抗性淀粉试剂盒说明书
抗性淀粉检测试剂盒K-RSTAR(100次分析)前言抗性淀粉(RS)是指在人小肠内不能被酶解的淀粉,在大肠部分或完全发酵。
RS是总膳食纤维的组分之一。
原理(AOAC法 ;AACC法32-40)抗性淀粉的测定方法:样品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶(AMG)37℃振荡水浴孵育16小时,在这期间,通过两种酶的联合作用,非抗性淀粉被溶解,水解成D-葡萄糖,孵育结束后,加入等体积的乙醇或工业甲基化酒精(IMS,变性乙醇)终止反应。
离心上述溶液,收集上清勿弃,底部残留絮状团即为样品中的RS,用含水的IMS或乙醇(50%v/v)洗涤絮状团,洗涤后离心,再重复一次洗涤离心,收集离心后获得的上清,与之前收集的上清混合。
小心倒出试管残留的液体,将絮状团置于冰水浴中,加入2M KOH溶解,溶解的同时用磁力搅拌机剧烈搅拌。
用醋酸盐缓冲液将这个溶液调至中性,用AMG将淀粉定量水解成葡萄糖。
D-葡萄糖用葡糖氧化酶/过氧化物酶试剂(GOPOD)测定,这也是对样品中RS含量的测定。
非抗性淀粉(可溶性淀粉)的测定可通过集中的上清液并定容至100mL,再用GOPOD测定D-葡萄糖完成。
应用性和精确性这个方法需要样品中RS含量多于2% w/w。
如RS含量多于2% w/w,常规标准误差为+5%。
少于2% w/w RS的误差更高。
试剂盒瓶子1:淀粉葡糖苷酶AMG,12 mL,3300U/ mL,条件为,40℃下,底物为可溶性淀粉,[单位或为200U/mL,条件为,40℃下,底物为对硝基苯基β-麦芽糖苷]。
AMG溶液应完全没有可检测到的游离D-葡萄糖。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子2:α-胰淀粉酶(胰酶,10g,3Ceralpha U/mg)。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子3:GOPOD 试剂缓冲液。
磷酸钾缓冲液(1M,),对羟基苯甲酸(0.22M)和叠氮化钠(%W/V)。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子4:GOPOD试剂酶。
葡糖氧化酶(>12,000U)加上过氧化物酶(>650U)和4-氨基安替比林(80mg)。
冻干粉,-20℃下稳定性>5年。
瓶子5:D-葡萄糖标准溶液(5 mL,mL)溶于苯甲酸%(w/v)。
室温下稳定性>5年。
瓶子6:抗性淀粉对照。
抗性淀粉含量如表所示。
室温下稳定性>5年。
溶液/悬浮液的制备1.使用瓶子1中提供的的产品(AMG;溶液1)。
这个溶液是有粘性的,因此应使用正向4℃下稳定性> 3年。
稀释AMG(300 U/ mL)。
取2 mL瓶子1中的AMG浓缩液用0.1M顺丁烯二酸钠缓冲液(0.1M,下面有清楚解释怎么调pH;试剂1,非提供)稀释至22mL。
以5 mL为单位分装后用聚丙烯管冷冻保存。
反复冻融不会影响稳定性,稳定性-20℃>5年。
用前制备2.用100mL顺丁烯二酸钠缓冲液(100mM,;试剂1,非提供)悬浮2中的产品(α-胰淀粉酶),搅拌5分钟。
加入稀释的AMG(300 U/ mL),混匀。
>1500g离心10分钟,慢慢倒出上清液,这就是制备的溶液2。
溶液2制备后应当天使用。
3.用蒸馏水稀释瓶子3中的产品(GOPOD 试剂缓冲液)稀释至1L,这就是制备的溶液3。
制备后马上使用。
全部用,下一步里有备注:(1)如果浓缩缓冲液在-20℃下储存,它将形成结晶盐,因此必须要完全溶解才可以用蒸馏水稀释。
(2)这个缓冲液包含%(w/v)的叠氮化钠。
因此这是个有毒化学物,应进行相应的处理。
4.取瓶3中制备好的溶液320mL溶解瓶子4里全部的产品,定量转移这个溶液至装有剩余溶液3的瓶子中。
用铝箔封盖瓶子以遮光。
这就是葡萄糖测定试剂(GOPOD 试剂),可以在2-5℃保存3个月或者-20℃下保存一年。
如果试剂要以冷冻态储存,应分装后再冻存。
