环境工程微生物学综合实验-
环境工程微生物学试验
将环境工程、生物学、化学等多学科的理论和技术进行整 合，以更全面地理解微生物在环境中的作用。
模拟真实环境
未来试验将更加注重模拟真实环境，以更准确地反映微生 物在自然环境中的行为和功能。
标准化和规范化
随着微生物学试验的不断发展，将需要建立更多的标准化 和规范化操作，以保证试验结果的准确性和可比性。
数据分析
采用统计分析方法，对试验数据进行 处理和分析，得出结论。
03 试验结果与讨论
试验结果呈现
表格呈现
将试验数据整理成表格，包括试验条件、操作步 骤、结果等，方便查看和对比。
图表呈现
将试验结果绘制成图表，如柱状图、折线图等， 直观展示数据的变化趋势和差异。
文字描述
对试验结果进行详细的文字描述，包括数据、现 象、变化规律等，以便深入理解。
试验步骤与操作
试验准备
01
准备好试验所需的菌株、培养基、试剂等材料，准备好试验设行微生物培养、接种、处理等操作，记
录数据。
数据整理与分析
03
对试验数据进行整理、分析，得出结论。
数据记录与分析
数据记录
详细记录试验过程中的数据，包括菌 株生长曲线、污染物降解效率、处理 后水质等指标。
结果解释
结合微生物学、环境工程等相关 知识，对试验结果进行科学解释， 为实际应用提供理论支持。
结果应用
根据试验结果，提出相应的环境 工程措施和建议，为解决实际问 题提供参考和指导。
04 微生物在环境工程中的应 用
污水处理
污水处理原理
生物膜法
利用微生物的代谢作用，将污水中的 有机物转化为稳定的无机物，实现污 水的净化。
环境工程微生物学试验
目录
环境工程微生物学实验答案
1.使用油镜时，为什么要先用低倍镜观察油镜指的是为了减少高倍镜的折光,在物镜和玻片之间滴上松节油等.所以油镜其实就是给高倍镜物镜和玻片之间加油.而所有高倍镜之前都先要用低倍镜观察，是因为低倍镜下好找目标。
低倍镜放大10倍，高倍镜放大40倍，油镜放大100倍，先用低倍镜、高倍镜，既便于找到目标，又方便调焦距。
要使显微镜视野明亮，除采用光源外，还可以采取哪些措施?加大聚光器光圈，同样设置下低倍物镜比高倍物镜视野亮把材料切薄一点透光较好使用滤光片,增加反差和清晰度。
向上调节聚光器。
2.怎样区别活性污泥中的几种固着型纤毛虫大多数情况下，会遇到钟虫、柄纤毛虫、累枝虫等。
三种虫形态均类似钟的形状，钟虫每个都是独立的，相互之间没有连接;柄纤毛虫类似钟虫，量很大，只是在根部汇聚在一根柄上，可以理解成一根柄上分出很多个钟虫；而累枝虫就像是树，一根柄上分出很多个柄，然后很多个柄上又分出很多个“钟虫”。
用压滴法制作标本片时注意什么问题4.涂片为什么要固定，固定时应注意什么问题如果不固定的话你进行染色后水洗去多余染料的同时会将菌体一并冲走注意的就是不要弄死细胞咯！不知道你用什么方法,如果是用火，那就是不要烧死它们,用载玻片背面靠近火源，过两次就好。
Over一般我都是用酒精灯的外焰烤的但是要注意温度.温度过高挥出现变形细胞。
温度已载玻片接触手背,手背不觉得烫为宜.加热只水分蒸发完全后，再在酒精灯外焰上通过两到三次,就成了。
革兰氏染色法中若只做1～4步，不用番红染液复染，能否分辨出革兰氏染色结果？为什么?革兰氏染色在微生物学中有何实践意义？细菌大多可以按照革兰氏法划分,在杀菌方面自然管用，还有实验方面,比方说，实验需要G阳性细菌作为研究材料，如果最后需要杀死细菌获取什么代谢产物，已知是G阳性细菌，那就有目的地杀除了,摒除了盲目手段。
6.培养基是根据什么原理配制成的？肉膏蛋白胨琼脂培养基中的不同成分各起什么作用是按照微生物生长的营养需求及其相互比例配制的.牛肉膏和蛋白胨提供微生物生长所需的蛋白质、核酸和维生素、无机盐（微量元素），琼脂只为培养基提供半固体的支撑结构，不提供微生物生长的营养。
实验四 细菌、真菌、放线菌的分离与培养
