基因治疗2
基因治疗的两种主要模式
基因治疗的两种主要模式高中生物学必修二对基因治疗只是简单地提了一下,.基因基因治疗临床意义重大，在部分适应症上，基因治疗比传统的治疗方案有明显优势，如单基因遗传病、肿瘤CAR-T疗法等。
近年国外已有几款基因治疗产品上市，临床在研项目众多，部分也取得了非常好的效果，进入临床试验后期。
综合来看，国外基因治疗行业已经逐步跨入成长期，有望于未来几年迎来大爆发。
一、治疗模式：“体外”、“体内”各有所长目前基因治疗的模式主要有两种：“离体”治疗和“体内”治疗。
（一）“离体”治疗：技术难度偏小，可实现程度更高“离体”治疗的操作对象是从病人身上分离的细胞，根据细胞类型的不同可分为两大类：造血干细胞、T淋巴细胞等血液细胞和其他类型的细胞。
（1）血液细胞：收集分离病人血液中特定类型的细胞后，利用基因改造的方式对细胞错误的基因进行修复或使其获得新的功能，再输回病人血液中，实现疾病的治疗。
（2）其他类型的细胞：以遗传性大疱性表皮松解症为例，治疗时获取病人小块的皮肤，对皮肤细胞基因改造后，利用细胞自身的增殖能力，体外培养出较大的皮肤组织，再移植到病人身上，实现疾病的治疗。
与“体内”治疗相比，“离体”治疗的优势主要表现在技术难度较小、对载体的要求较低、安全性更高等几个方面。
技术难度较小：体外基因改造的技术方法已经较为成熟，临床上也产生了一些成功的案例。
对载体的要求较低：体外培养环境对病毒等载体的容忍度要远高于体内苛刻的环境，因此对于载体的靶向性、免疫原性等要求都大幅降低。
安全性更高：在体外对细胞基因修饰后，可作进一步的筛选，从中找到优质的细胞对病人进行治疗，降低安全风险。
然而，“离体”治疗也存在很大的局限性，主要表现为候选细胞种类有限、难以长期保持移植细胞功效等。
候选细胞种类有限：通过获取细胞、体外改造培养的方式，只能产生细胞类型单一的组织，细胞难以自发形成有功能、组成复杂、形态多样的组织和器官，因此较大程度上限制了“离体”治疗的应用范围。
基因治疗的使用教程和步骤
基因治疗的使用教程和步骤基因治疗是一种新兴的医学手段，可以通过修改患者的遗传物质来治疗一些遗传性疾病或基因突变导致的疾病。
随着基因工程技术的发展，基因治疗在临床应用中越来越受到关注。
本文将为您介绍基因治疗的使用教程和步骤，让您了解这一领域的基本概念和流程。
首先，让我们了解一下基因治疗的基本原理。
基因治疗的目标是通过改变患者体内的基因表达来修复病理状态。
基因治疗可以分为三种主要类型：基因替代治疗、基因添加治疗和基因革命治疗。
基因替代治疗是指通过替换缺陷或异常基因来恢复正常基因功能。
这种方法涉及到将一个健康的基因导入到患者体内以代替异常基因。
这可以通过载体（如病毒、质粒等）将健康基因输送到患者体内，以便将其整合到患者的基因组中，从而恢复正常的基因功能。
基因添加治疗是一种将新的基因添加到患者体内以增加特定蛋白质的表达的方法。
这种方法适用于患者体内缺乏某种特定蛋白质的情况。
在这种方法中，研究人员会将新的基因导入到患者体内，以便在细胞中产生所需的蛋白质。
这可以通过添加类似病毒载体的载体来实现，该载体将新基因递送到患者细胞中。
基因革命治疗是通过编辑患者基因组中的特定部分来纠正基因突变。
这种方法利用CRISPR-Cas9系统或其他基因编辑工具来直接修改基因组。
通过这种方法，研究人员可以准确地修复病理性基因突变，从而恢复正常基因功能。
了解基因治疗的基本原理后，让我们来了解一下基因治疗的具体步骤。
第一步是目标基因的识别和筛选。
在进行基因治疗之前，我们需要确定具体的目标基因，以及该基因突变对患者健康产生的影响。
这通常需要进行基因测序或其他分子生物学实验来确认基因突变或缺失。
第二步是基因治疗载体的构建。
基因治疗载体是将治疗基因递送到患者体内的工具。
载体通常是一种可以将基因有效传递到患者细胞内的病毒。