当试剂是新鲜制备的,它的颜色应是浅黄色或浅粉色。
在4℃储存2-3个月时会演变成深粉色。
当以蒸馏水为对照时,这个溶液的吸光度应小于。
5&6.使用瓶子5或6提供的产品。
室温下稳定性>5年。
没有提供的试剂(应购买分析纯级)1.顺丁烯二酸钠(马来酸钠)缓冲液(100mM,加上5mM二水氯化钙和叠氮化钠(%w/v).用1600mL蒸馏水溶解23.2g顺丁烯二酸,用4M(160g/L)氢氧化钠调节pH至,加入0.74g二水氯化钙和0.4g叠氮化钠,并溶解。
定容至2L。
4℃下可保存一年。
2.醋酸钠缓冲液(1.2M,)将的冰醋酸(1.05g/mL)加至800 mL的蒸馏水中,用4M氢氧化钠调节pH至。
用蒸馏水定容至1L,室温下可保存一年。
3.醋酸钠缓冲液(100mM,)将的冰醋酸加至900 mL的蒸馏水中,用4M氢氧化钠调节pH至。
用蒸馏水定容至1L,4℃保存2个月。
4.氢氧化钾溶液(2M)将加至900 mL的去离子水中,搅拌溶解。
定容至1L,密封保存。
室温下可保存2年。
5.含水乙醇(或者IMS)(大约50%v/v)将500mL乙醇(95%v/v或者99%v/v)或者工业甲基化酒精(IMS;变性乙醇;95% v/v 乙醇加上5%甲醇)至500mL的水中。
密封保存,室温下稳定保存>2年。
备注:一系列包含RS的对照样品%-78%w/w可从Megazyme公司购买。
设备(推荐)1. 离心式粉碎机,带有齿轮转子和1.0mm筛子,或类似的装置。
小型样品可选择旋风磨碎机替代。
2.绞肉机-手动或电动的,装有4.5mm筛。
3.台式离心机-能够放入16×120mm玻璃试管,速度大约1500g(3000rpm)4.振荡水浴器,可设定为每分钟100次直线运动(振荡速度为每分钟200里程),振荡距离35mm,37℃。
5.水浴锅-能够保持在50+0.1℃。
6.涡旋混匀器。
7.磁力搅拌器。
8.磁力搅拌棒-5×15mm。
计10.计时器11.分析天平(精确到毫克)12.分光光度计-能够设定510nm(10mm路径长度)μL移液器及一次性枪头14.连续分配器-配有50mL管嘴,能够移取,和。
15.培养管-螺旋帽,16×125mm16.玻璃试管-16×100mm,14mL容量17.塑料盒,可放置试管架,也可作为冰盒使用。
18.温度计-能够读取37+0.1℃和50+0.1℃。
19.容量瓶-100mL,200mL,500mL,1L,2L样品制备用磨碎机研磨大约50g谷物样品或冻干植物或食品,使样品粉末可过1.0mm筛。
转移所有的材料至广口瓶,颠倒振荡混匀。
工业淀粉一般不用研磨。
用绞肉机粉碎鲜样(如罐装的豆子,香蕉,土豆),过4.5mm筛。
用AOAC法(15),测定干样中的含水量,根据AOAC法,冻干后烘炉干燥测定鲜样中的含水量。
分析方法(a)水解和溶液化非抗性淀粉1.准确称取100mg(±5 mg)样品后直接倒入有螺旋帽的试管里,轻柔的拍打试管以保证样品集中在底部。
注意:对于湿样,样品大概为0.5g(准确称重),这些材料的含水量通常为60-80%。
2.每个试管中加入 mLα-胰淀粉酶(10 mg/mL)其中含有AMG(3 U/mL)(溶液2)3.盖紧试管盖子,用涡旋振荡器混匀,卧式放入振荡水浴器,与运动方向平行。
如下图所示:4.连续振荡,37℃孵育,精确孵育时间为16小时。
(备注:200里程/min)5.把试管从水浴锅中拿出,用纸巾擦掉多余的水。
拿开盖子,加入乙醇(99% v/v)或者IMS(99% v/v),用涡旋器涡旋。
6.1500g离心,10分钟(不加盖)7.小心倒出上清,加入2mL 50%乙醇或50% IMS重悬浮,用涡旋器涡旋,再加入6mL 50%IMS,混合,1500g离心,10分钟8.小心倒出上清,重复上述重悬浮和离心步骤。
9.小心倒出上清,翻转试管,用纸巾吸除多余的液体。
(b)测定抗性淀粉含量1.将试管冰浴,再向每个试管中加入磁力搅拌棒和2 mL2M的KOH,用磁力搅拌机在冰浴/水浴状态下搅拌20min,以重悬浮絮状物和溶解RS。
如下图所示:备注:(1)不要使用涡旋器混匀,那将会导致淀粉乳化。
