 者都不 是以完 整人为 研究对 象的科 学，从 理论讲 二者都 不是科 学的， 势必影 响各自 发展。 事实也 证明这 一切， 中医长 期停滞 不前、 疗效也 不确实 。西医 尽管发 展到目 前的基 因分子 层次， 但疾病 发病率 居高不 下，对 绝大部 分疾病 发病原 因认识 不清、 发病机 理弄不 明白， 治疗受 到制约 ，在小 小SAR S、禽 流感面 前竟束 手无策 ，在糖 尿病、 癌症、 心脑血 管疾病 、尿毒 症等相 当多疾 病面前 更是不 得不求 助或借 助中医 治疗。 一个是 疗效不 确实， 一个是 有些甚 至相当 多疾病 无法治 疗，这 就是中 西医学 结合的 缘由。 然而， 由于二 者是两 套理论 、两股 道上跑 的车， 风马牛 不相及 ，从理 论上讲 就没有 结合的 可能， 只是形 式上的 融合罢 了。故 出现西 医对治 疗不了 的疾病 只好求 助中医 ，而中 医则往 往采用 西医诊 断中医 治疗， 以及中 西治疗 法一块 用的局 面。
遗传学实验
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考题
实验目的
掌握动物骨髓染色体标本制备基 本程，了解操作步骤的原理
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是 生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料， 通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到 许多处于分裂中期的染色体，可以进 行染色体组型分析。
实验用品
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
滴片：
➢滴2~3滴于玻片上，吹气， ➢在酒精灯火焰过火8次， ➢做记号，凉干，染色
滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，10~15分 钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。
作业与思考题
• 1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染 色体中期分裂相。
• 2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各 起什么作用？
15
9+16+15=40
4.细胞增殖指数统计
细胞增殖指数=
分裂细胞数
×100%
分裂细胞数+间期细胞数
实验三 细胞器的观察
一、中心体 二、高尔基体
一、中心体（4×10）
• 马蛔虫子宫横切片全貌
中心体（10×10）
中心体（40×10）
二、高尔基体（4×10）
脊神经节切片
高尔基体（10×10）
2.了解小鼠染色体核型。
3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。
• 器材与试剂
• 内容与方法
（一）小鼠骨髓细胞染色体制备
预处理
取材，收集细胞
低渗
染色
滴片
固定、再固定
❖取材前2～3h，向腹腔 内注射秋水仙素。注射 浓度随动物种类不同而 异。秋水仙素的主要作 用是使分裂细胞阻断在 有丝分裂中期，增加中 期分裂相的比例。
• 3、简述实验中应注意那些关键问题？
（二）染色体标本片观察 1.标本片质量评价 （1）细胞密度合适、均匀； （2）背景干净，细胞核和染色体清晰； （3）有较多的分裂相； （4）染色体分散较好。
细胞密度
染色体 分散度
2.染色体形态特征观察
3.染色体计数
40
10
（100×10）
高尔基体（40×10）
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验用品
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子 玻璃吸管 10ml刻度的离心管 离心机 载 玻片 盖玻片 显微镜 滤纸 擦镜纸 纱布 恒温水浴锅 3．药品：0.01%秋水仙素 0.075MKCl 固 定液（甲醇：冰醋酸=3：1） 2%柠檬酸 钠 改良石炭酸品红
实验步骤
预处理
绘制一张小鼠骨髓细胞中期染色体图
思考题
分析本实验中造成制片不佳的原因
低渗 染色
取股骨
离心 观察
冲洗骨髓
离心
离心
滴片
固定
实验步骤
1．预处理：实验前2.5-3小时，按每克体重 注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙 素。 2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组 织，洗净 3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取 10ml 2%柠檬酸钠，注射 器针头插入股 骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到 10ml的离心管中
