土壤中微生物的分离纯化(电子版实验报告)
土壤分离微生物实验报告
土壤分离微生物实验报告大学土壤微生物分离实验报告从土壤中分离纯化培养微生物并作初步观察鉴定【摘要】利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离与纯化，根据细菌在选择培养基的存活情况，确定该菌种的固氮解磷解钾属性。
【关键词】细菌芽孢杆菌培养基、选择培养基的配制高压蒸汽灭菌前言：在自然条件下，微生物常常在各种生态系统中群居杂聚。
群落是不同种类微物的混和体。
为了生产和科研的需要，人们往往需要从自然界混杂的微生物群体中分离出具有特殊功能的纯种微生物；或重新分离被其他微生物污染或因自发突变而丧失原有优良性状的菌株；或通过诱变及遗传改造后选出优良性状的突变株及重组株。
这种获得单一菌株纯培养的方法称为微生物的分离纯化技术。
分离纯化技术主要由采集样品、富集培养、纯种分离和性能测定等几个基本环节组成。
实验目的：1、学习从土壤中分离、纯化微生物的原理与方法。
2、学习、掌握微生物的鉴定方法。
3、对提取的土样进行微生物选择培养、分离、纯化，根据菌落的存活状况来判断未知菌的属性。
实验原理：菌种来源:选择无机磷农药含量较高的土壤,有机磷农药化工厂旁边的土壤和排污口区的污水.培养基的选取：五组选择培养基，分别以辛硫磷、甲胺磷、敌敌畏、草甘膦及五种有机磷农药混合为微生物生长的唯一氮源磷源。
分离纯化微生物：稀释倒平板法、涂布平板法、稀释摇管法、平板划线分离法。
此次实验采取的是平板分离法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，其基本原理主要包括两个方面：（一）选择适合于待分离微生物的生长条件或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰大部分不需要的微生物。
（二）微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术来完成。
微生物的观察可以用显微镜观察其细胞形态，也可以用肉眼观察其菌落形态。
实验二：土壤中微生物分离与纯化
了解并掌握微生物的生理生化特征， 如营养需求、代谢途径、酶活性等。
微生物纯化
在分离的基础上，进一步通过反复划 线培养或平板克隆培养，获得纯培养 的微生物。
熟悉微生物分离与纯化的实验操作流程
土壤样本采集
选择具有代表性的土壤样本， 采集时要避免污染，并记录采
样点的环境信息。
微生物的纯化
对分离得到的菌落进行纯化， 通过反复划线或平板克隆培养 ，获得纯培养的微生物。
菌落形态观察
观察纯化后的菌落形态，记录菌落 特征。
微生物的保存与鉴定
菌种保存
将纯化的菌株进行冷冻干燥或甘油保 藏，以备后续实验使用。
微生物鉴定
采用形态学、生理生化实验或分子生 物学方法对分离得到的菌株进行鉴定 。
04
CATALOGUE
实验结果与分析
微生物分离与纯化的结果观察
微生物分离
通过划线分离法，成功将土壤中的微生物分离到了培养基上，观察到菌落形态 各养基
根据目标微生物的特性， 选择适合的培养基。
培养
将土壤稀释液涂布或滴加 在培养基上，放入恒温培 养箱中培养。
观察与记录
观察微生物的生长情况， 记录菌落形态、颜色、大 小等特征。
微生物的纯化
挑选单菌落
从培养基上挑选单菌落，采用划 线法或稀释涂布法进行纯化。
纯化培养
将纯化的菌株进行多次划线培养或 传代培养，确保获得纯培养物。
01
微生物纯化的原理是利用微生物的单一特性进行分离，使同一种微生物在培养 基上形成单一菌落。
02
常用的微生物纯化方法包括划线分离法、稀释涂布平板法、显微操作法等。这 些方法可以根据不同微生物的特性选择使用，以获得纯培养。
03
土壤中微生物的分离纯化(电子版实验报告)
微生物实验报告土壤中微生物的分离与纯化指导教师：李海花周四晚第四组实验成员: 杜玉琪180112010009董天涵180112010008蒋怡菲180112010018逄颖180112010035【摘要】利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离和纯化，通过观察微生物的菌落形态特征判断菌的类型并通过平板划线进行分离纯化【关键词】土壤、微生物、菌落观察、分离纯化1.实验目的（1）通过对几种培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
（2）掌握倒平板的方法、接种和无菌操作技术。
（3）初步观察来自土壤中的几类微生物的菌落形态特征，并能判断菌的类型。
（4）学习平板菌落计数的基本原理和方法，并掌握其基本技能。
2.实验原理（1）培养基的配制与灭菌培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别、保存各种微生物或积累代谢产物。
一般的培养基应包含适合微生物生长的6大营养素即水分、碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子。
不同微生物对pH要求不一样，霉菌和酵母菌的培养基的pH一般是偏酸的，而细菌和放线菌培养基的pH一般为中性或微碱性。
所以配制培养基时还要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。
