新生儿溶血病检查2
新生儿溶血病血清学检查标准操作规程
新生儿溶血病血清学检查标准操作规程(一)检验目的检测孕妇产前与其丈夫ABO及Rh血型相容性、孕妇IgG 抗体效价、产后新生儿体内不相容抗体存在情况、新生儿与产妇之间血型相容性，为新生儿溶血病的预防、诊断及治疗提供可靠的实验室依据。
(二)检验原理新生儿溶血病是由母婴血型不合，母亲体内与新生儿红细胞抗原不配合的IgG性质的血型抗体进入新生儿体内，破坏新生儿或胎儿红细胞而引起，可发生在胎儿期和新生儿早期，溶血严重者可出现死胎而流产，存活者则有不同程度的新生儿黄疸。
新生儿溶血病产前诊断方法主要包括检测胎儿父母的ABO及Rh血型、孕妇不规则抗体筛查、外周血抗A ／抗B或Rh抗体效价来判断新生儿溶血病发生的可能性及严重程度；新生儿溶血病产后诊断主要包括母子ABO及RhD 血型鉴定试验、新生儿标本三项试验，为临床诊断及进一步采取治疗手段提供可靠的依据。
(三)适用范围适用于新生儿溶血病产前、产后血型血清学试验。
(四)设备性能参数参见血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Ortho BioVue离心机及各全自动血型／配血系统使用说明书。
(五)器材与试剂1.器材血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Or-tho BioVue离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mmXl2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液枪、一次性移液枪头。
2.试剂DiaMed ABO／RhD血型卡、OrthoBioVueABO ／RhD血型卡、抗A、抗B血清、Rh分，型血清、生理盐水、抗球蛋白试剂(市售单克隆)、抗体筛查试剂红细胞、抗体鉴定试剂红细胞、致敏的阳性对照细胞(自制)。
(六)标本要求1.夫妇标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。
2.患儿标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无明显乳糜。
新生儿溶血病产前产后检测操作步骤
产前血型血清学检查标本要求：夫妻双方抗凝血2ml（尽量要求父亲抗凝血2ml，非必要），母亲促凝血3-5ml（血清）。
第一步：取两个试管分别标记 A 和BA管 700 μL生理盐水 B管（从A管取200 μL混合液+100 μL母亲血清混匀再加入200 μL血浆IgM稀释液）混匀 B管封口绑紧37℃温育1小时。
第二步:紧接着做父母ABO血型、RH型和母亲的不规则抗体。
第三步：取六个试管，分别标记123456，每管里面加200 μL盐水（父亲AB型需要同时做IgG抗A效价和IgG抗B,各做1次）。
第四步：等B管温育时间到了，从B管吸200微升到1管，混匀后从1管吸200 μL到2管........从5管吸200 μL到6管，依次添加稀释（倍比稀释）。
第五步：取不规则卡标记好 6 5 4 3 2 16 5 4 3 2 11.所有孔先分别加入50 μL父亲（与父亲同型）的0.8%红细胞悬液。
2.然后每孔再依次加入相对应管号里面的稀释液50 μL（防止交叉污染，从浓度最低往最高依次加）。
第六步：1.放到37℃温箱温育15分钟。
2.离心5分钟，取出判读结果。
注：判读结果往前推一位（例如6号孔是阳性，就报5号管是阳性）。
母亲RhD阴性血型，不用加入血浆IgM稀释液，不用37℃温育1小时。
直接第二步同上。
产后血型血清学鉴定标本要求：新生儿抗凝血2-3ml第一步：1.收到标本之后离心2分钟，取两个空试管，标记红细胞1和血浆2。
红细胞1 血浆22.将离心好的血样中血浆全部吸入空试管2中，剩余的红细胞吸入另一空试管1中。
3.向试管1中加3000μL生理盐水，进行洗涤，洗涤红细胞三次后，取压积红20μL+2480μL盐水加入新的试管中配制成0.8%红细胞。
（剩余的压积红留着做放散液）。
第二步;直抗试验、血型试验取0.8%红细胞50μL分别加入血型卡和不规则抗体卡中（只加一个孔）做好标记，直接离心五分钟看结果。
第三步：游离试验、放散试验1.取试管1中压积红1000μL+盐水1000μL（1:1适量配比）。
