微生物限度与无菌-内毒素区别
微生物检验技术总结
微生物检验技术总结微生物检验技术总结微生物检验技术总结一．名词解释1.微生物：一群肉眼看不见的微小生物，如细菌、真菌、病毒。
必须借助于光学显微镜或电子显微镜放大数百倍，千倍，甚至数万倍才能观察到的低等生物体。
2.细菌：是一类体积微小，结构简单，以二分裂的方式繁殖，对抗生素敏感的原核细胞型单细胞微生物。
3.细菌的生化反应：利用生化试验检测细菌对各类基质的代谢作用及其代谢产物的试验方法。
4.内毒素：是革兰阴性菌细胞壁的脂多糖，当菌体死亡崩解后，才可释放到菌体外。
5.外毒素：是由革兰阳性菌及部分革兰阴性在生活过程中合成并可释放到菌体外的毒性蛋白质，毒性强而且有高度的选择性。
6.抗生素：是由某些微生物在代谢过程中产生的、能抑制或杀灭某些其他微生物和肿瘤细胞的微量生物活性物质。
7.正常菌群：在正常情况下，人体的体表及其与外界相通的腔道，（上呼吸道、口腔、泌尿生殖）都有一定种类和数量的微生物寄生，这些微生物通常对人体是无害的，甚至有益，8.条件致病菌：在正常情况下不致病，但在特定条件下能引起疾病的菌群，称为条件致病或机会致病菌。
9.菌群失调：是指宿主某些部位正常菌群中各菌群之间的比例发生了大幅度的变化，由生理性组合转变为病理性组合的状态。
10.消毒;是指杀死物体上的病原微生物但不一定能杀死细菌芽孢的方法。
11.灭菌：是指杀灭物体上所有的微生物（包括病源微生物、非病源微生物、和细菌芽孢）的方法12.无菌：是指没有活的微生物存在。
13.无菌操作：防止微生物进入机体或其他操作对象的方法，二．填空题1.微生物的类型：非细胞性微生物（病毒），原核细胞型微生物（细菌、放线菌、衣原体、支原体），真核细胞性微生物（真菌）2.寄居于人类的微生物可分为：（1）正常微生物群或正常菌群（2）条件致病微生物（3）病源微生物3.革兰阳性菌细胞壁特有组分a)磷壁酸;由核糖醇和甘油残基经磷酸二酯键交联而成的多聚物。
b)磷壁酸功能：抗原性强，是阳性菌表面重要抗原（分型），并与细菌的黏附（致病）有关。
药品GMP检查中清洁验证常见问题
药品GMP检查中清洁验证常见问题1、清洁目标物的选择及限度的确定清洁目标物即清洁验证中需关注的残留物，对于非无菌生产过程，通常包括活性成分、微生物和清洁剂；对于无菌生产过程，还加入细菌内毒素。
在原料药内控标准中，对细菌内毒素有具体要求，清洁验证也应考察细菌内毒素残留。
根据风险分析结果，也可增加其他可能存在的残留。
在检查中发现，有的企业在选择清洁目标物时，缺少充分的评估。
如某厂原料药盐酸法舒地尔洁净区玻璃反应釜的清洁验证文件中，缺少细菌内毒素控制分析数据及评估，而内控标准中对内毒素有要求；又如某厂原料药次水杨酸锐在清洁验证报告中缺少产品溶解性、化学残留物、稳定性的内容，对清洁目标物的评估不充分。
对于专用生产设备，有的企业未经必要的风险评估确定合适的清洁目标物。
如某厂口服混悬剂虽为专线生产，但化合物本身易降解为氧化型产物，且处方中添加了蔗糖等矫味剂，在清洁验证时仅作了目检，未对可能的降解产物、微生物残留进行测定考察。
1.1活性成分清洁目标物中活性成分的确定需经过风险评估，充分考虑其溶解度、清洁难易程度、毒性和效价、稳定性等，以确定最差条件［3］。
如某厂共线生产20%甘露醇、0.2%乳酸左氧氟沙星、0.4%甲硝嗖等注射剂，以水为清洁剂；虽乳酸左氧氟沙星、甲硝嗖属于微溶于水的化合物，但因为甘露醇注射液浓度为20%,其易结晶难洗，故选择了甘露醇作为清洁目标化合物。
又如，某厂药膏涂布机清洁验证仅进行了不挥发物检测，未考虑活性成分含辣椒素、生物碱、薄荷脑、樟脑等易溶或可溶的化合物；经整改评估后，最终选择生物碱为目标化合物。
再如，某湿法混合制粒机，清洁目标化合物的选择比较困难，因共线品种有非洛地平缓释片、阿奇霉素分散片、复方曲尼司特片等；其中非洛地平、阿奇霉素溶解度较差，两者日治疗剂量分别为2.5mg、167mg,最终选择日治疗剂量小的非洛地平为目标化合物。
