DNA提取及PCR扩增实验报告
pcr技术实验报告
pcr技术实验报告PCR技术实验报告引言PCR（聚合酶链式反应）是一种重要的分子生物学技术，它能够在短时间内扩增DNA片段，从而使得微量的DNA得以扩增至足够多的量进行进一步的分析和研究。
本实验旨在通过PCR技术扩增目标DNA片段，验证其在实验条件下的可行性和准确性。
实验方法1. 样品准备：从细胞或组织中提取DNA，并进行纯化处理。
2. PCR反应体系的准备：按照所需的PCR反应体系配制反应液。
3. PCR扩增：将DNA模板加入PCR反应管中，进行PCR扩增反应。
4. 扩增产物分析：将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。
实验结果通过PCR技术扩增，成功获得了目标DNA片段，并在琼脂糖凝胶电泳中观察到了明显的扩增产物条带。
实验结果表明PCR技术在实验条件下具有较高的可行性和准确性，能够快速、高效地扩增目标DNA片段。
讨论本实验结果验证了PCR技术在实验条件下的可行性和准确性，为进一步的分子生物学研究提供了可靠的技术支持。
同时，本实验还表明PCR技术在分子诊断、基因克隆等领域具有重要的应用前景。
结论通过PCR技术实验，成功扩增了目标DNA片段，并验证了其在实验条件下的可行性和准确性。
PCR技术的高效、快速特点使其在分子生物学研究和临床诊断中具有广阔的应用前景。
总结PCR技术作为一种重要的分子生物学技术，已经成为现代生命科学研究中不可或缺的工具。
本实验结果验证了PCR技术在实验条件下的可行性和准确性，为进一步的研究和应用提供了可靠的技术支持。
PCR技术的不断发展和完善，将为生命科学领域的研究和临床诊断带来更多的可能性和机遇。
pcr扩增的实验报告
pcr扩增的实验报告PCR扩增实验报告在生物学研究中，PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，它能够在体外快速、高效地扩增DNA片段。
本实验旨在利用PCR技术扩增目标DNA片段，并对扩增产物进行分析。
实验方法：1. 提取DNA样本：首先，我们从细胞或组织中提取目标DNA样本，这可以通过常规的DNA提取试剂盒来完成。
2. PCR反应体系：将提取的DNA样本与引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶和PCR 缓冲液混合，构建PCR反应体系。
3. PCR扩增：将PCR反应体系置于热循环仪中，进行一系列的温度变化循环，包括变性、退火和延伸步骤，以使DNA片段得以扩增。
4. 分析PCR产物：利用琼脂糖凝胶电泳或其他分析方法，对PCR扩增产物进行分析，确认目标DNA片段是否被成功扩增。
实验结果：经过PCR扩增反应后，我们成功获得了目标DNA片段的扩增产物。
通过琼脂糖凝胶电泳分析，我们确认了目标DNA片段的扩增产物大小和纯度，并且与预期的DNA序列相符合。
实验讨论：PCR扩增技术具有高度的特异性和灵敏度，能够在较短的时间内扩增目标DNA 片段，并且不受DNA起始量的限制。
因此，PCR扩增技术在分子生物学研究中具有广泛的应用价值，包括基因克隆、DNA测序、基因突变分析等领域。
结论：本实验成功利用PCR技术扩增了目标DNA片段，并对扩增产物进行了分析。
PCR扩增技术的成功应用为我们提供了一种快速、高效的DNA扩增方法，为后续的分子生物学研究奠定了基础。
通过本次实验，我们深刻认识到PCR扩增技术在生物学研究中的重要性，相信在今后的科学研究中，PCR技术将继续发挥重要作用，为生命科学领域的发展做出更大的贡献。
测定基因的实验报告
一、实验目的1. 掌握DNA提取、PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳等分子生物学技术；2. 学习基因的测定方法；3. 了解基因测序在生物研究中的应用。