新生儿溶血病检测标准操作规程
新生儿溶血病检测标准操作规程1.检验原理：本试验为将排阻层析和抗人球蛋白试验（COonIbS试验）相结合，即在微柱凝胶介质中，红细胞抗原与相应的不完全抗体在抗人球蛋白的作用下发生凝集反应，形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，该复合物不能通过凝胶间隙而浮于胶表面或悬于胶中；如无相应的不完全抗体结合，则不能形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。
2.主要组成部分：本品系在聚丙烯塑料透明卡片上的六支微柱型管中填充葡聚糖凝胶和抗人球蛋白（多抗），制成抗人球蛋白检测卡，凝胶微管分为反应腔和凝胶分离柱两部分。
3.样本要求：3.1红细胞样本：采集被检对象静脉血，用EDTA抗凝，配制成红细胞悬液（直接抗人球蛋白试验配制成红细胞生理盐水悬液，间接抗人球蛋白试验配制成红细胞低离子溶液悬液（只适用于交叉配血和不规则抗体筛检）），红细胞最终浓度0.5%-0.8%o3.2血清样本：采集被检对象静脉血，放入含有兔脑粉或者其他促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或者37℃放置2小时后离心，20OrPmlO分钟，取上清该上清不得有絮状物或沉淀。
血清标本必须充分去蛋白，否则标本中析出的或红细胞悬液中残余的纤维蛋白可阻碍红细胞沉降，使非凝集细胞离心后在胶表面形成一条红线，呈假阳性反应。
4.检验方法4.1.准备工作1）微柱凝胶检测卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡平衡至室温（18—25℃）,再用专用离心机离心5分钟。
2）标本采集：用EDTA抗凝管采集被检对象脐带血或静脉血，制备成红细胞标本和血浆标本。
3）红细胞悬液的制备：将被检者红细胞标本至少洗涤4次，取被检者压积红细胞10微升，加入1毫升红细胞稀释液或生理盐水，外观应为均匀淡红色,无絮状物和血块。
4）血浆标本的处理:将被检者血浆标本进行离心,采用3000r∕min离心3min或3500r∕min离心2min（不得有絮状物或沉淀）。
新生儿溶血病需要的诊断依据
新生儿溶血病需要的诊断依据
概述
新生儿溶血病是一种常见的新生儿疾病，其诊断依据涉及多个方面的临床表现、实验室检查和病史等。
本文将介绍新生儿溶血病的诊断依据以及相应的注意事项。
临床表现
1.黄疸：新生儿出生后24小时内出现明显的黄疸。
2.贫血：出生后数日内出现进行性加重的贫血。
3.血红蛋白尿：尿液中可检测到血红蛋白。
4.胎粪样便：新生儿的大便呈胎粪样，常见于溶血性疾病。
实验室检查
1.血液学检查：包括血红蛋白水平、红细胞计数、血红蛋白电泳等。
2.血型鉴定：母婴ABO血型和Rh血型的鉴定。
3.老年粒细胞试验：用于检测Rh血型不合的母婴是否发生了Rh溶血。
病史及其他考虑
1.孕产史：包括母亲怀孕期间的疾病史、用药史等。
2.家族史：是否有其他家庭成员有相似症状。
3.出生史：包括母婴ABO和Rh血型不合、早产等情况。
诊断注意事项
1.早期诊断：新生儿溶血病的诊断要尽早确立，以便及时采取治疗措施。
2.综合分析：综合临床表现、实验室检查和病史等资料进行诊断，避免
仅凭单一指标诊断。
3.联合会诊：需要根据病情严重程度邀请儿科、产科、血液科等专业医
生进行联合会诊。
结语
新生儿溶血病的诊断依据主要包括临床表现、实验室检查和病史等多个方面。
在诊断过程中，需要综合分析各项指标，做出准确的诊断，并及时采取相应的治疗措施，以提高患儿的生存率和生活质量。
以上为新生儿溶血病需要的诊断依据的相关内容，希望能对读者有所帮助。
新生儿溶血检查项目有哪些【母婴健康常识】
新生儿溶血检查项目有哪些
文章导读
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如今人们的生活质量好了，而且医学也发达了，很多的家长为了孩子的健康，在孩子出生的时候，都会为孩子做一些检查，新生儿溶血检查就是其中的一种，也是比较常见的检查。
那新生儿溶血检查项目有哪些?这个问题，很多的朋友并不了解，下面就关于这个问题为大家简单的介绍一下。
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新生儿溶血检查项目有哪些?
