生产洁净室区沉降菌测试操作规程
沉降菌测试标准操作规程
版本号
修订原因
修订日期
01
新订
附录
测试区域 测试依据 测试日期
沉降菌测试记录
编码：SOP-ZL-HJ-006-01-R1
测试人员 培养基用量
测试状态
培养时间
培养温度
报告日期
测试房间
现场操 采样点
房间编 作人员 布置类
号数
型
沉降菌菌落数/cfu
a b 测点1 测点2 测点3 测点4
符合规定
更鞋间
PLES123
8.1将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个
打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
8.2静态测试时，培养皿暴露时间为30min，动态测试时，培养皿暴露时
间为不大于4h。
9、培养：取样结束后将平皿倒置于生化培养箱内35℃培养72小时，并
以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。
10、结果计算
培养时间
报告日期现场操 采样点Fra bibliotek房间编 作人员 布置类
号数
型
沉降菌菌落数/cfu
a b 测点1 测点2 测点3 测点4
更衣 PLEQ003
缓冲间1 PLEQ004
取样间 PLEQ005
缓冲间2 PLEQ006 阴性对照
洁净度级别
AB
C
标准
＜1 5
50
沉降菌
警戒限
-- 3
40
cfu/4小时
纠偏限
-- 4
二更2 PLEZ122
缓冲间1 PLEZ123
缓冲间2 PLEZ124
微生物限度 室
PLEZ125
净化操作台 PLEZ125
阳性对照室 PLEZ126
洁净区沉降菌采样操作规程
管理文件一、目 的：规范洁净区沉降菌采样操作标准 二、适用范围：洁净区沉降菌采样操作 三、责 任 者：生产部、质量管理部 四、内 容：1.洁净区沉降菌采样依据：GB/T 16294-2010 《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》2.采样流程→3.采样准备 3.1培养皿准备选择Φ90mm ×15mm 规格的培养皿，培养皿盖和底盘均较平整，无损坏。
准备培养皿数量根据采样区域进行计算。
3.2培养基准备选择大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA ）或沙氏培养基（SDA ），根据实际情况选择。
4.采样前要求4.1沉降菌采样前，被测试洁净室（区）已经过消毒；4.2洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18℃～26℃，相对湿度在45%～65%之间为宜）；4.3采样状态有静态和动态两种，采样状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明采样状态；4.4 静态采样时，培养皿暴露时间为0.5小时；动态采样时，培养皿暴露时间为4小时； 4.5静态采样时，室内测试人员不得多于2人。
5.采样：5.1洁净区域（设备）级别及代码5.2培养皿标记：洁净区代码+“-”+培养皿编号，例如，超净台1第5个培养皿标记为：A1-5。
5.3最少采样点数目 5.4采样点布局洁净区（室、设备）采样点布局备注分装间1 2 3 47 85 69 10按左图采样点布置放置培养皿，“○”代表一个培养皿。
分装准备间12 3 4 56 7 8 9 10分装准备间采样时，因内部含有周转筐，故按照左图铺设培养皿，“○”代表一个培养皿。
混合罐装间12 5 634 7 89 10混合灌装间采样时，因室内有混合罐，故按照左图铺设培养皿，“○”代表一个培养皿。
其他洁净区（室）1 32 5 6 4 7 98 10采样时根据具体洁净室代码标记培养皿，“○”代表一个培养皿。
5.5铺设培养皿5.5.1培养皿铺设时按照从洁净度级别较高的区域向洁净度级别较低的区域依次铺设，先铺设A 级区培养皿，再铺设B 级区培养皿，最后铺设C 级区培养皿。
沉降菌检测操作规程
●1、目的规范洁净区和洁净室沉降菌测试条件和测试方法。
●2、适用范围适用于公司洁净区、洁净室或局部空气净化区域（如：洁净工作台）的沉降菌的测试和环境验证。
●3、引用文件⏹化妆品卫生规范-2007⏹GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法●4、定义⏹ 4.1 沉降菌：用本测试规定的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖的可见菌落数。
⏹ 4.2 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以（个/皿）表示●5、仪器和设备⏹ 5.1 灭菌培养皿90mm *15mm⏹ 5.2 培养基。
