PCR反应及琼脂糖电泳实验报告
实验2-PCR与琼脂糖凝胶电泳-New
1）吸取18µl水稻总DNA+3µl loading buffer, 混匀
Mark DNA: 5µl λDNA-HindⅢ
2） PCR产物+3µl loading buffer，混匀
Mark DNA : 5µl 100bp DNA 5、电泳：打开电源开关，调节电压至3-5 V/cm（约 100V），注意电极方向（可见到溴酚蓝条带 从负极向正极移动）；约30min后可观察 。
10× PCR buffer：
500mM KCl 200mM Tris-HCl（pH8.3）
0.01% 明胶 （ gelatin ）
15-20mM MgCl2
1×TBE缓冲液（1000ml）：电场中的导体 Tris 硼酸 EDTA 10.8 g 5.5 g 0.93 g
载样缓冲液（6×）：含指示剂溴芬蓝和二甲苯青，可在 可见光下指示样品的泳动过程 溴芬蓝 二甲苯青 甘油 0.25 % 0.25 % 30 %
0.2 µ l 引物R（10 µ M） :22179R
0.2 µ l Taq酶（5U/ µ l） 15.2 µ l ddH2O Total 18.0 µ l 模板DNA， 混匀，放入PCR仪中开始反应
最后加 2 µ l
PCR技术
PCR反应混合液（总体积20 µl）
成 份 ddH2O 1 15.2 n n × 15.2 10 152 25 380
72 ℃，延伸5 min PCR反应在带热盖的PCR仪上进行，大约
需要2小时。
电泳技术
3、制胶（浓度为2%）：
1）称取2.0g 琼脂糖，加入盛有200ml 1×TBE电泳缓冲 液的500ml蓝盖瓶中，摇匀，在微波炉上加热至琼脂 糖完全溶解，冷却到60 ℃，加入10µl Goldview并摇 匀。
pcr及琼脂糖凝胶电泳结果
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pcr检测实验报告
pcr检测实验报告PCR检测实验报告引言：PCR（聚合酶链式反应）是一种在分子生物学中广泛应用的技术，通过扩增目标DNA片段，使其数量增加到可以被检测的水平。
本实验旨在利用PCR技术对特定基因进行检测，并分析其在不同样本中的表达情况。
实验方法：1. 样本收集：从不同来源的细胞或组织中提取DNA。
本实验选择了人体血液样本，采用血液抽取器获取血液样本。
2. DNA提取：使用商业DNA提取试剂盒，按照说明书的步骤进行DNA提取。
通过离心和洗涤等步骤，获得高质量的DNA样本。
3. PCR反应体系准备：根据实验需要，制备PCR反应液。
反应液中包含DNA 模板、引物、酶和缓冲液等成分。
确保反应体系中各组分的浓度和比例正确。
4. PCR扩增：将PCR反应体系加入PCR仪器中，按照设定的温度和时间程序进行扩增。
PCR反应过程包括变性、退火和延伸等阶段，使目标DNA片段得到扩增。
5. PCR产物检测：将PCR产物进行凝胶电泳分析。
将PCR产物与DNA分子量标准品一同加载到琼脂糖凝胶上，通过电泳分离，观察PCR产物的大小和带电性。
使用紫外线照射，观察凝胶上的DNA条带。
实验结果：通过PCR反应和凝胶电泳分析，我们成功扩增了目标基因的DNA片段，并观察到了相应的DNA条带。
根据凝胶上的条带大小，我们可以初步判断目标基因在不同样本中的表达情况。
讨论：PCR技术在分子生物学研究中具有广泛的应用前景。
通过PCR扩增，可以快速、高效地获取目标基因的大量DNA片段，为后续的测序、克隆和表达研究提供了基础。
本实验中，我们选择了血液样本作为PCR反应的起始材料，这是因为血液中含有丰富的DNA，且采集较为方便。
然而，不同样本的DNA提取过程会存在一定的差异，可能会对PCR反应的结果产生影响。
因此，在实际应用中，需要根据具体样本的特点和实验目的，进行合适的DNA提取方法选择和优化。
此外，在PCR反应中，引物的选择也是至关重要的。
