临床检验技师-临床免疫学和免疫检验(2019)讲义第三章免疫原和抗血清的制备
第三章免疫原和抗血清的制备第一节免疫原的制备免疫原指能诱导机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
一、颗粒性抗原的制备细胞、细菌、寄生虫等皆为颗粒性抗原。
细胞抗原（如绵羊红细胞）一般情况下经生理盐水或其他溶液洗净，配制一定浓度即可。
细菌抗原多用液体或固体培养物，经集菌后处理。
颗粒性抗原大多用静脉内注射免疫法。
二、可溶性抗原的制备和纯化（一）组织和可溶性抗原的粗提蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆为良好的可溶性抗原。
1.组织匀浆的制备（1）高速组织捣碎机法；（2）研磨法：组织匀浆液要离心沉淀，沉淀物为组织和细胞碎片，上清液为提取可溶性抗原的材料。
2.细胞的破碎（1）反复冻融法：-20℃冷冻，30～37℃融化。
（2）超声破碎法（3）自溶法（4）酶处理法：胃蛋白酶或胰酶。
（5）表面活性剂处理法：十二烷基硫酸钠。
3.免疫球蛋白片段的制备（1）非共价键解离法：改变pH环境或用变性剂。
（2）共价键解离法：还原法或氧化法解离二硫键。
（3）溴化氰裂解法：溴化氰裂解蛋白质肽链。
（4）酶解法：木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或胰蛋白酶。
（二）可溶性抗原的提纯和纯化1.超速离心法：适用于少数大分子抗原或比重较轻的抗原，不适用于大多数中小分子抗原。
2.选择性沉淀法：（1）核酸去除法：核糖核酸降解法更简便。
（2）盐析法：常采用硫酸铵使蛋白抗原进行粗筛、提取丙种球蛋白及抗原浓缩。
（3）有机溶剂沉淀法：常采用乙醇或丙酮。
（4）聚合物沉淀法：常用非离子型聚合物，如聚乙二醇（PEG）。
3.凝胶过滤法：根据分子大小进行分离纯化。
4.离子交换层析法：利用一些带电离子基团的凝胶或纤维素，吸附带有相反电荷的蛋白质抗原。
5.亲和层析法：与生物分子间不同的亲和性进行分离。
如抗原和抗体、酶和酶抑制物、酶蛋白和辅酶、激素和受体等。
6.电泳法：蛋白质在同一pH环境中，分子量和电荷不同，在电场中迁移速率不同进行分离。
（三）纯化抗原的鉴定1.蛋白质含量测定：常用的是紫外光吸收法，该法测定280nm和260nm的吸光度（A）值。
2.分子量测定：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法、凝胶过滤法等。
3.纯度鉴定：采用醋酸纤维膜电泳、SDS-PAGE、毛细管电泳、等电聚焦、高效液相层析法等。
4.免疫活性鉴定：双向免疫扩散法、ELISA法等。
三、半抗原性免疫原的制备半抗原指只具有抗原性而无免疫原性的物质。
多见于分子量小于4000的有机物质。
半抗原与载体相结合具有免疫原性。
（一）载体1.蛋白质：以牛血白蛋白最常见。
2.多肽聚合物：常用多聚赖氨酸。
3.大分子聚合物和某些颗粒。
（二）半抗原与载体的连接方法1.物理方法：通过电荷和微孔吸附半抗原。
2.化学方法：通过功能基团将半抗原与载体连接。
（1）带有游离氨基或游离羧基的半抗原，脑啡肽、促胃液素、前列腺素等多肽激素，可直接与载体连接。
（2）无羧基和氨基的半抗原，如醇、酚、糖、多糖、核苷以及甾族激素等，需要用化学方法使其转变为带有游离氨基或游离羧基的衍生物后才能与载体连接。