⏹ 5.3 恒温培养箱。
⏹ 5.4 高压灭菌器。
⏹ 5.5 放大镜●6、培养基和试剂⏹ 6.1 生理盐水：成份﹕氯化钠 8.5g蒸馏水加至 1000ml制法﹕溶解后﹐分装到加玻璃珠的三角瓶内﹐每瓶90ml﹐121℃（15 1b）2 0 mi n，高压灭菌。
⏹ 6.2 卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基6.2.1 成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL6.2.2制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、• 吐温80，混匀，调pH 值为7.1～7.4，加入琼脂，103.43kPa（121℃15 lb）20min 高压灭菌，储存于冷暗处备用。
●7、操作步骤⏹7.1 取样：7.1.1 取样点的设置：A) 最少取样点数：灌装间、制造间3个，其他洁净区2 个；B) 取样点的位置：取样点应均匀分布在待测试区域内，一般离地高度为0.8m左右，关键设备处可增加取样点；C）每个取样点一般取样一次，每次一般为2个取样皿；D) 布置采样点时，应避免回风口；7.1.2 取样时间：可采用动态取样和静态取样：A) 动态取样：正常生产，且空气净化系统正常运转30分钟后开始取样；B）静态取样：员工己撤离生产区域，且空气净化系统正常运转至少20分钟后；静态取样时人员不得多于2人；7.1.3 取样A）将制备好的培养皿逐个放置到采样点，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养皿暴露在空气中；B）静态测试时，培养皿的暴露时间为30分钟以上；动态测试时，培养皿的暴露时间不得大于4个小时⏹7.2 置于37±1℃恒温培养箱内培养至少48小时，记录每个平皿的菌落数；●8、菌落计数方法：⏹8.1先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5 倍～10 倍的放大镜检查，以防遗漏；⏹每个测点的沉降菌总数为该测点所有培养皿菌落数的平均数；●9、结果评定：⏹9.1 每个测点的菌落数必需低于该洁净区的标准时判定符合要求；⏹9.2 静态测试时，如某测点的的菌落平均数超过标准，应再重新取样两次，两次都低于标准时才能判定符合；。
沉降菌检验标准操作规程
01.0目的01.1阐述洁净室（区）空气中沉降菌检测操作规程，保证药品的质量，防止生产环境对产品的污染，保证实验室的环境达到检测产品的要求。
02.0适用范围02.1适用于本公司的洁净室（区）的沉降菌监测和洁净度等级的验证。
03.0人员职责测试人员对洁净室（区）沉降菌的测试。
04.0内容04.1术语和定义下列术语和定义适用于本规程。
04.1.1菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的细菌集落，简称CFU，通常用个数来表示。
04.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下系繁殖到可见到的菌落数。
04.1.3沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以cfu/皿表示。
04.2测试原理：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
04.3监测周期：A级洁每次室验做监控，B级每周一次，C级每季度一次，D级每半年一次监控。
04.4测试方法：04.4.1使用设备与材料高压灭菌锅：使用时应严格按照操作规程进行。
恒温恒湿培养箱：必须定期对培养箱进行校验。
培养皿：一般采用φ90mm×15mm培养皿。
培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）；已灭菌配制好的培养基平皿放入30-35℃恒温培养箱中培养72小时，若培养基平皿上确无菌落生生即可供采样用，制备好的培养基平皿应放在2-8℃的环境中存放。
清洁剂：75%酒精04.4.2测试时间：（1）对单向流，如A级净化房间内及超净工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
（2）对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。
（3）培养皿的采样时间：静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4小时。
洁净室沉降菌测试标准操作规程