遗传学实验
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考题
实验目的
掌握动物骨髓染色体标本制备基 本过程，了解操作步骤的原理
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是 生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料， 通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到 许多处于分裂中期的染色体，可以进 行染色体组型分析。
实验原理
制备方法包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的 形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色 体停留在赤道面处 2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴 片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载 玻片上 3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载 片上展平, 经Giemsa染色后便可观察到染 色体的显微图象
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察ppt课件
9．在干净、湿冷的载玻片上以高距离滴2～3 滴上层细胞悬液，气干或在酒精灯上文火 烘干。注意在滴片时要有一定的高度（大 于40cm），使细胞膜破裂后易于使染色体 散开，并尽量使滴片上的细胞分布均匀， 不要重叠。
10．气干，染色。 在一块洁净的玻板上，将玻片标本有细胞的一面 朝下用牙签架空于玻板上。 11．用滴管将配好的染液充满于玻板与载玻片之间 的空隙中，注意载片上有细胞面的进行染色并在 滴加染液时注意排除气泡。视室温而定，染色15 分钟。 12．染色后，轻轻揭起玻片，倾斜玻片在自来水管 下细水流冲洗数秒，冲掉染液，擦干玻片标本底 面和四周，显微镜观察和分析。注意不要搞错沾 有细胞的一面。选择染色较好、较分散、形态清 晰的细胞分裂相，进行显微观察。
小鼠骨髓细胞染色体 标本的制备与观察
实验目的：
1．初步掌握动物骨髓细胞染色体的制备方法。 2．了解小鼠骨髓细胞染色体的形态特点。Fra bibliotek实验原理：
染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定 形式，是染色质紧密包装的结果。染色体 是有机体遗传信息的载体，对染色体的研 究在生物进化、发育、遗传和变异中有十 分重要的作用。
谢 谢 大 家
核型分析均是以中期染色体为标准，对制 作出的染色体标本进行照相以获得染色体 的显微图像，并将其剪裁排列即成，或用 专用软件进行分析排列。 凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各 种处理后，细胞就可进入分裂期此时均可 用于染色体分析。
在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的 组织之一。此时给动物注射一定剂量的秋 水仙素可使许多处于分裂的细胞停滞于中 期（ 秋水仙素可阻断纺锤丝微管的组装）， 然后采用常规空气干燥法制备染色体，即 可得到大量可供分析的染色体标本。本方 法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌 操作。
试验六 小白鼠骨髓细胞染色体制备及观察
6．加Giemsa染液染色8－10min，流水冲去 染液（注意水流不可急，细流冲去即可）， 干燥（晾干），观察，可见分散良好的染 色体。
小白鼠的保定和注射
五．结果与讨论
1．结果： （1）．选取分散良好的染色体绘实物图，上 传图片1幅）。 （2）．染色体计数（2n=40）。 2．讨论： （1）．实验前注射秋水仙素的作用？不作此 步会怎样？ （2）．为何要用冷冻片？烘烤片的作用？
小鼠骨髓细胞染色体
试验六 小白鼠骨髓细胞染色 体制备及观察
一．实验目的：
1．学习小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
2．观察骨髓细胞染色体，计数染色体。
二．原理：
活跃增值的组织细胞内染色体可用于制片分 析，秋水仙素（或以对二氯苯代之）可使 细胞分裂停滞于分裂中期，经染色处理， 可得到清晰的中期染色体标本。
三．材料试剂
1．材料：小白鼠；ห้องสมุดไป่ตู้