(2)确保边加入KOH溶液边剧烈搅拌试管里的样品。
这将会避免形成难溶的淀粉块。
2.向每个试管中加入8 mL1.2M的醋酸钠缓冲液(),并用磁力搅拌机搅拌。
立即加入(溶液1;3300U/mL),混匀,并放入50℃水浴。
3.孵育30min,期间用涡旋器间歇混匀。
4.对于RS含量>10%的样品,用水洗瓶定量转移试管里的样品至100mL容量瓶,当用洗瓶洗涤试管中的溶液时用外磁铁保持试管中的磁力棒。
用蒸馏水定容至100mL,并混匀。
以单位体积离心溶液,1500g,10min。
5.对于RS含量<10%的样品,直接离心1500g,10min(非稀释)。
对于这些的样品,试管里的最终体积大约为(体积可能会变化,如果分析的是湿样,在计算数值时应注意折扣)6.将稀释的(4.)或非稀释的(5.)上清液以为单位转移至玻璃试管(16×100mm),一式两份,加入试剂(溶液4),50℃孵育20分钟。
7.测量每一个溶液的在510nm下相对于空白试剂的吸光度值。
制备空白试剂准备空白试剂:通过混匀的100mM的醋酸钠缓冲液()和的GOPOD试剂制备D-葡糖糖标准品(一式四份)通过混合葡萄糖(1mg/mL)和的GOPOD试剂制备D-葡糖糖标准品。
(c)计算非抗性(可溶性的)淀粉1.收集起始孵育[(a)7.]过程中离心获得上清液和两次50%乙醇洗涤[(a)8.和9.]获得的上清液至容量瓶中。
用100mM的醋酸钠缓冲液()定容至100mL。
混匀。
2.以 mL为单位孵育溶液(一式两份)并加入10μL稀释的AMG溶液(300U/mL), 50℃孵育20分钟,加入 mL GOPOD试剂(溶液4),50℃孵育20分钟。
3.计算在510nm下相对于空白试剂的吸光度值。
4.计算非抗性淀粉的含量。
计算计算样品中抗性淀粉含量,非抗性淀粉含量和总淀粉含量(%,在干重的基础上),计算模板如下:抗性淀粉(g/100g样品)(样品包含>10%RS)=⊿E×F×100/×1/1000×100/W×162/180=⊿E×F/W×90抗性淀粉(g/100g样品)(样品包含<10%RS)=⊿E×F××1/1000×100/W×162/180=⊿E×F/W×非抗性淀粉含量(g/100g样品)=⊿E×F×100/×1/1000×100/W×162/180=⊿E×F/W×90总淀粉含量=抗性淀粉含量+非抗性淀粉含量⊿E=相对于空白试剂的吸光度值F=从吸光度值到微克的转换(在GOPOD反应中100μgD-葡萄糖的吸光度值是确定的,F=100(D-葡萄糖的μg数)除以这100μgD-葡萄糖的GOPOD吸光度值)100/=体积校正(从100mL取)1/1000=从微克到毫克W=分析样本的干重=重量×(100-含水量)/100100/ W=RS在样品重量中百分比因子162/180=从测定获得的游离D-葡萄糖转换到淀粉中存在的脱水-D-葡萄糖的因子=体积校正(从 mL取),对于含有0-10%RS,当孵育溶液时没有被稀释,最终体积为 mL。
AOAC2002抗性淀粉(中文翻译)
AOAC2002抗性淀粉(中文翻译)抗性淀粉的测量C.实验试剂(a)马来酸钠缓冲液:0.1M,pH6.0.取23.2g的马来酸溶解在1600ml的蒸馏水中,用4M(160g/L)的NaOH调节pH值到6.0 ,加入0.6gCaCl2.2H2O和0.4g的叠氮化钠,然后定容到2L。
4℃保存1年。
(b)马来酸钠缓冲液:1.2M,pH3.8,69.6ml的冰醋酸溶解在800ml 的蒸馏水中,用4M的NaOH调节pH值到3.8.用蒸馏水定容到1L。
室温下保存1年。
(c)马来酸钠缓冲液:100mM,pH4.5.5.8ml的冰醋酸溶解在900ml的蒸馏水中,用4M的NaOH调节pH值到4.5,最后用蒸馏水定容到1L,4℃下保存1年。
(d)氢氧化钾溶液:2M,取112.2KOH溶解在900ml的去离子水中,定容到1L(e)IMS溶液:50%V/V。
取500ml的乙醇(95%或99%)或工业甲基化酒精(IMS,变性乙醇;95%乙醇加5%的甲醇),用水定容到1L,密封保存1年。