1.2微生物和细菌内毒素在检查中发现，有的企业对生产设备和器具未制定清洁后的保存时效，缺少微生物等方面的数据支持。
微生物限度3篇
微生物限度第一篇：微生物限度的概念和意义微生物限度是一种质量控制方法，用于确保制药、食品和化妆品等产品中微生物的数量不超过一定限度。
微生物限度的主要目的是确保产品的安全性和稳定性，防止因微生物污染导致的品质问题和健康问题的发生。
本文将探讨微生物限度的概念和意义。
概念微生物限度是指微生物在一定量的样品中的可接受数量范围。
它是用来评估和规定一种产品是否符合微生物质量要求的标准。
微生物限度的标准和方法在各个行业之间可能有所不同，但通常都基于该行业的相关规定和标准。
微生物限度测试可用于监测产品中可能存在的各种微生物，如细菌、真菌和酵母等。
在制药和医疗行业中，微生物限度测试通常用于检验药品、生物制品和医疗器械等产品的微生物质量。
在食品和饮料行业中，微生物限度测试通常用于检验各种食品和饮料的微生物数量。
在化妆品行业中，微生物限度测试通常用于检验各种化妆品的微生物数量，例如面霜、洗发水、护肤品等。
意义微生物限度测试对于各行业的产品质量和安全性有着重要的意义。
下面列举了微生物限度测试的几个方面的重要性：1.保证产品的安全性微生物污染对于医药、食品、化妆品等产品的安全性是一个很大的威胁。
微生物限度测试能够监测产品中可能存在的各种微生物，并评估其数量是否达到安全标准。
如果产品中微生物数量超出安全标准，就会导致产品不安全，可能会对人们的健康造成危害。
因此，微生物限度测试对于确保产品的安全性至关重要。
2.控制产品的质量微生物限度测试可用于监测产品的微生物质量，并确保产品符合质量规定。
如果产品中微生物数量达到或超出了可接受范围，就说明产品质量不佳。
这可能是由于制造或存储过程中的污染导致的，或者可能是产品本身存在质量问题。
微生物限度测试可帮助制造商识别这些问题并采取行动来改进产品。
3.确保产品的稳定性微生物限度测试可用于监测产品的微生物质量，并确保产品的稳定性。
如果产品中微生物数量达到或超出了可接受范围，就说明产品的稳定性可能受到影响。
药品生物检定技术简介
门冬酰胺酶（抗肿瘤药） Ch.P（2005）二部 本品系自埃希大肠杆菌（E.coli ASI.357）
或欧文菌（Er-winia casotovora）中提取制备的 具有酰氨基水解作用的酶。
肝素钠（抗凝血药） Ch.P（2005）二部 本品系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨
基葡聚糖的钠盐，属黏多糖类物质。
小包装容器的数量。
例：2支（瓶）/2板×12粒
检查量：指一次试验所用供试品的总量
（g 或 ML）
例： 2×10=20ML
24×0.25=6g
2、对照试验： 阳性对照
阴性对照
9
3、检查方法：
a、薄膜过滤法：应用广、准确性高，适用 于任何药品、尤其是具有抑菌作用的
。
b、直接接种法：操作简便，适用于无 抑菌 作用的供试品。
中文名称
英文名或缩写
适应症
重组人干扰素a1b
rhuIFNaIb
上皮生长因子
(EGF)
粒细胞集落刺激因子
(GCSF)
粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF)
红细胞生成素
(EPO)
溶栓药物链激酶
(SK)
重组人胰岛素
Humulin
Novolin
Humalog
白细胞介素-2
rhuIL-2
治疗病毒性角膜炎 烧伤或创伤治疗外用药物
细胞因子类（重组人干扰素）
生长因子类（重组人表皮生长因子）
激素类（重组人胰岛素）
酶类（重组链激酶）
疫苗（重组乙型肝炎疫苗）
单克隆抗体
37
重组DNA技术
38
国外重组DNA制品
中文名称