研究人员需要将治疗基因插入到载体中，并确保其能够安全、有效地递送到患者细胞中。
第三步是载体的载体转染和基因递送。
一旦构建好治疗载体，研究人员将其转染到目标细胞中。
基因治疗技术名词解释
基因治疗技术名词解释《基因治疗技术名词解释》基因治疗技术是一种新兴的生物医学技术，旨在通过修复、替换或增强人体细胞基因组的功能，治疗各种遗传性疾病和其他疾病。
下面将对一些与基因治疗相关的重要名词进行解释。
1. 基因：基因是生物体遗传信息的基本单位，由DNA分子组成，携带了决定生物体形态和功能的遗传信息。
2. 基因治疗：基因治疗是指在患者的身体内引入修复性的、抑制性的或增强性的基因，通过改变或增强患者体内的基因表达和功能，达到治疗疾病的目的。
3. 基因传递系统：基因传递系统是将修复基因引入细胞内的一种载体，可以是病毒（例如腺病毒、逆转录病毒）或非病毒载体（例如质粒、纳米颗粒），用于将基因递送至特定的细胞或组织中。
4. 基因编辑技术：基因编辑技术是指通过针对性的改变和修复DNA序列，来修改特定基因和基因组的方法。
常用的基因编辑技术包括CRISPR-Cas9系统、锌指核酸酶和TALEN等。
5. 基因靶向治疗：基因靶向治疗是指通过对特定基因或基因组进行干预，修复或抑制相关基因表达和功能，从而实现对特定疾病的治疗。
6. 基因测序：基因测序是指对个体的基因组DNA进行全面或特定区域的测序分析，以获得基因序列信息。
基因测序可以用来识别疾病相关的基因突变或变异。
7. 基因表达：基因表达是指基因中的DNA序列转录和翻译为蛋白质的过程，决定了蛋白质的产生和功能。
8. 基因突变：基因突变是指基因序列发生的变异，可能导致基因表达和功能的异常，引发一些遗传性疾病。
基因治疗技术的不断发展为人们治疗遗传性疾病和其他慢性疾病提供了新的希望。
然而，基因治疗技术目前还面临诸多挑战，包括治疗效果的持久性、基因传递系统的安全性和高效性、对基因编辑技术的精确性和伦理道德问题等。
随着对于基因治疗技术的深入研究和不断创新，相信基因治疗技术将来能发挥更大的作用，为人类健康带来更多的福祉。
基因治疗的现状和未来发展趋势
基因治疗的现状和未来发展趋势基因治疗指的是通过改变患者基因的方法来治疗疾病的一种新型治疗方式。
与传统药物治疗不同，基因治疗是以基因为目标，通过介入基因表达来治疗疾病。
由于基因治疗具有许多独特的优点，如减少药物的副作用、提高治疗效果等，因此备受关注。
本文将探讨基因治疗的现状和未来发展趋势。
一、基因治疗的现状目前，基因治疗已经成功地应用于多个领域的临床研究。
例如，基因治疗可以用来治疗遗传性疾病、免疫性疾病、肿瘤等。
下面分别介绍一下这些领域的应用。
1、治疗遗传性疾病遗传性疾病是由基因突变引起的疾病。
基因治疗可以通过修复或取代缺陷基因来治疗这些疾病。
例如，包括囊性纤维化、遗传性失明等多种疾病都可以使用基因治疗来治疗。
目前，已经有多项临床试验证明基因治疗在治疗遗传性疾病方面是有效的。
2、治疗免疫性疾病免疫性疾病是一组由免疫系统出现异常反应而导致的疾病。
基因治疗可以通过调节或抑制免疫系统来治疗这些疾病。
例如，多发性硬化症、风湿性关节炎等疾病都可以使用基因治疗来治疗。
目前，已经有多项临床试验证明基因治疗在治疗免疫性疾病方面是有效的。
3、治疗肿瘤肿瘤是一种由多种因素引起的疾病。
基因治疗可以通过引入与肿瘤相关的基因来治疗这些疾病。
例如，肿瘤相关的基因可以用于识别和杀死癌细胞，以及促进免疫系统杀死癌细胞。
目前，已经有多项临床试验证明基因治疗在治疗肿瘤方面是有效的。
尽管如此，基因治疗在肿瘤治疗中的应用仍受到一定的限制。
二、基因治疗的未来发展趋势虽然基因治疗已经成功地应用于多个领域的临床研究，但它仍存在许多挑战和难题。
未来，基因治疗的发展趋势将集中在以下几个方面。
1、技术的进步基因治疗需要先将正确的基因送入患者体内，然后取代或修复缺陷基因。
目前，最主要的基因治疗技术是基因输送系统。