5.1.3.2.动态测试洁净区已处于正常生产状态下进行的测试。
5.2.试准备5.2.1.仪器与设备5.2.1.1.培养皿：φ90mm×15mm，121℃20分钟湿执灭菌。
5.2.1.2.高压灭菌器、恒温培养箱处于完好状态。
5.2.1.3.制备采样皿：取已配制好的普通营养琼脂培养基，检查品名及使用期是否在规定期限内，外观性状是否有异常，确认无误后，将培养基放入水浴中熔化，冷却到约45℃时，在规定条件下高压蒸气灭菌，在超净工作台以无菌操作技术注入培养皿中，每皿约15ml，冷凝后倒置于30-35℃恒温培养箱培养48小时，无菌生长方可供采样用。
5.2.1.4.编号对培养皿按测定区域及个数进行编号。
编号前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现有质量问题的应以剔除。
5.2.1.5.根据洁净室房间多少及面积，计算所需的培养皿数。
5.3.测试5.4.采样将培养皿在各个测试洁净区域按附表1和附表2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖盖好。
5.5.培养全部采样结束后，取样员将培养皿和放置记录一并交化验室主任，化验室主任将培养皿交于检验员检测、检验员将培养皿倒置于30-35℃恒温培养箱中培养48小时。
5.5.1.1.计数取出用肉眼计数，然后用5-10倍放大镜检查有否遗漏。
5.6.记录按《沉降菌测试记录》填写。
5.7.结果计算计数各个培养皿的菌落数并求其平均值。
计算公式：M—平均菌落数M 1……Mi—分别为1号至I号培养皿菌落数6.2.3.可在关键设备或关键工作范围内增加采样点。
6.3.检测结束后，质量部发检测报告，将所有记录一并归档。
6.4.测定频次车间洁净（区）每3个月测一次；微生物限度检查室每周期测一次，其超净化工作台每次实验时同时测定；有净化要求的取样间或取样车每3个月测一次。
6.5.空气净化系统连续停运1周以上，经对房间进行消毒后测沉降菌。
附表3 ：平均菌落数标准洁净级别100级10000级100000级30000级平均标准1个/皿3个/皿10个/皿15个/皿。
洁净区沉降菌培养检验操作规程
管理文件一、目的：规范洁净区沉降菌培养检验操作标准二、适用范围：洁净区沉降菌培养检验操作操作三、责任者：质量管理部四、内容：1.沉降菌培养1.1由QC人员将复核的培养皿转移至恒温培养箱；1.2培养前，培养箱温度应设为32℃或者22℃，1小时后检测培养箱温度是否恢复正常；1.3采用大豆酪蛋白琼脂培养基配制的培养皿时，在32℃的培养箱中培养，培养时间为2天；采用沙氏培养基配制的培养皿时，在22℃培养箱中培养，时间为5天；1.4培养时每天检测培养箱温度一次，以培养箱中温度计温度为准。
2.检测（菌落计数）2.1用肉眼对培养皿上所有菌落直接计数，专人复核是否计数有遗漏；2.2若平板上有2个或者2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数；2.3计数时一般用透射光对培养皿背面或正面仔细观察，不要漏记培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。
必要时，用显微镜鉴别；2.4将所计数菌落进行记录，然后进行结果计算。
3.结果计算：3.1用计数方法得出各个培养皿的菌落数，按下式计算：式中：M——平均菌落数M 1——1号培养皿菌落数M——2号培养皿菌落数2Mn——n号培养皿菌落数N——培养皿总数3.2结果评定：3.2.1用平均菌落数判断洁净室（区）空气中微生物；3.2.2洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准；3.2.3若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
4.洁净区沉降菌检测标准：4.1洁净区沉降菌检测静态标准：4.2洁净区沉降菌检测动态标准：5.非主要工作区的其他洁净区域，静态测试频次为每半年测试一次，动态测试频次为每一年测试一次。
洁净室（区）沉降菌检测标准操作规程
洁净室（区）沉降菌检测标准操作规程⽬的制定标准的洁净室（区）沉降菌的测试⽅法，指导沉降菌的测试⼯作。
范围适⽤于洁净室（区）沉降菌的测定和验证。
责任QC微⽣物室检验员负责洁净室（区）沉降菌的测试，QC主管和QA部门负责对测试的数据进⾏统计分析。
程序1.定义1.1.菌落：微⽣物培养后，由⼀个或⼏个微⽣物繁殖⽽形成的微⽣物集落，简称CFU。
1.2.沉降菌：通过⾃然沉降原理收集在空⽓中的活微⽣物粒⼦，通过专⽤的培养基，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数。