英文名或缩写
适应症
胰岛素
1168《药品生物检定技术》西南大学网教22秋作业参考答案
1168 20222判断题1、由于使用和要求不同，标准品可分为国际、国家、工作用三级标准。
( ). A.√. B.×2、实验动物的分组不管采用什么方法，重要的是不要受到主观愿烈的影响。
（）. A.√. B.×3、处于未完全密封状态下产品的操作和转运，如产品灌装（或灌封）、分装、压塞、轧盖等应在A级或B级背景下局部A级环境下完成。
（）. A.√. B.×4、在破伤风梭菌毒力实验中，小白鼠强直性痉挛，抽搐。
呈现弓背反张，腿部强直，尾巴竖立等症状，最后死亡，即为阳性反应。
（）. A.√. B.×5、每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。
（）. A.√. B.×6、在药品的微生物检验中，若作静置培养，则100 ml培养基/250 ml的三角瓶，最多不能超过150 ml培养基/250 ml的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌。
（）. A.√. B.×7、微生物限度检查应在环境洁净度为不低于D级背景下的B级单向流空气区域内进行，检验全过程需严格遵守无菌操作,防止再污染。
（）. A.√. B.×8、在控制菌检查中，白色念珠菌和黑曲霉均接入玫瑰红钠琼脂培养基中，作适应性检查。
（）. A.√. B.×9、药物微生物总数检测时，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30〜35 ℃培养3〜5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20〜25 ℃培养5〜7天。
（）. A.√. B.×10、霉菌、酵母菌计数平板倒置于23-28℃培养箱中培养24 h。
（）. A.√. B.×11、单向流系沿单一方向呈平行流线并且与气流方向垂直的断面上风速均匀的气流，所以仅有垂直单向流。
（）. A.√. B.×12、空态系指洁净室（区）在净化空气调节系统已安装完毕且功能完备的情况下，但是没有生产设备、原材料或人员的状态。
（）. A.√. B.×13、IMVC试验是指靛基质试验(I)、甲基红试验(M)、乙酰甲基甲醇试验(V)、枸橼酸盐试验(C)，主要用于金黄色葡萄球菌检测。
几种灭菌法的优缺点及技术参数
几种常用 灭菌法 的优缺点及技术参数灭菌法系指用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物杀灭或除去，从而使物品残存活微生物的概率下降至预期的无菌保证水平的方法。
本法适用于制剂、原料、辅料及医疗器械等物品的灭菌。
无菌物品是指物品中不含任何活的微生物。
对于任何一批灭菌产物品来说而言，绝对无菌既无法保证也无法用试验来证实。
一批物品的无菌特性只能相对地通过物品中活微生物的概率低至某个可接受的水平来表述，即无菌保证水平(Sterility assurance level，简称SAL)。
实际生产过程中，灭菌是指将物品中污染微生物的残存概率下降至一定水平，以无菌保证水平SAL（sterility assurance level）表示预期的无菌保证水平。
最终灭菌的产物品微生物存活概率，即无菌保证水平不得高于10-6。
已灭菌产物品达到的无菌保证水平可通过验证确定。
灭菌产物品的无菌保证不能依赖于最终产品的无菌检验，而是取决于生产过程中采用合格的灭菌工艺、严格的GMP管理和良好的无菌保证体系。
灭菌工艺的确定应综合考虑被灭菌物品的性质、灭菌方法的有效性和经济性、灭菌后物品的完整性和稳定性等因素。
灭菌程序的验证是无菌保证的必要条件。
灭菌程序经验证后，方可交付正式使用。
验证内容包括：(1)撰写验证方案及制定评估标准。