因此，开发新型的基因输送系统、提高现有系统的效率和安全性，将是基因治疗发展和应用的关键。
2、安全性问题基因治疗有一定的风险和副作用。
例如，不正确的基因表达可能导致癌症或其他疾病，也可能对患者的免疫系统产生负面影响。
恶性肿瘤的基因治疗 (2)
者体内； 后者是将重组基因导入相应的宿主细胞，如
细菌、酵母或哺乳动物细胞，在体外进行扩 增并经分离、纯化后，获得其表达的蛋白产 物（如生长因子、可溶性受体等）。
基因治疗发展史
从20世纪80年代起至今，经历了三个阶段：
（一）准备期（1980-1989）：基因治疗的“禁锢时代”。1990年 批准正式临床实验。关键人物：French Aderson、Steve Rosenberg、 Michael Blease
肿瘤在中国上市
基因治疗基本原理
二、基因治疗的基因导入系统
II：基因治疗导入系统（载体）
基因治疗的核心技术
病毒 (复制缺陷病毒)
优缺点
逆转录病毒 单纯疱疹病毒 腺相关病毒 腺病毒 慢病毒 痘苗病毒
转染效率高 可短暂或持久表达 免疫原性较强 转基因大小有限
Hale Waihona Puke 化学和物理方法（非病毒）裸DNA （基因枪，水压法） 磷酸钙 脂质体 ✓配体/阳离子多聚物/DNA 复合物
具有一定的包装容量，一般来说，病毒包装容量不超过自身基因组大小 的105～110％。需将适当长度的外源DNA插入病毒基因组的非必需区， 包装成重组病毒颗粒。
缺点： 大多数野生型病毒对机体都具有致病性：需对其进行改造才能用于人体 插入外源DNA的长度受到很大限制：删除病毒的必需/非必需基因，这些
13
基因治疗的靶细胞
1. 基因缺陷的细胞: 受体缺陷细胞， 肿瘤细胞等 2. 广泛的细胞类型: 造血干细胞 皮肤成纤维细胞 血液淋巴细胞 肌细胞 肝细胞 骨髓基质细胞
14
基因治疗靶细胞的选择
可根据疾病的特点、目的基因及其转移的 方式等因素来确定。
基因治疗存在的问题
基因治疗存在的问题一、引言基因治疗是一种利用基因工程技术来治疗遗传性疾病和后天获得性疾病的新型医疗手段。
随着生物技术的不断发展，基因治疗已经取得了显著的进展，但仍存在许多问题需要解决。
本文将探讨基因治疗存在的问题，并对其进行详细分析。
二、基因治疗存在的问题1.靶点选择与定位基因治疗的首要问题是如何准确地选择和定位治疗的靶点。
在许多情况下，需要明确缺陷基因的位置和功能，以便精确地将外源基因导入到相应的位置。
然而，由于人体基因组的复杂性，这往往是一项极具挑战性的任务。
目前，基因治疗的靶点选择与定位技术尚不成熟，缺乏精准度和特异性，这可能导致治疗效果不佳或产生不必要的副作用。
2.安全性问题基因治疗的安全性问题是目前研究的重点之一。
将外源基因导入人体细胞可能导致不可预测的副作用或产生新的疾病。
例如，导入的基因可能引起免疫反应或插入到细胞的关键区域，导致细胞功能异常。
此外，基因治疗还可能引发长期副作用，例如致癌、致畸和遗传毒性等。
因此，确保基因治疗的安全性是至关重要的。
3.基因导入效率基因治疗的另一个问题是基因的导入效率。
目前，基因导入的效率仍然较低，需要大量的载体或细胞才能产生可见的效果。
这增加了治疗的复杂性和成本，并可能增加副作用的风险。
提高基因的导入效率和特异性是基因治疗研究的重要方向之一。
4.长期影响未知由于基因治疗仍处于发展阶段，许多治疗的长期影响尚未完全了解。
例如，导入的基因是否会在后代中传递？是否会产生潜在的长期副作用？这些都是需要进一步研究的问题。
因此，对于长期影响的监测和研究至关重要，以确保患者的安全和治疗效果的可持续性。
5.伦理与法律问题基因治疗还涉及到一系列伦理和法律问题。
例如，修改人类基因可能会引发关于人类身份、尊严和生物伦理的争议。
此外，不同国家和地区对基因治疗的法律和监管框架各不相同，这增加了治疗的复杂性。
因此，在开展基因治疗之前，必须进行充分的伦理和法律评估，以确保患者的权益和社会责任。
