原代细胞培养实验(药理)
细胞原代培养实验具体步骤及方法
细胞原代培养实验具体步骤及方法将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。
因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。
但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。
最常用的原代培养有组织块培养和分散细胞培养。
一、实验材料准备1. Hank's液配方：KH2PO4 0.06 g，Nacl 8.0 g，NaHCO3 0.35 g，KCl 0.4 g，葡萄糖1.0 g，Na2HPO4·H2O 0.06 g，加H2O至1 000 ml。
Hank's液可以高压灭菌。
4℃下保存。
二、具体操作1. 将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2-3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带入超净台内（或将新生小鼠在超净台内）解剖取肝脏，置平皿中。
2. 用Hank's液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。
3. 用手术剪将肝脏剪成小块（1 mm2），再用Hank's液洗三次，转移至小青霉素瓶中。
4. 视组织块量加入5-6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20-40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。
5. 加入3-5 ml培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。
6. 静置5-10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。
7. 1 000 rpm，离心10分钟，弃上清液。
8. 加入Hank's液5 ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。
9. 加入培养液1-2 ml（视细胞量），血球计数板计数。
10. 将细胞调整到5x105/ml左右，转移至25 ml细胞培养瓶中，37℃下培养。
注意1. 自取材开始，保持所有组织细胞处于无菌条件。
实验报告-细胞原代培养实验
细胞生物学实验报告实验三细胞原代培养1引言1.1 实验目的1. 理解细胞原代培养原理。
2. 了解细胞原代培养的应用。
3. 独立进行鼠胚和鸡胚细胞原代培养操作。
4. 巩固无菌操作技术。
1.2 实验原理细胞原代培养：原代培养组织直接从机体获取后，通过组织块长出单层细胞或者用酶消化或机械方法将组织分散成单个细胞开始培养，严格意义上的原代培养指在首次传代前的培养，但通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。
2实验仪器、试剂及操作步骤2.1 实验仪器超净工作台、倒置相差显微镜、CO2培养箱、酒精灯、酒精棉球、酒精喷壶、试管架、滴管筒（头）、废液缸、手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶等2.2 实验试剂DMEM培养基、D-Hanks缓冲液、血清、抗生素、胰蛋白酶消化液等2.3 实验材料动物：9至12日龄的鸡胚、15日龄的鼠胚2.4 实验步骤A.鸡胚成纤维细胞的原代培养1.实验室和超净工作台消毒，紫外照射20Min左右。
2.穿好实验服，进无菌室前穿鞋套、洗手。