(2)确认灭菌设备技术资料齐全、安装正确，并能处于正常运行（安装确认）。
(3)确认关键控制设备和仪表灭菌设备、关键控制和记录系统能在规定的参数范围内正常运行（运行确认）。
(4)采用被灭菌物品或模拟物品按预定灭菌程序进行重复试验，确认灭菌效果各关键工艺参数符合预定标准，确定经灭菌物品的无菌保证水平符合规定（性能确认）。
(5)汇总并完善各种文件和记录，撰写验证报告。
日常生产中，应对灭菌程序的运行情况进行监控，确认关键参数（如温度、压力、时间、湿度、灭菌气体浓度及吸收的辐照剂量等）均在验证确定的范围内。
灭菌程序应定期进行再验证。
无菌、微生物限度、细菌内毒素方法学验证
无菌检查验证用菌株：
金黄色葡萄萄球菌 (Staphylococcus aureus) [CMCC(B) 26 003] 铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa) [CMCC(B) 10 104] **拟修订为大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) [CMCC(B) 63 501] 生孢梭菌 (Clostridium sporogenes) [CMCC(B) 64 941] 白色念珠菌 (Candida albicans) [CMCC(F) 98 001] 黑曲霉 (Asperglllus niger) [CMCC(F) 98 003]
直接接种法
取符合直接接种法培养基用量要求的硫 乙醇酸盐流体培养基8管，分别接入小于 100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞 菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2管；取 符合直接接种法培养基用量要求的改良 马丁培养基4管，分别接入小于100cfu的 白色念珠茵、黑曲霉各2管。其中1管接 人规定量的供试品，另1管作为对照，按 规定的温度培养3～5天。
验证的目的是为了确认试验中供试品应 选择药典中所收载的何种供试液制备方 法、何种测定方法及确定的检测系统是 否适用于该供试品的检验，即只有通过 方法验证，才能确定供试品的检验条件 和方法，保证“微生物限度检查”或 “无菌检查”方法的科学性和检验结果 的准确性。
2．不同企业生产的相同品种，特别是中
问题：方法选择错误
薄膜过滤法和直接接种法 如：一般供试品（无特殊说明）采用直接接种法 某厂家胸腺五肽注射液为普通注射剂，完全可以 采用薄膜过滤法，生产单位进行的无菌检查验证 法为直接接种法。 也有的厂家把两种方法的验证都写上，结论中也 没有说明采用那种方法。 CP2005：无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种 法，只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤法。 修订：改为薄膜过滤法重新进行验证。
无菌、微生物限度检查及方法验证
此法为实验室工作用菌种的最常用的保藏方法，仅能用于工作用菌种的短期保藏。
8
琼脂斜面低温保藏法保藏法（厂家常用）
保藏芽胞液对
产芽胞的微生物宜制成芽胞菌悬液后再保藏， 无菌操作，取1ml孢子液接入茄形瓶或培养皿内，轻轻转动使菌液均匀分布于培养基表面。 将培养皿在适当的温度下培养。一般需要7天或更长时间 在层流台下，取3~5ml氯化钠磷酸盐缓冲液（pH7.0）加入培养皿内 用无菌玻璃L棒轻轻刮下菌苔，注意不要划破培养基。 用无菌注射器或无菌吸管吸取菌悬液，收集于试管中。 将收集的芽胞液放在80~90℃水浴中加热15分钟，冷却。 做好标记，放至2~8℃冰箱中保藏。原始芽胞液可保存1年。 每次使用前用平皿法重新标定其浓度。
微生物实验室的质量管理