基因治疗的使用方法简介与操作流程详解
基因治疗的使用方法简介与操作流程详解基因治疗是一种新型的治疗方法，它利用基因工程技术将正常基因导入患者体内，修复或替换病变基因，从而达到治疗疾病的目的。
本文将介绍基因治疗的使用方法以及详细的操作流程。
1. 基因治疗的使用方法基因治疗可以分为体外基因治疗和体内基因治疗两种方法。
体外基因治疗是将患者的细胞取出后，通过体外培养将目标基因导入细胞中，再将处理后的细胞重新注入患者体内。
这种方法常用于癌症治疗，如CAR-T细胞治疗等。
体内基因治疗是将基因药物直接注射或输注到患者体内，使其通过血液循环进入到靶细胞中。
这种方法常用于遗传性疾病的治疗，如囊性纤维化、血友病等。
2. 基因治疗的操作流程（1）目标基因的筛选：根据患者的病情和基因突变的类型，从基因库中筛选出能够修复或替代病变基因的目标基因。
（2）载体构建：选择合适的载体，将目标基因插入载体中，生成重组载体。
常用的载体包括病毒载体（如腺病毒、腺相关病毒）和非病毒载体（如脂质体、高分子聚合物）。
（3）载体纯化和扩增：将重组载体转染到宿主细胞中，利用细胞培养技术进行载体的纯化和扩增，得到足够量的载体。
（4）基因药物的制备：将得到的载体与适当的辅助剂（如输送剂、保护剂）混合，经过纯化和过滤处理，制备成基因药物。
（5）患者的治疗计划和预处理：根据目标疾病的特点和患者的病情，制定个体化的治疗计划。
在实施基因治疗之前，患者可能需要接受一系列的预处理，如化疗、放疗或免疫抑制剂的使用。
（6）基因药物的输送：将制备好的基因药物通过静脉注射或局部注射的方式输送到患者体内。
在进行输送时，需要严格控制输送剂的剂量和输送速度，确保基因药物能够有效到达到靶细胞中。
（7）基因治疗效果的监测和评估：在基因治疗后，需要对患者的疗效进行监测和评估，以确保治疗的有效性和安全性。
常用的监测方法包括基因表达水平的检测、临床症状的观察和影像学检查等。
（8）随访和复查：基因治疗后，患者需要进行定期的随访和复查，以了解治疗效果的持续性和潜在的不良反应。
基因治疗成功的两个实例
基因治疗成功的两个实例教材研究：和同事讨论必修2教材的基因治疗实例，⼈类ADA基因怎么整合到MoMLV病毒的基因组中？因为⼀个双链DNA分⼦，另⼀个逆转录病毒（单链RNA分⼦），查找了资料，并没有找到具体的过程，但同时也学习到了基因治疗成功的两个实例，也⼤致了解了基因治疗的发展过程。
实例⼀：1990年9⽉4⽇，美国科学家进⾏了世界上第⼀例临床基因治疗。
患者是⼀个患有严重复合型免疫缺陷疾病（SCID）的4岁⼩姑娘，她从⽗母处各继承了⼀个有缺陷的腺苷酸脱氨酶基因（ada），造成了体内缺乏腺苷酸脱氨酶，⽽腺苷酸脱氨酶是免疫系统完成正常功能所必需的，因此她不能够抵抗任何微⽣物的感染，只能在⽆菌条件下⽣活。
所以科学家们对她进⾏了基因治疗。
第⼀步：病毒的筛选⾸先需要的是⼀种能够帮助定位和进⼊⼈类⽩细胞的病毒。
当然，出于安全性的考虑，使⽤其⾃⾝能够侵染⼈体并导致疾病的病毒是不太合适的。
最终，科学家选定的是⼀种名为“莫罗尼⼩⿏⽩⾎病病毒”的家伙（MoMLV）。
该病毒能够⾼效侵染啮齿类动物的淋巴细胞并且导致⽩⾎病，但是，对⼈类淋巴细胞的侵染能⼒和致病性相对来说要好控制得多。
第⼆步：降低这种病毒的潜在风险为了确保安全性，美国国⽴卫⽣研究院（NIH）的William French Anderson医⽣在1985年⾸先尝试了改造MoMLV病毒：他与合作者把MoMLV病毒基因组RNA上编码病毒球壳的蛋⽩⼀律删除掉。
这样⼀来，MoMLV侵染进⼊细胞后，⽆论如何复制，都没有办法产⽣后代所需要的病毒球壳，因此也就失去了繁殖和继续侵⼊其他细胞的能⼒。
第三步：⼈类ADA基因放⼊MoMLV病毒的基因组MoMLV属于所谓的“逆转录病毒”，它的遗传信息是由RNA⽽不是⾼等⽣物常⽤的DNA编码的。
