细菌的培养和分离
实验五 微生物的分离、接种及培养法
实验五微生物的分离、接种及培养法一目的要求1.掌握倒平板的方法、划线分离法、稀释平板分离法和菌落（活菌）计数法。
2.熟练掌握微生物的接种技术，学会微生物的一般培养方法和无菌操作技术。
二实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的分离方法有： 1) 平板划线分离法；2）稀释平板分离法。
在食品发酵工业中，通过微生物的分离、纯化，选育优良的微生物菌种，以提高产品的质量和产量；在食品卫生管理方面，需要进行微生物检测，必须将微生物单一分离出来，加以鉴别和研究。
土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
微生物的分离和接种是微生物学中重要的技术之一，需要严格的无菌操作，否则使得微生物实验毫无意义。
三实验材料1.菌种：葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、酵母菌、毛霉、曲霉、青霉等含菌样品。
2.培养基：肉汤蛋白胨培养基（斜面、平板）、肉汤蛋白胨液体培养基、蔡氏琼脂培养基（斜面、平板）。
3.土壤（自带）或其他物品；无菌水，无菌培养基，无菌吸管，无菌三角瓶等。
四实验内容与步骤（一）微生物的分离技术1. 平板划线分离法借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，以获得单个菌落，从而达到分离的目的。
具体方法如下：倒制平板→制备含菌样品稀释液→划线→倒置适温培养→观察记录（1)倒制平板：将固体培养基熔化→冷却至 50-55℃→注入培养皿内 15ml（无菌操作）→旋匀→静置凝固→即成平板→在皿盖边贴标。
（2)含菌样液制备：样品少许（1-10g），加入盛有无菌水的试管内，摇匀，制成菌悬液即可，能直接划线的样品（如体液、黏液、污水等），可省去这操作。
（3)划线：左手持平板，接种环经灼烧灭菌后，以无菌操作取样，迅速将接种环伸入培养皿，轻轻划线（切勿把平板表面划破）。
然后将培养皿倒置放入恒温培养箱37℃，培养24-48 小时，观察平板上出现的现象，注意菌落的形状，并做记录。
细菌的分离培养与纯培养实验报告
细菌的分离培养与纯培养实验报告一、实验目的本实验旨在掌握细菌的分离培养方法，了解纯培养的原理及方法，以及熟悉细菌培养基的制备和使用。
二、实验原理1. 细菌分离培养方法细菌分离培养是指将混合菌落中的单一细菌分离出来，使其在无竞争的环境中独立生长。
常用的方法有均匀涂布法、斜坡涂布法和点式涂布法。
2. 纯培养原理及方法纯培养是指将混合菌落中同一种细菌分离出来并进行单独培养。
常用的方法有挑选法和稀释法。
3. 细菌培养基制备与使用细菌培养基是供给微生物生长发育所需营养物质和条件的一种人工环境。
根据不同需求可制备不同类型的细菌培养基，如寒偏好性、厭氧性、选择性、差异性等。
常用的细菌培养基有普通营养琼脂平板、LB 平板等。
三、实验步骤1. 细菌分离培养（1）取一支无菌的铂丝，将其消毒并冷却。
（2）取一份混合菌落，将铂丝在其表面轻轻刮几下，使细菌附着在铂丝上。
（3）将铂丝均匀涂布于琼脂平板上。
（4）重复以上步骤，涂布多个琼脂平板。
（5）将琼脂平板放置于恒温箱中，在适宜的温度下培养。
2. 纯培养（1）取一份混合菌落，在显微镜下观察并挑选出同一种细菌。
（2）取一支无菌的铂丝，在混合菌落表面轻轻刮几下，使细菌附着在铂丝上。
（3）将铂丝均匀涂布于琼脂平板上，并进行单独培养。
3. 细菌培养基制备与使用（1）按照需要制备不同类型的细菌培养基，并进行消毒灭菌处理。
（2）将需要进行分离或纯化的混合菌落均匀涂布于培养基上，进行培养。
四、实验结果1. 细菌分离培养经过适当时间的培养后，可看到琼脂平板上出现单一的细菌菌落。
2. 纯培养经过适当时间的培养后，可看到琼脂平板上只有挑选出的同一种细菌菌落。
3. 细菌培养基制备与使用制备好的细菌培养基可用于分离、纯化和大量繁殖特定细菌。
五、实验注意事项1. 实验器材需消毒并严格无菌操作。
2. 均匀涂布法需注意铂丝在琼脂平板上均匀涂布。
3. 液体培养基需注意摇晃均匀以使细菌均匀分布。
