石蜡切片制备方法和操作技术过程
石蜡切片制作流程
石蜡切片制作流程以石蜡切片制作流程为标题，写一篇文章。
石蜡切片制作是一项常见的实验技术，在生物学、医学和材料科学等领域广泛应用。
石蜡切片可以用于显微镜下的观察和分析，能够提供关于细胞和组织结构的详细信息。
下面将介绍一下石蜡切片的制作流程。
1. 组织固定：首先，需要从感兴趣的样本中取得组织样本，并将其进行固定。
固定是为了保持组织的形态结构和化学成分，常用的固定剂有福尔马林、乙醛等。
固定过程中，需要确保样本完全浸泡在固定液中，通常需要数小时至数天的时间，以确保组织被充分固定。
2. 脱水：固定后的组织样本需要进行脱水处理，以去除其中的水分。
脱水是将样本中的水分逐渐替代为有机溶剂，常用的有乙醇、丙酮等。
通常采用递增浓度的有机溶剂，从低浓度逐渐提高到高浓度。
每个浓度的脱水液中，样本需要浸泡一定的时间，以确保脱水彻底。
3. 渗透：脱水后的组织样本需要进行渗透处理，以使其与石蜡更好地结合。
渗透剂通常为石蜡溶液，可以将样本浸泡在石蜡溶液中，以使其逐渐渗透进入组织内部。
渗透过程中，需要注意控制温度和时间，以确保渗透均匀。
4. 包埋：渗透后的组织样本需要进行包埋处理，即将其嵌入到石蜡中。
首先，将组织样本放置在石蜡模具中，并加入适量的石蜡。
然后，将模具放入石蜡包埋机中，利用加热和真空等处理，使石蜡与组织样本充分结合。
包埋过程中需要严格控制温度和时间，以确保石蜡固化完全。
5. 切片：包埋后的组织样本需要进行切片处理，以获取薄片供观察。
首先，使用切片机将石蜡块切割成薄片。
然后，将薄片置于载玻片上，并加热使其与载玻片结合。
最后，使用刮片等工具将石蜡薄片修整成所需的形状和大小。
6. 然后，对切片进行染色处理，以增强对组织结构的观察。
常用的染色方法有血液学染色、免疫组化染色等。
染色后，可以使用显微镜观察和分析切片中的细胞和组织结构。
总结起来，石蜡切片制作流程包括组织固定、脱水、渗透、包埋、切片和染色等步骤。
每个步骤都需要严格控制条件和时间，以确保制作出高质量的石蜡切片。
石蜡切片的主要步骤
石蜡切片的主要步骤石蜡切片是一种常用的制备薄片的技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。
本文将介绍石蜡切片的主要步骤，并详细说明每个步骤的操作方法和注意事项。
1. 样品固定和处理在进行石蜡切片之前，首先需要对待切样品进行固定和处理。
固定样品的方法可以根据实验的需要选择，常用的有乙醛固定、冰醋酸固定和福尔马林固定等。
处理样品的方法也根据实验目的而定，可以包括染色、脱水、透明化等步骤，以便更好地观察和研究样品。
2. 包埋将处理好的样品包埋在石蜡中，以便进行切片。
首先，将样品放入石蜡溶液中，使其充分浸泡。
然后，将石蜡溶液转移到恒温水浴中，使其逐渐固化。
在固化过程中，要确保样品均匀分布在石蜡中，避免出现气泡和空洞。
3. 切片切片是石蜡切片过程中最关键的一步。
首先，将固化的石蜡块从模具中取出，并放置在切片机的夹持装置上。
然后，调整切片机的切片厚度和速度，根据需要选择合适的参数。
接下来，使用切片刀将石蜡块切割成薄片。
在切割过程中，要保持手稳定，避免切片厚度不均匀或出现断层。
4. 切片取片切片切割完成后，需要将切片从切片刀上取下。
首先，使用镊子将切片从切片刀上小心取下，避免损坏或弯曲切片。
然后，将切片放置在预先准备好的载玻片上。
在放置切片时，要注意避免气泡的产生，可以使用专门的工具如细管吸气来帮助排除气泡。
5. 去除石蜡和染色切片取片后，需要将切片上的石蜡去除，并进行染色处理。
首先，将切片放入去石蜡剂中，使其充分浸泡。
然后，将切片转移到浸泡染色剂中，进行染色处理。
在去石蜡和染色过程中，要注意时间控制和温度控制，以确保染色效果和切片质量。
6. 封片和封边染色完成后，需要将切片做成封片，以保护切片并便于保存。
首先，将切片用透明胶片或玻璃片覆盖。
然后，使用封片胶或封片胶带将切片和覆盖物固定在一起。