(f)AMG储备液:12ml,3300U/ml溶解在50%的甘油中,呈粘性。
在4℃下保存5年。
(注:1U:在40℃,pH4.5的条件下,AMG分解可溶性淀粉产生1μmol 的葡萄糖所需要的酶量)。
(g)淀粉葡萄糖苷酶稀释液:300U/ml,将2ml的AMG储备液用0.1M,PH马来酸缓冲液C(a)稀释到22ml,等分为5ml冷冻保存在聚丙烯管中,使用时可以反复冻融,-20℃下保存5年。
(h)胰a-淀粉酶(10mg/ml)+AMG(3U/ml):1g的胰a-淀粉酶加100ml马来酸缓冲液C(a),搅拌5min,加1.0mlAMG(300U/ml),搅拌离心,>1,500g,10min。
小心倒出上清液。
现配现用。
(i)葡萄糖氧化酶-过氧化物酶-氨基安替比林溶液(GOPOD):制备GOPOD通过稀释50ml的缓冲液到1.0L,用部分稀释缓冲液溶解冻干的GOPOD混合液,将小瓶内的酶液转移到1.0L的容量瓶中,用稀释缓冲液定容到1.0L.葡萄糖氧化酶>12000U/L;过氧化物酶>650U/L;4-氨基安替比林溶液0.04mM4℃保存2~3月,-20℃保存>2年缓冲液的制备:溶解136gkH2PO4,42gNaOH,30g的4-羟基苯甲酸,溶解在900ml水中,用1MHCL和2MNaOH调节pH7.4,稀释到1L,添加0.4g 叠氮化钠混合至溶解。
淀粉样物质染色液(改良 Stores 刚果红法) 说明书
产品组成:
产品名称 淀粉样物质染色液(改良 Stores 刚果红法)
试剂(A): Stores 刚果红染色液 试剂(B): Leagene 苏木素染色液
操作步骤(仅供参考): 1、常规固定,常采用 10%的中性福尔马林固定液,常规脱水包埋。 2、切片厚度 4μm,常规二甲苯或脱蜡透明液脱蜡至水。 3、入 Stores 刚果红染色液浸染 25~30min,弃余液。 5、无需分化,自来水冲洗 5min。 6、入苏木素染色液,浅染细胞核 1~2min 或更短时间。
7、滴加酸性分化液分化 2~5s,滴加 Stores 返蓝液返蓝 20~40s。 8、自来水冲洗 10min。 9、逐级常规乙醇脱水,二甲苯或脱蜡透明液透明,中性树胶封固。
染色结果:
淀粉样物质、弹力纤维、嗜伊红颗粒 细胞核
红色 蓝色
注: 在偏光显微镜下,淀粉样物质呈黄绿色的双折光。
注意事项: 1、切片脱蜡应尽量干净,否则影响染色效果。 2、酸性乙醇分化液应密闭保存,一旦开启尽快用完。 3、Stores 刚果红染色液染色时尽量采用浸染,如果滴染,应置于湿盒防止溶液挥发。 4、酸性分化液应密闭保存,分化步骤很重要。 5、脱水应迅速,避免脱色。 6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
淀粉样物质染色液(改良 Stores 刚果红法) 说明书
本产品仅供体外研究使用,不得用于临床诊断
产品简介: 淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质,可存在于不同的组织、器官导致的疾病 称为淀粉样变,淀粉样物质主要是由蛋白质构成,该蛋白大部分排列成反向的β-折叠层结 构,在电子显微镜下淀粉样物质呈原纤维排列,病例材料中为大量细胞外的、不分支的细丝, 大多随机排列。用于识别淀粉样物质的组织学方法有甲紫染色、刚果红染色、偏振光显微镜 观察等,目前研究发现传统的甲紫染色法灵敏度低、特异性差,经典的而且有效的方法是刚 果红染色,1922 年 Bennhold 发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别,并应用到 组织切片,后来经过 Highman 改良,染色效果更好。
血清淀粉样蛋白A测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)产品技术要求森美希克玛生物
型
号
、
规 试剂 1:1×50mL,试剂 2:1×10mL; 试剂 1:2×50mL,试剂 2:2×10mL;
格