实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年 10月16日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。
二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。
在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。
为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。
通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。
挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。
1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。
在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。
2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。
用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。
用途一般多用于筛选菌株。
环境工程微生物学大实验实验报告
环境工程微生物学大实验实验报告实验十二环境中四环素抗性细菌的分离鉴定组员：吴富华，张真，，金炯震环5205一、实验目的1、自行设计实验方案从环境中分离四环素抗性菌的实验方法。
2、分离获得四环素抗行菌。
3、检测并分析获得的菌株的四环素抗性强弱。
4、学会通过16SrDNA鉴定实验获得的菌株的种属。
二、实验要求1、自行设计实验证明富集培养是否成功。
2、观察并记录实验现象，作适当的分析或解释。
3、获得至少一株四环素抗性菌（不要多于三株），并进行短期保存。
4、根据实验视频指导和说明，完成菌株基因组DNA纯化，16SrDNA的PCR扩增。
5、比较各组筛选出的抗性菌抗性强弱。
6、各组间交流实验过程和实验结果，分析抗性菌抗性的影响因素。
7、养成良好的实验习惯和团队合作的作风，并给出评价。
三、实验器材1、培养基（营养琼脂，琼脂粉，酵母膏，胰蛋白胨，氯化钠），提供四环素，琼脂糖，灭菌条件。
2、室温和37℃恒温培养箱和摇床。
3、离心机，漩涡震荡仪，PCR仪，电泳仪，紫外成像分析仪。
四、实验步骤（略）1、配置富集培养基和四环素梯度培养基2、四环素抗性菌富集培养3、单菌株筛选4、四环素抗性强弱比较5、单菌株基因组DNA的提取6、16SrDNA的PCR扩增7、PCR产物电泳实验内容、具体操作单菌株基因组DNA提取（5.17进行步骤1-4；5.18进行步骤5-10；5.20进行步骤11）（1）选择5.8号挑选的菌株进行DNA提取实验；（2）取200μL菌液转移到1.5mL灭过菌的EP管中，10000rpm常温离心1min，去掉上清（得到菌细胞）。
菌细胞可在-20℃冻存。
（3）如果是革兰氏阳性菌，取100μL，1mg/mL的溶菌酶/TE加到菌液中，漩涡震荡混匀，37℃温浴1h（溶菌步骤）。
（4）用取液器（移液枪）缓慢吸加500μL（革兰氏阳性）或600μL（革兰氏阴性）裂解缓冲液和20μL，20mg/mL蛋白酶K（proteinase K），充分混匀，50℃过夜（完全裂解细菌并降解所有蛋白质）。
环境工程微生物学实验
实验器材