3.关闭紫外灯，开日光灯和开风机，超净工作台台面应整洁，用75%酒精擦双手消毒，擦拭台面。
4.在D-Hanks缓冲液中按1：100的比例加入双抗。
5.取9-12日龄鸡胚，用照蛋器照检，画出气室边界和胎位。
将鸡胚置于鸡卵架上，用酒精棉球擦拭蛋壳。
6.用镊子在鸡蛋气室位置敲一道划痕，然后用镊子小心去除气室部位的蛋壳。
7.换用洁净的无菌镊子揭开膜，取出鸡胚至灭菌的培养皿中，用D-Hanks缓冲液冲洗鸡胚。
8.用眼科剪去除鸡胚的头部、四肢以及内脏，然后用D-Hanks缓冲液充分洗涤躯干。
9.将躯干置于小平皿盖中，用D-Hanks缓冲液至少洗涤3次，充分弃除红细胞。
10.用无菌眼科小剪刀将鸡胚躯干剪成1mm3的碎块。
在胚胎组织块中加入1mL的胎牛血清，用滴管吸取组织块接种到培养瓶内。
在培养瓶中放置10-15个组织块。
11.在培养瓶的另一侧面加入完全培养基，注意不要冲到组织块。
原代细胞培养实验报告
原代细胞培养实验报告实验名称：原代细胞培养实验实验目的：1.掌握原代细胞培养的基本技术和方法；2.观察和记录原代细胞在体外培养过程中的生长和变化；3.学习和探究细胞培养对细胞形态、功能和特性的影响。
实验材料和方法：1.实验材料：原代细胞，培养基，培养皿，培养瓶，培养箱等；2.实验方法：a.准备工作：消毒实验区域，准备适宜的培养条件；b.培养器皿预处理：将培养皿和培养瓶加热至高温，使其表面杀菌；c.细胞移植：用适量的培养基将原代细胞移植至培养皿或培养瓶中；d.细胞培养：将细胞培养在恒温恒湿的培养箱中，定期观察和记录细胞的生长情况；e.细胞传代：当细胞达到一定密度时，用消化液将细胞从原培养皿中剥离，并转移到新的培养皿中，促进细胞的继续生长和繁殖。
实验结果与分析：在进行原代细胞培养实验的过程中，我们发现原代细胞在培养基中可以维持一定的形态和生物活性。
经过一段时间的培养，细胞开始出现贴壁生长，并形成单层密集的细胞群。
这时，细胞的数量明显增加，可见其细胞分裂和增殖的效果。
细胞形态也逐渐变得规整，细胞质较为丰满，细胞核染色质着色精细。
随着培养的时间推移，细胞的代谢活动逐渐增强，细胞数量持续增加。
细胞形态和功能逐渐分化，并出现特定的细胞类型，如心肌细胞、肝细胞等。
这表明原代细胞在体外培养的过程中，依然能够保持其特定的细胞类型和功能特性。
然而，我们也发现在长时间的培养过程中，细胞的生长速度逐渐放缓，甚至停滞。
细胞形态也开始出现变异和退化，如细胞形状异常、质量变差等。
这可能是由于细胞的老化和突变导致，同时也与培养条件和传代的次数有关。
结论：通过本次实验，我们成功地进行了原代细胞的培养，并观察到了细胞在体外培养过程中的生长和变化。
我们发现原代细胞能够在适宜的培养条件下，维持其形态和功能的稳定性，并且能够分化成特定的细胞类型。
然而，在长时间的培养过程中，细胞的生长速度逐渐放缓，而细胞的形态也逐渐出现变异和退化。
因此，在进行原代细胞培养时，需要合理控制培养条件和适时进行细胞传代，以保持细胞的生长和特性。
原代细胞培养的名词解释
原代细胞培养的名词解释在细胞生物学领域里，原代细胞培养是一种常见的实验技术。
它是通过从一个生物体内分离和培养细胞，使其在体外继续生长和繁殖的过程。
通过原代细胞培养，我们可以研究细胞的生理特性、功能和互作，有助于我们深入了解生物体内组织和器官的基本构成和功能，以及与疾病相关的异常细胞行为。
一、原代细胞的选择和分离方法要进行原代细胞培养，第一步是选择适合的原代细胞。
原代细胞是从组织或器官中分离出来的初代细胞，与体内的细胞相似，具有原始的细胞特性。
常用的原代细胞包括人类和动物的肌肉细胞、皮肤细胞、神经细胞等。
原代细胞的分离通常通过组织分块法或酶处理法进行。