（三）半抗原性免疫原的鉴定20个以上半抗原连接在一个载体分子上，才能有效刺激免疫动物产生抗体。
方法有：1.吸收光谱分析法2.放射性核素标记半抗原渗入法第二节免疫佐剂一、佐剂的种类1.化合物：包括氢氧化铝、矿物油、吐温-80、弗氏不完全佐剂（羊毛脂与液状石蜡的混合物）以及人工合成的多聚肌苷酸：胞苷酸、脂质体等。
2.生物制剂：①经处理改造的细菌及其代谢产物，如卡介苗、脂多糖（LPS）和类脂A、源于分枝杆菌的胞壁酰二肽等；②细胞因子及热休克蛋白等。
最常用于免疫动物的佐剂是弗氏佐剂，弗氏佐剂分为弗氏完全佐剂（弗氏不完全佐剂加卡介苗）和弗氏不完全佐剂两种。
使用时加入水溶性抗原并充分乳化，使抗原与佐剂形成油包水乳剂。
佐剂和抗原的比例为1:1。
乳化的方法有两种：①研磨法。
②搅拌混合法：本法优点是无菌操作，节省抗原或佐剂，且可用此注射器直接注射。
缺点是不易乳化完全。
二、佐剂的作用机制1.改变抗原的物理性状，延缓抗原降解和排除，从而更有效地刺激免疫系统；2.刺激单核-巨噬细胞系统，增强其处理和提呈抗原的能力；3.刺激淋巴细胞增殖和分化；4.改变抗体的产生类型和诱导迟发型超敏反应。
第三节抗血清的制备抗血清的制备是将制备好的免疫原按照一定的免疫程序接种给所选择的动物，该动物在含有多种抗原表位的抗原刺激下，体内多个B细胞克隆被激活并产生针对某一抗原多种不同表位的抗体，其混合物为多克隆抗体。
采集动物血液，分离含有抗体的血清，即为抗血清。
一、免疫动物的选择常用的有家兔、绵羊、豚鼠、鸡、山羊和马。
1.抗原来源与动物种属差异越大，免疫原性越强，免疫效果越好。
2.抗体需求量大时，可选用马、绵羊等大动物。
抗血清需求量少时，可选用家兔、豚鼠和鸡等小动物。
3.抗血清分为R型和H型4.抗原的性质：对于蛋白质抗原大部分动物皆适合，常用的是山羊和家兔。
在某些动物体内有类似物质时，蛋白质抗原对这些动物免疫原性极差，如IgE对绵羊、胰岛素对家兔、多种酶类对山羊，免疫后均不易产生抗体。
二、免疫程序1.免疫原的剂量：免疫原剂量过大或过小都可使动物产生免疫耐受，在一定剂量范围内，免疫原剂量越大，产生的抗体效价越高。
2.免疫途径：有皮内、皮下、肌内、静脉、腹腔、淋巴结等途径。
皮内或皮下免疫时一般采用多点注射。
初次免疫一般选择皮内接种，加强免疫和颗粒性抗原一般选择静脉注射。
宝贵抗原可选择淋巴结内微量注射法。
3.免疫间隔时间：间隔时间过短，极易造成免疫抑制。
若间隔时间太长，则刺激减弱，抗体效价不高。
第1次与第2次免疫间隔时间以10～20天为好，第3次及以后的间隔一般为7～10天。
三、动物采血法动物经免疫3～5次后，如抗血清鉴定合格，应在末次免疫后5～7天及时采血。
1.颈动脉采血法：该法最常用，适用于家兔、绵羊、山羊等动物。
最多可获70～80ml，—般50ml左右。
2.心脏采血法：家兔、豚鼠、大鼠和鸡等动物。
3.静脉采血法：家兔可用耳中心静脉采血，山羊和绵羊可用颈静脉采血。
动物采血后，应尽快分离血清，分离血清的方法常采用室温自然凝固，然后置37℃或4℃使血块收缩后，收集血清。
第四节抗血清的鉴定和保存一、抗血清的鉴定1.抗体特异性的鉴定常用双向免疫扩散法。
（1）粗抗原及纯抗原之间皆有一条沉淀线，且两者互相融合，则已产生单价特异性抗体；（2）若纯化抗原出现一条，而粗抗原出现多条线，且一条沉淀线与纯抗原沉淀线相连接，需去除杂抗。