二、实验原理1. DNA提取：利用细胞裂解、盐析等方法将DNA从细胞中提取出来；2. PCR扩增：通过设计特异性引物，利用DNA聚合酶在体外扩增目标DNA片段；3. 琼脂糖凝胶电泳：将PCR产物在琼脂糖凝胶上电泳分离，根据迁移率判断DNA 片段大小；4. 基因测序：利用DNA测序仪对目标DNA片段进行测序，获取基因序列。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠；2. 试剂：DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、琼脂糖、DNA分子量标准、DNA测序试剂盒等；3. 仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、DNA测序仪等。
四、实验步骤1. DNA提取（1）取小鼠组织，加入DNA提取试剂盒中的裂解液，充分匀浆；（2）加入蛋白酶K，56℃水浴1小时，使蛋白质变性；（3）加入饱和NaCl溶液，混匀，室温静置10分钟；（4）12,000 r/min离心10分钟，取上清液；（5）加入异丙醇，混匀，室温静置10分钟；（6）12,000 r/min离心10分钟，弃上清液；（7）加入70%乙醇洗涤沉淀，12,000 r/min离心5分钟；（8）弃上清液，室温晾干；（9）加入TE缓冲液溶解DNA。
2. PCR扩增（1）设计特异性引物，针对目标基因；（2）配置PCR反应体系，包括DNA模板、引物、dNTPs、PCR缓冲液、Taq酶等；（3）PCR反应条件：94℃预变性5分钟，94℃变性30秒，退火温度根据引物设计，延伸温度72℃，延伸时间1分钟，共35个循环；（4）PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测。
3. 琼脂糖凝胶电泳（1）配置琼脂糖凝胶，加入DNA分子量标准；（2）将PCR产物与DNA分子量标准混匀，点样；（3）电泳条件：100 V，电泳1小时；（4）凝胶成像系统观察电泳结果。
4. 基因测序（1）将PCR产物纯化，送至测序公司进行测序；（2）获取基因序列，进行序列比对和分析。
pcr技术扩增DNA实验报告
pcr技术扩增DNA实验报告摘要：PCR（聚合酶链反应）是一种广泛应用于分子生物学领域的技术，通过该技术可以在短时间内获得大量特定DNA序列的复制。
本实验旨在使用PCR技术对DNA进行扩增，验证其可行性和准确性。
实验结果表明，PCR技术成功扩增了目标DNA，并呈现出预期的结果。
引言：PCR技术的发明对分子生物学领域做出了巨大贡献。
PCR通过扩增DNA片段来满足各种实验和应用的需求，例如基因克隆、遗传突变检测和DNA起源研究等。
PCR技术的原理基于DNA链的反应性，在特定条件下通过DNA引物、酶和核苷酸扩增目标DNA序列。
本实验旨在验证PCR技术的可行性和准确性，并展示扩增DNA的结果。
材料与方法：材料：1. DNA模板：提供待扩增的DNA样本。
2. 引物：设计用于识别并扩增目标DNA序列的引物。
3. PCR反应液：包含缓冲液、DNA聚合酶、dNTP、镁离子。
4. PCR仪：用于控制PCR反应的温度和时间。
方法：1. 准备PCR反应液：按照指定比例将缓冲液、DNA聚合酶、dNTP、镁离子混合制备PCR反应液。
2. 加入DNA模板和引物：将待扩增的DNA模板和引物加入PCR反应液中。
3. PCR反应条件设置：根据扩增目标和引物的特性设置PCR反应的温度和时间。
4. PCR反应进行：将PCR反应管放入PCR仪中，进行PCR反应。
5. 扩增产物分析：将PCR反应的产物进行凝胶电泳分析。
结果：经过PCR反应后，我们成功扩增了目标DNA序列，并获得了预期的结果。
凝胶电泳分析显示PCR扩增产物呈现出目标大小的DNA条带，并且PCR扩增产物的浓度较高。
讨论：PCR技术的成功扩增显示了其在分子生物学领域的重要性和应用价值。
通过PCR技术，我们可以在保证准确性和快速性的前提下，生成大量特定DNA序列。
在本实验中，我们通过PCR技术扩增了目标DNA，证明了PCR技术在实验中的可行性和准确性。