（1）活材料：培养18h的大肠杆菌（E. coli）培养液。 （2）培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨液体培养基14支 (每支10ml)，浓缩5倍的牛肉膏蛋白胨培养基。无菌 酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。 （3）器材：1ml无菌吸管、摇床、冰箱、光电比色计、 标签等。
实验方法
1、接种：按无菌操作法用吸管向每管准确加入0.2 ml 的大肠杆菌培养液。 2、培养：将接种后的培养管置于摇床上，在37℃下 振荡培养。其中9支培养管分别于培养的0、1.5、3、5、 7、9、12、24和36h后取出，放冰箱中贮存，待测定。 3、比浊：以未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基调零 点，在光电比色计上，选用520～560nm波长进行比浊， 从最稀浓度的菌悬液开始，依次测定。
实验步骤
1．将肉膏胨淀粉琼脂培养基加热融化，待冷至45℃左右倒入无 菌培养皿内(每皿约10～
15毫升)，共倒3个，静置待冷凝即成平板。
2．在无菌操作条件下，用接种环分别挑取大肠杆菌和活性污泥 各一环分别在4个平板上各点种4个点。倒置于37℃恒温箱内培 养24～48h。
3．观察结果，取出平板，分别在2个平板内菌落周围滴加碘液， 观察菌落周围颜色的变化。若在菌落周围有一个无色的透明圈， 说明该细菌产生淀粉酶并扩散到基质中去。若菌落周围仍为蓝 色，说明该细菌不产生淀粉酶。
实验器材
1．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 2．仪器：电炉、恒温水浴锅．恒温培养箱．放大 镜。 3．试剂：硫代硫酸钠溶液。 4．其他用品：无菌采样瓶，9ml无菌水试管，无菌 培养皿(直径9cm)，无菌移液管等。
实验步骤
1．水样采取 2．细菌总数测定 (1) 水样稀释：根据水样受有机物或粪便污染的程度，可用无
3．高倍镜观察
环境工程微生物学教学的几点实践与体会
环境工程微生物学教学的几点实践与体会随着当前社会科技的不断发展，环境工程微生物学的重要性也日益凸显。
环境工程微生物学是研究利用微生物来修复环境污染和控制环境污染源的一个研究领域。
因此，环境工程微生物学的教学愈发重要。
本文将以我在实践中总结出的几点，来阐述环境工程微生物学的教学。
首先，在环境工程微生物学的教学中，要求学生要培养一定的实验技能，因为实验能够让学生在实际运用中学到的知识更加深入。
因此，我们在上课的时候教学内容尽量以实验为主，而非纯理论概念。
我们重点阐述实验内容，既有理论讲解，又要求学生按照步骤完成实验。
这样一来，学生能够更加深刻的理解环境工程微生物学的内容。
其次，在环境工程微生物学的教学中，要加强对学生思维能力和创新能力的培养。
我们在上课时，不仅要求学生记住实验过程和实验结果，更重要的是要求学生结合实验结果，培养分析思维的能力，形成自己的实验结论。
同时，我们提供一定的实验资源，要求学生根据实验结果，提出自己的新想法。
从而激发学生的创新精神，使他们能够在环境工程微生物学的实践中更有成效。
此外，我们还增加对学生综合能力的训练，为学生提供了许多实战实践机会。
比如，我们设计了一系列的实验任务，要求学生完成整个环境工程微生物学的实验过程。
在完成实验任务的过程中，学生需要学习用微生物来影响环境的一些基本知识，并且结合实际情况，做出正确的分析，最终形成完整的实验报告。
这样，学生不仅能掌握相关知识，而且还能锻炼到综合思维能力，提高自己的实战能力，活跃课堂气氛，提高学习效果。
最后，我们在实践中还发现，实验室安全问题也是教学过程中需要重点考虑的。
比如，实验室中的药物和易燃易爆物品要管理好，以免出现安全事故。
此外，实验室中的设备也要定期维护，以保证使用的安全性。
同时，我们还要加强对学生的安全意识教育，教会他们正确的实验室用途。