2．试剂：Giemsa染色液，0.4％KCl，2％柠 檬酸钠，固定液（甲醇：冰乙酸＝3：1）。
四．操作步骤
1．实验前4－8h小鼠腹腔注射秋水仙素1ml （0.14mg/ml）,(据小鼠体重用量调整)或1ml饱和 对二氯苯。 • 2．脱臼处死小鼠，取后肢胫骨和股骨，去两端。 用细针头注射器吸取2％柠檬酸钠1ml，反复冲洗 骨髓腔5次，将冲洗液（离心管中）加入0.4%KCl 低渗10min（8ml,37℃）。
• 3．离心（1000rpm，8min）,去上清液，加固定 液5ml（注意缓慢加入）。充分吹打，使沉淀块 分散，静置10min，再离心10min，弃上清液， 重复一次。
4．用约2ml固定液悬浮骨髓细胞成悬液（依 沉淀量定）。
5．取冷冻载片，距载片15cm高度滴下悬液 （取悬液前吸打均匀），单向吹气展开， 酒精灯上文火烘干。
小白鼠的保定和注射
五．结果与讨论
1．结果： （1）．选取分散良好的染色体绘实物图，上 传图片1幅）。 （2）．染色体计数（2n=40）。 2．讨论： （1）．实验前注射秋水仙素的作用？不作此 步会怎样？ （2）．为何要用冷冻片？烘烤片的作用？
小鼠骨髓细胞染色体
试验六 小白鼠骨髓细胞染色 体制备及观察
一．实验目的：
1．学习小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
2．观察骨髓细胞染色体，计数染色体。
二．原理：
活跃增值的组织细胞内染色体可用于制片分 析，秋水仙素（或以对二氯苯代之）可使 细胞分裂停滞于分裂中期，经染色处理， 可得到清晰的中期染色体标本。
三．材料试剂
1．材料：小白鼠；ห้องสมุดไป่ตู้
2．试剂：Giemsa染色液，0.4％KCl，2％柠 檬酸钠，固定液（甲醇：冰乙酸＝3：1）。
四．操作步骤
1．实验前4－8h小鼠腹腔注射秋水仙素1ml （0.14mg/ml）,(据小鼠体重用量调整)或1ml饱和 对二氯苯。 • 2．脱臼处死小鼠，取后肢胫骨和股骨，去两端。 用细针头注射器吸取2％柠檬酸钠1ml，反复冲洗 骨髓腔5次，将冲洗液（离心管中）加入0.4%KCl 低渗10min（8ml,37℃）。
• 3．离心（1000rpm，8min）,去上清液，加固定 液5ml（注意缓慢加入）。充分吹打，使沉淀块 分散，静置10min，再离心10min，弃上清液， 重复一次。
4．用约2ml固定液悬浮骨髓细胞成悬液（依 沉淀量定）。
5．取冷冻载片，距载片15cm高度滴下悬液 （取悬液前吸打均匀），单向吹气展开， 酒精灯上文火烘干。
小鼠骨髓染色体标本的制备.
7、再固定：再加入固定液2－3滴，打匀。
8、制片：用滴管吸细胞悬液，从20－30cm高度滴在冰水预浸泡 的洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风 机吹干。
9、染色：Giemsa染液染色7 min、细水冲洗、晾干。
10、镜检：低倍镜下找到分散良好的分裂相后，换高倍镜、油 镜、认真观察。
四、作业 1 为什么要低渗处理？ 2 观察2-3个小鼠骨髓细胞染色体的分裂
小鼠骨髓染色体标本的制备
实验五、小鼠骨髓染色体标本的制备
一、实验目的： 掌握小鼠骨髓染色体标本的制备方法。
观察小鼠染色体的形态和数目。 二、实验原/L-1KCI进行低渗后，经 固定、染色，可见到分散的染色体。
三、实验步骤：
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦 去附着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注 射器吸取KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗， 用离心管接收冲洗液。
相，数一数有几条。
2、低渗处理：加KCL至2/3管，用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液 中，放入37℃恒温水浴锅中，静置25min。（吹打不宜过猛）
3．预固定：加入固定液5滴吹打混匀。
4．离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
6、再离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
8、制片：用滴管吸细胞悬液，从20－30cm高度滴在冰水预浸泡 的洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风 机吹干。
9、染色：Giemsa染液染色7 min、细水冲洗、晾干。
10、镜检：低倍镜下找到分散良好的分裂相后，换高倍镜、油 镜、认真观察。
四、作业 1 为什么要低渗处理？ 2 观察2-3个小鼠骨髓细胞染色体的分裂
小鼠骨髓染色体标本的制备
实验五、小鼠骨髓染色体标本的制备