1.3.动态测试：洁净室（区）已处于正常⽣产状态设备在指定的⽅式下进⾏，并且有指定的⼈员按照规范操作的状态。
2.测试⽅法2.1.测试过程2.1.1.设备和培养基：恒温培养箱、购买预灌装TSA平⽫或者⾃制TSA平⽫。
2.2.测试条件2.2.1.洁净室（区）的温度和相对湿度应与其⽣产及⼯艺要求相适应（⽆特殊要求时，温度在18~26℃，相对湿度在45%~65%为宜）。
2.2.2.风速、压差应在合格范围内。
2.2.3.动态测试。
2.3.测试⽅法2.3.1.将准备好的培养⽫按采样点要求放置或放在沉降架上（约1.0m）。
将采样台⾯取样位置或采样辅助设施表⾯消毒，打开培养⽫，将培养⽫盖置于已消毒位置，将培养⽫置于培养⽫盖上，使培养基表⾯充分暴露后，将培养⽫盖盖上后倒置。
2.3.2.在每⼀只培养⽫上标记好具体的取样位置及取样⽇期，将所有培养⽫在QC微⽣物室进⾏培养观察。
2.4.培养观察计数2.4.1.全部采样结束后，将培养⽫倒置于恒温培养箱中培养，在20~25℃培养箱中培养3天，30~35℃培养箱中培养2天后观察计数。
2.4.2.每批培养基应有阴性对照试验，检验培养基本⾝是否污染。
可每次选定2只培养⽫作对照培养。
2.5.计算2.5.1.平均菌落数M= M1＋M2＋…MNNM1＝1号培养⽫菌落数M2＝2号培养⽫菌落数Mn＝n号培养⽫菌落数n＝培养⽫总数2.5.2.结果判定2.5.2.1.最终结果采⽤平均值。
沉降菌检测标准操作规程
1.目的：规范对洁净区沉降菌检查的方法，以做出洁净情况的正确评价。
2.范围：各生产车间洁净区3.职责：空气沉降菌检测操作人员负责本规程的实施，品保部经理监督执行4.内容4.1本测试方法是采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养皿中，经若干时间，在适宜条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。
4.2所用设备、试剂高压消毒锅、恒温培养箱、φ90mm 营养琼脂培养基培养皿。
4.3测试状态4.3.1沉降菌测试前，被测试洁净室的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
4.3.2测试前，被测试洁净室已经过消毒。
4.3.3洁净厂房的空气净化调节系统的风机已启动至少30分钟。
4.3.4测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
4.4测试人员4.4.1测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服，培养基按物料进入规定传入。
4.4.2静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
4.5采样点数目及布置注:表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面积，对于乱流洁净室是指房间的面积4.5.2在满足最少测点数的同时，还要满足最少培养皿数，如下表。
不论面积大小，作为4.5.3采样点的布置：1)采样点的位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。
2)可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
4.6采样方法及培养4.6.1将培养皿按要求放置后，打开平皿盖，使培养皿表面暴露30分钟后，将培养皿盖上后倒置，全部采样结束后将培养皿倒置于恒温培养箱中培养，在30～35℃的条件下，培养48小时后计数。
每批可选定3只培养皿作对照培养。
4.7结果计算4.7.1用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏若。
4.7.2培养皿上有2个或者2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
洁净室沉降菌检测标准操作规程
目的制定标准的洁净室（区）沉降菌的测试方法，指导沉降菌的测试工作。
范围适用于洁净室（区）沉降菌的测定和验证。
责任QC微生物室检验员负责洁净室（区）沉降菌的测试，QC主管和QA部门负责对测试的数据进行统计分析。
程序1.定义1.1.菌落：微生物培养后，由一个或几个微生物繁殖而形成的微生物集落，简称CFU。
1.2.沉降菌：通过自然沉降原理收集在空气中的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数。
1.3.动态测试：洁净室（区）已处于正常生产状态设备在指定的方式下进行，并且有指定的人员按照规范操作的状态。