已配制好的培养基必须立即灭菌，如来不及灭菌，应暂存冰箱，以防止其中微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基酸碱度所带来不利影响。
（2）微生物的培养及鉴定接种：将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。
接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。
接种的关键是要严格的进行无菌操作。
鉴定：常见与常用的微生物中,根据它们的主要形态可分为细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类。
细菌菌落光滑，易于基质脱离；放线菌菌落质地致密，菌落较小，广泛延伸；酵母菌菌落较细菌菌落大而厚；霉菌形成的菌落较稀松，多成绒毛状，絮状。
（3）平板分离与活菌计数倒平板：按稀释涂布平板法倒平板，并用记号笔标明培养基名称、土样编号和实验日期等。
土壤中微生物的分离与纯化
实验五土壤中的四类微生物的分离与纯化（一）实验目的1.明确培养基的配制原理，并通过对微生物培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤2.掌握按照研究需要选取不同的环境以找到自己需要的目标菌株的基本方法，学习分离纯化微生物的基本操作技术。
进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术；掌握微生物培养方法以及接种技术。
3.学习并掌握放线菌、霉菌、酵母菌形态结构的方法。
4．加深理解放线菌、霉菌、酵母菌形态结构特征（二）实验原理1.土壤中存在微生物土壤是微生物生活的大本营，在这里生活的微生物无论是数量和种类都是极其多样的，因此，土壤是我们开发利用微生物资源的重要基地，可以从其中分离，纯化到许多有用的菌株。
土壤中含有多种多样的有机和无机营养物，所以被称为微生物生长和繁殖的天然培养基。
土壤的环境条件十分复杂多变，其中的微生物种类也极其丰富，1g干的农田土壤中含有几百万个细菌，数十万真菌孢子和数万个原生动物和藻类。
2.富集培养指从微生物混合群开始，对特定种的数量比例不断增高而引向纯培养的一种培养方法。
在适于目标微生物而不适于其他微生物生长的条件下继续培养，则目标微生物将成为优势种而得到纯培养。
3.微生物对营养物质的需求不同微生物需要各种各样的营养物质，其功能主要有：提供能量，提供合成原料，调节代谢活动进行，提供适宜代谢环境。
虽然微生物对各种营养物质需求不同，但是都离不开碳源，氮源，能源，生长因子，无机盐，水。
除水外，碳源所需的量最大，其次是氮源。
在自养微生物中，能源是日光能或还原态无机物，在异养微生物中，能源就是碳源。
在无机盐中，磷，硫需量稍大，钾，镁次之。
其他元素和生长因子的需要量一般很少。
4.微生物的生长速度不同一个微生物细胞在合适的外界环境条件下，会不断地吸收营养物质，并按其自身的代谢方式不断进行新陈代谢。
如果同化作用的速度超过异化作用，则其原生质的总量就不断增加，于是出现了个体细胞的生长。
在微生物的研究和应用中，只有群体的生长才有意义。
土壤中微生物的分离与纯化
微生物学实验报告实验名称：土壤中微生物的分离与纯化课程名称环境微生物学实验学院环境科学与工程学院专业班级2011级环境科学（1）班学号 3111007364姓名刘迪鸿联系方式2013年 12 月 10 日实验报告土壤中微生物的分离与纯化刘迪鸿（广东工业大学11级环科（1)班）摘要:各种微生物生长所需条件存在差异，根据需要配制不同的培养基可以得到只含目标菌株的纯培养.关键词:选择培养基，分离，纯化一、实验目的与要求1.明确培养基的配制原理，并通过对微生物培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2.掌握根据需要选取不同的环境以找到目标菌株的基本方法，学习分离纯化微生物的基本操作技术，进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术，掌握微生物培养方法以及接种方法。
二、实验方案1.实验原理培养基是人工的将多种物质按各种微生物生长的需要配制而成的一种混合营养基质，用以培养或分离各种微生物，因此,培养基质应当有微生物所能利用的营养成分（包括碳源，氮源，能源，无机盐,生长因素。
）和水，根据微生物的种类和实验目的地不同,培养基也有不同的种类和配置。
在土壤，水，空气及动、植物体中,不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起,当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分理它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。
为了获得某种微生物的纯培养,一般是根据该微生物对营养,酸碱度，氧等条件的要求不同,而供给它适宜的培养条件,或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离纯化微生物,直至得到纯菌株。
2.实验材料1)培养基与试剂牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏2.0g，蛋白胨4。
0g,氢氧化钠2.0g，琼脂6~8g,水400mL。