一、实验目的： 掌握小鼠骨髓染色体标本的制备方法。
观察小鼠染色体的形态和数目。 二、实验原/L-1KCI进行低渗后，经 固定、染色，可见到分散的染色体。
三、实验步骤：
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦 去附着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注 射器吸取KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗， 用离心管接收冲洗液。
相，数一数有几条。
2、低渗处理：加KCL至2/3管，用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液 中，放入37℃恒温水浴锅中，静置25min。（吹打不宜过猛）
3．预固定：加入固定液5滴吹打混匀。
4．离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
6、再离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
实验九小鼠骨髓细胞染色体标本制备
固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、 Giemsa染液、0.01M磷酸缓冲液 (PH6.8)，0.85%生理盐水。
四、实验步骤
1、预处理：实验 。作用：
2、处死动物：断颈处死小白鼠， 解剖小鼠内生殖器官，鉴别雌雄性别
3、取股骨：剥取股骨，剔去肌肉 组织，剪去两端的股骨头。
11、滴片：用吸管吸取细胞悬液， 滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰 上微微加热，室温晾干。预冷载玻片 的作用：
12、染色：10% Giemsa染液染色30分 钟。
13、镜检：低倍———高倍 。
五、作业
1、选择染色体清晰，分散好的 中期分裂相，计数染色体，显微摄影、 并打印出照片。
2、分析成功或失败的原因。
4、取骨髓：注射器吸取0.6ml生 理盐水, 针头插入股骨一端,反复冲 洗骨髓到10ml的离心管中。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用
6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定；
同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具：
注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品： 0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨 髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造 血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
四、实验步骤
1、预处理：实验 。作用：
2、处死动物：断颈处死小白鼠， 解剖小鼠内生殖器官，鉴别雌雄性别
3、取股骨：剥取股骨，剔去肌肉 组织，剪去两端的股骨头。
11、滴片：用吸管吸取细胞悬液， 滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰 上微微加热，室温晾干。预冷载玻片 的作用：
12、染色：10% Giemsa染液染色30分 钟。
13、镜检：低倍———高倍 。
五、作业
1、选择染色体清晰，分散好的 中期分裂相，计数染色体，显微摄影、 并打印出照片。
2、分析成功或失败的原因。
4、取骨髓：注射器吸取0.6ml生 理盐水, 针头插入股骨一端,反复冲 洗骨髓到10ml的离心管中。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用
6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定；
同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具：
注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品： 0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨 髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造 血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验三 小白鼠骨髓染色体制备及观察
❖ 1、实验目的与要求