设施—洁净室、净化工作台、生物安全柜。 设备—高压蒸汽灭菌器、电热恒温干烤箱、培养箱、冰箱。 实验仪器—全封闭薄膜过滤装置、电动匀浆仪、电热恒温水浴箱、离心机、显微镜，及刻度吸管、试管、三角烧瓶、培养皿等。 建立主要设施、设备、仪器的明细记录，内容包括名称、型号、生产厂家、购买日期。 质量保证档案：购买发票、安装验收或开箱验收记录、调试记录、计量检定或运行校验合格证、指定专人负责、制订标准操作规程（SOP）、建立使用登记册，维修、保养记录、改造或更新记录、直至报废记录。
记录温湿度是否在规定的范围内，每次实验时，对操作室和层流台做微生物沉降菌落计数并记录；如发现问题应找原因，及时报修和报告并将报修原因和结果记录归档。如遇停电，应立即停止实验，重新进入无菌室前，至少开启机房运转1小时以上。
实验室使用管理
微生物实验室的质量管理
平时实验室内应尽可能减少人员的走动或活动，通向洁净室的门要关闭或安装自动闭门器使其保持关闭状态。
枯草芽孢杆菌 [CMCC（B）63501] 金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003] 生孢梭菌 [CMCC（B）64941] 铜绿假单胞菌 [CMCC（B）10104] 大肠埃希菌 [CMCC（B）44102] 乙型副伤寒沙门菌 [CMCC（B）50094] 白色念珠菌 [CMCC（B）98001] 黑曲霉 [CMCC（B）9 003]
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微生物限度-无菌-内毒素区别与联系
微生物检测基本就这3项了。
微生物限度：用营养琼脂、玫瑰红钠培养。
洁净度中等操作台内进行（B级)
无菌：硫乙醇酸盐、改良马丁在无菌套筒里操作并培养。
洁净度要求较高(A级）
内毒素：鲎试剂稀释不同浓度来判定。
洁净度要求不高，D级情况下即可。
我的理解微生物泛指细菌和霉菌酵母菌等等、应该是包罗万象，各种杂菌都有
无菌则也是各种杂菌与微生物限度检测的微生物有什么区别？
内毒素是一种热源，服用没什么关系，在注射后容易导致人体发热。
内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，叫做脂多糖。
脂多糖对宿主是有毒性的。
内毒素只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，所以叫做内毒素。
耐高温
比如说注射液产品用气接触产品，他应该用滤器过滤其他吧。
用膜直径改用0.45（过滤）的好还是0.22（除菌）的好？滤膜泡点肯定要做的，高风险产品应该要最少2层滤膜吧。
用了这滤膜可以不用检这3项还是要检其中项目？而且有的企业只是一年验证一下，不对气体日常可行吗？
求大神详解3者的联系与区别，各什么时候需要检这3项及为什么。
答：微生物限度针对非无菌产品
无菌和内毒素针对无菌产品。
微生物限度，无菌检验，内毒素检验均为供试品安全性检测。
主要区别是微生物限度，无菌检验是检验活的微生物方法，内毒素检验可以检验死去的微生物中内毒素含量。
什么时候选用不同的检验方法，主要参见药典要求，例如口服制剂选择微生物限度，注射剂和眼用制剂选择无菌检验，注射剂也需要做内毒素检验。
选择不同实验方法主要依据是供试品生物风险级别和供试品用途。
例如纯化水检验中不需做内毒素实验，注射用水检验中不需做无菌实验。
依据是纯化水主要用途为清洗，注射用水用途是配液，所以注射用水的微生物风险更高，需要做内毒素实验，控制风险。
微生物限度和无菌实验用具要求无菌，内毒素实验用具要求去除内毒素。
检验环境要求
现行药典微生物限度和无菌实验均是C级下局部A级，微生物限度在超净工作
台，无菌实验在生物安全柜内操作。
也可以选择D级下隔离系统中操作。
内毒素实验对环境无要求，在普通操作台上操作即可。