试剂 1:4×50mL,试剂 2:4×10mL; / 试剂 1:1×25mL,试剂 2:1×5mL; 包 试剂 1:2×20mL,试剂 2:2×4mL。
校准品(选配):1×1mL。 装 质控品(选配):水平 1:1×1mL、水平 2:1×1mL。
规
格
:
结
构
试剂 1 及
组
成 试剂 2
/
主
要 校准品
组
成
组成 Tris 缓冲液 聚乙二醇 6000 Tris 缓冲液 聚乙二醇 6000 SAA 抗体结合的胶乳颗粒 Tris 缓冲液
人血清 SAA 靶值浓度范围
浓度 100mmol/L
10g/L 100mmol/L
10g/L 0.5% 20mmol/L 300mL/L (250~350)mg/L
成
TriБайду номын сангаас 缓冲液
20mmol/L
分
质控品 :
人血清 SAA 靶值浓度范围
300mL/L 水平 1:(10~25)mg/L 水平 2:(75~120)mg/L
校准品靶值批特异,详见说明书。质控品质控范围批特异,详见说明书。
适 用 范 围
/
用于体外定量测定人血清中血清淀粉样蛋白 A 的含量。
预 期 用 途
:
产
品
储 2℃~8℃条件下避光保存,有效期为 18 个月。
存
条
件
及 有 效 期
( 体 外 诊 断 试 剂 适 用 ):
抗性淀粉试剂盒说明书
抗性淀粉检测试剂盒K-RSTAR(100次分析)前言抗性淀粉(RS)是指在人小肠内不能被酶解的淀粉,在大肠部分或完全发酵。
RS是总膳食纤维的组分之一。
原理(AOAC法 ;AACC法32-40)抗性淀粉的测定方法:样品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶(AMG)37℃振荡水浴孵育16小时,在这期间,通过两种酶的联合作用,非抗性淀粉被溶解,水解成D-葡萄糖,孵育结束后,加入等体积的乙醇或工业甲基化酒精(IMS,变性乙醇)终止反应。
离心上述溶液,收集上清勿弃,底部残留絮状团即为样品中的RS,用含水的IMS或乙醇(50%v/v)洗涤絮状团,洗涤后离心,再重复一次洗涤离心,收集离心后获得的上清,与之前收集的上清混合。
小心倒出试管残留的液体,将絮状团置于冰水浴中,加入2M KOH溶解,溶解的同时用磁力搅拌机剧烈搅拌。
用醋酸盐缓冲液将这个溶液调至中性,用AMG将淀粉定量水解成葡萄糖。
D-葡萄糖用葡糖氧化酶/过氧化物酶试剂(GOPOD)测定,这也是对样品中RS含量的测定。
非抗性淀粉(可溶性淀粉)的测定可通过集中的上清液并定容至100mL,再用GOPOD测定D-葡萄糖完成。
应用性和精确性这个方法需要样品中RS含量多于2% w/w。
如RS含量多于2% w/w,常规标准误差为+5%。
少于2% w/w RS的误差更高。
试剂盒瓶子1:淀粉葡糖苷酶AMG,12 mL,3300U/ mL,条件为,40℃下,底物为可溶性淀粉,[单位或为200U/mL,条件为,40℃下,底物为对硝基苯基β-麦芽糖苷]。
AMG溶液应完全没有可检测到的游离D-葡萄糖。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子2:α-胰淀粉酶(胰酶,10g,3Ceralpha U/mg)。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子3:GOPOD 试剂缓冲液。
磷酸钾缓冲液(1M,),对羟基苯甲酸(0.22M)和叠氮化钠(%W/V)。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子4:GOPOD试剂酶。
葡糖氧化酶(>12,000U)加上过氧化物酶(>650U)和4-氨基安替比林(80mg)。
胰淀粉酶测定试剂盒(免疫抑制-EPS底物法)产品技术要求zhongshengbeikong
胰淀粉酶测定试剂盒(免疫抑制-EPS底物法)适用范围:本试剂用于体外定量测定人血清、血浆或尿液中胰淀粉酶的含量。