此外，本实验还展示了PCR反应条件对扩增结果的重要影响。
测序实验报告
一、实验目的1. 学习和掌握DNA提取、PCR扩增和测序的基本原理和操作方法；2. 了解DNA测序技术在生物科学研究中的应用；3. 掌握测序数据分析的基本方法。
二、实验仪器与试剂1. 仪器：高速离心机、PCR仪、凝胶成像系统、测序仪等；2. 试剂：DNA提取试剂盒、PCR试剂、测序试剂、DNA标记物等。
三、实验原理1. DNA提取：采用试剂盒法提取DNA，利用酚-氯仿法去除蛋白质和RNA，得到纯净的DNA；2. PCR扩增：利用PCR技术扩增目标DNA片段，得到足够量的模板DNA；3. 测序：利用测序仪对扩增后的DNA片段进行测序，得到序列信息。
四、实验步骤1. DNA提取（1）将样本加入提取缓冲液，涡旋混匀；（2）加入无水乙醇，静置沉淀；（3）将沉淀转移至离心管，离心去除上清液；（4）加入70%乙醇洗涤沉淀，离心去除上清液；（5）加入TE缓冲液溶解DNA，测定DNA浓度。
2. PCR扩增（1）设计引物，进行PCR反应；（2）PCR反应条件：95℃预变性5分钟，然后进行35个循环（95℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸1分钟），最后延伸7分钟；（3）PCR产物进行电泳检测，观察扩增效果。
3. 测序（1）将PCR产物进行纯化，去除杂质；（2）进行测序反应，将PCR产物与测序引物结合，进行测序；（3）将测序数据上传至测序仪，进行序列分析。
五、实验结果与分析1. DNA提取：电泳结果显示，DNA条带清晰，表明DNA提取成功；2. PCR扩增：电泳结果显示，PCR产物条带清晰，表明PCR扩增成功；3. 测序：测序结果显示，测序数据完整，质量较高。
六、实验结论1. 本实验成功提取了目标DNA；2. 成功扩增了目标DNA片段；3. 成功完成了DNA测序，得到了高质量的数据。
七、实验反思与体会1. 在DNA提取过程中，要注意控制实验操作过程中的温度和时间，以确保DNA的完整性；2. 在PCR扩增过程中，要优化反应条件，以确保扩增效率；3. 在测序过程中，要注意测序数据的读取和分析，以确保数据的准确性。
pcr扩增实验报告
pcr扩增实验报告篇一：DNA提取及PCR扩增实验报告PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳刘琳1131428 环境科学一、实验目的1．学习并掌握PCR扩增的基本原理与实验技术。
2．对扩增后的DNA进行琼脂糖凝胶电泳试验，并分析相应结果。
二、实验原理1. PCR扩增多聚酶链反应（PCR）技术的原理类似于DNA的天然复制过程。
在微量离心管中加入适量缓冲液，加入微量模板DNA、四种脱氧核苷酸（dNTP）、耐热Taq聚合酶及两个合成DNA的引物，而后加热使模板DNA在高温下（94℃）变性，双链解链，这是所谓变性阶段。
降低溶液温度，使合成引物在低温（55℃）与模板DNA互补退火形成部分双链，这是所谓退火阶段。
溶液反应温度升至中温（72℃），在Tap酶作用下，用四种dNTP 为原料，引物为复制起点，模板DNA的一条双链在解链和退火之后延伸为两条双链，这是延伸阶段。
如此反复，在同一反应体系中可重复高温变性、低温退火和DNA合成这一循环，使产物DNA 重复合成，并在重复过程中，前一循环的产物DNA可作为后一循环的模板DNA而参与DNA的合成，使产物DNA 的量按指数方式扩增。
经过30～40个循环，DNA扩增即可完成。
2. DNA琼脂糖凝胶电泳实验DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
该电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
三、实验材料仪器：PCR扩增仪、薄壁管、离心管、移液枪、枪头、微波炉、电泳仪、水平电泳槽、制胶版、紫外透射仪。