高氏一号培养基配方：可溶性淀粉4g，硝酸钾0.4g，磷酸氢二钾0。
土壤微生物的分离和纯化实验
实验八土壤微生物的分离和纯化一、目的1.了解从土壤中分离与纯化微生物的基本原理及方法。
2.掌握几种常用的分离的基本操作技术。
二、原理在自然界中,土壤是微生物生活中的最适宜的环境,土壤中存在大量的微生物,但土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体,因此,为了研究某一微生物的特性,或者要大量地培养和利用某种微生物,必须把它们从这些混杂的微生物群中分离出来。
从而获得某一菌株的纯培养。
这种获得纯培养的方法称之为微生物的分离和纯化三、器材1.牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏l号培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基。
2.盛有100毫升无菌水的三角瓶,9毫升无菌水的试管,无菌吸管,无菌玻璃涂抹棒,10%的酚液,25%的乳酸,土样,接种环,标签。
四、方法(一)涂抹平板分离法1.制备土壤稀释液称取土样10克,放入装有玻璃珠和100毫升无菌水的三角瓶中,振摇15—20分钟,使土与水充分混合,将菌分散,静止片刻,用吸管从中吸取1毫升土壤悬液注人盛有9毫升无菌水试管中,吹吸三次,并振摇使之充分混匀,然后再吸取1毫升注入另一支盛有9毫升无菌水的试管中,以此类推制成10-1、10-2、l0-3、10-4、l0-5……的各种稀释度的土壤悬液。
2.倒平板将牛肉膏蛋白胨培养基,高氏1号培养基,马铃薯蔗糖培养基溶化。
待冷至50—60℃时,在高氏l号培养基中加入10%酚2滴,在马铃薯蔗糖培养基中加入25%乳酸2滴,然后分别倒平板,每支培养基倒一皿(用右手持盛培养基的试管,左手拨出棉花塞,试管口在火焰上灭菌,然后左手将培养皿在火焰附近打开少许,迅速注入培养基,加盖后轻轻摇动培养皿使培养基均匀分布,平放在桌面上,待凝后即成平板。
(见图18)。
3.涂抹将上述每种培养基平板标上10-3、10-4、10-5稀释度,然后用无菌吸管分别从10-5、10-4、10-3稀释度的试管中吸取土壤悬液,每一平板注入0.2毫升,再用灭菌玻璃涂抹刮棒在培养基表面轻轻地涂布均匀,静止5分钟。
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物的分离和纯化实验报告
土壤微生物的分离和纯化实验报告
实验目的
本次实验的目的是利用物理、化学和生物性等技术，从原始土壤样品中分离、筛选和纯化微生物株，并对分离出的微生物株进行形态学特征观察和分类鉴定。
实验材料
1. 原始土壤样品
2. 饱和淡盐水
3. 10% (v/v) 的平衡磷酸盐溶液
4. 0.85% (w/v) 的千顷盐溶液
5. 2% (w/v) 的体糖酸钠溶液
6. 氯仿
7. 板藻素
8. 无菌玻璃管
实验步骤
1. 将原始土壤样哮放入摇瓶内，加入淡盐水攪拌均匀，进行粗筛提取。
2. 将1ml混合液放入无菌玻璃管，8次补充磷酸盐溶液悬浮液进行细筛提取。
3. 将细筛提取的悬浮液转移到新的无菌容器中，加入盐溶液攪拌均匀。
4. 加入盐溶液之后，用氯仿消毒，然后加入体糖酸钠溶液留取微生物株悬浮液。
5. 使用板藻素进行单菌株筛选，筛选出单菌株。
6. 将筛选出的单菌株进行形态学特征观察和分类鉴定。
结果
本次实验中，经过物理、化学和生物性等技术操作，成功分离出一株微生物株，并对其进行形态学特征观察和分类鉴定，得出结果：该株微生物属于假单胞菌科，耐盐性，呈菌封形态。
结论
本次实验成功分离纯化出一株微生物株，该株微生物属于假单胞菌科，耐盐性，呈菌封形态。
土壤中微生物的分离与纯化实验报告
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配置高氏 号培养基的原料（可溶性淀粉，KNO3，K2HPO4，MgSO4·7H2O，
NaCl，FeSO4·7H2O，琼脂，pH=7.4-7.6）
配制查氏培养基的原料（硝酸钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钾、硫酸亚
铁、蔗糖、琼脂、蒸馏水）
配制无氮培养基的原料（葡萄糖，K2HPO4，MgSO4·7H2O，
微生物实验报告
土壤中微生物的分离与纯化
指导教师：李海花
周四晚第四组
实验成员:杜玉琪180112010009
董天涵180112010008
蒋怡菲180112010018
逄颖180112010035
【摘要】利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离和纯化，通过观察微生物的菌落形态特征判断菌的类型并通过平板划线进行分离纯化
体恰好成对角线铺满试管为标准。剩余培养基液体分装入两个三角烧瓶。
c.加塞包扎：培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口塞上棉塞，以阻止外界微
生物进入培养基内造成污染。并用牛皮纸包住试管口和三角烧瓶口，皮筋固定。
并在试管和三角烧瓶全身包上报纸。用记号笔标好培养基名称、组别、配制日期。
d.灭菌：将上述培养基以0.1MPa，121℃，20min高压蒸汽灭菌。
（4）细菌的分离与纯化