（3）若不出现沉淀线，表示免疫失败。
2.抗体效价的测定颗粒性抗原采用凝集试验，可溶性抗原采用双向免疫扩散试验（棋盘滴定）、ELISA 等方法。
3.抗体纯度的鉴定采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、双向免疫扩散试验、免疫电泳等。
若只出现一条蛋白电泳区带说明抗体纯化已达到要求。
4.抗体亲和力的鉴定以亲和常数表示。
二、抗血清的保存1.2～8℃保存：用于短期保存；2.冷冻保存：是常用的抗体保存方法。
将抗体分为小包装，在-80～-20℃保存，一般可保存5年，但应避免反复冻融；3.真空干燥保存：用真空冻干机进行干燥，封装后可长期保存，一般在冰箱中可保存5～10年。
第五节抗血清的纯化抗血清纯化的目的是除去不相关成分，防止抗血清中的其他杂抗体干扰试验结果。
最常见的是提取抗血清中的特异性IgG或单价抗体。
一、特异性IgG抗体1.盐析法多采用硫酸铵盐析法或硫酸钠盐析法。
2.凝胶过滤法蛋白质分子量不同，通过凝胶介质时的洗脱速度不同。
血清蛋白的分级分离常用该法。
按分子大小可分为3组：第1组：IgM和一些脂蛋白；第2组：IgG和较少量的IgA、IgD、IgE等；第3组：白蛋白、血清黏蛋白、转铁蛋白等。
该法过滤条件温和，不影响IgG活性。
常结合盐析法提取IgG。
3.离子交换层析法常用的离子交换剂是DEAE纤维素。
该法可获得较纯的IgG，且不影响抗体活性。
4.亲和层析法将纯化抗原制成亲和层析柱，抗血清通过层析柱时，IgG被层析柱吸附。
然后改变洗脱条件，使IgG从层析柱上解离。
二、单价特异性抗血清单价特异性是指血清只与其特异性抗原发生反应。
免疫得到的抗血清总是有抗白蛋白等杂抗体存在。
杂抗体的去除有两种方法：1.亲和层析法2.吸附剂方法制备蛋白质抗原时破碎组织细胞最简便的是A.反复冻融法B.超声破碎法C.表面活性剂处理法D.自溶法E.酶处理法『正确答案』A『答案解析』制备蛋白质抗原时破碎组织细胞最简便的是反复冻融法。
需制备10ml抗血清，应选择何种动物A.家兔B.小白鼠C.马D.绵羊E.猴『正确答案』A『答案解析』抗体需求量大时，可选用马、绵羊等大动物。
抗血清需求量少时，可选用家兔、豚鼠和鸡等小动物。
下列佐剂中具有免疫原性的是A.脂多糖B.氢氧化铝C.石蜡油D.羊毛脂E.多聚核苷酸『正确答案』A『答案解析』生物制剂具有免疫原性，所以具有免疫原性的是脂多糖。
厂家生产的抗IgG制剂一般的保存方法为A.液体4℃保存B.液体-10℃保存C.真空干燥保存D.25℃保存E.加叠氮钠保存『正确答案』C『答案解析』抗血清的保存：①2～8℃保存：用于短期保存；②冷冻保存：是常用的抗体保存方法。
将抗体分为小包装，在-80～-20℃保存，一般可保存5年，效价不会明显下降，但应避免反复冻融；③真空干燥保存：用真空冻干机进行干燥，封装后可长期保存，一般在冰箱中可保存5～10年。
最常用的半抗原载体是A.牛血清白蛋白B.牛甲状腺球蛋白C.人血清白蛋白D.人甲状腺球蛋白E.球蛋白『正确答案』A『答案解析』半抗原载体常用的有人血白蛋白、牛血白蛋白、血蓝蛋白、牛甲状腺球蛋白等。
以牛血白蛋白最常用。
A.盐析沉淀法B.有机溶剂沉淀法C.凝胶过滤D.离子交换层析E.亲和层析1.经典的蛋白质抗原纯化分离方法为『正确答案』A『答案解析』经典的蛋白质抗原纯化分离方法为盐析沉淀法。