4. 实验结束后要彻底清洗和消毒实验器材和工作台面。
实验四：细菌的接种、培养和分离技术
实验四：细菌的接种、培养和分离技术一、实验目的与要求：（1）掌握从环境土壤、水体、活性污泥等中分离培养细菌的方法;从而获得若干种细菌纯培养技能（2）掌握细菌纯种分离的方法：稀释平板分离法和平板划线法..（3）掌握几种接种技术：斜面接种技术、穿刺接种、稀释平板涂布法等..二、实验原理在土壤、水、空气或人及动、植物体中;不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起;当我们希望获得某一种微生物时;就必须从混杂的微生物类群中分离它;以得到只含有这一种微生物的纯培养;这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化..为了获得某种微生物的纯培养..一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同;而供给它适宜的培养条件;或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长;而抑制其他菌生长的环境;从而淘汰其他一些不需要的微生物;再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物;直至得到纯菌株..三、实验器材1、牛肉膏蛋白胨培养基2、盛9ml无菌水的试管;盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶;1ml和5ml无菌吸管;无菌培养皿；3、接种环;土样;酒精灯等..四、操作步骤1、倒平板将加热融化的牛肉膏蛋白胨培养基倒平板;并标明培养基的名称..2、贴标签接种前在试管上贴上标签;注明菌名、接种日期、接种人姓名等..贴在距试管口径2-3厘米的位置..3、点燃酒精灯..4、接种取接种环右手拿接种环如握钢笔一样、在火焰上将环端烧红灭菌;然后将有可能伸入试管的其余部分;均用火烧过灭菌..环冷却将灼烧过的接种环伸入菌种管;先使环接触边壁;使其冷却..取菌种待环冷却后轻轻沾取经稀释10倍的土壤悬液-环;然后将接种环移出菌种管;注意不要使环的部分碰到管壁;取出后不可使环通过火焰..接种在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环在平板上划线..划线的方法很多;但无论哪种方法划线;其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释;使形成单个菌落..常用的划线方法有下列二种：⑴用接种环以无菌操作挑取土壤悬液一环;先在平板培养基的一边作第一次平行划线3-4条;再转动培养皿约70°角;并将接种环上剩余物烧掉;待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线;再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线图A..划线完毕后;盖上皿盖;倒置于温室培养..⑵将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线图 B..划线完毕后;盖上皿盖;倒置温室培养..环灭菌将接种环烧红灭菌..5、挑菌将培养后长出的单个菌落分别挑取接种到上述三种培养基的斜面上;分别置25℃和28℃温室中培养;待菌苔长出后;检查菌苔是否单纯;也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物;若有其他杂菌混杂;就要再一次进行分离、纯化;直到获得纯培养..四、注意事项1、实验操作过程中无菌操作..。
细菌的分离、培养和鉴定
② 加富培养基：在基础培养基中加入某些特殊营养物质 （如血液/血清、酵母浸膏或生长因子等）；用以培养对 营养要求高的微生物（2216E）
③ 选择培养基：利用细菌对某种或某些化学物质的敏感性 不同；在培养基中加入这类物质，利于所需分离的细菌生 长，而抑制不需要的细菌生长，从而达到分离某种微生物 的目的。（中国科学院海洋研究所专利：一种定量检测鳗弧 菌的选择性培养基及其制备）【利用鳗弧菌对氨苄青霉素的抗性 】