进⼊细胞后，RNA会被病毒⾃⾝携带的逆转录酶变成DNA，并同时插⼊到宿主细胞的基因组DNA上。
病毒当然是利⽤这个过程把宿主细胞变成⾃⼰的永久驻地，可以⽆休⽌的产⽣后代，⽽医⽣们则恰恰是希望利⽤这⼀特点，把病⼈所需要的“救命基因”永久性地放⼊病⼈细胞内。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
反向重复序列
ITR
E1
E2
E3
E4
ITR
包装信号
腺病毒的优点
1.基因导入效率高，对人类安全； 2.宿主范围广； 3.基因转导与细胞分裂无关； 4.重组腺病毒可通过口服经肠道吸收、或喷雾吸 入或气管内滴注； 5.腺病毒载体容量较大，可插入7.5 kb外源基因；
腺病毒载体缺点
1.不能整合到靶细胞的基因组DNA中。分裂增殖快 的细胞，导入的重组病毒载体，随分裂而丢失的 机会增多，表达时间相对较短。 2.宿主的免疫反应导致腺病毒载体表达短暂。 3.有两个环节可能产生复制型腺病毒。
基因治疗与基因工程
基因治疗（Gene therapy ）
基因治疗：指应用DNA重组技术，将外源正常基因导 入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的
疾病,以达到治疗的目的。
二、基因治疗的发展历史
•1966年：安德森提出“基因治疗”概念。 •1970年：美国医生罗杰斯尝试基因治疗精氨酸血症。 •1980年：美国加州大学马丁•克赖恩教授进行人类第 一例真正意义上的基因治疗，未获批准，也未获成功。 马丁•克赖恩教授被誉为“基因治疗的先驱”。 •1989年：美国批准进行5例标志基因的人体转移试验。 安德森被誉为“基因治疗之父”。 •1990年：布利等人进行了世界上首次人体基因治疗的 临床试验，取得初步治疗效果。 •1991年起：国内外基因治疗临床试验越来越多。
（1）逆转录病毒
Retrovirus
DNA前病毒的结构特征
长末端 重复序列 包装信号
LTR
ψ
gag
pol
env
LTR
产生病毒 产生 产生病毒 调节和 核心蛋白 逆转录酶 外膜蛋白 启动转录
U5 R U3
U3=增强子，R=启动子，U5=转录起始位点
(1)保留病毒颗粒的包装信号而缺失病毒蛋白基因
(2) 辅助细胞株，产生病毒包装蛋白。
包装细胞主要有： ψ—2 PA317 ψCRIP
Retroviral packaging system
PA317 cell gag
LTR Pro therapeuticgene LTR
pol
env
Vector DNA
rRV particles
Retroviral vector pakaging system: Virus producing cells, VPC
（2）基因直接注射技术
5、免疫基因疗法：DNA疫苗，免疫因子基因导入 6、活化前体药物基因疗法 （“自杀基因” ）：如 单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK），催化核苷酸类 似物(丙氧鸟苷)磷酸化为有毒中间物，阻断DNA合 成 7、化疗保护性基因疗法：多药抗性基因（MDR-1） 导入骨髓干细胞
（一）基因臵换（gene replacement）
逆转录病毒载体的主要缺点
随机整合，有插入突变、激活癌基因的潜 在危险； 逆转录病毒载体的容量较小，只能容纳7 kb以下的外源基因。
（2）腺病毒(adenovirus，AV)载体
腺病毒是一种大分子(36 kb)双链无包膜DNA病毒。它 通过受体介导的内吞作用进入细胞内，腺病毒基因组转移 至细胞核内，保持在染色体外，不整合进入宿主细胞基因 组中。 AV两端各有一个反向重复序列目前作为基因治疗中所 用的AV载体通常是一些复制缺陷病毒，其基因缺失位于基 因组的E1A-E1B或E3区。
脂质体介导的基因转移示意图
人工脂质体膜具有如下特点：
1. 2. 3.
