亚甲基蓝染色鉴别死活酵母的原理
实验二 酵母菌的死活染色和放线菌的形态观察(二类参照)
实验二酵母菌的死活染色及放线菌的形态观察赵奕玲 121180169一．实验目的1.观察酵母菌的形态及出芽生殖。
2掌握酵母菌的死活细胞的鉴定方法。
3.掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征。
二．实验原理1.酵母菌形态及出芽方式观察的基本原理：酵母菌的死活染色通过用美蓝染色制成水浸片，来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。
美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。
2.酵母菌子囊孢子观察的基本原理：子囊类酵母菌是以接合产生形成子囊和子囊孢子的方式进行有性繁殖的。
它们一般通过邻近的两个形态相同而性别不同的细胞各自伸出一根管状的原生质突起相互接触、局部融合并形成一条通道，再通过质、核配和减数分裂形成4或8个子核，然后它们各自与周围的原生质结合在一起，再在其表面形成一层孢子壁，这些一个个子囊孢子就成熟了，而原有的营养细胞则成了子囊。
能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。
酵母菌形成子囊孢子需一定条件，其中麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。
孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。
因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。
在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。
3.放线菌形态观察的基本原理：放线菌在固体培养基上呈辐射状生长而得名。
放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。
菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基表面的气生菌丝。
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定_百替生物
实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。
芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。
本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
三、实验器材1.材料：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。
2.试剂：O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。
3.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。
四、实验步骤1.美蓝浸片观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑去少量酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。
注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。
（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。
注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。
（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
（4）染色约0.5h后再次观察，注意死细胞数量是否增加。
2.水-碘浸片观察在载玻片中央滴一滴碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。
细胞死活鉴定
【实验目的】1、回顾细胞培养的有关知识；2、学习小鼠脾细胞的分离技术及简单的细胞培养技术3、掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用；4、了解细胞原代培养的基本方法及操作过程；5、学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法；6、学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数；7、学习实验过程的详细描述及实验记录。
【实验原理】细胞培养指的是在无菌条件下，把动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并且维持其结构和功能的一种培养技术。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
从供体获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法称为细胞的原代培养。
当培养的动物细胞生长增殖达到一定密度，形成致密的单层细胞时，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，从一个容器中以1：2或其他比例转移到另一个容器中扩大培养的方法，称为细胞的传代培养。
传代培养的累计次数就是细胞的培养代数。
高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体的功能活动是十分困难的。
但如果把活细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则要方便和简单得多。
被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类揭开生、老、病、死的规律，探索优生、抗衰老和防治各种疾病的途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，使其向有利于人类健康长寿的方向发展。
因此动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法。
活细胞和死亡细胞在生理技能和性质上主要存在一下差异：①细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性地通过；而细胞死后，细胞膜受损，其通透性增加。
实验二 酵母菌的死活染色和放线菌的形态观察
实验二酵母菌的死活染色及放线菌的形态观察赵奕玲 121180169一．实验目的1.观察酵母菌的形态及出芽生殖。
2掌握酵母菌的死活细胞的鉴定方法。
3.掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征。
二．实验原理1.酵母菌形态及出芽方式观察的基本原理：酵母菌的死活染色通过用美蓝染色制成水浸片，来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。
美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。
2.酵母菌子囊孢子观察的基本原理：子囊类酵母菌是以接合产生形成子囊和子囊孢子的方式进行有性繁殖的。
它们一般通过邻近的两个形态相同而性别不同的细胞各自伸出一根管状的原生质突起相互接触、局部融合并形成一条通道，再通过质、核配和减数分裂形成4或8个子核，然后它们各自与周围的原生质结合在一起，再在其表面形成一层孢子壁，这些一个个子囊孢子就成熟了，而原有的营养细胞则成了子囊。
能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。
酵母菌形成子囊孢子需一定条件，其中麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。
孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。
因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。
在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。