④ 鉴别培养基：是一类含有某种特定化合物或试剂的培养
基。某种细菌在这种培养基上培养后，产生某种代谢产物，
能与这种特定化合物或试剂发生某种明显的特征性反应；
从而达到区分不同的微生物.。（TCBS）
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ ❖ 病料在接种培养基后，经过一段时间，应检查其 生长状况。首先用肉眼检查有无细菌生长；若有， 则需进一步检查菌落是否纯一。形态特征包括： 大小、形状、突起或扁平、凹陷、边缘（光滑、 波形、锯齿状、卷发状等）、颜色（红色、灰白 色、黄色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度 （不透明、半透明、透明等）和粘度等
水可直接涂布平板
• 平板置于28℃ 恒温培养箱培养24h，观察细菌生
长状况
（注意：操作台在使用前后都需要用酒精棉球擦拭
台面，保持操作台的整洁）
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二、细菌的培养
培养基：培养基是指由人工方法配合而成的，用于微生物 培养、分离、鉴别、研究和保存菌种用的混合营养制品。
培养基的种类
① 基础培养基：含有一般细菌生长繁殖需要的基本营养物 质；可作为一些特殊培养基的基础成分（普通营养琼脂）
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生化鉴定管
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养 基质的分解能力也不一样，因而代谢产物 或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用
细菌的培养与分离技术
细菌的培养与分离技术● 考点◇ 基本条件◇ 细菌的接种与分离技术◇ 细菌培养的方法◇ 细菌的生长现象◇ 细菌L型的检查【内容讲解】细菌培养是将细菌接种到培养基内，并在适当的环境内，使细菌生长和繁殖。
分离培养是指从标本中培养出细菌或者从混有多种细菌的标本中将各个菌种分别同时培养出来。
一、基本条件（一）细菌实验室（二）无菌实验室（三）基本设备和器具（一）细菌实验室标本接种、培养、分离、鉴定及药敏试验等工作都要在此完成。
1.细菌室必须安装严密的门窗，以防室内环境受到外界的污染。
且室内禁用风扇，避免细菌的播散。
2.细菌室必须安装供空气消毒的紫外线灯，置于操作台上面lm处，每天开始工作前照射20min。
对其消毒效果要定期检查，及时更换失效的灯管。
3.室内应备有消毒剂，用于试验中发生菌液洒溅时的及时消毒处理。
同时还应备有供工作人员浸手用的盛有消毒剂的水盆、肥皂及自来水源等。
4.室内操作台须每日用消毒剂擦洗，地面至少一周用消毒剂擦洗l次。
5.对接收的标本、无菌器具、用过的物品等应明显分开并放在指定位置。
同时要对用过的物品及时进行灭菌处理。
6.细菌室根据当地的气温特点，安装空调机，以适合细菌实验工作。
同时室内应设置必要的消防设备。
（二）无菌实验室无菌实验室是细菌实验室内用于无菌操作的小室，其内部装饰、消毒条件要求更严格。
1.无菌室应完全封闭，人员出入应有两道门，其间应隔有缓冲区。
2.用前应以紫外线消毒30min，定期用乳酸或甲醛熏蒸，彻底消毒。
3.在无菌室中一般仅限于分装无菌的培养基及传染性强的细菌的接种，不进行有菌标本的分离及其他操作。
4.无菌室内应仅限操作人员进入，而且进入无菌室应着隔离衣和专用鞋，操作时戴口罩，随时保证室内的无菌状态。
5.条件有限的实验室，可用超净工作台代替无菌实验室进行相应的操作。
超净工作台应选择垂直气流通风方式。
6.无菌室应配备空调设备，保证不因室温而影响工作。
（三）基本设备和器具温箱、C02培养箱、厌氧培养设备；显微镜；高压蒸气灭菌器、干烤箱；冰箱和冷藏柜；接种器具，包括接种环和接种针；pH计；火焰灯或酒精灯；平皿、试管、吸管等玻璃器皿，以及离心机、天平等。
细菌的培养与分离
– 蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖（醇）类、血 液、鸡蛋和动物血清、无机盐类、生长因子