2.根据抗原分子大小进行纯化分离的方法为『正确答案』C『答案解析』凝胶过滤法：根据分子大小进行分离纯化。
3.根据抗原所带电荷不同进行纯化分离的方法为『正确答案』D『答案解析』离子交换层析法：根据所带电荷不同进行纯化分离。
免疫原和抗血清的制备PPT课件
（六）亲和层析
亲和层析是利用生物大分子的生物学特 异性，即生物分子间所具有的专一性亲 和力而设计的层析技术。例如抗原和抗 体、酶和酶抑制剂、酶蛋白和辅酶、 DNA 和 RNA 、激素和受体等 之间有特 殊的亲和力,在一定的条件下,二者能紧 密地结合成复合物。如果将复合物的已 知一 方固定在固相载体上,则可从溶液 中专一性地分离和提纯另一方。
上清液中含有 可溶性抗原
上清 1万—2万转/分，20到30分钟
沉淀
2. 组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备
制备抗原的细胞包括正常细胞、传代细胞或 病理细胞 ( 如肿瘤细胞 )。
(1) 反复冻融法；(2) 超声破碎法；(3) 自溶 法；(4) 酶处理法；(5) 表面活性剂处理法。
( 二 ) 超速离心分离法
绵羊红细胞、细菌、毒素、寄生虫和真 菌抗原的制备
二、可溶性抗原的制备和纯化
蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、细菌毒素、 酶、补体和核酸等都是良好的可溶性抗 原。
（一） 组织和细胞粗抗原的制备
1. 组织细胞抗原的制备所用组织必须是新鲜
的或低温保存的。
高速组织捣碎机
器官或者组织
处理
粉碎 研磨法
离心3000r/min，10分钟
一、佐剂的种类
1. 具有免疫原性的佐剂 如卡介苗、枯草 分支杆菌、短小棒状杆菌、百日咳杆菌、 革兰阴性杆菌内毒素 ( 脂多糖 ) 和细胞 因子等。
2. 非免疫原性佐剂如氢氧化铝、磷酸铝、 磷酸钙、石蜡油、羊毛脂、表面活性剂、 藻酸钙、多聚核昔酸和胞壁肽等。
1. 福氏佐剂 (Freund adjuvant,FA) 是目 前动物免疫中最常应用的佐剂 , 可分为 福氏不完全佐剂 ( 石蜡油 + 羊毛脂 ) 和福氏完全佐剂 ( 石蜡油 + 羊毛脂 + 卡介苗 ) 两种 。
临床医学检验-临床免疫学与检验
源单抗CDR序列。 2、小分子抗体：可在大肠杆菌等原核细胞内表达。 3、抗体融合蛋白：指利用基因工程技术将抗体片段与其他生物活
性蛋白融合得到的产物。 4、双特异性抗体：两个抗原结合位点具有不同的特异性。 5、噬菌体抗体库技术：可以得到完全人源性的抗体，在HIV等病毒
此过程需要电解质参加，常用0.85%NaCl。 2、酸碱度：一般在pH 6~9之间。 3、温度：一般以15℃~40℃为宜。
吉普塞舞神
第三章 免疫原和抗血清的制备
免疫原：指能诱导机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与 抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
一、颗粒型抗原的制备 各种细胞、细菌、寄生虫等皆为颗粒型抗原 1、细胞抗原（如绵阳红细胞）一般情况下经生理盐水或其他溶液 洗净，配置一定浓度即可。 2、细菌抗原多用液体或固体培养基，经集菌后处理。 颗粒性抗原大多用静脉内注射免疫法。