⑴ 掌握动物骨髓细胞染色体制备技术 ⑵ 学会动物细胞的滴片方法 ⑶ 观察小白鼠染色体的形态特征和染色体数目
精选ppt
1
2、实验原理
❖ ⑴ 小鼠骨髓细胞 ❖ ⑵ 秋水仙素可破坏骨髓细胞分裂过程中纺锤
体的形成，把分裂细胞阻截在中期。 ❖ ⑶ 通过对小鼠骨髓细胞的低渗、固定、滴片、
9
滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、 肌肉等组织清除干净。
精选ppt
10
加入适量低渗液，用剪刀将骨充分剪碎，并 用吸管吹打，使骨髓细胞全部释放出来。
亦可用注射器抽取柠檬酸铵溶液冲洗骨髓，效果佳
精选ppt
11
将获得的液体收集到离心管中，离心后去上清液，
加低渗液至8ml左右，室温下静置20~30分钟，进行
低渗。低渗结束后，加入1ml左右的Carnoy’s固定液
进行预固定，轻轻混匀后精选，ppt离心。
12
1000转/分，离心10分钟，弃上清，加入固定液， 混匀后，室温放置25分钟，再次离心去上清，重 复固定一次，离心后，向沉淀中加入1ml固定液， 将细胞重悬。
精选ppt
13
预冷的玻片
精选ppt
14
❖取材前3～4 h，向腹 腔内注射秋水仙素。注 射浓度随动物种类不同 而异。秋水仙素的主要 作用是使分裂细胞阻断 在有丝分裂中期，增加 中期分裂相的比例。
精选ppt
7
腹腔内注射秋水仙素3~4小时后， 断头处死小鼠。
精选ppt
8
取出小鼠的后肢骨，注意不要将股骨剪断，否 则容易造成骨髓细胞的流失。
精选ppt
滴片后，将片子晾干，滴加适量Giemsa染液染色 10~15分钟，弃去染液，水洗，镜检。
精选ppt
15
实验结果Байду номын сангаас
苯酚品红染色效果
精选ppt
16
结果显示
在显微镜寻找分散良好的 中期分裂相。小白鼠染色 体一般呈“U”形，都为近 端着丝粒染色体。染色体 数2n=40。 图示为吉姆萨染色效果
精选ppt
17
精选ppt
20
思考题
❖ 1．KCl溶液低渗处理与滴片过程在染色体制 片中有何联系，对制片结果各有何影响？
❖ 2．骨髓细胞染色体标本制作时，为什么要采 用冰片滴片？冰片滴片时滴液高度有什么要 求？为什么滴片后要马上吹散？冰片温度为 什么越冰越好？
精选ppt
21
感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络， 如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！
❖ 实验器材
恒温培养箱、普通离心机、显微镜、分析天平、 离心管(5～10 mL)、吸管注射器(5 mL)、100 mL 烧杯、
载玻片 （冰片）
精选ppt
4
3、实验材料
❖ 溶液配制：
➢ (1)0.01％秋水仙素：称10 mg秋水仙素，溶于 100 mL生理盐水中。
➢ (2)低渗溶液：称5.59克KCl溶于1,000 mL蒸馏水 中，其浓度为0.075M。
➢ 2%柠檬酸钠溶液：：称2.28克柠檬酸钠溶于 100ml蒸馏水中。
➢ Giemsa溶液
精选ppt
5
4、实验方法
❖ 主要实验步骤
⑴ 秋水仙素注射
⑵ 解剖小鼠
⑶ 离心
⑷ 低渗
⑸ 固定
⑹ 制备细胞悬浮液
⑺ 滴片
⑻ 空气干燥
⑼ 染色
⑽ 水洗
⑾ 显微镜观察结果
精选ppt
6
方法与步骤
染色等处理，可观察到小鼠染色体。 ❖ ⑷ 这种骨髓染色体制片方法简单，取材容易，
不需无菌条件，方便易行。
精选ppt
2
3、实验材料
❖ 实验动物
健康小鼠(Mus musculus 2n=40)，体重约18～ 20g，雌雄不限。
❖ 试剂
甲醇、冰乙酸、石炭酸品红、秋水仙素、KCl、 生理盐水
精选ppt
3
3、实验材料
5、实验结果与分析讨论
❖ 绘制小鼠骨髓细胞染色体图 ❖ 统计小鼠染色体数目 ❖ 如果有条件时，要进行显微摄影，然后进行
组型分析
精选ppt
18
使用柠檬酸钠的原因：
在临床上采取新鲜血液时,需要加入一些消毒 过的柠檬酸钠,就能起到防止血液凝固的作用,所 以柠檬酸钠被称为抗凝血剂。
枸橼酸根与血中钙离子形成难解离的络合物， 钙离子是凝血过程中所需的物质之一，血液中 钙离子减少，而使血液凝固受阻。
精选ppt
19
低渗的作用：
低渗液是指渗透压和离子强度均低于正常细胞生理条件的 溶液，例如水、低渗的柠檬酸钠或氯化钠、甘油磷酸钾 （0.65M）、氯化钾（0.075M）等。低渗效果取决于低 渗液的化学组成、低渗的温度和处理时间。低渗处理是凭 借反渗透作用使细胞膨胀染色体铺展，同时可使粘附于染 色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察所有染色 体形态。实验室中一般选用0.075M KCl为低渗液（具体情 况取决于实际操作），其优点有：①染色体轮廓清楚，可 染色性强，染色时间短，②用于显带染色时能充分显示带 型特点。低渗处理为37℃，15－25分钟，以预实验条件为 准。
❖ 1、实验目的与要求