1.血常规如红细胞及血红蛋白下降(脐血<13g dl="">6%)、外周血有核红细胞增高
(>10/100个白细胞)等均提示患儿可能存在溶血。
2.血清胆红素主要为未结合胆红素升高。
溶血病患儿生后黄疸逐渐加深，胆红素水平呈动态变化，需每天随访2～3次。
3.定血型 ABO溶血病者母亲为O型，新生儿为A或B型。
Rh溶血病者母亲为Rh阴性(D抗原阴性)，新生儿为Rh阳性。
如母亲为Rh阳性(但C或E抗原阴性，胎儿C或E抗原阳性)，婴儿Rh阳性，也可发生抗E、抗C、抗e、抗C引起的溶血病。
4.抗人球蛋白试验(antihuman globulin test) 即Coombs试验，检查特异性血型抗体，可证实患儿红细胞是否被血型抗体致敏，如直接试验阳性说明患儿红细胞已被致敏，再做释放试验阳性，即可诊断。
ABO溶血病者需做改良法。
新生儿ABO溶血病(新生儿ABO溶血症)
新生儿ABO溶血病（新生儿ABO溶血症）【病因】(一)发病原因ABO溶血病是母婴血型不合溶血病中最常见的一种，主要发生在母亲O型，胎儿A型或B型，其他血型极少见。
本病是由于胎儿接受了母体的(通过胎盘)同族免疫抗体而发病，其发病条件是母体曾接受异种抗原刺激，产生相应的免疫抗体，母体所产生的抗体通过胎盘进入胎儿，胎儿对此抗体具有免疫敏感性而得病。
(二)发病机制发病者的母亲多数为O型，具有免疫性抗A及抗B抗体;婴儿多数是A型，特别多见于A1其次为A2，及B型。
多见于O型母亲，是由于母亲其抗A、抗B抗体除了属于IgM 的天然抗体外，同时还有IgG的免疫性抗体。
A(B)型血清中则主要是抗B(A)IgM，极少有抗B(A)IgG，而IgM抗体是不能通过胎盘的。
免疫性抗A或抗B抗体(IgG)则可通过胎盘，抗体进入胎儿体内后，附着于胎儿相应红细胞膜上，与其抗原发生免疫反应而溶血。
ABO溶血病可以第一胎发病，这是因为母亲产生免疫性IgG抗体，除了可以由红细胞抗原刺激外，还可以由多种非特异性刺激产生，因具有ABO的血型物质可存在于多种组织细胞及体液中，如血清、唾液、胃液、卵巢囊肿液、精液、羊水、汗、尿、泪、胆汁、乳汁中;以及由于肠道寄生虫感染，注射伤寒菌苗、破伤风或白喉类毒素等非特异性刺激而引起免疫性抗体，由于有如此众多的刺激均可使孕妇产生抗体，故孕妇在怀孕前就已具备了这些抗体，因此第一胎就可发病。
具有免疫抗体的母亲，虽其胎儿与其ABO血型不合，但不一定发病，这是由于来自母体的抗体，被胎儿血浆和组织中存在的血型物质结合，阻止抗体对红细胞的作用。
同时还由于胎儿红细胞表面的抗原密度较小，因此结合的抗体量少，不引起症状。
具有免疫性抗体的妇女在分娩过一次ABO溶血病的婴儿后，以后怀孕的情况，据Mothan分析大量资料发现，约1/3的新生儿比第一胎的病情为重，1/3的新生儿与第一胎相似，另1/3则比第一胎为轻。
【症状】ABO溶血病的症状轻重差别很大，轻症仅出现轻度黄疸，易被视为生理性黄疸而漏诊，有些仅表现为晚期贫血，重症则可发生死胎，重度黄疸或重度贫血。
新生儿溶血病三项试验指什么
新生儿溶血病三项试验指什么