组织分块法是将组织样本切割成小块，然后用细胞培养基将其浸泡，通过适当的培养条件，细胞会从组织中游离出来并生长扩增。
酶处理法则是使用特定的酶来消化组织，使细胞从基质中分离出来。
二、原代细胞培养的技术和条件原代细胞的培养需要提供适合其生长和繁殖的环境。
培养基是最基本的条件，通常包括营养物质、生长因子、补体和抗生素等。
细胞培养基中的成分要根据细胞类型的不同而调整，以满足其特定的营养需求。
细胞培养的环境因素也很重要。
温度、湿度和气体组成是常见的调节参数。
温度需要恒定在37摄氏度左右，以模拟体内的正常生理条件。
湿度的控制可以减少蒸发和细胞表面的沉积。
气体组成通常是5％二氧化碳和95％空气，以稳定酸碱平衡。
在原代细胞培养中，还需要注意细胞的传代。
传代是指将细胞从一个培养皿转移到另一个培养皿中，以保证细胞的生长和更新。
传代时要遵循适当的规程和技术，以确保细胞的稳定和增殖。
三、原代细胞培养的应用原代细胞培养在细胞生物学研究中具有广泛的应用。
通过原代细胞培养，我们可以研究细胞的分化、增殖、凋亡和信号传导等基本生理过程。
这对于揭示细胞发育和组织构建的机制非常重要。
此外，原代细胞培养还可以用于研究疾病的发生机制和治疗方法。
通过比较病变组织和正常组织的原代细胞，我们可以发现细胞中的异常变化，从而揭示疾病的发生和发展规律。
请简述细胞原代培养(组织块培养法)的实验步骤及注意事项
请简述细胞原代培养(组织块培养法)的实验步骤及注意事
项
细胞原代培养也被称为组织块培养法，是一种从组织中分离和培养原代细胞的方法。
以下是细胞原代培养的实验步骤和注意事项：
1.组织分离：首先需要从生物体中收集组织样本，如肝、肺、心脏等。
样本需要通过消化或机械分离等方法分离出单个细胞或小组织块。
消化方法可以使用胰酶或胰蛋白酶等酶类来消化样本，机械分离则需要使用切割器或剪刀等工具。
2.细胞培养：分离出的组织块需要在含有营养物质和生长因子的培养基中培养。
在培养过程中需要注意不要过度培养，否则会导致细胞老化或死亡。
3.传代：当细胞达到一定密度时，需要将其分离并移至新的培养皿中进行传代，以维持细胞的生长和繁殖。
注意事项：
1.细胞的培养需要在严格的无菌条件下进行，以避免细胞污染。
2.选择适当的培养基和生长因子，以保证细胞的生长和分化。
3.细胞培养过程中需要定期观察细胞的形态和生长情况，以及细胞浓度，以便及时进行传代。
4.细胞应该在体外保持与体内相似的环境和温度，以提高细胞的存活和生长率。
5.尽量使用新鲜的组织样本，避免长时间冷藏或保存，以保证细胞质量和数量的优良。
细胞的原代培养
细胞原代培养【实验目的】1.理解细胞原代培养原理2.熟悉细胞原代培养方法与过程3.了解细胞原代培养的应用4.独立进行细胞原代培养操作【实验原理】1、原代培养实验原理细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一，可分为原代培养和传代培养两种。
原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养，即组织直接从机体获取后,通过组织块长出单层细胞,或者用酶消化或机械方法将组织分散成单个细胞开始培养,在首次传代前的培养可认为是原代培养。
由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。
这一方法可为研究生物体细胞的生长，代谢，繁殖提供有力的手段。
同时也为以后传代培养创造条件。
原代培养的过程指动物的组织或器官从机体取出后，经机械法或各种酶类（常用胰蛋白酶）和鳌合剂（常用EDTA)处理，使之分散成单个细胞,加入适量培养基，置于合适的培养容器中，在无菌、适当温度和一定条件下，使之生存、生长和繁殖的过程。