⑴ 掌握动物骨髓细胞染色体制备技术 ⑵ 学会动物细胞的滴片方法 ⑶ 观察小白鼠染色体的形态特征和染色体数目
精选ppt
1
2、实验原理
❖ ⑴ 小鼠骨髓细胞 ❖ ⑵ 秋水仙素可破坏骨髓细胞分裂过程中纺锤
体的形成，把分裂细胞阻截在中期。 ❖ ⑶ 通过对小鼠骨髓细胞的低渗、固定、滴片、
9
滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、 肌肉等组织清除干净。
精选ppt
10
加入适量低渗液，用剪刀将骨充分剪碎，并 用吸管吹打，使骨髓细胞全部释放出来。
亦可用注射器抽取柠檬酸铵溶液冲洗骨髓，效果佳
精选ppt
11
将获得的液体收集到离心管中，离心后去上清液，
加低渗液至8ml左右，室温下静置20~30分钟，进行
低渗。低渗结束后，加入1ml左右的Carnoy’s固定液
进行预固定，轻轻混匀后精选，ppt离心。
12
1000转/分，离心10分钟，弃上清，加入固定液， 混匀后，室温放置25分钟，再次离心去上清，重 复固定一次，离心后，向沉淀中加入1ml固定液， 将细胞重悬。
精选ppt
13
预冷的玻片
精选ppt
14
❖取材前3～4 h，向腹 腔内注射秋水仙素。注 射浓度随动物种类不同 而异。秋水仙素的主要 作用是使分裂细胞阻断 在有丝分裂中期，增加 中期分裂相的比例。
精选ppt
7
腹腔内注射秋水仙素3~4小时后， 断头处死小鼠。
精选ppt
8
取出小鼠的后肢骨，注意不要将股骨剪断，否 则容易造成骨髓细胞的流失。
精选ppt
滴片后，将片子晾干，滴加适量Giemsa染液染色 10~15分钟，弃去染液，水洗，镜检。
精选ppt
15
实验结果Байду номын сангаас
苯酚品红染色效果
精选ppt
16
结果显示
在显微镜寻找分散良好的 中期分裂相。小白鼠染色 体一般呈“U”形，都为近 端着丝粒染色体。染色体 数2n=40。 图示为吉姆萨染色效果
精选ppt
17
精选ppt
20
思考题
❖ 1．KCl溶液低渗处理与滴片过程在染色体制 片中有何联系，对制片结果各有何影响？
❖ 2．骨髓细胞染色体标本制作时，为什么要采 用冰片滴片？冰片滴片时滴液高度有什么要 求？为什么滴片后要马上吹散？冰片温度为 什么越冰越好？
精选ppt
21
感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络， 如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！
❖ 实验器材
恒温培养箱、普通离心机、显微镜、分析天平、 离心管(5～10 mL)、吸管注射器(5 mL)、100 mL 烧杯、
载玻片 （冰片）
精选ppt
4
3、实验材料
❖ 溶液配制：
➢ (1)0.01％秋水仙素：称10 mg秋水仙素，溶于 100 mL生理盐水中。
➢ (2)低渗溶液：称5.59克KCl溶于1,000 mL蒸馏水 中，其浓度为0.075M。
➢ 2%柠檬酸钠溶液：：称2.28克柠檬酸钠溶于 100ml蒸馏水中。
➢ Giemsa溶液
精选ppt
5
4、实验方法
❖ 主要实验步骤
⑴ 秋水仙素注射
⑵ 解剖小鼠
⑶ 离心
⑷ 低渗
⑸ 固定
⑹ 制备细胞悬浮液
⑺ 滴片
⑻ 空气干燥
⑼ 染色
⑽ 水洗
⑾ 显微镜观察结果
精选ppt
6
方法与步骤
染色等处理，可观察到小鼠染色体。 ❖ ⑷ 这种骨髓染色体制片方法简单，取材容易，
不需无菌条件，方便易行。
精选ppt
2
3、实验材料
❖ 实验动物
健康小鼠(Mus musculus 2n=40)，体重约18～ 20g，雌雄不限。
❖ 试剂
甲醇、冰乙酸、石炭酸品红、秋水仙素、KCl、 生理盐水
精选ppt
3
3、实验材料
5、实验结果与分析讨论
❖ 绘制小鼠骨髓细胞染色体图 ❖ 统计小鼠染色体数目 ❖ 如果有条件时，要进行显微摄影，然后进行
组型分析
精选ppt
18
使用柠檬酸钠的原因：
在临床上采取新鲜血液时,需要加入一些消毒 过的柠檬酸钠,就能起到防止血液凝固的作用,所 以柠檬酸钠被称为抗凝血剂。
枸橼酸根与血中钙离子形成难解离的络合物， 钙离子是凝血过程中所需的物质之一，血液中 钙离子减少，而使血液凝固受阻。
精选ppt
19
低渗的作用：
低渗液是指渗透压和离子强度均低于正常细胞生理条件的 溶液，例如水、低渗的柠檬酸钠或氯化钠、甘油磷酸钾 （0.65M）、氯化钾（0.075M）等。低渗效果取决于低 渗液的化学组成、低渗的温度和处理时间。低渗处理是凭 借反渗透作用使细胞膨胀染色体铺展，同时可使粘附于染 色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察所有染色 体形态。实验室中一般选用0.075M KCl为低渗液（具体情 况取决于实际操作），其优点有：①染色体轮廓清楚，可 染色性强，染色时间短，②用于显带染色时能充分显示带 型特点。低渗处理为37℃，15－25分钟，以预实验条件为 准。