一、新生儿溶血病三项试验指什么二、新生儿溶血病的检验指标三、新生儿溶血病人的饮食
新生儿溶血病三项试验指什么1、新生儿溶血病三项试验指什么
新生儿溶血病三项试验指改良直接抗人球蛋白试验、抗体释放试验和游离抗体试验。
2、新生儿溶血病的病因
2.1、Rh血型不合(5%):Rh血型不合引起的新生儿溶血症在我国的发病率较低,通常是母亲为Rh阴性,胎儿为Rh阳性而血型不合,并引起溶血。
2.2、ABO血型不合(60%):本病以ABO血型不合最常见,其中最多见的是母亲为O型,胎儿(或婴儿)为A型或B型,第一胎即可发病,分娩次数越多,发病率越高,且一次比一次严重。
2.3、遗传(20%):遗传来的显性抗原恰为母亲所缺少,胎儿血因某种原因进入母体,母体产生相应的IgM抗体,当胎儿血再次进入母体,母体发生次发免疫反应,产生大量IgG抗体,通过胎盘进入胎儿,使胎儿,新生儿发生溶血,只要0.1～0.2ml的胎儿红细胞进入母体循环就足以使母亲致敏。
3、新生儿溶血病的症状
3.1、胎儿水肿 :严重者表现为胎儿水肿 ,主要发生在Rh溶血病,在胎儿期有大量红细胞破坏,患儿全身水肿,苍白,皮肤瘀斑 ,胸腔积液,腹水 ,心音低,心率快,呼吸困难 ,肝脾肿大 ,胎盘也明显水肿。
3.2、黄疸 :溶血病患儿黄疸出现早,一般在生后24h内出现黄疸,并很快发展,血清胆红素以未结合胆红素为主,但也有少数患儿在病程恢。
新生儿溶血的诊断标准
新生儿溶血的诊断标准新生儿溶血的诊断标准主要包括以下几个方面：1. 症状诊断：如果新生儿出现贫血、黄疸、肝脾肿大等症状，应考虑新生儿溶血的可能性。
特别是当母亲是O型血，父亲是AB型血，或者母亲是Rh阴性血（熊猫血），父亲是Rh阳性血时，更应考虑新生儿ABO溶血或Rh 溶血的可能。
2. 血型检查：如果母子血型不合，可能存在新生儿溶血。
例如，母亲是O型血，父亲是AB型血，新生儿是A型或B型血，就可能发生ABO溶血。
3. 实验室检查：实验室检查包括改良Coombs试验和抗体释放试验等。
如果这些试验中有一项阳性，即可确诊新生儿溶血。
同时，血常规检查也可能发现白细胞偏高或正常，血红蛋白偏低，肝功明显升高，网织红细胞升高，以及抗人球蛋白试验阳性等表现。
4. 产前诊断：对于既往有不明原因死胎、流产、新生儿中毒黄疸史的孕妇及其丈夫，应进行ABO、Rh血型检查，不合者进行孕妇血清中IgG抗A或抗B检测。
如果孕妇血清中IgG抗A或抗B>1:64，提示有可能发生ABO溶血病。
Rh阴性孕妇在妊娠16周时应检测血中Rh血型抗体做为基础值，以后每2-4周检测一次，当抗体效价上升时，提示可能发生Rh溶血病。
5. 其他症状：新生儿溶血病还可能导致胎儿水肿，主要发生在Rh溶血病中。
在胎儿期有大量红细胞破坏，患儿全身水肿、苍白、皮肤瘀斑、胸腔积液、腹水、心音低、心率快、呼吸困难、肝脾肿大。
胎盘也明显水肿，胎盘重量与新生儿体重之比可达1∶(3～4)，严重者可发生死胎。
综上所述，新生儿溶血的诊断需要综合考虑临床症状、血型检查和实验室检查结果。
如有疑虑，请及时就医咨询专业医生。
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新生儿的A(B)抗原密度比成人低，所以被