原代培养的方法有：a.组织块法:在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎，每个组织块小于1mm3大小。
用Hanks液洗涤2—3次，自然沉淀。
用吸管吸去上清液。
将组织块贴于培养瓶进行培养。
b.酶消化法:将1mm3大小的组织块放入1个三角瓶内加入10—30ml的0.125%的胰蛋白酶。
370C磁棒搅拌消化20－30分钟。
然后终止消化。
用几层无菌纱布过滤。
取过滤液，离心800rpm 5—10分钟收集细胞。
弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶培养。
【实验仪器、材料、试剂及用品】1.仪器：荧光显微镜，CO2培养箱2.材料：孕鼠3.试剂：(1) 培养液：为DMEM，添加10％新生牛血清(NBS)、青霉素100 u／ ml 、链霉素100ug／ml。
(2)消化液：为0.125％胰蛋白酶—0.02％EDTA 混合消化液。
4.用品：镊子，剪刀，培养瓶，试管，移液管，巴斯德吸管，废液缸，75％酒精棉球，酒精灯、小指管。
【实验步骤】(一)小鼠胚胎的准备:1.取怀孕16～18d的母鼠，断颈处死，置于75%的酒精中。
细胞生物学实验细胞原代培养
• 2、离散细胞培养：有单细胞贴壁或分裂成片
培养观察一般项目
正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次。 观察的内容包括：
严重者细胞脱壁悬浮。
9．将植块置于12孔培养板的培养孔中央，每孔5块，间隔约2mm，
布局合理，粘膜面向上，轻轻按压每块植块，使其紧贴培养板的
表面；
10．沿培养孔的边缘，缓慢加入约0.5ml的完全MEM培养液，
勿使培养液与植块接触；
11．将培养板置于370 C
、
５％CO2培养箱中预孵育1小时；
12．每孔加完全MEM培养液2ml，轻拿轻放，切勿使植块飘
• 学习观察体外培养细胞的形态及生 长状况。
实验原理
• 模仿体内生长环境，使来自机体 的细胞、组织、器官能够在人工 培养条件下生存、生长、繁殖。
•
培养用主要仪器设备
1、纯水设备：纯水仪 2、干燥消毒设备：电热干燥箱、高压蒸汽消毒锅、
过滤器及0.22 m滤膜； 3、超净工作台 4、培养设备： 普通培养箱、CO2培养箱； 5、贮存设备：冰箱、液氮罐 6、观察设备：倒置显微镜 7、其他设备：天平、离心机、水浴锅等
关闭超净工作台内的紫外光灯,点燃酒精灯 (一切操作均需在酒精灯火焰下进行)
将消毒过的所用物品放入超净工作台中
植块培养法培养鸡心肌细胞步骤
一、配M199完全培养液：
M199基础培养液 90％
小牛血清
10％
青霉素 链霉素
100IU/ml 100g/ml
过滤除菌。
二、获取心脏
① 消毒鸡胚蛋：泡入70％酒精 ② 取出鸡胚，Hank’s液洗涤。 ③ 取出心脏，放入Hank’s液中。
细胞原代培养
细胞
一细胞培养
（一）原代培养
○1胰蛋白酶消化法
1.将组织块用PBS清洗3遍，去除表面血污，移入新的培养皿中用弯头剪剪至1mm3（糊状）后用PBS清洗三遍（洗至PBS澄清透明）
2.吸去PBS液，将组织块移入15ml离心管中，加入组织块两倍体积预热至37℃的0.25%含EDTA的胰蛋白酶，在37℃水浴中作用20分钟，每隔五分钟摇晃一下
3.加入两倍体积的含血清的培养基终止消化，将消化后的组织块过细胞筛，取过滤液于离心管中，1000r/min离心5分钟
4.离心后吸去上清液，加入5ml含10%胎牛血清和1%双抗的培养基，轻轻吹打混匀，细胞计数，调至约5×105个/ml，每个培养皿（6㎝培养皿）加入5ml含细胞的培养基，上下左右移动混匀
5.放入37℃，5%CO2的培养箱中培养
6.24h后，观察细胞贴壁情况，更换培养基，继续培养，2-3天更换一次培养基