2.水：蒸馏水或去离子水 3.凝固物质：即赋形剂，常用琼脂、明胶
一、培养基
4.抑制剂
– 抑制非检出菌的生长或使其少生长，以利于检 出菌的生长。
– 胆盐、煌绿、亚硫酸钠、某些染料及抗生素等。
5.指示剂
– 常用的指示剂：酚红、中性红、中国蓝、溴甲 酚紫、酸性复红等。
– 菌落：单个细菌在培养基上分裂繁殖成一堆肉 眼可见的细菌集团 • CFU：菌落形成单位，活菌计数用
– 细菌菌落的描述：大小、形状、突起或扁平、 边缘、颜色、表面、透明度等
二、细菌的人工培养
2. 在液体培养基中
– 均匀混浊：大多数细菌 – 沉淀生长：呈链状排列的细菌 – 表面生长：专性需氧菌
3.在半固体培养基
一、培养基
（二）培养基分类
1. 按用途分类
– 基础培养基：只有基本营养成分 – 营养培养基：加有血液 、血清等 – 鉴别培养基：含有特定底物和指示剂 – 选择培养基：含有抑制剂 – 特殊培养基：厌氧、细菌L型
一、培养基
2.按物理性状分类
– 液体培养基：增菌 – 固体培养基：分离培养、纯化、增菌 – 半固体培养基：动力检测、保存菌种
• 无菌技术是保证细菌检验质量，防止污染和病原 菌扩散的基础
二、细菌的人工培养
（二）细菌的接种与分离方法
1.平板划线法：分离单个菌落 2.琼脂斜面接种法：纯培养 3.液体培养基接种法 ：增菌 4.穿刺接种法：观察细菌动力 5.涂布平板法：计数细菌源自量 6.倾注接种法 ：纸片法药敏试验
分区划线分离法
– 琼脂斜面：分装量为试管的1/4~1/3，灭菌后趁 热摆成斜面，斜面长度约为试管的2/3。
分离培养步骤及注意事项
分离培养步骤及注意事项1准备工作细菌培养是细菌学研究的基础，能够完成细菌培养剂制备、细菌分离、细菌种系鉴定以及抗药率分析，都必须具备一定的实验基础和技能，以便能够成功完成细菌的分离培养。
2细菌分离培养步骤1.收集样品：根据实验要求，从自然界或细菌实验室中选择合适的样品，样品必须符合实验要求，很多实验还需要按照试验要求对样品进行配制、抽取、稀释处理等步骤；2.制备培养基：根据实验要求，从常用培养基中选择合适的培养基成分进行自制，搭配合适的培养条件，以降低被害菌类的生存率，并用以减少多样性；3.增殖培养：将收集的样品涂布到增殖培养基，放置于37℃的培养箱内培养发酵，一般不少于18-20小时；4.分离培养：将发酵后的培养品滴液分离部分的样品涂布到分离培养基上，放置在受限的环境内进行培养，待芽菌状散单菌形成后，锁入相应介质中保存；5.鉴定分离菌株：根据形态特征以及生理生化反应等进行菌株鉴定。
3注意事项1.实验过程中注意实验准确、认真，尤其是实验前和实验后的消毒操作，避免误操作；2.用于培养的培养基要拆封使用，不要将同一份培养基用于实验多次，以免大菌斑的影响实验结果；3.尽量使用自制的非营养性培养基，其中的阴离子成分有助于抑制竞争菌类的生长，以便成功发现所需要的细菌；4.放置培养基的培养箱应保持清洁，以及室内总体环境要维持比较干净，减少室外污染物的入侵；5.培养液中的细菌很容易在空气中繁殖，培养过程完毕后要及时封口，以免造成污染；6.对培养成功后的菌株要及时进行归档保存，如用木芯片或正规种系库菌体的保存，以便及时使用，避免菌株的变异，影响实验结果。
以上即是细菌分离培养的步骤及其对应的注意事项，只有实验操作准确、认真，并遵从相关注意事项，才能更好的完成细菌的分离培养，为细菌学研究打下坚实的基础。
细菌的分离与培养
细菌的分离与培养实验目的：掌握在各种培养基上的接种方法并观察生长现象。
实验材料：菌种、普通琼脂平板、肉汤培养基、半固体培养基、斜面培养基、接种环、接种针、酒精灯。
实验内容：一、平板划线接种法（分离培养法）原理：通过在平板上划线，将混杂的细菌在琼脂平板表面充分的分散开，使单个细菌能固定在一点上生长繁殖，形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。
若需从平板上获取纯种，则挑取一个单个菌落作纯培养。
用途：分离出纯种细菌，以利作纯培养。
课时安排：2课时操作方法（三区划线法）：1、右手拿接种环，烧灼冷却后，取菌液一环。
2、左手抓握琼脂平板（让皿盖留于桌上），在酒精灯火焰左前上方，使平板面向火焰，以免空中杂菌落入，右手将已沾菌的接种环在琼脂表面密集而不重叠的来回划线，面积约占整个平板的1/5-1/6，此为第一区。
