年龄_基础FSH_窦卵泡数预测卵巢储备功能的临床研究_李晓晴

2. 15 ＜ 0. 05
bFSH（ mIU / ml） 8. 53 ± 4. 05 6. 65 ± 3. 55 2. 70 ＜ 0. 01
窦卵泡数（ 个） 8． 82 ± 2. 25 11. 25 ± 2. 68 4. 95 ＜ 0. 01
3讨论 3. 1 年龄对卵巢储备功能的预测价值 卵巢储备功能是指
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中国优生与遗传杂志 2013 年第 21 卷第 12 期
1． 4. 2. 1 量取 100μl 新鲜抗凝全血，再加入 100μl 裂解液和 20μl Ｒnase / 蛋白酶 K 液，迅速充分震荡混匀，置于 55℃ 温浴 30 － 45min。期间来回颠倒离心管数次； 1． 4. 2. 2 加入 10μl 3M NaAc（ pH = 4． 8） ，随后加入 1250μl 结 合缓冲液，充分震荡混匀，12000rpm 离心 2 － 3min，将上清用 Tip 直接加入到离心吸附柱中去，放置 1min，12000rpm 离心 30s； 1． 4. 2. 3 倒掉收集管中的废液，再加入 600μl 漂洗缓冲液， 12000rpm 离心 30s； 1． 4. 2． 4 重复步骤（ 1． 4. 2. 3） 1 次至 2 次。最后一次漂洗倒 掉废液后应于 12000rpm 离心 3min 以充分除去漂洗缓冲液； 1． 4. 2. 5 小心取出离心吸附柱，将其套入一个干净的 1. 5ml Eppendorf 离心管，并加入 50μl 洗脱缓冲液。放置 1min 后， 于 12000rpm 离心 30s。取出 Eppendorf 离心管，其中便是所 提取基因组 DNA。放置 － 20℃ 保存。 1. 5 紫外分光光度仪检测 采用紫外分光光度仪测定基因 组 DNA 的紫外吸收峰，计算 DNA 的浓度和纯度，以吸收度 （ OD） 值表示。DNA 纯度以 OD260 / OD280 比值为依据，DNA = OD260 × 50 × 稀释倍数。 1. 6 基因组 DNA 电泳鉴定 取 DNA 样品 5μl，加电泳上样 缓冲液 5μl，在 0． 8% 琼脂糖凝胶上，进行平板电泳，用 DNA 作为标准，若 DNA 区带比较集中，泳动速度与 DNA 相同或 稍慢，即可证明 DNA 分子量大于 50kb。 1. 7 统计学处理 采用 SPSS13. 0 统计学软件进行处理，两 种方法均重复 3 次，采用统计学 t 检验，测得计量资料以数据 以均数 ± 标准差（ x ± s） 表示，P ＜ 0. 05 为有显著性差异。 2结果 2. 1 核酸蛋白定量仪检测结果 2 种方法提取 DNA 的纯 度、产量及血液需要量见表 1。全血基因组 DNA 小量快速提
取试剂盒抽提 DNA 纯度高、且实验操作时间短，所需血液量 也少； 经典的酚/ 氯仿法抽提 DNA 操作时间长，所需血液量多。 2. 2 凝胶电泳检测结果 用 0． 8% 的琼脂糖凝胶电泳分别检测 两种方法提取的 DNA 模板，在紫外灯可见全血基因组 DNA 小 量快速提取试盒法提取 DNA 电泳带整齐，荧光较强； 用经典的 酚 / 氯仿法提取 DNA 电泳带欠整齐，有拖尾现象，荧光较弱。 3讨论
表 1 两种方法提取基因组 DNA 的纯度、产量、耗时的比较
方法
每个样本 耗时（ h）
纯度
DNA 产量 所需血液 （ mg / L 8 1. 65 ± 0. 12 28. 3 ± 3. 02 200
全血基因组 DNA 小量快速提取试盒法
1 1． 86 ± 0. 15 33． 8 ± 3. 24 100
以获卵数判断卵巢反应性，低反应与正常反应周期间年 龄、基础 FSH 及窦卵泡数方面比较，均有显著性差异 （ P ＜ 0. 05） 。见表 1。
表 1 不同获卵数的 IVF － ET / ICSI 周期的各参数情况
分组 例数 A 组 36 B 组 122
t P
年龄（ 岁） 29. 26 ± 3. 24 28. 15 ± 2. 56
［4］王薇，邵超鹏． 全血 DNA 快速提及其在 HLA 基因型中的应用 ［J］． 深圳医学，1998，11 （ 1） ∶ 5．
［5］Xu Weichen，Zhang Ｒunxu，Bai Yanqu，et al． DNApurification on a lab － on － valve system incorporating are new able micro column with in situ monitoring by laser － induced fluorescence ［J］． Analytical and Bionalytical Chemistry，2007，388 （ 1） ∶ 157 － 163． 收稿日期： 2013 － 08 － 01
分为 A 组 （ 卵巢低反应组，获卵数≤4 个） ，B 组 （ 卵巢正常反应组，获卵数 ＞ 4 个） ，比较两组之间年龄、基础 FSH 和窦
卵泡数。结果 年龄、基础 FSH 和窦卵泡数各指标两组之间差异均有统计学意义 （ P ＜ 0. 05） 。结论 年龄、基础 FSH 和