引物的设计应考虑目标基因的特异性，避免与其他非目标基因发生扩增。
pcr扩增产物的电泳分析
pcr扩增产物的电泳分析PCR扩增是一种基本技术，它可以在短时间内制备大量DNA片段。
通过PCR扩增，可以在多样本（包括细胞、组织、体液等）中迅速检测到特定的基因或其他分子。
PCR扩增还可以用于DNA测序、基因工程研究等领域。
但是PCR扩增产物的电泳分析更是重要的检测手段之一。
PCR扩增产物的电泳分析有两种常用的方法：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
琼脂糖凝胶电泳分析常用来检测较短的DNA片段（200-800bp），而聚丙烯酰胺凝胶电泳则用于检测长的DNA片段（500bp以上）。
琼脂糖凝胶电泳需要制备一定浓度的琼脂糖凝胶，通常是1%的琼脂糖缓冲液。
将PCR扩增产物混合掉在凝胶上的样品孔中，通电引导电离之后，DNA分子按大小迁移至凝胶较低位置。
然后，将凝胶浸泡在DNA荧光染料中，使DNA片段变得可见。
通过比较待测样品和一系列不同大小的DNA片段标准的迁移距离，我们可以确定PCR扩增产物的大小和数量。
聚丙烯酰胺凝胶电泳是电泳分析PCR扩增产物的另一种方法。
与琼脂糖凝胶电泳不同，聚丙烯酰胺凝胶是一种合成的聚合物，其孔隙大小可以根据所需精度而调节。
它还具有耐久性，重复使用方便。
使用聚丙烯酰胺凝胶电泳，样品的迁移距离与琼脂糖凝胶电泳相同，通过荧光染料检测到PCR扩增产物。
无论采用哪种方法，PCR扩增产物的电泳分析都需要严格控制实验条件，并采用多个标准参照来验证结果的可靠性。
另外，一些常见问题也需要被考虑和解决，例如对碱基偏差，电泳实验的鲁棒性等。
总体来说，PCR扩增产物的电泳分析提供了一种简单且准确的定量PCR扩增产物的手段，广泛应用于分子生物学、医学以及生物技术工业。
琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物
❖ 琼脂糖是一种线性多糖聚合物; ❖ 浓度越高;孔隙越小;其分辨能力就越强;
琼脂糖浓度% 线型DNA分子的分离范围Kb
03
5～60
06
1～20
07
0 8～1009源自0 5～7120 9～6
15
0 2～3
12 0
0 1～2
➢ DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时;有电荷效应与分 子筛效应; 不同的DNA;分子量大小及构型不同;电泳 时的泳动率就不同;从而分出不同的区带;
注意事项：
EB是致癌物质;切勿用手接触;更不要污染环境;
上样缓冲液
电泳指示剂溴酚兰在碱性液体中呈紫兰色;一般 与蔗糖 甘油或聚蔗糖400组成上样缓冲液;
作用： ①增加样品比重;以确保DNA均匀沉入加样孔内; ②形成肉眼可见的指示带;预测核酸电泳的速度和位置; ③使样品呈色;使加样操作更方便;
实验步骤：琼脂糖凝胶制备
❖ 如果凝胶重为0 1g;其体积可视为100μl;则加入300μl溶胶液;
❖ 4 56℃水浴放置5分钟或直至胶完全溶解; 每 23分钟涡旋震荡一次帮助加速溶解;
❖ 5 将上一步所得溶液加入吸附柱AC中吸附柱放入收 集管中; 12;000 rpm离心3060秒;倒掉收集管中的废 液;
❖ 如果总体积超过750μl;可分两次将溶液加入同一个吸附柱 AC中;
注意事项：
❖ EB是致癌物质;切勿用手接触;更不要污染环 境;
❖ 实验过程中操作要保持安静 镇定;注意样品不 能污染;
实验仪器 材料与试剂
一 仪器 ❖ 1 水平式凝胶电泳槽 ❖ 2 稳压电泳仪 ❖ 3 电炉 ❖ 4 紫外检测仪 ❖ 5 台式离心机
二 材料 ❖ 实验一中的PCR产物
三 试剂
11-琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物
【目的】 目的】