结合的抗体亦很少，呈弱阳性的混合视野 外观。
ABO-HDN患儿血样本检查
游离抗体试验 新生儿血清中的IgG抗A(B)抗体来自母亲，
如果患儿血清中发现有与其红细胞不配合的IgG 抗A(B)时，应将其血清与A、B、O试剂红细胞
ABO-HDN患儿血样本检查
放散试验注意事项：
▪ 洗出尽量多的红细胞进行放散 ▪ 注意放散液的温度不可超过56℃，以防
溶血
▪ 天冷时放散液离心注意保温 ▪ 将尽可能多的放散液吸出 ▪ 注意除去放散液中残留的红细胞
在放散试验的结果观察中，会遇到 一种交 叉反应性抗-AB抗体，它针对的特异性是A和B抗 原所共有的，因而它能凝集A型和B型红细胞，抗 -AB同样可引起ABO溶血病。
ABO新生儿溶血病判读中可能遇到的问题
直抗阳性而释放试验阴
可能是试验误差或抗C3阳性造成或是药物 引起新生儿溶血病
在A(B)细胞的释放液中检出抗-B(A )
在释放试验的结果观察中，会遇到交叉反 应性抗-AB抗体，如果在A(B)细胞的释放液中仅 仅检出抗B(A),却未检出抗A(B)时，仍认为是阴 性。
ABO-HDN患儿血样本检查
血清胆红素测定：
采用Lathe-Ruthven氏改良法，较适合于新 生儿高胆红素血症的检查。生理性黄疸一般不超 过150μmol/L (8.8mg/dl)，ABO新生儿黄疸常可 达200μmol/L(11.7mg/dl)以上。脐血胆红素值高 于68μmol/L (4mg/dl)，24小时后血清胆红素值 达340μmol/L (20mg/dl)以上者,应给予换血治疗。
新生儿溶血病血清学检查
通过血清学检查可了解：母婴血型是 否不合、母亲血清是否存在与患儿红细胞 相对应的IgG性质的抗体、患儿红细胞是否 被来自母亲的IgG抗体所致敏，从而对新生 儿溶血病进行预防诊断和治疗。
血型血清学检查对新生儿溶血病的诊断 有重要意义
母婴ABO血型不合溶血病的血清学检查
孕妇血样本检查(产前检查)是孕妇血液常规 进行产前检查，用以鉴定这些孕妇妊娠患新生儿 溶血病胎儿的危险，一旦被鉴定有此危险时，定 期过筛试验可用于确定影响的程度。
有关试验包括血型鉴定、血清IgG抗A（B） 抗体检查、不规则抗体筛选和鉴定
孕妇血样本检查
血型鉴定：包括夫妇的ABO、Rh血型以及 夫妇血型是否配合。
孕妇血样本检查
血清中IgG抗A（B）抗体检查： ABO系HDN由IgG抗A(B)引起，检测母
亲
血清中有无IgG性质的抗A(B)抗体及效价，即可 预ABO系HDN发生的可能性。
ABO-HDN患儿血样本检查
患儿血样本检查是诊断ABO系HDN的最有 利证据，证实患儿红细胞是否被来自母体的IgG 抗A（B）抗体所致敏。
试验包括红细胞直接抗球蛋白试验、游离 抗体试验、抗体放散试验、血清胆红素测定。
ABO-HDN患儿血样本检查
红细胞直接抗球蛋白 如果新生儿红细胞被IgG抗A(B)所致敏，
母婴Rh血Leabharlann 不合溶血病的血清学检查孕妇血样本的检查