窦卵泡数对于卵巢的储备功能有较好的预测价值。
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年龄、基础 FSH、窦卵泡数预测卵巢储备功能的临床研究
李晓晴，王 莹 （ 湖北省荆州市中心医院生殖中心，434000）
摘 要： 目的 评价年龄、基础 FSH 和窦卵泡数预测卵巢储备功能的价值。方法 将入选的 158 例患者按卵巢反应性
关键词： 卵巢储备功能； 年龄； 基础 FSH； 窦卵泡数
中图分类号： Ｒ321 － 33
文献标识码： A
文章编号： 1006 － 9534 （ 2013） 12 － 0129 － 02
随着社会的发展，婚育年龄的增大，女性不孕的发病率 呈现出不断上升的趋势，而辅助生殖技术现已被广泛应用在 不孕症的治疗中，但其疗效远未达到患者理想的期望值，其 成功与否的关键之一就是准确评估卵巢的储备功能［1，2］。目 前对卵巢储备功能的预测方法尚有较多争议，故本文旨在进 一步研究年龄、基础 FSH 及窦卵泡数在 IVF － ET / ICSI 治疗 中对卵巢储备功能的预测价值。 1 资料与方法 1. 1 研究对象 2010. 11 － 2011. 10 间在本生殖中心接受 IVF － ET / ICSI 助 孕 治 疗 的 不 孕 症 患 者 158 例，平 均 年 龄 （ 28. 78 ± 2. 75） 岁。 1. 2 COS 方案 均采用 GnＲH － a / FSH / HMG / HCG 长方案 超促 排 卵，当 主 导 卵 泡 直 径 达 18mm 时，肌 内 注 射 HCG 10000U，36h 后穿刺取卵。 1. 3 研究指标 1. 3. 1 基础卵泡刺激素（ bFSH） 水平测定 在 IVF － ET / ICSI 前 1 ～ 2 周期采用放射免疫法于月经周期第 1 ～ 3d 测定血 清 bFSH。 1. 3. 2 窦卵泡数测定 所有患者在接受 IVF － ET / ICSI 前 1 ～ 2 周期，于月经周期 d3 采用 Aloka 超声诊断仪行常规阴道 超声检查，计数直径 0. 3 － 1. 0cm 的窦卵泡数。 1． 4 分组方法 按卵巢反应性分为 A 组（ 卵巢低反应组，获 卵数≤4 个） ，B 组（ 卵巢正常反应组，获卵数 ＞ 4 个） 。 1. 5 统计学方法 采用 SPSS 统计软件分析，计量资料比较 采用 t 检验。 2结果
卵巢内存留卵泡的数量和质量，反映女性的生育能力。Menken［3］等研究发现，35 岁以上女性生育潜能明显下降，主要与 卵子质量异 常 和 卵 巢 内 可 募 集 的 卵 泡 数 减 少 有 关，在 接 受 IVF 或 ICSI 治疗中，发生卵巢低反应及周期取消的机会明显 增加。邓波等［4］研究发现，女性生育潜能在 35 岁前无显著 性改变，而在 35 岁以后出现明显的下降： 窦卵泡数明显下 降，卵泡刺激素用药量及刺激时间和周期取消率明显上升。 并且卵巢反应不良组患者的年龄与反应正常组间存在显著 性差异。本研究结果也显示，卵巢低反应组与正常反应组间 年龄存在显著性差异，说明年龄可用于预测卵巢的反应性。 3. 2 基础 FSH 对卵巢储备功能的预测价值 基础 FSH 是 指在自然周期早卵泡期即月经周期第 3 天测定的 FSH 基础 值，由于其反映了 INHB、E2 负反馈的强度，因此可以提示卵 巢储备功能。基础 FSH 水平升高是卵巢不排卵、卵巢储备能 力下降的早期信号。赵旭等［5］将 IVF － ET 的患者根据获卵 数分为卵巢 低 反 应 组 和 正 常 反 应 组，单 因 素 分 析 和 多 因 素 Logistic 回归分析均显示，随着年龄增长，bFSH 水平升高，卵 巢低反应增加，而 bE2 水平与卵巢反应性无关。陈静等［6］发 现，正常妇女的 FSH 值明显小于卵巢功能下降患者，在年龄 ≥35 岁者中，FSH 的增高非常显著，相应阶段的卵泡数目也 显著减少，表明 FSH 对于卵巢储备功能有较好的预测价值。 本研究结果 也 显 示，卵 巢 低 反 应 组 与 正 常 反 应 组 之 间 基 础 FSH 有显著性差异，说明基础 FSH 值可预测卵巢反应性。 3. 3 窦卵泡数对卵巢储备功能的预测价值 近年来许多研 究报道了卵巢的超声研究指标对卵巢低反应性的预测价值， 认为基础窦卵泡计数是其中一个较好的超声预测指标，在辅 助生殖中对卵巢低反应具有预测价值。Bancsi 等［7］ 研究月 经第 3 天窦卵泡数≤4 个或卵巢体积≤3cm3 或二者并存时， IVF 周期取消率上升，取卵数、妊娠率明显下降，认为 AFC 是 预测卵巢低反应性的 最 佳 指 标。 符 淳 等［8］ 研 究 发 现 卵 巢 反 应正常者的窦卵泡数目明显多于卵巢反应差者，卵巢反应差 者临床妊娠率低，用两种促卵泡发育药物的机率卵巢反应差 者明显多于卵巢反应正常者。比较两者的 95% 的可信区间， 不难发现在本中心治疗的患者中，月经第 3 天双侧卵巢的窦 卵泡数 9 个以下者往往提示卵巢反应较差。从本研究结果 中可见，卵巢低反应组窦卵泡数平均为（ 8． 82 ± 2. 25） 个，正常 反应组窦卵泡数平均为（ 11. 25 ± 2. 68） 个，两组之间相比，差