试剂：TapDNA聚合酶、dNTP、buffer、两种引物、16S全长DNA样本、无菌ddH2O、模板DNA 、TBE、琼脂糖、EB、显色剂。
pcr基因扩增实验报告
pcr基因扩增实验报告PCR基因扩增实验报告引言：PCR（聚合酶链反应）是一种体外DNA复制技术，通过特定引物和DNA聚合酶酶活，可以在短时间内扩增特定DNA片段。
PCR技术广泛应用于基因工程、疾病诊断和法医学等领域。
实验目的：1.掌握PCR技术的基本原理和操作方法；2.通过PCR扩增特定基因片段，验证扩增效果；3.了解PCR技术在基因工程中的应用。
材料与方法：1.实验材料：PCR试剂盒、DNA模板、引物、PCR仪、电泳仪等。
2.实验步骤：（1）提取DNA模板；（2）配置PCR反应体系；（3）设置PCR反应条件；（4）进行PCR扩增；（5）检测扩增产物；（6）进行电泳分析。
结果与讨论：1.提取DNA模板：从样本中提取DNA模板是PCR扩增的前提，本实验采用常规的酚/氯仿法提取DNA模板，提取后的DNA浓度为X ng/μl，纯度良好，满足PCR 扩增的要求。
2.配置PCR反应体系：根据PCR试剂盒的说明书，按照一定比例配置PCR反应体系，包括DNA模板、引物、dNTPs、聚合酶等。
反应体系中的每个组分都有其特定的浓度和作用，合理配置反应体系可以提高PCR扩增效果。
3.设置PCR反应条件：PCR反应需要设置一系列温度和时间参数，包括变性、退火和延伸等步骤。
本实验设置的PCR反应条件为：预变性95℃，30s；变性95℃，5s；退火60℃，30s；延伸72℃，30s，共循环30次。
4.进行PCR扩增：将PCR反应体系加入PCR管，放入PCR仪中进行扩增反应。
根据设定的PCR反应条件，PCR仪会自动控制温度和时间，反复循环进行扩增。
本实验扩增后的PCR产物为明亮的条带，表明PCR扩增成功。
5.检测扩增产物：为了验证PCR扩增的准确性，我们对扩增产物进行测序分析。
结果显示，扩增产物与目标基因序列完全匹配，证明PCR扩增的准确性和可靠性。
6.进行电泳分析：将PCR产物与DNA分子量标记物共同进行电泳分析，根据PCR产物的大小和标记物的位置，可以确定PCR产物的大小。
pcr扩增的实验报告
pcr扩增的实验报告PCR扩增的实验报告引言：PCR（聚合酶链式反应）是一种在分子生物学中广泛应用的技术，它能够通过体外扩增DNA片段，从而使得微量的DNA样本得以大量复制。
PCR扩增技术的发展，极大地促进了基因组学、遗传学和生物医学研究的进展。
本文将介绍我们在实验室中进行的PCR扩增实验的方法、结果和讨论。
材料与方法：1. DNA模板：我们使用了来自人类基因组的DNA样本作为PCR扩增的模板。
2. 引物：设计了两对引物，分别用于扩增目标DNA片段的前端和后端。
3. dNTPs：使用了含有四种脱氧核苷酸的混合物。
4. 聚合酶：选择了高度稳定的热稳聚合酶。
5. 缓冲液：使用了含有镁离子的PCR缓冲液。
6. 模板DNA扩增仪：我们使用了PCR仪来控制反应的温度和时间。
7. 凝胶电泳仪：用于检测扩增产物的大小和纯度。
实验步骤：1. 首先，我们从DNA样本中提取所需的模板DNA。
2. 根据目标DNA片段的序列，设计引物，并合成引物。
3. 准备PCR反应体系：在无菌条件下，将DNA模板、引物、dNTPs、聚合酶和缓冲液按照一定比例混合。
4. 将PCR反应体系放入PCR仪中，设置好扩增程序的温度和时间。
5. 扩增结束后，取出PCR反应体系，进行凝胶电泳分析。
6. 在凝胶电泳仪上运行PCR产物和DNA分子量标准，观察扩增产物的大小和纯度。
结果与讨论：通过凝胶电泳分析，我们成功地观察到了目标DNA片段的扩增产物。
根据扩增产物的大小与DNA分子量标准的比较，我们可以确定PCR扩增反应的特异性和准确性。
此外，我们还观察到扩增产物的纯度较高，没有出现明显的非特异性扩增。
PCR扩增技术的优点在于其快速、高效和特异性。
通过合理设计引物，可以选择性地扩增目标DNA片段，而不受其他DNA的干扰。