划线时接种环与琼脂呈30-40度角轻轻接触，利用腕力滑动，切忌划破琼脂。
3、接种环上多余的细菌可烧灼（每划完一个区域是否需要烧灼灭菌视标本中含菌量多少而定），待冷后，在划线末端重复2-3根线后，再划下一区域（约占1/4面积），此为第二区。
4、第二区划完后可不烧灼接种环，用同样方法划第三区，划满整个平皿。
5、划线完毕，将平板扣入皿盖并作好标记，置37℃温箱孵育18-24小时观察琼脂表面菌落分布情况，注意是否分离出单个菌落，并记录菌落特征（如大小、形状、透明度、色素等）。
二、液体培养基接种法用途：凡肉汤、蛋白胨水，各种单糖发酵均用此法接种。
可以观察细菌不同的生长性状、生化特性以供鉴别之用。
操作方法：右手执笔式握住接种环，灭菌冷却后取单个菌落。
1、左手拇指、食指、中指托住液体培养基之下端，右手小指和无名指（或手掌）拔取试管塞，将管口移至火焰上旋转烧灼。
2、将沾菌的接种环移入培养基管中，在液体偏少侧接近液面的管壁上轻轻研磨，沾取少许液体与之调和，使菌液混合于培养基中（图5）。
3、管口通过火焰，塞好试管塞，将接种环灭菌后放下，经37℃温箱孵育18-24小时，取出观察生长情况。
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第一节.细菌的培养技术(分离和计数)
(三)固体平板培养基配制程序 1.称量：天平 2.溶解：加热 3.调PH值：PH试纸、NaOH、HCl。 高压蒸汽灭菌 4.包扎灭菌： 5.倒平板：培养皿，超净台 6.固体平板培养基应倒置存放 用途：分离、纯化和计数
倒平板操作的讨论
1.培养基灭菌后要冷却到50OC时倒平板。用
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动微生物的计数； 只能测量含量较高的样品； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
六.微生物数量的测定 2.稀释涂布平板法 (活菌计数法) 每毫升或每克样品菌数 = 菌落平均数×稀 释倍数÷稀释液体积(0.1ml) (待菌落数稳定时计数，菌落数少于活菌数) 3.滤膜法 (测活菌数) 饮用水中微生物的测定 已知体 过滤 滤 放入 伊红美蓝培 积的水 膜 养基培养 统计黑色 菌落数量
第一节.细菌的培养和分离
2.无菌技术实例
操作对象 操作空间(超净台) 培养基 玻璃器皿,金属用具 无菌技术 紫外线灯消毒 高压蒸汽灭菌（121˚C） 干热灭菌（160˚C）
接种环,涂布器,管口瓶口
接种,倒平板等实验操作 衣着和手
灼烧灭菌
在酒精灯火焰附近进行 酒精消毒
3.人工操作方法： 各种操作均应在超净台的酒精灯火焰附近进行
什么办法来估计培养基的温度？
用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时 即可开始倒平板。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基
表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表
面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培 养基，造成污染。 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿 盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？
为什么？
空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上
滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。