7.代细胞融合率达80%-90%时进行传代培养
○2组织块法
1. 将组织块用PBS清洗3遍，去除表面血污，移入新的培养皿中用弯头剪剪至1mm3（糊状）后用PBS清洗三遍（洗至PBS澄清透明）
2.将组织块转移至培养皿中，每个组织块保持一定间距
3.向培养皿中缓慢加入培养基至刚好没过组织块，小心放入37℃，5%CO2的培养箱中培养
4.24h后，观察贴壁情况，并补加新培养基
仪器：6㎝培养皿、弯头剪、15ml离心管、50ml离心管、5ml移液枪、1ml移液枪、5ml枪头、1ml枪头、废液瓶、酒精棉球、离心机、水浴锅、倒置显微镜、细胞培养箱
试剂：PBS缓冲液、0.25%EDTA-胰蛋白酶、DMEM （高糖）培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素混合液（双抗）。
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一.细胞培养的基本原理细胞培养是用酶消化法将组织碎块分离成单个细胞，用培养基制成细胞悬液，在体外适宜条件下，使细胞生长繁殖，并保留其一定的结构和功能特性。
细胞培养与组织培养、器官培养主要不同点在于原始培养的对象不同。
细胞培养使用的是单个细胞悬液，组织培养使用的是组织块(0.5～1立方毫米)或薄片(厚0.2毫米)，而器官培养使用的是器官原基或器官的一部分或整个器官。
在组织培养中，细胞自组织块周围移出并生长，细胞在生长过程中总有移动(运动)或其它变动，这样就使被培养的组织难以长期维持其原有的结构和功能。
培养时间越长，发生变化的可能性越大，结果常使单一类型的细胞保存下来，最终成了细胞培养。
在细胞培养中，细胞生命活动和体内细胞一样，仍然是相互依存的，呈现一定的组织特异性，所以组织培养和细胞培养实际上无严格区别。
细胞培养技术是生命科学中常用的研究手段，该方法能排除神经体液因素的影响及肝、肾解毒功能的干扰，观察某些因素或药物对培养细胞的直接作用。
通过实验可获得某一类型细胞的纯培养。
如心肌组织中心肌细胞约占50%，非心肌细胞占50%;而经纯化分离的心肌细胞悬液中，心肌细胞可达95%以上，这样，心肌细胞原代培养实验基本不受其它细胞的干扰。
在细胞培养实验中能直接观察到培养细胞生命活动的动态过程;用定时显微摄影记录可发现一些肉眼观察不到的生命现象;还可利用电镜手段、同位素标记、放免法和免疫组化法等来研究细胞形态结构及细胞内化学物质的分布。
此外，还能节约研究费用。
如在某些研究中，用100只动物做实验所获得结论与用100张盖玻片或几十个培养瓶而获得结论具有相同的统计学意义，而细胞培养较之大批量的动物饲养花费要小。
但细胞培养方法也存在不足之处：培养细胞失去体内细胞的制约和整体的调节作用，细胞形态和功能会发生一定程度的改变。
培养方法、实验试剂对细胞形态和功能有一定的影响，如胰蛋白酶可破坏细胞表面受体、酶、抗原等。
长期体外培养的细胞，由于反复传代、冻存和操作等因素的影响，可能发生染色体非整倍体改变，呈永生化或癌变的特征。
二.细胞培养的基本设备与用品(1)细胞培养的基本设备细胞培养的基本设备有：CO2培养箱，倒置显微镜，净化台，压力蒸汽消毒器，自动双重纯水蒸馏器，液氮罐，冰箱，电热干燥箱，电热恒温培养箱，电动吸引器，抽气泵等。
(2)常用的实验用品1.玻璃器皿细胞培养所用的玻璃器皿应由透明度好、无毒的中性硬质玻璃制成。
常用的有以下几种：国产螺旋口培养瓶[有12.5毫升，25毫升，100毫升等规格，国外培养瓶常以底面积(平方厘米)表示];培养皿(直径有3.5厘米，6厘米，9厘米，10厘米等规格);离心管(5毫升，10毫升);注射器(1毫升，5毫升等);用生理盐水瓶代替的贮存瓶(100毫升，250毫升，500 毫升);青霉素瓶(5毫升);西力辛瓶(10毫升);其它还有尖吸管和移液管，载玻片(厚度0.8～1.2毫米)，盖玻片(厚度0.12毫米)，贮存尖吸筒用的玻璃筒或金属筒，漏斗，烧杯，量筒，贮蒸馏水瓶，冷冻管(1.5毫升，2毫升)等。