3.放线菌形态观察的基本原理：放线菌在固体培养基上呈辐射状生长而得名。
放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。
菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基表面的气生菌丝。
细菌活菌亚甲蓝染色原理
细菌活菌亚甲蓝染色原理
亚甲蓝染色法是一种常用的细菌染色方法，它可以使细菌的染色体染上蓝色，同时可以区分细菌活菌与死菌。
该染色法的原理是利用亚甲蓝对细菌细胞壁和染色体的亲和力，使细菌染上蓝色。
在进行亚甲蓝染色前，需要先将菌液平铺于玻璃片上，晾干后进行固定。
固定的方法有多种，如火焰法、甲醛固定法等。
然后将亚甲蓝溶液滴于细菌上，静置2-3分钟后用水轻轻冲洗几遍，使多余的染料洗掉。
最后用纸巾将玻璃片吸干，即可观察到染色结果。
在染色结果中，活菌的染色体呈现出深蓝色，而死菌则呈现出浅蓝色或无色。
这是因为亚甲蓝对细胞膜和染色体的亲和力较弱，只有在活菌中才能充分渗透并染色。
而死菌细胞膜已经破裂，亚甲蓝无法渗透到细胞内部染色体上。
细菌活菌亚甲蓝染色法是一种简单、快速、易于操作的染色方法，可以用于鉴定细菌的形态、大小和排列方式，同时也是一种常用的生物学实验技术。
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细胞培养与细胞生死状态的鉴别
姓名程开源系年级2010级临床医学八年制组别同组者孙琳科目分子细胞生物学目细胞培养与细胞生死状态的鉴别学号201000232012【实验目的】1.学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。
2.了解并掌握用组织块贴壁培养法和消化细胞培养法进行动物细胞原代培养的实验方法。
3.熟练掌握动物细胞传代培养的实验方法。
4.学习细胞生死状态鉴别的方法。
5.了解细胞生死状态鉴别的原理。
6.熟悉和掌握各种鉴别细胞生死状态方法的判定特征。
7.掌握细胞技术方法，计算细胞存货率。
【实验原理】细胞培养指的是在无菌条件下，把动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体内的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并且维持其结构和功能的一种培养技术。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
从供体获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法称为细胞的原代培养。
当培养的动物细胞生长增殖达到一定密度，形成致密的单层细胞时，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，从一个容器中以1：2或其他比例转移到另一个容器中扩大培养的方法，称为细胞的传代培养。
传代培养的累计次数就是细胞的培养代数。
高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的。
但如果把活细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则要方便和简单得多。
被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类揭开生、老、病、死的规律，探索优生、抗衰老和防治各种疾病的途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，使其向有利于人类健康长寿的方向发展。
因此动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法。
活细胞和死亡细胞在生理技能和性质上主要存在一下差异：①细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性地通过；而细胞死后，细胞膜受损，其通透性增加。
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定
实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。
芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。
本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
三、试剂与器材1.材料酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。
2.试剂0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。
3.器材显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。
四、实验内容1.美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检2.水-碘浸片观察五、关键步骤及注意事项1.染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。
2.用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。
六、思考题1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。
2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌? 实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
酵母菌死活鉴别原理
酵母菌死活鉴别原理嘿，咱今天就来讲讲酵母菌死活鉴别原理。
你说这酵母菌啊，就像一群小小的精灵，在我们看不见的地方忙碌着。
咱先想想啊，活的酵母菌和死的酵母菌那肯定不一样呀！就好像活蹦乱跳的小兔子和已经没了气的小兔子，差别大了去了嘛！那怎么来分辨它们呢？其实啊，有个挺简单的办法，就是利用一种染料。
这染料可神奇了，它能跟活的酵母菌玩个小把戏，却对死的酵母菌不理不睬。
就好像是一个聪明的小伙伴，能分得清谁是好朋友，谁只是个路人甲。
你看啊，当我们把染料加进去的时候，活的酵母菌就会把染料拒之门外，嘿，它可精着呢，不让染料进去捣乱。
而死的酵母菌呢，就没办法啦，染料就会大摇大摆地进去，给它染上颜色。
这不就一下子区分开了嘛！这就好像在一个大派对上，活的酵母菌是那些穿着漂亮衣服尽情跳舞的人，而死的酵母菌就是那些倒在一边没动静的。
我们用这个染料的办法，不就像是有了一双火眼金睛，能清楚地看到谁在活跃，谁已经歇菜了嘛！咱再深入想想，这酵母菌在我们生活里可重要啦！做面包要靠它，酿酒也要靠它。
要是分不清它们是死是活，那做出的面包能好吃吗？酿出的酒能香醇吗？那肯定不行啊！所以学会这个鉴别原理，就像是掌握了一门神奇的魔法，能让我们更好地利用这些小家伙们。
你说这多有意思啊！就这么一个小小的鉴别方法，却有着大大的用处。
它能让我们知道酵母菌们的状态，就像了解我们身边朋友的心情一样。
难道不是很神奇吗？而且啊，这也提醒我们，生活中的很多小细节其实都有着大学问呢！我们可不能小瞧了它们。
总之啊，酵母菌死活鉴别原理就是这么一个实用又有趣的东西，学会了它，你就能更好地和酵母菌这些小精灵打交道啦！原创不易，请尊重原创，谢谢!。
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亚甲基蓝染色鉴别死活酵母的原理
亚甲基蓝染色鉴别死活酵母的原理是利用亚甲基蓝是一种胞内氧化还原指示剂，可以通过与活细胞内还原态NADH反应，形成蓝色的亚甲基蓝离子。
死细胞或凋亡细胞中的NADH含量较低，无法与亚甲基蓝形成蓝色产物。
具体原理如下：
1. 活细胞内的还原态NADH与亚甲基蓝发生反应，生成蓝色的亚甲基蓝离子。
这是因为还原态NADH可以将亚甲基蓝的氧化态还原为还原态，形成蓝色产物。
2. 死细胞或凋亡细胞中的NADH含量较低，无法提供足够的还原电子与亚甲基蓝发生反应，因此无法产生蓝色产物。
通过观察染色后细胞的颜色变化，可以判断细胞的活力状态。
活细胞呈现蓝色，因为其内部含有还原态NADH；而死细胞或凋亡细胞则无色或呈现浅蓝色，因为其NADH含量较低。
这样可以通过亚甲基蓝染色来快速鉴别细胞的生存状态。