牛肉膏 5.0克 葡萄糖 10.0克 (1)根据用途分,该培养基称 乳糖 5.0克 为_____ 鉴别 培养基,利用该培养 KNO3 2.0克 基的目的是______________. 鉴别大肠杆菌 伊红-美蓝 0.2克 (2)根所物理性质分,该培养 琼脂 12.0克 固体 培养基,该培养 基称为______ 水 定容至 基可用于微生物的_________. 分离和计数 1000ml (3)该培养基中能提供碳源的是____________, 牛、葡、乳 能提供 牛肉膏、 KNO3 从培养基成分来分析,该培养基 氮源的是 __________, 所培养的微生物的同化作用类型为______ 异养型。配制该平 板培养基培养基的程序为称量、溶解、____________ 、 调PH值 _____________ 。 高压蒸汽灭菌 、____________ 倒平板
发醉法生产酒精后的废液（pH4.3）含有大量有机物， 可用于培养、获得白地霉菌体，生产高蛋白饲料。培养 、制取白地霉菌体的实验过程示意图如下：
（3）为确定菌体产量，图中②操作之前，应先称量 _______________的质量。过滤后需反复烘干称量，直至 _____________________。所得菌体干重等于________。
生长因子
(微量有机物)
维生素、氨基酸、 碱基、核苷酸 PO43- SO42-等
生长不可缺少，自身已无 法合成(酶,核酸的组分)
水和无机盐
维持渗透压，PH，原料
牛肉膏,蛋白胨：分别是牛肉和大豆的水解产物（主要是多肽）。
问题讨论2：判断对错
同一种物质不可能既作碳源又作氮源。 凡是碳源都能提供能量。 除水以外的无机物仅提供无机盐。 能以氮气为氮源的微生物为_______生物。 能利用无机碳源的生物属于型_______生物， 在生态系统中充当________。 只能利用有机碳源的生物属于______生物， 在生态系统中充当________。
第一节.细菌的培养和分离
(二)培养基的类型
分类 类型
物理 液体 性质 固体
成分
无凝固剂 加凝固剂(琼脂)
作用
培养(扩增)、分离 分离,计数,鉴别
某化学物质有无，允许 分离特定微生物，如含青霉 选择 特定种类微生物生长， 素培养基能分离出酵母菌和 抑制其它微生物生长。 霉菌但抑制细菌放线菌生长 按用
重 复 多 次 直 至 获 得 目 的 菌
振荡培养若干天后，测定各瓶中化合物A的含量
固体培养基
（4）转为固体培养时，常 采用 的方法接种，获得 单菌落后继续筛选。 （5）若研究“目的菌”的 生长规律，将单个菌落进行 液体培养，可采用 的 方法进行计数，以时间为横 坐标，以 为纵 坐标，绘制生长曲线。 （6）实验结束后，使用过 的培养基应该进行 处 理后，才能倒掉。
同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。
问题4.如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析
其可能的原因。 无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可 能是接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了 污染。
第一节.细菌的培养和分离
四.无菌操作技术 1.方法
（1）消毒 用温和的理化方法（酒精、紫外线）来杀 死物体表面和内部的微生物。 （2）灭菌 用强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生 物（包括芽孢和孢子）。 1.灼烧灭菌 灭菌 2.干热灭菌： 3.高压蒸汽灭菌： 4.砂芯漏斗过滤灭菌（对尿素溶液）
练习：观察表格中培养基成 分数据，回答问题：
实验设计：
实验１：将Ａ接种于一般培养基，结果出现菌落。 实验２：用放射线处理Ａ，以产生突变体ａ1，将 其接种于一般培养基，不出现菌落。但在培养基中 添加物质甲后，就出现菌落。 实验３：另用放射线处理Ａ，得突变体ａ2，将其 接种于一般培养基，也不出现菌落。但在培养基中 添加营养物质乙后，就出现菌落。 实验４：将突变体ａ1和ａ2一起接种于一般培养基， 数日后出现菌落。 探究实验４中出现菌落的原因(要求：提出问题， 提出假说,设计实验程序，预期实验结果，分析相 应实验结果得出的结论)。