掌握DNA琼脂糖凝胶电泳检测的原理，熟悉其 琼脂糖凝胶电泳检测的原理， 掌握 琼脂糖凝胶电泳检测的原理 方法 。
【原理】 原理】
琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作 用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束， 用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型 凝胶。 凝胶。
Excitation
SG 5’ 3’ SG
SG SG
SG SG
SG 3’ 5’
Emission
Green结合的数量与DNA含量成正比 结合的数量与DNA SYBR Green结合的数量与DNA含量成正比
——定量 定量
PCR产物混合荧光染料（ PCR产物混合荧光染料（SYBR Green 产物混合荧光染料 I)以及指示剂 溴酚蓝） 以及指示剂（ I)以及指示剂（溴酚蓝）后，以琼脂糖 凝胶为支持介质，在电泳冲液中电泳， 凝胶为支持介质，在电泳冲液中电泳， 根据DNA片段的大小、 DNA片段的大小 根据DNA片段的大小、构型分离成不同区 在紫外光下观察。 带，在紫外光下观察。
1
1
轻轻混匀。 轻轻混匀。
制样
制胶 倒上缓冲 液，使其 没过点样 孔。 点样
样品（10μL） 样品（10μ
小心！！！ 小心！！！ 点样孔不要 戳破
3
制样
制胶
点样 80－100V， 40min, 负极向正极。 － 负极向正极。 ， 结束后，取出琼脂糖凝胶， 结束后，取出琼脂糖凝胶，置于 紫外观察箱中观察 中观察。 紫外观察箱中观察。
【试剂与器材】 试剂与器材】
• • • • • • 1.PCR产物、荧光染料（ 1.PCR产物、荧光染料（SYBR Green) PCR产物 2.样品缓冲液 含溴酚蓝） 样品缓冲液（ 2.样品缓冲液（含溴酚蓝） 2.微量加样器 2.微量加样器 3.电泳仪 电泳仪、 3.电泳仪、电泳槽 4.琼脂糖 4.琼脂糖 5.TBE电泳缓冲液 pH8.0） 电泳缓冲液（ 5.TBE电泳缓冲液（pH8.0）
pcr扩增实验报告
pcr扩增实验报告篇一：DNA提取及PCR扩增实验报告PCR扩增及DNA琼脂糖凝胶电泳刘琳1131428 环境科学一、实验目的1．学习并掌握PCR扩增的基本原理与实验技术。
2．对扩增后的DNA进行琼脂糖凝胶电泳试验，并分析相应结果。
二、实验原理1. PCR扩增多聚酶链反应（PCR）技术的原理类似于DNA的天然复制过程。
在微量离心管中加入适量缓冲液，加入微量模板DNA、四种脱氧核苷酸（dNTP）、耐热Taq聚合酶及两个合成DNA的引物，而后加热使模板DNA在高温下（94℃）变性，双链解链，这是所谓变性阶段。
降低溶液温度，使合成引物在低温（55℃）与模板DNA互补退火形成部分双链，这是所谓退火阶段。
溶液反应温度升至中温（72℃），在Tap酶作用下，用四种dNTP 为原料，引物为复制起点，模板DNA的一条双链在解链和退火之后延伸为两条双链，这是延伸阶段。
如此反复，在同一反应体系中可重复高温变性、低温退火和DNA合成这一循环，使产物DNA 重复合成，并在重复过程中，前一循环的产物DNA可作为后一循环的模板DNA而参与DNA的合成，使产物DNA 的量按指数方式扩增。
经过30～40个循环，DNA扩增即可完成。
2. DNA琼脂糖凝胶电泳实验DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
该电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
三、实验材料仪器：PCR扩增仪、薄壁管、离心管、移液枪、枪头、微波炉、电泳仪、水平电泳槽、制胶版、紫外透射仪。
试剂：TapDNA聚合酶、dNTP、buffer、两种引物、16S全长DNA样本、无菌ddH2O、模板DNA 、TBE、琼脂糖、EB、显色剂。