总之，环境工程微生物学的教学需要考虑到很多因素。
学生要掌握实验技能，还要提高创新能力，增强实战能力，加强实验室安全意识。
环境工程微生物学实验报告6
一.玻璃器皿的准备
1.玻璃器皿的洗涤
2.玻璃器皿的包装
1移液管的包装；
2培养皿的包装；
3棉塞的制作。
二.培养基的配制
1.按照配方要求配制溶液；
2.根据微生物的生长需求调节PH；
3.过滤杂质；
4.将锥形瓶和试管进行分装加棉塞，包装后灭菌；
5.斜面的制作。
三.稀释水的配备
1.锥形瓶稀释水的配备
2.试管稀释水的配备
四.灭菌
1.干热灭菌法
2.加压蒸汽灭菌法
注意事项：
1.在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气要尽可能排除完；
2.易燃易爆物品（如：硝化甘油、硝化纤维、黄磷、红磷、乙醚、汽油及可燃性气体等）不能用高压灭菌法灭菌；
3.当含盐类的液体和含盐的琼脂中大量的盐类泼洒在工作腔体，要立即换水，冲洗腔体，仔细擦干锅盖垫圈上的水滴。否则它们会带来腐蚀和变质。要检查压力表பைடு நூலகம்的指数为“0Mpa”后才能打开锅盖。
4.外来物质（金属、液体）不能堵塞通风孔，否则会引起装置故障、起火、短路。
思考题：
1.培养基是根据什么原理配成的？牛肉膏、蛋白胨、琼脂在培养基中的不同成分哥起什么作用？
答：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，有碳、氢‘氧、氮、磷、硫、钾、钙、钠、镁、铁、等微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。调整适合的ph，经高温灭菌后以备培养微生物之用。其中的牛肉膏为微生物提供碳源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，琼脂凝固后可以成型，产生一定机械强度，为培养基里其他的营养物质提供支撑介质。
实验六、培养基的配制和灭菌
实验目的：
1.熟悉玻璃器皿的洗涤及灭菌前的准备工作；
环境工程微生物学实验
（1）试管编号；
（2）2只试管分别穿刺接种大肠杆菌和变形杆菌； （3）37 ℃ ，培养24h 3、柠檬酸盐利用试验
（1）试管编号；
（2）2只试管分别划线接种大肠杆菌和枯草杆菌； （3）37 ℃ ，培养24h
四、实验结果观察与记录
1、将实验结果填入下表，＋表示阳性，－表示阴性。 2、思考题：微生物生理生化反应的意义何在？
三操作步骤1微生物大小的测量1枯草杆菌标本片的制作2目镜测微尺的标定放置镜台测微尺放置目镜测微尺校正目镜测微尺计算不同放大倍数下目镜测微尺每格代表的长度3枯草杆菌大小的测量四实验报告1将目镜测微尺校正结果填入下表接物镜接物镜倍数目镜测微尺目镜测微尺每格代表的长度2在高倍镜下测量枯草杆菌大小的实验结果填入下表菌体编号长度的目镜测微尺格数宽度的目镜测微尺格数平均值菌体大小平均值m3分析实验结果一实验目的明确显微镜计数的原理
酵母菌的形态构造
线 粒 体 芽体液泡 芽 体 核 液 泡 膜 细 胞 壁 细 胞 膜
根霉（Rhizopus)
青霉（Penicillum):
曲霉(Aspergillus)
四、实验报告
1. 分析实验结果，绘制酵母菌、青霉、黑曲霉的形
态图，并注明各部位名称，。 2. 怎样才能观察到较为完整的霉菌形态，各种霉菌 制片过程中分别有哪些注意事项？
121℃,灭菌20~30min
使用时, 将培养基加热融化, 待温度降至50 ℃左右时在 100mL培养基中加入1%链霉素0.3mL
糖发酵培养基：
蛋白胨2g，葡萄糖10g， K2HPO4 0.2g, NaCl 5g, 琼脂5～6g， pH7.0～7.2 ，蒸馏水1L ， 1%溴百里酚蓝 3ml. 分装试管，每管4～5cm， 112℃,灭菌30min.