接下来，将切片的边缘进行封边处理，以避免切片脱落或污染。
7. 干燥和贴标封片完成后，需要将切片进行干燥处理，并进行贴标。
石蜡切片制备方法和操作技术过程
醋酸-乙醇)、纳瓦兴(Navaschjn’s)固定液。
材料固定完毕，保存于加盖的容器内，贴上标签。
(三)抽气
植物材料内部由于含有空气，导致固定液不能完全渗入。
材料投入固定液后需要立即抽气，以便让固定液有效透入 材料组织中，排除材料内气泡的干扰。
一般抽气时间为20-30min。抽过气的材料在停止抽气后， 应沉入底部。
保持组织原有形态 熟悉要取材的部位 选择好组织的切面
• (二)固定
将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固定液 中，使细胞的新陈代谢瞬时停止，并保持细胞或组织的形态构 造及其内含物的状态不发生变化，使组织变硬，便于切片、着
色，同时具有防腐作用。
常用固定液：乙醇、甲醛、醋酸、液中的成分有可能会妨碍染色或发生沉淀、结晶，影
响观察；有的还会继续作用，使材料变质等，因此需要洗
去渗入细胞内部的固定液。
根据固定液的种类，需要用到不同的洗涤液，
常用的洗涤液有：水、70%乙醇或缓冲液
• (五)脱水
材料洗涤后残留的洗涤液，可能使材料分解变形，因此需用
脱水剂除去材料中的洗涤液，使组织逐渐变硬，以便让石蜡浸
在研究细胞、组织、胚胎以及微生物形态等方面石蜡切片 法是最理想的制片方法。
发 展 ：
石蜡切片技术应用已有300多年历史：
1665年，英国人胡克用来制作薄片的小刀可以称得上最早的 “切片机”； 一个世纪以后，英国植物学家John Hill设计了世界上第一台真 正意义上的切片机； 1883年，剑桥大学车间制造了一台轮转式切片机； 1894年Rudolf Jung开发了第一台能重复切片的滑动式切片机；
做切片方法
常规组织病理技术切片技术是病理检验技术的重要组成部分。
在实验室内的病理检查工作中，不仅要观察大体标本的病理变化，更重要的还要观察组织标本的病理变化，才能作出最后诊断。
大体标本的病理变化是用肉眼观察，而组织标本必须借助显微镜进行观察。
组织标本的质量将直接影响镜检观察，也就是影响到诊断和研究。
学习和从事切片技术工作，首先应当认识这一工作的重要性，提高责任感。
切片技术随着生物学和医学的发展而发展，随着光学仪器和切片机的日益精密而不断改进。
下面仅就目前兽医实验室最常用的石蜡切片的制作技术做一系统的介绍。
（一）石蜡切片制作方法和程序任何组织制成一张菲薄的切片标本需要经过一系列的处理过程，而每一过程的步骤和手续严密而复杂。
现将制作石蜡切片的主要程序介绍如下。
制作石蜡切片的主要程序：取材；固定；脱水；透明；浸蜡；包埋；切片；染色；封固。
1.取材病理组织大多数采自动物尸体剖检材料或活体检查组织，取材的种类、数量取决于诊断和研究的目的，病理组织要越新鲜越好，因此标本取材后要及时切成小块，进行固定。
取材时必须注意：⑴接受病理组织材料时，必须依据送检单详细检查送检物。
自己采的病料也要求及时填写送检单。
检查时注意标本名称、数量与送检单是否相符，并查明送检单位地址以及有无临床及化验等有关资料。
如果发现送检标本不符，标本固定不当以及标本发生腐败等而不能制作切片时，应立即退回；若检查无误，应将标本及时登记、编号。
⑵组织切块需用锐刀或剪，切忌对组织材料挤压，揉搓及扭折等损伤，以保持组织完整及生活时状态。
⑶切块要选择病变显著部位及可疑病灶。
切取组织块要包括病灶及其周围健康部分，重要病变可多取几块，以反映病变各阶段、各部分的形态变化。
采取组织应包括各该器官的各组成部分，如肾脏应包括被膜、肾皮质部、肾髓质部、肾乳头及肾盂。
⑷组织块不宜过大，通常长1厘米，宽为1.5厘米，厚度为0.3厘米，最宽可达1.5~3厘米，但厚度不超过0.5厘米为宜。
常用标本制备技术
常用标本制备技术一、常用光镜标本制备技术1.切片标本的制备：常用的切片方法为石蜡切片，其制备程序如下：⑴取材从动物身体割取所需的新鲜组织一小块（厚度约0.5厘米）。