PCR反应及琼脂糖电泳实验报告
PCR反应及琼脂糖电泳实验报告摘要：本实验通过PCR反应和琼脂糖电泳的方法，对DNA分子进行扩增和分析。
通过设置不同的PCR反应条件，并检测扩增产物的大小，从而探究PCR反应的最佳条件。
同时利用琼脂糖电泳对PCR产物的大小和纯度进行分析，评估PCR反应的结果。
实验结果表明，PCR反应的最佳温度为60℃，最佳循环次数为30次。
琼脂糖电泳结果显示，PCR反应产物与目标DNA条带大小基本一致，且纯度较高。
关键词：PCR反应；琼脂糖电泳；扩增产物；循环次数；温度；目标DNA条带引言：PCR（Polymerase Chain Reaction）反应是一种快速扩增特定DNA序列的技术，具有高灵敏度和高特异性。
琼脂糖电泳则是一种常用的DNA分析方法，用于检测PCR扩增产物的大小和纯度。
本实验旨在通过PCR反应和琼脂糖电泳的方法，对DNA分子进行扩增和分析，探究PCR反应的最佳条件，并评估PCR反应结果的准确性。
材料与方法：1.材料实验所需的材料包括：PCR试剂盒、DNA模板、引物、琼脂糖、琼脂糖电泳缓冲液等。
2.方法2.1PCR反应首先，在PCR试剂盒中配置PCR反应混合液，包括DNA模板、引物、Taq聚合酶和其他试剂。
将混合液分装至PCR反应管中，并设置不同的PCR反应条件，如温度和循环次数等。
放入PCR仪中进行反应。
2.2DNA分析将PCR反应产物混合后，加入琼脂糖电泳缓冲液，将混合液加入琼脂糖电泳槽中。
开启电泳仪进行电泳，待电泳结束后，观察琼脂糖胶中的DNA条带，判断PCR反应产物的大小和纯度。
结果：3.1PCR反应条件优化本实验设置不同的PCR反应温度和循环次数，通过琼脂糖电泳分析PCR产物的大小，选取最佳PCR反应条件。
结果显示，在60℃的温度下，PCR反应产物的大小最合适，与目标DNA条带大小基本一致。
循环次数方面，30次循环给出了较好的PCR反应结果，产物表现出较高的纯度。
3.2琼脂糖电泳分析通过琼脂糖电泳分析PCR反应产物的大小和纯度。
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多聚酶链式反应（PCR）扩增DNA片段及琼脂糖凝胶电泳产物检测
一、实验目的：
1、了解PCR技术的基本操作
2、理解PCR的原理
3、讨论PCR的应用
二、实验原理：
PCR是一种在体外模拟细胞内环境进行迅速扩增DNA片段的技术，这一技术需要模板、四种脱氧核苷酸等组分条件外，还需要不同温度环境以进行DNA的解旋和聚
1、PCR反应组分
细胞内DNA复制条件分析：
2、PCR反应条件
PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，现在使用的PCR 仪实质上也是一台能够自动调控温度的仪器。
PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤──变性、复性和延伸。
(!)变性（模板DNA解旋）
模板DNA经加热至90℃以上。
一定时间后，使模板DNA双链解离，使成为单链，以便于它与引物结合，为下轮反应作准备。
(2)复性（退火）
模板DNA经加热变性成单链后，温度降到50℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
(3)延伸
DNA模板－引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下以脱氧核苷酸为原料，以母链为模板，按碱基互补配对的原则与半保留复制的原理，合成一条新的DNA链。
3、PCR产物的检测
(1)紫外分光光度计
DNA在260nm的紫外波段有一强烈的吸收峰，可以通过与蒸馏水的对比进而计算扩增出DNA的含量。
(2)琼脂糖凝胶电泳
DNA在电厂作用下，可以由电源的负极向正极泳动，泳动的速度与DNA片段的长度成负相关，与电压强度成正比，因此可以分离不同长度的DNA。