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环境工程微生物学综合实验- 功能菌（絮凝菌）的分离、筛选与性能研究实验须知*一、环境工程微生物学实验目的1. 通过实验进一步加深理解课堂讲授的理论内容。
2. 训练学生掌握微生物学最基本的操作技能，建立无菌概念并掌握无菌操作技术。
通过实验，培养学生分析问题、解决问题的能力及创新能力，提高学生的综合素质，为将来能够独立工作打下坚实的基础。
二、环境工程微生物学实验基本要求1. 每次实验前必须对实验内容进行充分预习，弄清实验目的、原理及操作步骤，以免手忙脚乱，影响实验课效果。
2. 实验前，按内容要求仔细检查所需仪器、药品是否齐全，若有问题及时提出。
3. 整个实验过程要严格按操作步骤进行，不得马马糊糊，否则会造成错误，甚至出现事故。
4. 实验过程中要做好记录，特别是对于连续观察的实验，必须认真记下每次观察到的现象与结果，然后进行整理分析，写出实验报告。
5. 使用贵重精密仪器时要特别小心，注意保护，用毕要复原，并进行登记。
实验使用的一切物品实验完毕均放回原处。
损坏仪器照价赔偿。
6. 实验室要保持整洁、干净，不准大声喧哗，勿随意走动，严禁吸烟，不许吃东西，不准随便乱丢废物。
7. 实验过程中，一些易燃品如乙醇、丙酮等切勿接近火焰。
如遇火险，要先切断火源，再用沙土或湿布灭火，必要时应使用灭火器。
8. 使用过的废液及琼脂培养基不得直接倒入水池内，应先进行灭菌处理，然后再将废液倒入下水道，将琼脂培养基埋掉。
9. 离开实验室前要将桌面擦净，清扫卫生，检查电源、火源、自来水、门窗是否关闭，以确保安全。
实验一、絮凝菌分离、筛选准备实验（器皿的包装、无菌水、培养基的制备与灭菌）一、器皿的包装（一）实验目的学会微生物技术实验中所用器皿的包装方法及意义。
（二）包装方法1.培养皿的包装用牛皮纸或旧报纸进行包装。
包好后灭菌备用。
2. 吸管的包装在已干燥的吸管的平头端距0.5cm处，塞长约1.5cm的棉花，松紧要合适。
过松，棉花易脱出；过紧，吹吸费力，甚至吹吸不动。
棉花的作用是防止吸管中的细菌吸入口中，同时又防止口中的细菌吹入管中。
将塞好棉花的吸管的尖端，放在裁成4cm ~ 5cm宽的长报纸条的一端，吸管与纸条约成45º角。
折叠纸角，包住吸管尖端，然后以螺旋式在桌面上用力向前搓转，纸条将吸管包紧，余下的纸尾打成结。
将这样包好的几根或几十根吸管放一起，再用一张牛皮纸或两张报纸包装，然后干热灭菌。
3.三角瓶的包装在三角瓶的瓶口上塞上合适大小的瓶塞（棉塞或泡膜塑料塞），在瓶口外面包上2层至 3层报纸，扎好灭菌。
若进行湿热灭菌，最好再包一层牛皮纸或铝铂，以免打湿棉塞。
二、培养基的制备与灭菌（一）实验目的1．掌握培养基和无菌水的制备方法。
2．掌握高压蒸汽灭菌技术。
3．了解灭菌前的准备工作。
（二）材料1．培养皿（直径9cm）4套、移液管（10毫升、1毫升）、三角瓶（250毫升、150毫升、50毫升）、烧杯、量筒（100毫升）、漏斗、漏斗架；2．牛皮纸（或报纸）、纱布、棉花；3.玻璃珠、蒸馏水(配培养基用)；4.分离培养基：营养琼脂培养基；5.筛选培养基{发酵培养基（g/L）}：葡萄糖20 g , KH2PO42g , K2HPO45g , (NH4)2SO40.2g ,NaCl 0.1g ,尿素0.5g ,酵母膏0.5g）。
5.高压蒸汽灭菌锅、摇床、烘箱、电炉、冰箱等。
（三）操作步骤1．无菌水的制备在150mL三角瓶中加90mL蒸馏水，放20粒 ~ 40粒玻璃珠（用以打碎污泥颗粒，使其中的微生物游离出来），塞上硅胶塞，包扎好，灭菌备用。
2.培养基的制备（1）制备培养基的过程及要求①配制取一合适的干净烧杯，先加入一定量的蒸馏水，按培养基的配方依次称取各种成分，并依次加入蒸馏水中。