肿瘤细胞合成DNA一般有两条途径：一条是生物合成的主要途径，利 用糖和氨基酸合成核苷酸进而合成DNA，叶酸拮抗物（甲氨蝶呤）可 阻断该途径；另一条是替代途径，当叶酸代谢受阻时，细胞通过 HGPRT和TK利用核苷酸的前体合成核苷酸，进而合成DNA。因此筛选杂 交瘤细胞用HAT培养液。 HAT培养液：在基础细胞培养液内添加次黄嘌呤、甲氨蝶呤和胸腺嘧啶 核苷。
二、可溶性抗原的制备与纯化 蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、 核酸等。 胃蛋白酶或胰酶处理，可获得游离的单个细胞。 溶菌酶、蜗牛酶、纤维素酶等使细菌或组织裂解。 木瓜酶将IgG裂解成2个Fab片段和1个Fc片段； 胃蛋白酶可将IgG裂解成F（ab，）2片段及数个小片段； 胰蛋白酶可将IgG切成不规则的肽链。
临床检验免疫主管 (3)
临床检验免疫主管 (3)临床医学检验主管技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》第三章免疫原和抗血清的制备第一节免疫原的制备免疫原指能诱导机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
免疫原相当于抗原。
一.颗粒性抗原的制备颗粒性抗原：各种细胞.细菌.寄生虫。
1.细胞抗原（如绵羊红细胞）一般情况下经生理盐水或其他溶液洗净，配制一定浓度即可。
2.细菌抗原多用液体或固体培养物，经集菌后处理。
颗粒性抗原大多用静脉内注射免疫法，较少加佐剂作皮内注射二.可溶性抗原的制备和纯化（一）可溶性抗原的制备蛋白质.糖蛋白.脂蛋白.酶.补体.细菌毒素.免疫球蛋白片段.核酸等皆为良好的可溶性抗原，免疫前常需提取和纯化。
1.组织细胞抗原的制备细胞破碎方法有：（1）高速组织捣碎机法（2）研磨法，可用组织匀浆器或乳钵2.组织细胞或培养细胞可溶性抗原制备第一步单个细胞获得的方法（1）机械捣碎（2）酶处理法，常用胃蛋白酶或胰酶第二步细胞破碎方法有：（1）反复冻融法：一般—20℃反复冻融。
（2）超声破碎法：利用超声波机械振动原理使细胞破碎。
（3）自溶法：利用组织.细菌自身酶系统使之裂解。
（4）酶处理法，常用溶菌酶.蜗牛酶.纤维素酶（5）表面活性剂处理法：常用二烷基硫酸钠等表面活性剂处理。
3.免疫球蛋白片段的制备五种免疫球蛋白都具抗原性，皆可提取及纯化，但如分解成片段（如Fab片段.Fc片段.轻链片段等）作为免疫原可制备出分辨力更高的特异性抗血清（1）非共价键解离法：温和条件下离析亚单位，如改变pH；用盐酸胍或脲等强变性剂将亚单位分开。
（2）共价键解离法：用还原法或氧化法解离二硫键。
（3）溴化氰裂解法：用溴化氰裂解蛋白质肽链。
（4）酶解法1）木瓜酶可将IgG裂解成2个Fab片段及1个Fc片段2）胃蛋白酶可将IgG裂解成F（ab’）2片段及数个小片段3）胰蛋白酶可将IgG切成不规则的肽链（二）可溶性抗原的纯化1.超速离心法仅适用于少数大分子抗原及一些比重较轻的抗原，而不适用于大多数中小分子抗原。
临床检验技师-临床免疫学和免疫检验(2019)讲义第三章免疫原和抗血清的制备
第三章免疫原和抗血清的制备第一节免疫原的制备免疫原指能诱导机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
一、颗粒性抗原的制备细胞、细菌、寄生虫等皆为颗粒性抗原。