1.1规格液体双剂型试剂1(R1):60mL×2,试剂2(R2):15mL×2;试剂1(R1):60mL×1,试剂2(R2):15mL×1;试剂1(R1):40mL×1,试剂2(R2):10mL×1。
1.2规格划分说明根据净含量划分规格。
1.3主要组成成分试剂盒由试剂1(R1)液体、试剂2(R2)液体组成。
1.3.1 试剂1(R1)液体:氯化钙0 .075 mmol/L氯化钠90 mmol/L氯化镁13 mmol/LHEPES50 mmol/Lα-葡萄糖苷酶 >4 U/mL 鼠抗唾液淀粉酶单克隆抗体50 mg/L1.3.2 试剂2(R2)液体:亚乙基-4-NP-麦芽庚糖苷18mmol/LHEPES50 mmol/L2.1 外观试剂盒中各组件的外观应满足:a) 试剂1(R1)应为无色或淡黄色透明溶液,无杂质、无絮状物,外包装完整无破损;b) 试剂2(R2)应为无色透明溶液,无杂质、无絮状物,外包装完整无破损。
2.2 净含量液体试剂净含量应不少于标示值。
2.3 试剂空白吸光度在波长405nm(光径1cm)处,试剂空白吸光度(A)应≤0.5000,试剂空白吸光度变化率(ΔA/min)的绝对值应≤0.0100。
2.4 准确度测定胰淀粉酶纯品, 回收率应在80%~120%范围内。
2.5 分析灵敏度对应于浓度为175U/L的胰淀粉酶所引起的吸光度变化率(△A/min)的绝对值应在0.0200~0.2000的范围内。
2.6 重复性重复测定高、低浓度样本,变异系数(CV)应≤10%。
2.7 批间差测定同一样本,批间差(R)应≤10%。
2.8 线性范围在[3,1300] U/L范围内,线性相关系数(r)应≥0.990;在[3,100] U/L范围内,线性绝对偏差应不超过±15U/L;在(100,1300] U/L范围内,线性相对偏差应不超过±15%。
MEGAZYME直链淀粉试剂盒说明书
前言:谷类淀粉的许多特性决定其最终用途,这些取决于直链淀粉/支链淀粉的比率。
这些特性包括糊化和凝胶化,溶解度,抗性淀粉的形成以及整颗大米的烹饪和构造特性。
因此,淀粉中直链淀粉含量的测定是淀粉加工的一个重要的质量参数。
最常用的测定谷物淀粉中直链淀粉含量的方法是利用电势,电流测定或直链淀粉的碘结合能力比色测定直链淀粉-碘色合配合物。
然而,这些方法具有不确定性。
支链淀粉-碘复合物也可以形成,这样降低了利用非比色法测定的游离碘离子的浓度,并且用比色法测量时,该复合物可能和直链淀粉-碘复合物吸收相同波长的光。
这种复合物致使直链淀粉的测定含量超过实际含量,需要进行校正。
Gibson等详细列举了使用这些方法所遇到的许多其他问题。
支链淀粉结合ConA的特殊复合物为淀粉中直链淀粉的测定提供了一种替代方法,而且不存在不确定性问题。
在指定pH值,温度和离子强度的条件下,ConA特异性结合分支多糖并形成沉淀,这种结合以多个非还原性末端基团上的α-D-吡喃葡萄糖基或α-D-吡喃甘露糖基单位为基础。
因此,ConA可以有效结合淀粉中的支链淀粉成分,但是不能结合线性为主的直链淀粉成分。
此方法是Yun和Matheson改进的ConA方法。
分析之前用乙醇预处理去除脂质。
原理:淀粉样品通过加热完全地溶解在二甲基亚砜(DMSO)里。
用乙醇沉淀淀粉去除其中的脂质,回收沉淀的淀粉。
用醋酸/盐溶液溶解沉淀的样品,加入ConA,特异性沉淀支链淀粉,离心去除沉淀。
单位体积上清液中的直链淀粉用酶水解为D-葡萄糖,然后用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶试剂进行测定。
另外一份单位体积醋酸/盐溶液中的总淀粉同样用酶水解为D-葡萄糖,然后加入葡萄糖氧化酶/过氧化物酶,用比色法测定。
根据ConA沉淀样品的上清液和与总淀粉样品中的GOPOD在510 nm处的吸光光度值之比判断直链淀粉在总淀粉中的含量。
该方法适用于所有的纯淀粉和谷物粉。
精确性样品如为纯淀粉,相对标准偏差为<5%。
淀粉含量检测试剂盒说明书__ 微量法UPLC-MS-4133