2.测试方法2.1.测试过程2.1.1.设备和培养基：恒温培养箱、购买预灌装TSA平皿或者自制TSA平皿。
2.2.测试条件2.2.1.洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18~26℃，相对湿度在45%~65%为宜）。
2.2.2.风速、压差应在合格范围内。
2.2.3.动态测试。
2.3.测试方法2.3.1.将准备好的培养皿按采样点要求放置或放在沉降架上（约）。
将采样台面取样位置或采样辅助设施表面消毒，打开培养皿，将培养皿盖置于已消毒位置，将培养皿置于培养皿盖上，使培养基表面充分暴露后，将培养皿盖盖上后倒置。
2.3.2.在每一只培养皿上标记好具体的取样位置及取样日期，将所有培养皿在QC微生物室进行培养观察。
2.4.培养观察计数2.4.1.全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养，在20~25℃培养箱中培养3天，30~35℃培养箱中培养2天后观察计数。
2.4.2.每批培养基应有阴性对照试验，检验培养基本身是否污染。
可每次选定2只培养皿作对照培养。
2.5.计算2.5.1.平均菌落数M= M1＋M2＋…MNNM1＝1号培养皿菌落数M2＝2号培养皿菌落数Mn＝n号培养皿菌落数n＝培养皿总数2.5.2.结果判定2.5.2.1.最终结果采用平均值。
但每个碟的菌落数亦不得多于标准规定。
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程受控状态文件编号 ZHSS03—09—01版环境监测沉降菌检测操作规程(试行本)编制:审核:批准:发布日期: 实施日期:北京京中宏塞思生物技术有限公司北京中宏赛思生物技术有限公司受控状态沉降菌检测操作规程文件编号 ZHSS03—09—01版1. 目的规范检测人员对有洁净要求的洁净区域的沉降菌指标进行检测的操作方法的行为。
2. 范围适用于本工厂内洁净生产车间、微生物实验室和百级工作台等洁净区域。
3. 职责质量控制负责人、微生物检验员对本标准的实施负责。
4. 检测方法4.1 检测依据引用标准《医药工业洁净厂房设计规范》标准号 GB50457—2008执行标准《医药工业洁净室(区)沉降菌的检测方法》标准号 GB/T1629—20104.2 仪器设备立式压力蒸汽灭菌器、恒温培养箱、百级工作台4.3 玻璃仪器Φ90mm培养皿、三角烧杯4.3 检测药品大豆酪蛋白琼脂、纯化水4.4 培养基制备4.4.1 将大豆酪蛋白琼脂按照比例加水配置，并加热溶解。
4.4.2 将溶解后的培养基置于立式蒸汽压力灭菌器中，121?灭菌20min。
4.4.3 将灭菌合格的培养基，冷却至60?左右，移入百级工作台，以每皿约20ml 的量分装在平皿中，待凝固备用。
4.5 采样4.5.1 测试前培养皿表面严格消毒。
4.5.2 将制备好的培养皿按照采样布点图的位置放好，然后由里到外逐个打开，使培养基表面完全暴露在空气中。
4.5.3 静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上;动态监测时，培养皿暴露时间不大于4h。
4.5.4 全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中进行培养。
4.6 培养:采用大豆酪蛋白琼脂培养基采样结束后，在30?~35?培养箱中培养不少于2d。
4.7 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否有污染。
每批做3个对照培养。
4.8 菌落计数4.8.1 用肉眼对培养皿上所有的菌落计数，然后用5~10倍放大镜检查，是否有遗漏。
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生产洁净室（区）沉降菌测试操作规程
一、范围：本标准规定了生产洁净室（区）中沉降菌测试条件测试方法；
适用于本公司生产洁净室（区）的沉降菌的测定和环境的验证。
二、引用标准：GB/T-16293-1996
药品生产质量管理规范（1998年修订）附录。
三、质量指标：
四、测试方法：
1、方法概述
本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净室。
2、所用的仪器和设备
使用时应严格按照仪器说明书操作。
2.2恒温培养箱
必须定期对培养箱的温度计进行检定。
2.3 培养皿
普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基，基配制方法见附录（标准的附录）。
3、测试步骤
3.1采样方法
将已制备的培养皿按4.1.2的要求放置,打开培养皿,使培养表面暴露0.5h,再将培养皿盖盖上后倒置.