31。某化工厂的染水池中，含有一种有害的、难于降解 的有机化合物A，研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以 及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化 合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如图所示。 请分析回答问题：
（1）培养基中加入化合物的目的是 筛选 ，这种培养基属 于 培养基。 （2）“目的菌”生长所需的氮源和 碳源是来自培养基中的 ，实 验需要振荡培养，由此推测“目的菌 ”的代谢类型是 。 （3）培养若干天后，应选择培养瓶 中化合物A含量 的培养液，接入新 的培养液中连续培养，使“目的菌” 的数量 。
食品 主要 微生物 制作装 置或操 作步骤 A 果酒 酵母菌 B 果醋 醋化醋杆菌 （醋酸菌） C 腐乳 毛霉 D 泡菜 醋酸菌
发醉法生产酒精后的废液（pH4.3）含有大量有机物， 可用于培养、获得白地霉菌体，生产高蛋白饲料。培养 、制取白地霉菌体的实验过程示意图如下：
（1）实验过程中培养白地霉的培养基是_________。 培养基定量分装前，先调节____________, 分装后用棉 塞封瓶口，最后______________________处理。 （2）图中 ① 过程称为__________，从甲到丁的培养 过程是为了_______。白地霉的代谢类型为_________。
未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，
菌落？它们的大小、形状、颜色相似？
如果接种成功的话，在培养基的表面可观察到大小、 形状、颜色相似的菌落。
问题3.培养12h和24h后，观察到的实验结果相同吗？ 如果不同，请分析产生差异的原因？
培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不
五.培养和保存纯化菌株
1.试管低温临时保存
将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，培养成菌落
后，置于4OC的冰箱中保存。
2.甘油管长期保存 在3mL的甘油瓶中加入1mL的甘油，高压灭菌。将1mL
培养的菌液转移到甘油瓶中，充分混合后，置于－20OC的
冷冻箱中保存。
六.微生物数量的测定
1.血球计数板计数法 （显微镜直接计数法） 缺点
样品菌数含量（个/ ml ）= 菌落平均数×稀 释倍数÷接处稀释液体积（ml） 练一练 某同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板 上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的 菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为 0.1ml）( A ) A.2.34× 108 个菌落/ ml B.2.34× 109个菌落/ ml C.2.34× 106个菌落/ ml D.23.4个/ 菌落ml
牛肉膏 5.0克 葡萄糖 10.0克 (1)根据用途分,该培养基称 乳糖 5.0克 为_____ 鉴别 培养基,利用该培养 KNO3 2.0克 基的目的是______________. 鉴别大肠杆菌 伊红-美蓝 0.2克 (2)根所物理性质分,该培养 琼脂 12.0克 固体 培养基,该培养 基称为______ 水 定容至 基可用于微生物的_________. 分离和计数 1000ml (3)该培养基中能提供碳源的是____________, 牛、葡、乳 能提供 牛肉膏、 KNO3 从培养基成分来分析,该培养基 氮源的是 __________, 所培养的微生物的同化作用类型为______ 异养型。
途分
加入指示试剂，使菌 鉴别菌种。如伊红-美蓝可 鉴别 落或菌落周围出现特 使大肠杆菌的菌落呈现出紫 定的颜色或形态变化。黑色。
配制何种培养基可选择出下列微生物?
土壤中的固氮微生物 能分解有机污染物A的细菌 分离土壤中能分解纤维素的细菌 分离土壤中能分解尿素的细菌 分离金黄色葡萄球菌（耐盐） 说出碳源和氮源即可。
七.微生物的分离纯化
平板划线法, 稀释涂布平板法, 选择培养基分离法,
鉴别培养基分离法。