淀粉含量检测试剂盒说明书微量法UPLC-MS-4133100T/96S试剂名称规格保存条件试剂一液体65mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体65mL×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×2瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制:1、标准品:临用前加入1mL 蒸馏水使其溶解,制备10mg/mL 葡萄糖标准液,2-8℃保存两周。
2、工作液的配制:临用前取1瓶试剂三加入2.625mL 蒸馏水后,缓慢加入14.875mL 浓硫酸,不断搅拌,充分溶解,待用,用不完的试剂可以2-8℃保存一周。
淀粉是植物中糖的主要储存形式,其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢都有重要意义。
利用80%乙醇可以把样本中可溶性糖与淀粉分开,进一步采用酸水解法分解淀粉为葡萄糖,采用蒽酮比色法测定葡萄糖含量,即可计算淀粉含量。
StarchH 2SO 4Glucose H 2SO 45-Hdroxymethylfurfural AnthroneFurfural Derivatives最低检出限:0.0074mg/mL 线性范围:0.008-0.7mg/mL注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿或者96孔板、研钵、冰、浓硫酸(不允许快递)、蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1、称取约0.03g 样本于研钵中研碎,加入0.6mL 试剂一,充分匀浆后转移到EP 管中,80℃水浴提取30min ,3000g ,常温离心5min ,弃上清,留沉淀。
2、沉淀中加入0.3mL 双蒸水,放入沸水浴中糊化15min (盖紧,以防止水分散失)。
3、冷却后,加入0.6mL 试剂二,放入沸水浴中提取15min ,振荡3-5次。
4、冷却后,8000g ,常温离心15min ,取上清液待测。
支链淀粉含量检测试剂盒说明书 微量法
支链淀粉含量检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC4275规格:100T/96S产品简介:支链淀粉又称胶淀粉,一般由几千个葡萄糖残基组成,淀粉中直链淀粉和支链淀粉的比例和含量对淀粉产品的加工、物化特性、糊化温度等有着直接的影响。
支链淀粉和碘形成红紫色络合物,利用乙醇分开样品中的可溶性糖和淀粉,再用碘与其反应得到支链淀粉含量试验中所需的仪器和试剂:可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、乙醚、无水乙醇、EP管。
产品内容:试剂一:液体110mL×1瓶,4℃保存;试剂二:乙醚100mL×1瓶,自备;试剂三:液体55mL×1瓶,4℃保存;O=9mL:91mL混匀,现用现配,4℃保存半年。
试剂四:将试剂三:H2试剂五:液体2mL×1瓶,4℃保存;粉剂一:粉剂×1瓶,4℃保存;粉剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;试剂六的配制:将粉剂一倒入粉剂二,用蒸馏水定容至10mL,4℃避光保存一个月。
标准品:10mg支链淀粉×1支,4℃避光保存。
临用前加入0.1mL无水乙醇和0.9mL试剂三,混匀后封口膜封口,沸水浴至溶解,即10mg/mL的支链淀粉。
吸取0.1mL加入0.9mL蒸馏水配制为1mg/mL的标准溶液待用。
操作步骤:一、支链淀粉的提取:称取0.005g烘干样本(建议称取约0.01g)于研钵中研碎,加入1mL试剂一,充分匀浆后转移到EP 管中,80℃水浴提取30min,3000g,25℃离心5min,弃上清,留沉淀,加入1mL试剂二(乙醚)振荡5min,3000g,25℃离心5min,弃上清,留沉淀,加入5mL试剂四充分溶解,90℃水浴10min,冷却后3000g,25℃离心5min,取上清待测。