手术愈快愈好，以防组织的死后变化。
⑵固定把切取的小块组织，迅速投入预先配好的固定液[如10%福尔马林、0.5%锇酸、包氏液、岑克氏液、卡氏等固定液]中固定，使组织细胞的蛋白质变性，组织块硬化，以保存组织细胞原有的形态。
⑶冲洗（洗涤）组织块自固定液取出后，须经流水冲洗或乙醇洗涤，使组织中含有的固定液全部除去，直至洗净为止。
⑷脱水脱水的目的在于除去组织中的水分。
因为组织中的水分和石蜡是不相溶的，为不使组织块在脱水时产生收缩，所以一定要经过各级浓度的脱水剂（如乙醇等）将水分脱净。
⑸透明组织块脱水后，须经既可和乙醇相混，亦可作石蜡溶剂的透明剂（如二甲苯）透明，使组织中的乙醇被透明剂所替代，才能浸蜡包埋。
⑹浸蜡浸蜡是将包埋剂（石蜡）透入整个组织的过程。
石蜡透入组织需要一定的温度（石蜡熔点）。
所以浸蜡都在恒温箱中进行。
⑺包埋制备一定形状的容器（如纸盒等），倒入熔化的石蜡，迅速夹取浸透石蜡的组织块放入盒内，待表面石蜡凝固后立即将容器投入水中，使它凝固成蜡块。
⑻切片组织块经上述处理后，不仅变硬，且有石蜡支撑，可用切片机将包埋组织的蜡块切成薄片，一般厚度是5～8微米。
⑼贴片把由切片机切下的蜡条，分割成小段，分别排放于滴有蒸馏水的载玻片上，在展片台上微热，使皱褶的蜡片伸展平正。
⑽烘片把贴有蜡片的载玻片置于45℃恒温箱中，烘烤3～4小时，使切片干燥。
⑾脱蜡与复水组织切片的脱蜡等过程是在染色缸中进行的，因此须预先准备洁净的染色缸，并分别放入二甲苯、各级浓度的乙醇及染料溶液，按顺序贴好标签。
染色前须先进行脱蜡和复水，即用二甲苯溶去切片上的石蜡后再经各级浓度乙醇（自高浓度到低浓度）下行到水的过程。
因为没有经过复水处理的切片不能用水溶性染料染色，所以在染色前必须再度复水。
石蜡切片流程范文
石蜡切片流程范文石蜡切片是一种常见的组织学技术，用于制备生物组织薄片，使其可以在显微镜下观察和分析。
下面是石蜡切片制备的详细流程。
1.组织固定：首先，需要选择适当的方法将生物组织进行固定，以保持其形状和结构。
最常用的方法是使用福尔马林溶液进行组织固定。
将组织样品置于福尔马林溶液中，通常需要固定24至48小时。
2.去水：固定完毕后，需要将组织中的水分除去，以便进行后续的处理。
通过逐渐提高样品中酒精浓度（例如70％、80％、95％和100％构成的酒精梯度）来逐步去除水分，通常每次浸泡20至30分钟。
3.清洁：去水后，通常需要对样品进行清洁，以去除可能存在的污物和其他杂质。
可以用清洁的醇溶液（例如100％酒精）浸泡样品数分钟，然后用去福尔马林等溶液洗涤样品。
4.浸渍：在石蜡切片制备过程中，需要将组织样品浸泡在石蜡中，以使其渗透并得到支撑。
选择适当的石蜡类型和温度很重要。
通常使用低熔点石蜡（例如58℃石蜡），在60至65℃的恒温水浴中加热并溶解石蜡。
5.渗透：将组织样品从酒精中转移到融化的石蜡中，通常需要经历多个步骤的渗透过程。
首先将样品浸泡在75％酒精中，然后再依次转移到浓缩的酒精溶液中（例如85％、95％和100％）和石蜡中，每次浸泡时间约为1小时。
6.包埋：当样品完成渗透后，需要进行包埋，即将渗透后的组织样品放置在切片模型中，并用石蜡封住。
将切片模型倒置，将溶解的石蜡缓慢倒入模型直到完全覆盖组织样品。
然后将切片模型固定在冷却装置中，等待石蜡冷却和固化。
7.切片：当石蜡块完全固化后，可以将其切割成所需的薄片。
通常使用旋转切片机或手动切片机进行切片。
将切片机的刀片调整到所需厚度（通常为3至5微米），将石蜡块放置在切片机上，并逐渐将刀片与石蜡块接触，以制备薄片。
8.制片：将切好的石蜡薄片静置在温水中，让其自然展开，并将其转移到预涂有胶水的载玻片上。
轻轻将玻片压在石蜡薄片上，以确保两者之间有良好的接触。
然后将载片放置在恒温台上，以便胶水干燥。
石蜡切片法
包埋过程中易出现的问题及解决办法