在有石棉网的电炉上加热，用玻璃棒不断地搅动，待药品全部溶解后，补加蒸馏水至所配体积。
若配制固体培养基，将琼脂加入继续搅拌，以防糊底。
②分装将配好的培养基分装于三角烧瓶中。
分装时培养基不能滴到瓶口上，以防瓶塞被污染。
分装量视需要及容器大小而定。
液体培养基的高度为容器高度的1/4～1/3。
（2）肉膏蛋白胨琼脂培养基的制备按说明称取一定量的营养琼脂培养基于250毫升三角瓶中，根据（1）进行配制，趁热分装，塞好棉塞，包上牛皮纸，扎好，灭菌。
3.高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌法是利用高压蒸气锅进行灭菌的方法。
高压蒸气灭菌锅有自控式和非自控式两类。
实验室通常采用的是非自控式高压蒸气灭菌锅。
非自控式高压蒸气灭菌锅又分为手提式和卧式两种，其结构和基本原理相同。
压力锅上主要有压力表、加水口、排水口、安全阀、放气阀等；热源有电炉、煤气或蒸气。
高压蒸气灭菌锅的操作步骤及注意事项：（1）加水热源为蒸气的不需加水。
若为煤气灯或电炉的则应先加水（由加水口加水至水线）。
（2）将待灭菌的物品装进灭菌锅内（注意：物品不能放得太紧，否则，达不到灭菌效果），关严锅盖，同时拧紧对角线的一对螺旋，勿漏气。
（3）点火若为电源要插好插头，或打开开关；若为蒸气要缓慢地打开蒸气进口，蒸气不可过猛冲入锅内。
（4）锅内水沸腾后或压力为0.35kg/cm2时，开启放气阀，利用蒸气驱走锅内空气。
过几分钟，待达到100ºC或放出白色蒸气时，表明空气确已除尽，关闭放气阀（请注意：空气一定要排尽，否则，达不到一定压力时的相应温度，影响灭菌效果）。
（5）关闭放气阀后，随着蒸气的增多，锅内温度和压力随之升高，当达到所需压力时，即灭菌开始，此时要控制热源，以维持所需要的压力。
不同的物品，所需压力及灭菌时间长短不同。
牛肉膏蛋白胨培养基用1.05kg/cm2，灭菌20min；玻璃器皿和无菌水用1.05kg/cm2，灭菌30min。
（6）到预定灭菌时间后，切断热源，自然降压，指针回“0”时，打开排气阀（应注意：排气阀不能早早打开，以防因压力突然下降，培养基冲出，造成损失且弄湿棉塞）。
（7）揭开锅盖，取出物品，将剩余的水放掉。
（8）待已灭菌的物品（装有牛肉膏琼脂的试管除外）冷却后置于37ºC恒温箱内培养24h，若无细菌生长，贮于冰箱或阴凉处备用。
4.筛选模型的建立样品采集→稀释→富集培养→平板划线→挑菌落→纯化培养→初筛→富集培养→复筛→高效絮凝剂产生菌。
5.记录结果（1）你所做的培养基有无异常现象出现？请分析原因。
（2）培养不同种类的微生物能否用同一种培养基？请说明理由。
思考题1.请回答高压蒸气灭菌的操作及注意事项。
2.牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中各成分的作用是什么？该培养基适于培养哪类微生物？3.配培养基时能否用自来水代替蒸馏水？为什么？实验2 絮凝菌的分离一、实验目的1．熟练掌握接种方法；2. 掌握纯种分离技术。
二、实验原理在土壤、活性污泥及生物膜等构筑物中，微生物都是以群体形式混杂在一起的，要了解其微生物间的相互关系、降解机理及优势类群，需要进行纯种分离。
纯种分离工作对污染控制也具有特别重要的意义。
将从自然环境中分离到的有着特殊降解能力的高效菌种，投放到处理系统中，可强化系统的处理能力，提高其处理效果。
要想得到某微生物的纯种，通常是根据其对营养、温度、pH值、溶解氧等条件的要求，选择不同的培养基，在一定的条件下进行培养，再用经过分离、纯化，直至得到纯菌体。