3.2 培养
3.2.1 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
3.2.2 在30℃-35℃培养箱中培养，时间不少于48h。
3.2.3 每批培养应有对照试验，检验培养基本身是否污染。
可每批选定3只培养皿作对照养。
3．3 菌落计数
3．3．1用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。
3．3．2若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨是仍以2个或2个以上菌落计数。
4、注意事项
4．1测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
4．2采取一切措施防止人为对样本的污染。
4．3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
4．4 由于细菌种类繁多，判别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落并髯注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要进用显微镜鉴别。
4．5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
五、测试规则
1、测试状态
1．1沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温间断度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
1．2 沉降菌测试前，被测洁净室（区）已经过消毒。
1．3 测试状态和静态两种，测试瘃态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测度状态。
2、测试人员
2．1 测度人员必须穿戴符合环境洁净级别的工作服。
2．2 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。
3、测试时间
3．1 对单向流，如100级净化房间及层注工作台，测试应在净化系统运行不少于10min后开始。
3．2 对显而易见单向流，如10000级以上的净化空间。
测试应在净化空调正常运行不少于30min后开始。
4、沉降菌计数
4．1
4．1．1采样点数目及其布置
沉隆重法的最少采样点数可按表1确定
表1
最少采样点数目
在满足最少测点数的同时,还宜满足最少培养皿数,见表2.
表2
最少培养皿数
4.1.2 采样点的布置
采样点的位置可以同悬浮粒子测试点.
a) 工作区采样点的位置离地0.8m-1.5m左右(略高于工作面)
b) 可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样采样点位置的详细规则见附录二
5、记录
测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差及测试状态。
测试报告的编写见附录三
6、结果计算
6．1用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
6．2平均菌落数的计算，见式（1）
M
1+M
2
+……M
n
平均菌落数M=------------------------- (1)
n
式中： M-平均菌落数；
M
1
—1号培养皿菌落数；
M
2
—2号培养皿菌落数
M
N
- n号培养皿总数
7、结果评定
用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。
7．1洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所迁还定期的评定标准。
7．2若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
附录三沉降菌测度报告
编号测试单位
测试依据测试状态
环境温度℃相对湿度 % 静压差 Pa
培养基批号培养温度
检测日期报告日期
评定标准结论检验者复核者
附录一培养基的准备及灭菌
1、培养基的准备
培养基可以外购或自行配制。
自行配制方法见YY/T 0188.6-1995第6章无菌检查部分中关于此类培养基的配方和操作步骤。
其它符合药典灵敏度要求的培养基可以自行配制。
2、培养基平皿的制备
2．1 将ф90mm的培养皿置于121℃湿热灭菌20min或180℃干热灭菌2h.。
2.2 将培养基加热溶化,冷至45℃时,在无菌操作要求下,将培养基注入培养皿,每皿约15ml
2.3 待琼脂凝固后,将培养基平皿倒置于30℃-35℃恒温培养箱中培养48h,若培养基平思上确无菌落生长即可供采样用.
注: 制备好的培养基平皿宜在2℃-8℃的环境中存放.。
附表二采样点布置
洁净室和洁净区采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏，下列采样点布置的图不可作参考。
附图。