此外，PCR扩增还可以在短时间内复制大量的DNA，从而满足后续实验的需要。
然而，PCR扩增也存在一些潜在的问题。
例如，扩增反应中可能出现引物的非特异性结合，导致非特异性扩增产物的出现。
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PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳
刘琳1131428 环境科学
一、实验目的
1 •学习并掌握PCR扩增的基本原理与实验技术。
2 •对扩增后的DNA进行琼脂糖凝胶电泳试验，并分析相应结果。
二、实验原理
1. PCR 扩增
多聚酶链反应（PCR技术的原理类似于DNA的天然复制过程。
在微量离心管中加入适量缓冲液，加入微量模板DNA四种脱氧核苷酸（dNTP）、耐热Taq聚合酶及两个合成DNA
的引物，而后加热使模板DNA在高温下（94C ）变性，双链解链，这是所谓变性阶段。
降低溶液温度，使合成引物在低温（55C ）与模板DNA互补退火形成部分双链，这是所谓退火阶段。
溶液反应温度升至中温（72C）,在Tap酶作用下，用四种dNTP为原料，弓I物为复制起点，模板DNA 勺一条双链在解链和退火之后延伸为两条双链，这是延伸阶段。
如此反复，在
同一反应体系中可重复高温变性、低温退火和DNA合成这一循环，使产物DNA重复合成，并
在重复过程中，前一循环的产物DNA可作为后一循环的模板DNA而参与DNA的合成，使产物DNA的量按指数方式扩增。
经过30〜40个循环，DNA扩增即可完成。
2. DNA琼脂糖凝胶电泳实验
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，
DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA 分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
该电泳方法
以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物
的目的。
三、实验材料
仪器：PCR扩增仪、0.2ul薄壁管、1.5ml离心管、移液枪、枪头、微波炉、电泳仪、水平电泳槽、制胶版、紫外透射仪。
试剂：TapDNA聚合酶、dNTR buffer、两种引物、16S全长DNA羊本、无菌ddHO 模板DNA、TBE琼脂糖、EB显色剂。
四、实验步骤
1. PCR 扩增
本次试验选择细菌16S rDNA V3 区片段进行扩增。
1.1 根据计算，首先取1.5ml 离心管按照
2.5ul 10 x Buffer 、1 ul dNTR 0.5 ul 341GC、
0.5 ul 534 、0.125 ul Taq 、19.375u ddH 2O的比例配置足量的PCR反应体系。
1.2 分别向9个薄壁管中分别加入24 ul 的反应体系，并分别添加8种不同的模版，并于第9个薄壁管中加入无菌ddfO作为阴性对照。
1.3将薄壁管放入PCR扩增仪中，按照预定程序进行PCR扩增。
其中循环过程需要达到30~40 次。
程序如下：
预变性：94 C 3min
循环：94 C 变性30s
55 C 退火30s
72 C 延伸30s
末次延伸:72 C 5min
1.4 PCR扩增完成后，将样品取出并保存于15C环境中。
2. DNA琼脂糖凝胶电泳实验
2.1称取0.2g琼脂糖粉末，放到一锥形瓶中，加入适量的0.5 XTBE电泳缓冲液。
然后置微
波炉加热至完全溶化，溶液透明。
摇匀，待冷却至60C左右，在胶液内加入适量的EB
2.2取有机玻璃制胶板槽，在一端插好梳子，在槽内缓慢倒入已冷至60 C左右的胶液，使
之形成均匀水平的胶面。
2.3待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。
2.4在槽内加入0.5 X TBE电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面。