为了得到单一菌种，要对培养的菌分离和纯化。用接种环挑起培养基里少量菌在无菌条件下接种到新的培养基上，划线，继续进行培养，从而得到新的单一菌落。
3.实验器材
（1）器材：
培养皿、载玻片、量筒、滴管、吸水纸、烧杯、三角瓶、酒精灯、玻璃棒、接种
环、镊子、恒温培养箱、高温灭菌锅、无菌操作台、天平、滤纸、pH试纸等。（2）试剂：
药品完全溶解后补充水分都所需的总体积。将称好的琼脂放入上述已溶的药品中，
加热使琼脂熔化，期间不断搅拌，最后补足加热过程中损失的水分。
注意：琼脂熔化过程中应控制火力，一面培养基因沸腾而溢出容器，同时，需不断搅
拌，以防琼脂糊底烧焦。
b.分装：将配好的液体培养基均匀装入8支试管，每支试管的液体量以倾斜试管液
pH··········································7.4－7.6
淀粉琼脂培养基（高氏一号），用于分离和培养放线菌，是一种合成培养基。
操作流程：
称量→溶解→分装→包扎→灭菌
*调PH一步省略不做
操作步骤：
a.称量和溶解：按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，Fra bibliotek用少量冷水将淀粉
（1）培养基的配制与灭菌
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别、保存各种微生物或积累代谢产物。一般的培养基应包含适合微生物生长的6大营养素即水分、碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子。不同微生物对pH要求不一样，霉菌和酵母菌的培养基的pH一般是偏酸的，而细菌和放线菌培养基的pH一般为中性或微碱性。所以配制培养基时还要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。已配制好的培养基必须立即灭菌，如来不及灭菌，应暂存冰箱，以防止其中微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基酸碱度所带来不利影响。
调成糊状，再加入小于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全熔化。然
后再称取其它各成分依次熔化。对微量成分FeSO4·7H2O可先配成高浓度的储备
液，按比例换算后再加入，方法是先在100mL水中加入1g的FeSO4·7H2O，配
成0.01g/mL，再在1000mL培养基中加入1mL的0.01g/mL的贮备液即可。待所有
（2）微生物的培养
倒平板:
将牛肉膏蛋白胨培养基、高氏 号培养基、查氏培养基、无氮培养基加热
融化，在无菌操作台上将其倒在16个培养皿中。
（2）微生物的培养及鉴定
接种：将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。接种的关键是要严格的进行无菌操作。
鉴定：常见与常用的微生物中,根据它们的主要形态可分为细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类。细菌菌落光滑，易于基质脱离；放线菌菌落质地致密，菌落较小，广泛延伸；酵母菌菌落较细菌菌落大而厚；霉菌形成的菌落较稀松，多成绒毛状，絮状。
【关键词】土壤、微生物、菌落观察、分离纯化
1.实验目的
（1）通过对几种培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
（2）掌握倒平板的方法、接种和无菌操作技术。
（3）初步观察来自土壤中的几类微生物的菌落形态特征，并能判断菌的类型。
（4）学习平板菌落计数的基本原理和方法，并掌握其基本技能。
2.实验原理
（3）平板分离与活菌计数
倒平板：按稀释涂布平板法倒平板，并用记号笔标明培养基名称、土样编号和实验日期等。
划线：在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，菌种在平板上划线。通过划线将样品在平板上稀释，培养后能形成单独的菌落。平板计数法是将测菌液经适当稀释，涂布在平板上，经过培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。统计并记录菌落数。
NaCl，CaSO4·2H2O，CaCO3，pH=7.0-7.2）
（3）菌种：
土壤稀释液
4.实验步骤
（1）高氏培养基的配制
培养基的配方：
可溶性淀粉········································20.0 gKNO3············································1.0 g K2HPO4··········································0.5 g MgSO4• 7H2O·······································0.5 g NaCl············································0.5 g FeSO4• 7H2O·······································0.01 g琼脂·············································20 g自来水········································1000 mL