问题：包埋后的石蜡块应为均匀半透明状，有时出现白色浑浊 结晶（像雪花一样）部分，这样在切片时就有妨碍，不易切出 薄的切片。 原因：①组织内部或石蜡中混有透明剂；②脱水不干净；③石 蜡本身品质不良；④组织块移入纸盒时动作太慢，周围的石蜡 已成凝固状态；⑤冷却用水温度不够低，石蜡凝固太慢。 解决办法：属于前三个原因者应在包埋之前就须注意；属于后 二个原因者，可将包埋块再投入Ⅲ蜡中熔化后重新包埋，但必 须注意熔化包埋过的石蜡块的时间不宜过久。
脱水（常用脱水剂：乙醇；脱水原则：低浓度到高浓度）（目的？） 脱水时间：视材料的性质、大小而定 小鼠肝脏：在各级AL中停留0.5-1h； 植物叶片：在各级AL中停留2-4h； 注意：脱水应彻底，否则与二甲苯混合后混浊，必须倒回重脱水；如需过夜， 则停留在70%酒精中。
二、实验步骤（2）
透明（置换） 常用透明剂：二甲苯； 透明原则：低浓度到高浓度 （½ 二甲苯+ ½ 100%酒精 二甲苯 二甲苯） 透明时间：小鼠肝脏每级停留0.5-1h；植物叶片每级停留1-3h。
染色原理－－化学作用
化学作用的主要理论根据是染色剂的性质可分为酸性、碱性和 中性染色剂，而动、植物的细胞内—般也可区分为酸性(阴离子) 和碱性(阳离子)部分。当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳 离子时，就能与细胞的阴离子(酸件部分)较牢固地结合，当酸 性染色剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳 离子(碱性部分)较牢固地结合。 例如，细胞核，尤其是核内的染色质，主要由核酸组成，是酸 性的组成成分．故和碱性染色剂(苏木精)的亲和力很强，易于 着色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(伊红、曙红)的亲 和力很大，易于着色。
甲醛－醋酸－酒精液(FAA) 50%或70％酒精 90ml 冰醋酸 5ml 甲醛 5ml 特点：过去称”标准固定液“或”万能固定液“；是 组织形态中常用的固定液；同时兼作保存液。是植物 制片技术中较为良好的固定液和保存液。除单细胞和 丝状藻类外，均可用此液固定．也通用于昆虫和甲壳 类的固定。
石蜡切片机
石蜡切片机石蜡切片机是一种常见的实验室设备，主要用于制备石蜡切片。
石蜡切片是生物学和医学研究中常用的一种样品制备技术，可用于组织学切片、病理学诊断以及医学教育等领域。
工作原理石蜡切片机的工作原理比较简单，它主要由滑刀、定刀、切片台、移动台、刀架、刀盘、蜡筒等组成。
其工作过程一般如下：1.将石蜡样本放入蜡筒中加热至蜡体液化，然后将蜡液倒入切片台中。
2.调节切片机上的刀架和定刀使其夹紧滑刀，然后将滑刀从刀架中取出，平稳地移到蜡体表面，切下一片薄薄的石蜡样本。
3.将滑刀上的石蜡切片移动到移动台上，调节光源和放大倍数，用显微镜观察切片下的结构并进行病理学诊断或组织学研究。
技术要点及注意事项在使用石蜡切片机时，需要掌握一些技术要点和注意事项，以确保切片效果和实验安全。
以下是一些常见的技术要点和注意事项：1.切片机的刀片应定期更换和磨削，以保持好的切片质量。
2.操作时应注意刀片的角度和切片的厚度，以适应不同的实验需要。
3.切片前应充分加热样本，使其尽量均匀涂敷于切片台中，有利于切片的取样和质量控制。
4.在切片过程中，应随时检查刀片和样品表面的状态，调节切片机上的控制器，适时调整切片速度和厚度。
5.操作人员需佩戴助手手套和防护眼镜等安全设备，切勿用手触摸加热部件，以防烧伤。
应用领域及展望石蜡切片技术在生物和医学研究中应用广泛，特别是在组织学领域中，几乎是必需的样品制备方法。
它可以制备出高质量、高保真度的组织学切片，有助于研究细胞、组织、器官的结构和功能。
未来，随着生物技术和医学研究的不断发展，石蜡切片技术也将不断改进，设备性能和样本的处理方法将更加高效、精确和智能化，为疾病诊断、药物研发和生物学基础研究等领域提供更加有力的支持。
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醋酸-乙醇)、纳瓦兴(Navaschjn’s)固定液。