2.塑料品多孔培养板规格有4、6、12、24、96孔等，培养皿直径有3厘米、6厘米、10厘米等。
塑料品经消毒灭菌密封包装，供一次性使用，重复使用的需经特殊方法清洗消毒。
塑料器材厚薄均匀，有的表面经特殊处理，细胞易于生长。
3.器械解剖刀、眼科剪和镊(直头和弯头)、中号圆头镊、止血钳等。
4.杂用品金属饭盒、试管架、各种规格胶塞、记号笔、搪瓷盘、吸头(吸取液体的胶帽)、酒精灯、酒精、碘酒棉球瓶、火柴等。
组织培养中使用最多的是吸管、培养瓶、培养皿及各种瓶塞。
实验者手中应有三套器材，瓶塞数要大于瓶数，才能保证实验中的循环使用。
三.细胞培养用品的清洗与消毒灭菌(1)清洗1.常用玻璃器皿清洗◇清洗要领浸泡初次使用的玻璃器皿呈碱性，表面常附有灰尘和一些对细胞有毒的物质，如铝和砷等。
空气湿度高时，玻璃器皿表面又易长霉。
使用前，新器皿浸泡在5%稀盐酸中过夜，以中和玻璃表面的碱性物质并去除霉斑;然后经简单刷洗，流水冲洗(逐片进行)，蒸馏水浸泡，干燥备用。
新玻片处理后，短时间不用时，需将它投入95%的酒精中保存，以防玻片长霉。
培养后的玻璃器皿应立即投入清水中浸泡，器皿中残留的细胞、蛋白质一旦干涸，即固着于玻璃表面，极难脱落。
刷洗用过的玻璃器材经自来水冲洗后，浸入水中煮沸，然后将适量洗涤剂(洗洁精或洗衣粉)投入沸水中继续煮沸10分钟，趁热刷洗器皿内外，刷洗后浸入清水中进行冲洗。
酸泡刷洗好的玻璃器材干燥后置清洁液中浸泡24小时，清洁液的强氧化作用可清除刷洗不掉的极微量杂质。
◇清洗步骤玻璃器材煮沸10分钟→刷洗→流水振荡冲洗15-20遍→50℃烤干→清洁液浸泡24小时→流水振荡后冲洗15-20遍→漓水→蒸馏水浸泡2次(每次24小时)→50℃烤干，待包装。
◇清洗注意事项和要求①使用后的实验器材应立即投入清水中。
②浸泡、煮沸、酸泡的器皿内要充满液体，不得有气泡。
③刷洗、酸泡后的器材要用流水振荡冲洗，不得残留洗涤剂、清洁液。
方法是：每瓶灌2/3容积的自来水，振荡后倒掉，重复15—20次(尖滴管置量杯中冲洗)。
④煮沸前的水面要高于器材5厘米，水沸后投入洗涤剂(直径35厘米的铝锅，用洗衣粉10克左右)。
若洗涤剂和实验器材同时从冷水煮至沸腾或使用过量洗剂，均易腐蚀玻璃表面，使玻璃碱化，pH值上升。
⑤软毛刷的刷端已掉毛的应该弃去，否则会损害玻璃。
玻璃划痕处易残留洗涤剂，会改变培养液pH值和毒害细胞。
⑥清洁物品应及时包装消毒，应注意妥善保存，防止落入灰尘、蟑螂、蚂蚁等引起二次污染。
⑦使用后的胶塞与玻璃器材同时煮洗时，胶塞要放在煮锅的底部。
⑧浸泡器材的蒸馏水容器要专用，并做好标记，如“蒸馏水Ⅰ盆”、“蒸馏水Ⅱ盆”。
⑨器材清洗干燥后，在以后各步操作时，手指不可接触器材的使用端。
清洗者可戴一次性薄膜手套进行操作，省时又保证清洗质量。
⑩用超声波仪清洗器材时，清洗要求同上。
2.橡胶制品的清洗新购置的橡胶制品(胶塞、胶管、橡皮乳头)的洗涤方法如下：0.5摩尔/升NaOH煮沸15分钟→流水冲洗→0.5摩尔/升HCl煮沸15分钟→流水冲洗→自来水煮沸2次→蒸馏水煮沸20分钟→50℃烤干备用。
这样处理可完全除净胶塞上的硫磺等有毒物质。
用过的胶塞，其清洗方法、要求基本同玻璃器材。
因胶塞使用面常沾有洗涤剂，流水冲不净，故胶塞洗刷的重点部位是胶塞使用面，用刷逐个刷洗。
在使用过程中，胶塞不能与培养液接触，以防未洗净的胶塞污染培养液和细胞。
3.G6除菌滤器的清洗新G6除菌滤器置玻璃洗液中浸泡24小时，流水缓慢冲洗，至pH值为5.5左右，然后用4倍的蒸馏水缓慢冲洗，再用重蒸馏水缓慢冲洗，烤干，包装消毒备用。