二、测定步骤:1、分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节双波长至530nm和755nm,蒸馏水调零。
α-淀粉酶(α-AL)活性检测试剂盒说明书
α-淀粉酶(α-AL )活性检测试剂盒说明书微量法注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC0615规格:100T/48S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体20 mL×1瓶常温保存试剂二液体5 mL×2瓶2-8℃保存试剂三粉剂×2支2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制:1、试剂一:若有黄色晶体析出,需加热溶解后再用;2、试剂二:临用前取1支试剂三加入1瓶试剂二中,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌粉剂至溶解,用不完的试剂2-8℃保存4周;3、标准品:10 mg 无水葡萄糖。
临用前加1 mL 蒸馏水,配成10 mg/mL 葡萄糖标准液,2-8℃保存两周。
产品说明:淀粉水解酶,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。
α-AL (EC 3.2.1.1)随机催化淀粉中α-1,4-糖苷键水解,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。
淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖,还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质,在540nm 有吸收峰;通过测定540nm 吸光度增加速率,计算淀粉酶活性。
α-AL 耐热,但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min 。
因此粗酶液经过70℃钝化15min ,就只有α-AL 能够催化淀粉水解。
Reducing Sugar3-Amino-5-Nitrosalicylate (540nm)注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)称取约0.1g 样本,加0.8mL 蒸馏水匀浆;匀浆后在室温下放置提取15min ,每隔5min 振荡1次,使其充分提取;6000g ,室温离心10min ,吸取上清液并且加蒸馏水定容至10mL ,摇匀,即为淀粉酶原液。
植物淀粉酶(Amylase)ELISA试剂盒说明书
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断植物(Plant)淀粉酶(Amylase)ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被淀粉酶(Amylase)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的淀粉酶(Amylase)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品活性。
样品收集、处理及保存方法1.样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行。
3.植物萃取液或其它相关样本:请1000x g离心20分钟,取上清即可检测。
4.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪(450nm)2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、250、500、1000、2000、4000U/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