微生物絮凝剂是一类由微生物或其分泌物产生的高效、无毒、能生物降解的水处理剂,它克服了常规的无机絮凝剂和有机絮凝剂对人体有害和产生二次污染的缺点。
能产生絮凝性的微生物种类多,且具有广谱絮凝活性,因而具有广阔的应用前景。
目前,生物絮凝剂研制的关键问题是成本过高,因此,筛选高效絮凝剂产生菌,提高絮凝活性,降低成本成为生物絮凝剂研究工作者的首要任务。
三、仪器、材料1．显微镜、恒温培养箱、酒精灯、接种环、载玻片、擦镜纸、香柏油、二甲苯。
2 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、斜面培养基、无菌水、灭菌移液管、灭菌三角瓶、灭菌培养皿等。
以上材料均由实验1备妥。
四、操作步骤1．取样用无菌三角瓶取一定量的有代表性的活性污泥或生物膜样品，立即送实验室检测。
若不能马上处理，必须存入冰箱，但不得超过12h。
2．样品处理取20g （或适量）样品放入内有玻璃珠的无菌水中，振荡20min，将团粒打碎。
3．制平板将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基融化，然后冷却至45ºC左右，以无菌操作，倾注于无菌培养皿内，其厚度约为0.3㎝。
根据经验，直径为9㎝的培养皿一般倾注15mL～20mL培养基为宜。
倾注前，应先将盛有培养基的容器瓶口或管口于火焰上转烧一圈。
培养基注入后，立即盖好皿盖，平放于桌面上，轻轻转动，待凝固后，即成平板。
4.稀释分离（1）样品稀释称取10g样品，以无菌操作加到90mL 无菌水（内有玻璃珠）中，振荡，摇匀，浓度即为10-1的菌液。
（2）样品处理将稀释好的样品放于水浴锅（80度）处理25分钟。
（3）倒平板将培养皿编号。
在无菌条件下，先用1支1mL 移液管吸1mL菌液注入已编号的培养皿中。
每个培养皿中加入已融化且冷却至45ºC左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（注意：温度过高易将细菌烫死；过低易凝固），迅速轻轻地在平面上转动，使培养基与稀释液混匀（注意：不能沾到培养皿内壁上或溢出皿外）。
冷却后，30ºC恒温倒置培养48h，取出，放于冰箱停止培养，为实验3备用。
思考题1.絮凝菌的筛选为何先进行分离？2.怎样才能达到最好的分离效果？实验3 絮凝菌的筛选及絮凝性能的研究一、实验目的1.理解微生物的筛选概念2.掌握微生物筛选方法二、材料发酵培养基（由实验1准备）；4g/L高岭土悬浊液；5mL1%(wt %)CaCl2三、操作步骤1.3 筛选方法用接种环将实验三分离到的菌种接种到装有40ml发酵培养液的200ml三角瓶中进行预发酵培养,温度设定为30℃,摇床转速为160r/min ,18～24h后,按2.5 %的接种量将预发酵培养液接种到发酵培养基中进行发酵培养72 h (温度和摇床转速与预发酵同)。
通过测定各培养液的絮凝率进行初筛,对初筛获得的菌进行平行发酵培养,将絮凝率较高且稳定性较好的菌株作为复筛菌种。
1.4 絮凝剂样品的制备将发酵液于12000r/min 离心10min ,取上清液作为絮凝剂样品.1.5初筛，2mL培在100mL量筒中加入93mL 4g/L高岭土悬浊液，5mL1%(wt %)CaCl2养液，将量筒颠倒3～5次,目测,使高岭土悬浊液絮凝成较大絮状体的为有絮凝活性的菌株。
1.6 复筛在100mL量筒中加入80mL蒸馏水,0.4g高岭土,5mL1%的CaCl溶液,2mL絮凝剂2样品,然后加蒸馏水至100mL,调节pH 至7.0,溶液倒入150mL 烧杯中,放在磁力搅拌器上快速搅拌1min,慢速搅拌3min,静置3min,用吸管吸取一定深度的液层于722型分光光度计550nm处测定吸光度,以不加发酵液的吸光度为对照来确定菌发酵液的絮凝程度。