可生物降解，不会在体内堆积 可制成球状(0.03~50 m)，包容大小不同的生物活性 分子 可带有不同的电荷 具有不同的膜脂流动性、稳定性、及温度敏感性，能 适应不同的生理要求
缺点：脂质体介导进入靶细胞内，易被单核-吞噬细胞系 统选择性吞噬、降解。
施373个临床方案，3134人接受了基因转移试验（其中肿瘤方案
234个，受试者2134人）；至2002年，400余项基因治疗方案进 入临床试验；2003年，基因治疗药物上市。
重点：遗传病（如血友病、地贫、囊性纤维病、家族
性高胆固醇血症等）、恶性肿瘤、心血管疾病、感染
性疾病（如艾滋病、类风湿等），而且以恶性肿瘤为
(1)腺病毒产生过程中与293辅助细胞内E1区序列发生同 源重组； (2)腺病毒载体与被治疗的患者体内已感染的野生型腺 病毒，甚至乳头瘤病毒、巨细胞病毒发生重组。
4.靶向性差（特异性差）。
2.非病毒载体介导的基因转移系统
（1）脂质体介导 脂质体介导的基因转移技术使用方便、成本低廉。 基本原理:利用阳离子脂质体单体与DNA混合后， 可以自动形成包埋外源DNA的脂质体，然后与细胞一 起孵育，即可通过细胞内吞作用将外源DNA（即目的 基因）转移至细胞内，并进行表达。
逆转录病毒载体的特点
①逆转录病毒包膜上由env编码的糖蛋白，能够被许多哺乳 动物细胞膜上的特异性受体识别，从而使逆转录病毒携带 的遗传物质高效地进入靶细胞。 ②逆转录病毒结构基因gag、env和pol的缺失不影响其他部 分的活性。 ③前病毒可以高效整合至靶细胞基因组中，有利于外源基因 在靶细胞中的永久表达。 ④包装好的假病毒颗粒（携带目的基因的重组逆转录病毒载 体）以芽生的方式分泌至辅助细胞培养的上清液中，易于 分离制备。
三）靶细胞的选择
靶细胞是指接受外源Gene的体细胞 选择靶细胞的原则是： 1）必须较坚固，便于体外培养和进行遗传技术 操作； 2）易于由人体分离又便于输回体内 3）具有增殖优势，生命周期长（能存活几月至 几年，或整个生命周期） 4）易于受外源遗传物质转化。
常见的靶细胞
外周血T淋巴细胞 上皮细胞 内皮 皮肤成纤维细胞 造血干细胞——β 地中海贫血、严重
（三）基因干预
基因干预(gene interference)
指采用特定的方式抑制某个基因的表达，
或者通过破坏某个基因而使之不表达，以达到
治疗疾病的目的。
1. 反义核酸： 封闭基因表达
2. 核
酶： 裂解特异的靶mRNA
3. RNA干涉技术：
（四）自杀基因治疗
自杀基因治疗 : 恶性肿瘤基因治疗的主要方法之一。 原理 : 将“自杀”基因导入宿主细胞中，这种基因
（五）基因免疫治疗
通过将抗癌免疫增强细胞因子或MHC基因导入肿 瘤组织，以增强肿瘤微环境中的抗癌免疫反应。
二、基因治疗的基本程序
–治疗性基因的选择 –基因载体的选择 –靶细胞的选择 –基因转移 –外源基因表达的筛选
–回输体内
治疗性基因的选择
目的基因分类： 直接选择缺陷基因的正常基因，如选择腺苷脱氨酶治 疗重症联合免疫缺陷综合征（SCID） 间接治疗作用的基因：细胞因子基因、自杀基因、多 药抗性基因等 目的基因来源： 基因克隆、人工合成和PCR扩增