在有DNA marker（不同已知碱基
对大小的DNA片段的混合物）的条件下，由于不同碱基大小的DNA片段在琼脂糖凝胶上涌动的速度不同，因此电泳完毕后会出现在胶块的不同位置。
通过将扩增出的DNA片段与已知的条带做比较，可以大概推测出该片段的碱基对的大小。
如果要进一步检测其大小，可以换另外规格的DNA marker 继续电泳。
核酸荧光染料可以与DNA嵌合，一起电泳，DNA图谱观察仪可以激发特定的蓝色光源，荧光染料在该光照射下可见到荧光，荧光的亮度与DNA大小成正比。
三、实验仪器及试剂
7种PCR组分微量可调移液器离心管 PCR仪水平电泳槽电泳仪电源紫外分光光度计 250ml锥形瓶(封口膜) 记号笔卫生纸
四、实验步骤
1、DNA体外扩增
(1) 将所有试剂管瞬时离心一次（4000r/min,1min），使管壁没有残留药品，在引物
I 和引物II的离心管内用移液器各加入40ul双蒸水（ddH2O），混匀后瞬时离心一次。
所有的离心管都摆到双面板上。
(2)向装有Taq DNA 聚合酶的离心管按下表加入以下成分：
原有的Taq DNA 聚合酶有15ul，此时混合液体系共计500ul,此步骤由第一、二组同学合作完成。
（在实验老师的监督指导下操作，确保此后其他同学的实验顺利进行）
(3)共分25组，第一、二组的同学并入其他小组进行实验。
每组取20ul的上述混合液于的离心管中，加入15ul的液体石蜡封闭体系，以防止在加热过程中蒸发。
(4) 对自己组的离心管上进行标记之后，放到PCR仪上进行DNA扩增。
2、琼脂糖凝胶电泳检测DNA
（1）用蒸馏水将电泳槽和梳子冲洗干净，放在水平桌面上，并架好梳子。
（2）配制浓度为1%（1 g/100 mL）的琼脂糖凝胶2块。
在锥形瓶中，称取1g的琼脂糖粉，加入100ml 1x电泳缓冲液，用封口膜封住瓶口后在微波炉内加热，使琼脂糖粉熔化，
然后冷却至60 ℃，倒入电泳槽中（每块胶50ml），插好梳子，待其凝固。
（电泳槽首先用透明胶带将两端封住再进行倒胶）
（3）待胶凝固后，去掉胶带纸，小心移去梳子，注意不要破坏加样孔。
将倒胶槽至于水平电泳槽内，梳井（点样孔）一端朝负极方向。
向电泳槽中缓缓倒入1x电泳缓冲液，以没过胶面2 mm为宜。
（5）将80ul的6xLoading Buffer 加入到80ul的核酸荧光染料中，按1:1比例混合。
（6）移液器枪头插入到扩增出的样品离心管的底部，吸取20ul样品于另一的离心管中，注意不要吸到液体石蜡，再加1ul的染料混合液，充分振荡混匀。
用移液器吸取10ul缓慢加入梳井内，枪头抵到梳井口，以防止样液被缓冲液冲散，此外，为防止手抖将凝胶破坏，可以用左手扶住右手的手腕。
（6）盖上电泳槽盖，接通电源，电压为80 V，电流最大。
（7）当指示剂移动到凝胶中间时，断开电源，终止电泳。
（8）取出凝胶块，在DNA图谱观察仪中观察电泳带及其位置，判断扩增产物的情况。
3、紫外分光光度计检测DNA含量
（1）最后1组取2ulPCR反应液，加入98ul蒸馏水，将样品稀释50倍。
（2）以蒸馏水作为空白对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计的读数调节至零。
（3）加入DNA稀释液100ul至比色杯中，测定260nm处的光吸收值。
（4）根据下面的公式计算DNA含量：
DNA含量（ul/ml）=50*（260nm的读数）x稀释倍数
五、注意事项
1 离心机上盖没有锁，在离心机运转时，转速最高可达16000r/min，如果这
时打开离心机上盖，里面的离心管就会甩出，对人身造成危险，切忌等全部停下来之后再打开上盖取出离心管。
另外，离心管一定要对称放置。
2 水平电泳槽在电泳时一定要盖上上盖，此时的缓冲液电压可以达到80V，
大大超过了人体的安全电压，切忌不能用手触碰缓冲液或者是电源两端接头。