取 1 d缓冲液和5 d待测DNA
样品混合后，用移液枪滴加至凝胶的加样孔中。
2.5接通电泳仪和电泳槽，并接通电源，调节稳压输出，电压最高不超过5V/cm,开始电泳。
点样端放阴极端。
根据经验调节电压使分带清晰。
2.6观察溴酚兰的带（蓝色）的移动。
当其移动至距胶板前沿约1cm处，可停止电泳。
2.7在紫外透视仪的样品台上重新铺上一张保鲜膜，赶去气泡平铺，然后把凝胶放在上面。
关上样品室外门，打开紫外灯，通过观察孔进行观察。
五、实验结果与讨论
如图所示：从左至右，分别是模版1-8
号，第9列为阴性对照。
前8列均有明显的条带出现，而阴性对照
无显示，说明扩增整体效果很好。
图中有上下
两条线，上面一条线所覆盖的条带基本可以代
表扩增的产生的片段位置，参照图可以看出扩
增片段在200bp左右。
在第9个阴性对照的第
二条线处可以看到较为模糊的条带，并非是出
现假阴性，而是由于二聚物而产生的条带。
通
过该条带与最右侧的marker对比可知该片段出
现在100bp左右，并非由于实验操作等问题而
产生的污染。
实验的照片显示实验结果有拖尾现象，但
是并不影响后续实验。
在实验过程中由于有些
试剂加到了管壁上面，并没有完全加入，可能
会出现一些误
差。
另外在第1列条带中出现了其他的亮带，可能是由于在前期于量过少而进行的摇匀和融合等操作产生了非特异性扩增，也有可能是因为胶板制作过程中
梳子的位置不合适或者胶板制作时边缘处不够均匀导致产生污染。
但总体而言，实验结果较
为满意。
六、实验注意事项
1. 由于PCR技术非常敏感，可使一个DNA分子得以扩增，装有PCR式剂的离心管打开之
前，应先在微量离心机上作瞬间离心使液体沉积于管底。
PCR T增反应的条件，要控制好温
度、时间和循环次数。
2. 最好在加完所有其它反应成分后才加模板DNA
3. 配琼脂糖时应使其完全溶化后方可制胶。
4. EB具有致癌作用，配制及使用时应带一次性手套。
并在专门的实验室内使用。
七、实验收获
1. 通过本次实验学习并掌握了PCF反应的基本原理、实验过程及技术。
2. 通过本次实验掌握了电泳实验分离DNA的原理和方法。
八、思考题
1 、如果你的研究中要扩增大肠杆菌某个酶的基因，你如何进行相关实验？
通过PCR T增出想要的片段，然后通过凝胶电泳实验进行回收，并与合适的载体连接，转化进感受态细胞。
经过培养提取质粒，进行酶切或PCR验证，测序最终验证，保存菌种
2. 一对引物序列为5 -GACTCCAGTCGAATCTACC和-35 -AACCGTGGCGACACCGCT计算它们的Tm值及选择合适的退火温度，如果按你算的退火温度做PCR寸没有得到相应的产物，你怎
么解决？
5‘-GACTCCAGTCGAATCTACC'A-3
Tm值=4( G+C +2(A+T)-(5 〜10C ) =4 ( 3+7) +2 ( 6+4) -(5 〜10C )
=60 C -(5 〜10C ) =50~55 C
5‘-AACCGTGGCGACACCG'CTAA
Tm值=4 ( G+C +2(A+T) -(5 〜10C )
=4(5+7)+2(6+2) -(5 〜10C )
=64 C -(5 〜10 C )=54~59 C
因此退火温度可以选择在55 C
可以通过分析几个逐步提高退火温度的反应以提高特异性。
开始低于估算的Tm5C ，以
2C 为增量，逐步提高退火温度。
较高的退火温度会减少引物二聚体和非特异性产物的形成。
为获得最佳结果，两个引物应具有近似的Tm值。
引物对的Tm差异如果超过5C ,就会令引
物在循环中使用较低的退火温度而表现出明显的错误起始。
如果两个引物Tm不同，将退火
温度设定为比最低的Tm低5C或者为了提高特异性，可以在根据较高Tm设计的退火温度
先进行5个循环，然后在根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。
这使得在较为严紧
的条件下可以获得目的模板的部分拷贝。