Rh阴性孕妇的抗体检测应分别在20、28、 34周进行。检测包括对母亲的血清用抗体筛选红 细胞以及(在ABO血型配合时）丈夫红细胞作抗 体筛选。
孕妇血样本的检查
如果抗体筛选试验阳性则
▪ 做抗体鉴定，确定抗体特异性 ▪ 确定孕妇Rh血型，以印证抗体鉴定结果 ▪ 测定抗体效价
患儿的血样本检查
直接抗球蛋白试验 Rh新生儿溶血病的直抗都相当强，一般≥2+，
因此新生儿直抗强弱是区别ABO和Rh溶血病的主 要标志。 游离试验
Rh溶血病的游离试验要求最好用母亲的血清 代替婴儿血清做一组谱细胞,该试验阳性不能证实 新生儿溶血病，只能确定婴儿血清中可能存在的 不规则抗体。必要时用婴儿自身血清排除合并 ABO溶血病。
用2-巯基乙醇（2-Me）处理孕妇血清，
然 后进行倍比稀释，加入相应红细胞，用间接抗球
蛋白法检测；抗体效价大于64时，其血型不合
的
孕妇血样本检查
抗体筛选和鉴定 取母亲血清与筛选红细胞作盐水试验、抗球
蛋白试验、聚凝胺试验 。 如果该试验阳性，应进一步用配组谱细胞作
抗体鉴定，以确定抗体的特异性。当检出某一抗 体后，需进一步鉴定双亲的相关红细胞抗原。
ABO-HDN游离、释放试验阳性和阴性的判定，以出 现可以致敏新生儿红细胞的血型抗体为阳性。如：
新生儿血型 A 细胞 B 细胞 O 细胞 结果
A 型 ＋ 0 0 阳性 ＋ ＋ 0 阳性 0 0 ＋ 阳性（ABO 以外抗体引起溶血病） 0 ＋ 0 阴性
通过直抗、游离、释放试验确定ABO-HDN
直抗试验 阴性： 阳性 阴性 阴性 阳性 阳性 阴性 阳性
游离试验 阴性 阴性 阳性 阴性 阴性 阳性 阳性 阳性
释放试验 阴性 阴性 阴性 阳性 阳性 阴性 阳性 阳性
结论 不能证实为由血型免疫抗体引起的新生儿溶血病 可疑为新生儿溶血病 可疑为新生儿溶血病 可以证实为 ABO 新生儿溶血病 可以证实为 ABO 新生儿溶血病 可以证实为 ABO 新生儿溶血病 可以证实为 ABO 新生儿溶血病 可以证实为 ABO 新生儿溶血病
检测Rh系HDN的同时，注意母婴ABO系 HDN 的并存，需以缺乏该Rh抗体相应抗原的A(B)红细 胞进行检测证实。
患儿的血样本检查
包括： 直抗、ABO和Rh血型定型、乙醚放散试验、 游离试验、排除合并ABO溶血病。
如果Rh系HDN的三项试验为阳性，即可 证实婴儿的红细胞被来自母体的IgG抗体致敏
用间接抗球蛋白试验加以证实。
ABO-HDN患儿血样本检查
抗体放散试验
用加热放散法提取致敏于红细胞表面的抗体 将抗体放散于盐水溶液中，然后加入经酶处理的
A、B、O红细胞，作间接抗球蛋白试验，此法
甚为敏感，即使是直接抗球蛋白试验阴性的患儿， 一旦本试验出现阳性结果，即可明确诊断。本试 验是新 生儿溶血病三项试验中最具价值的一项试 验。
检出有意义的抗体后，应定期复查， 观测抗体效价变化情况，抗体效价持续升 高提示胎儿可能受害。必要时可准备产后 立即换血。
孕妇血样本的检查
如果抗体筛选试验阴性，只有丈夫红细胞出 现阳性反应，则提示孕妇血清中存在针对低频率 抗原的抗体。
如果孕妇血清中抗体未针对其丈夫或婴儿的 血型抗原，则该抗体可能是由于输血等原因引起的 对胎儿无害。