定义：指将特定的目的基因导入特定细胞，通 过定位重组，以导入的正常基因臵换基因组内原 有的缺陷基因。
目的：将缺陷基因的异常序列进行矫正。 对缺陷基因的缺陷部位进行精确的原位修复， 不涉及基因组的任何改变。 技术：基因同源重组
基因置换必要条件：
1、对导入的基因及其产物有详尽的了解 2、外来基因能有效地导入靶细胞 3、导入基因能在靶细胞中长期稳定存在
二、靶细胞的选择
性细胞基因治疗（Germline gene therapy）:是在 生殖细胞中进行操作，改变生殖细胞的程序， 这些细胞能将改变传递给下一代，使其后代从 此再不会得这种遗传疾病。 伦理学问题？ 体细胞基因治疗（Somatic gene therapy）:是在体 细胞中进行基因操作，以改变身体已分化细胞 DNA的程序，但这些细胞没有能力将这种改变传 递给下一代，其子孙后代仍会患这种病。
1990年，布利和安德森等人进行了世界上首次人体基因 治疗的临床试验，他们用无害的病毒作为载体，将能产生 腺苷脱氨酶（ADA）的健康基因导入患者体内的细胞中， 用于治疗由于基因缺陷而无法合成具有分解氨基毒素功能 的ADA的4岁女孩，获得了初步治疗果。
1990--1994年，40余项基因治疗方案被批准；至1998年，已实
体内法（in vivo）：将宿主注入血流，将治疗性基因以安全有 效的方式带至组织，目前尚未研制成功。
三、基因治疗中基因导入的方法
生物学方法（病毒载体） 逆转录病毒载体，腺病毒载体，腺病毒相关病 毒载体，单纯疱疹病毒载体
非生物学方法 物理方法：显微注射，电穿孔 化学方法：脂质体，磷酸钙共沉淀，其它方法
☻CD/5-FC 大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase, CD ）基因，在细胞内将无毒性 5- 氟胞嘧啶（ 5-FC ） 转变成毒性产物5-氟尿嘧啶（5-FU）。 5-FU通过竞争性抑制胸苷酸合酶的活性，从而抑制脱 氧胸苷三磷酸的合成。
2. 旁观者效应
旁观者效应 :“ 自杀基因”治疗不仅使转导了 “自杀基因”的肿瘤细胞在用药后被杀死，而 且与其相邻的未转导“自杀基因”的肿瘤细胞 也被杀死。
基因治疗研究的重点对象。
欧盟委员会（EC）已批准了西方世界首个基因治疗药
物Glybera，该药来自一个很小的荷兰生物技术公司 uniQure，标志着修复基因缺陷的新颖医疗技术的一 个里程碑。该药用于治疗一种极其罕见的遗传性疾 病——脂蛋白脂肪酶缺乏症（LPLD），预计每名患者 的花费将高达120万欧元（约合160万美元），该药将 创造昂贵现代医药的新纪录
靶细胞的选择须考虑：
1. 2.
3.
4.
最好为组织特异性细胞 细胞较易获得，且生命周期较长 离体细胞较易受外源基因转化 离体细胞经转染和一定时间培养后再植回体内，仍较 易成活
目前常用的靶细胞有：
1. 2.
3.
4. 5. 6. 7.
造血细胞 皮肤成纤维细胞 肝细胞 血管内皮细胞 淋巴细胞 肌肉细胞 肿瘤细胞
1.病毒介导的基因转移系统