材料固定完毕，保存于加盖的容器内，贴上标签。
(三)抽气
植物材料内部由于含有空气，导致固定液不能完全渗入。
材料投入固定液后需要立即抽气，以便让固定液有效透入 材料组织中，排除材料内气泡的干扰。
一般抽气时间为20-30min。抽过气的材料在停止抽气后， 应沉入底部。
入细胞。
常用的脱水剂是不同浓度的酒精。 酒精浓度可逐渐升高，脱水要充分。
(六)透明
用透明剂置换出材料中的脱水剂，使熔化的石蜡能顺利
进入材料中。
常为矿物质油或植物油。
二甲苯是目前应用最广的透明剂 作用迅速，但易使材料变脆。
•
(七)浸蜡
逐步清除材料中的透明剂，使石蜡充分渗透于材料内部。
• (四)洗涤
固定液中的成分有可能会妨碍染色或发生沉淀、结晶，影
响观察；有的还会继续作用，使材料变质等，因此需要洗
去渗入细胞内部的固定液。
根据固定液的种类，需要用到不同的洗涤液，
常用的洗涤液有：水、70%乙醇或缓冲液
• (五)脱水
材料洗涤后残留的洗涤液，可能使材料分解变形，因此需用
脱水剂除去材料中的洗涤液，使组织逐渐变硬，以便让石蜡浸
苏木精染色5min，自来水冲洗。
盐酸乙醇分色 流水冲洗 置伊红液2min 常规脱水，透明。
•
(十二) 封藏
封藏于中性树胶中，使材料能在显微镜下清晰地显示出来， 并能长期保存。
• (十一) 染色
即根据植物细胞中不同的化学性质，用染料分别进行染色， 在不同染液的作用下，将其显示出来，使之在光学显微镜 下，能够完全的观察观察切片中细胞与组织的形态与构造 及其内含物，所以一般用混合染料染色。
常用的染料 苏木精-伊红（HE）染色法
步骤：
二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗。
如今，生物切片机已经发展为五大系列、上百个品种，即轮式 切片机、平推式切片机、恒温冷冻切片机、震动切片机和超薄 切片机。
石蜡切片法的一般流程 • 取材 透明 染色 固定 浸蜡 封藏 抽气 包埋 洗涤 切片 脱水 贴片
• (一)取材
材料新鲜 组织块力求小而薄
勿使组织块受挤压、重复切割。
石蜡切片制备方法和操作技 术过程
报告人：李雪松
• 石蜡切片的简介 • 石蜡切片技术的发展
石蜡切片法的一般流程
石蜡切片：
是生物技术研究的一种操作方法，是以石蜡作包埋剂，用 切片机将材料切成薄片，经一系列处理制成永久玻片。 石蜡切片法是显微切片技术的主要方法，它有许多优点:
①比较节省时间，容易操作； ②可以切成薄的片段(2um)，而且能连续切片； ③容易附贴于玻片上；
保持组织原有形态 熟悉要取材的部位 选择好组织的切面
• (二)固定
将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固定液 中，使细胞的新陈代谢瞬时停止，并保持细胞或组织的形态构 造及其内含物的状态不发生变化，使组织变硬，便于切片、着
色，同时具有防腐作用。
常用固定液：乙醇、甲醛、醋酸、FAA 固定液(福尔马林-冰
④标本经石蜡包埋后，可永久保存。
在研究细胞、组织、胚胎以及微生物形态等方面石蜡切片 法是最理想的制片方法。
发 展 ：
石蜡切片技术应用已有300多年历史：
1665年，英国人胡克用来制作薄片的小刀可以称得上最早的 “切片机”； 一个世纪以后，英国植物学家John Hill设计了世界上第一台真 正意义上的切片机； 1883年，剑桥大学车间制造了一台轮转式切片机； 1894年Rudolf Jung开发了第一台能重复切片的滑动式切片机；
浸蜡是一个渐进的过程，浸蜡的时间视材料种类、大小而
调节。
•
(八)包埋
将浸蜡后的材料包埋于石蜡中。
(九)切片
即将包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带。
(十)贴片
Hale Waihona Puke 用贴片剂把切片平铺贴在载玻片上，烘干后染色、观察。 常用的贴片剂有下列二种: (1) 明胶贴片剂 (2) 蛋清贴片剂 常用水捞法