用过的G6除菌漏斗立即浸泡水中(注意：滤器千万不能干涸)过夜，流水缓慢冲洗24小时或更长时间，至滤面基本疏通时，50℃烤干，滤器再置清洁液中浸泡24小时，或装满清洁液自然过滤。
流水冲洗及其后的处理同新G6除菌滤器。
4.正压除菌滤器的清洗新的或使用后的正压滤器经稀洗涤剂刷洗一流水冲洗15分钟→漓水→去离子水浸泡24小时→三蒸水浸泡24小时→干燥备用。
5.塑料制品的清洗塑料制品质地软且耐腐蚀能力强，但不耐热，易出现划痕。
其清洗程序为：器皿用后立即用流水冲洗→浸于自来水中过夜→用纱布、棉签和50℃稀洗液刷洗→流水冲洗(人工冲洗15—20遍)→晾干→浸于清洁液中15分钟→流水冲洗→蒸馏水浸泡两次(每次24小时)→晾干备用。
6.清洗液的配制清洁液新配制的清洁液为棕红色，遇有机溶剂或水分增多时变成绿色，表明失效。
先在搪瓷盆中加入蒸馏水，加热溶解重铬酸钾，再将盆置流动自来水中，待重铬酸钾液冷却后，缓慢加入浓硫酸，边加边用玻棒搅动，以混合液温度不过快上升和不出现重铬酸钾结晶为度。
玻璃滤器洗液取10克硝酸钠和28.6毫升浓硫酸，放入盛有470毫升蒸馏水的玻璃缸内混匀备用。
小鼠肝细胞的原代培养实验目的：探究小鼠肝细胞分离和原代培养的方法。
1 材料与方法1.1 动物2～4周龄BALB/C小鼠，雌雄不限（湖北省防疫站动物房提供）。
1.2 试剂D-hank's液；消化液Ⅰ：含1g/L胰蛋白酶、10g/L聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyroli done, PVP)及0.3g/L EDTA；消化液Ⅱ：含2g/L胶原酶Ⅳ及10g/L PVP；基础培养液为DMEM，另含青霉素100u/ml、链霉素100μg/ml、50mmol/L HEPES、30g/L谷氨酰胺；小牛血清（BS，GIBCO公司提供）；培养基内其他因子：胰岛素5μg/ml 、转铁蛋白5μg/ml 、促甲状腺素释放因子10－6mol/L（Sigma公司产品）、促肝细胞生长因子20μg/ml、氢化可的松10－6mol/L。
1.3 鼠肝组织块培养1）取小鼠20只断头放血处死，置于75%酒精浸泡2-3分钟，无菌分离肝组织后均在冰浴下操作。
2）肝组织用4℃ D-hank's液（PBS）或不含BS的培养液洗净血污，剥除包膜及纤维成分；3）将肝组织切为约1mm3小块，再用上述液体尽量洗去残留血污，最后一次清洗后800r/min离心4min，弃上清，4）加入消化液Ⅰ（5-6倍体积），37℃孵育12min，再加入数滴血请终止消化。
5）将消化好的肝组织块用注射器栓轻轻研磨至糊状，用双层纱布去除组织屑，再经200尼龙网过滤后1000r/min离心5分钟去上清。
再用无血清培养液洗三次去除胰酶，加入20%胎牛血清的培养液重悬，收集肝细胞，台盼蓝活细胞计数大于85%1.4 鼠肝细胞原代培养将活力在85%以上的肝细胞调整到10/ml左右，转移至25cm培养瓶中，5537℃、5%CO2条件下培养。
24h首次换液，以后每两天换液，并以20%胎牛血清继续培养。
1.5 肝细胞形态观察及其功能测定原代培养前三天尽量不晃动培养瓶，以后每天观察细胞生长情况，每次换液前收集培养上清放-20℃保存，送本院检验科测定蛋白含量。
1.6 电镜检测待细胞生长成单层后倾去培养液刮取单层细胞加入25ml/l戊二醛固定后按常规方法制片，电镜（opton EM 10C，德国）观察细胞结构2 预计结果原代组织块培养一般三天后组织块周围有生长晕出现，并逐渐向周围扩散，单层细胞三天后已贴壁生长。
光镜下可见培养的肝细胞呈三角形圆形或类圆形，排列整齐，细胞界限清晰，胞浆丰富透亮。
细胞有单核或双核，呈圆形或椭圆形，核仁清晰可见。