细胞抗原（如绵羊红细胞）一般情况下经生理盐水或其他溶液洗净，配制一定浓度即可。
细菌抗原多用液体或固体培养物，经集菌后处理。
颗粒性抗原大多用静脉内注射免疫法。
二、可溶性抗原的制备和纯化（一）组织和可溶性抗原的粗提蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆为良好的可溶性抗原。
1组.织匀浆的制备（1）高速组织捣碎机法；（2）研磨法：组织匀浆液要离心沉淀，沉淀物为组织和细胞碎片，上清液为提取可溶性抗原的材料。
2细.胞的破碎（）反复冻融法：℃冷冻，〜7融化。
（2）超声破碎法（3）自溶法（4）酶处理法：胃蛋白酶或胰酶。
（5）表面活性剂处理法：十二烷基硫酸钠。
3免.疫球蛋白片段的制备（）非共价键解离法：改变环境或用变性剂。
（2）共价键解离法：还原法或氧化法解离二硫键。
（3）溴化氰裂解法：溴化氰裂解蛋白质肽链。
（4）酶解法：木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或胰蛋白酶。
（二）可溶性抗原的提纯和纯化超速离心法：适用于少数大分子抗原或比重较轻的抗原，不适用于大多数中小分子抗原。
选择性沉淀法：（1）核酸去除法：核糖核酸降解法更简便。
（2）盐析法：常采用硫酸铵使蛋白抗原进行粗筛、提取丙种球蛋白及抗原浓缩。
（3）有机溶剂沉淀法：常采用乙醇或丙酮。
（）聚合物沉淀法：常用非离子型聚合物，如聚乙二醇（）G凝胶过滤法：根据分子大小进行分离纯化。
离子交换层析法：利用一些带电离子基团的凝胶或纤维素，吸附带有相反电荷的蛋白质抗原。
5亲.和层析法：与生物分子间不同的亲和性进行分离。
如抗原和抗体、酶和酶抑制物、酶蛋白和辅酶、激素和受体等。
电泳法：蛋白质在同一环境中，分子量和电荷不同，在电场中迁移速率不同进行分离。
（三）纯化抗原的鉴定蛋白质含量测定：常用的是紫外光吸收法，该法测定和的吸光度（）值。
《临床免疫学检验》教学大纲
《临床免疫学检验》教学大纲课程类别：专业核心课程课程性质：必修英文名称：Clinical immunology examinations总学时：96 讲授学时：48 实验学时：48学分：4.5先修课程：仪器分析、人体解剖学、组织学与胚胎学、生理学、细胞生物学、病理学、病理生理学、药理学、生物化学、医学免疫学、病原生物学、医学遗传学、分子生物学、临床生物化学检验。
适用专业：医学检验技术开课单位：医学院一、课程简介临床免疫学检验是研究免疫系统功能异常与相应疾病发病机制及其诊断和防治措施的科学。
通过学习本课程，使学生获得免疫功能异常所致的病理过程及其机制以及免疫学理论和技术在疾病预防、诊断和治疗中的应用等方面的基本知识。
同时结合教学实践，培养学生分析问题和解决问题的能力以及严谨的科学作风。
二、教学内容及基本要求第一章临床免疫学与检验概论（1学时）教学内容：1.1 免疫学技术概论1.2 临床免疫性疾病及检验概论教学要求：1.了解免疫学技术在医学中地位和应用；了解免疫学技术的发展简史。
2.了解临床免疫学及其检验在医学中的作用。
授课方式：讲授第二章抗原抗体反应（1学时）教学内容：2.1 抗原抗体反应的原理2.2 抗原抗体反应的特点2.3 影响抗原抗体反应的因素2.4 免疫学检测技术的类型教学要求：1.掌握抗原抗体反应的原理。
2.掌握抗原抗体反应的特点。
3.掌握影响抗原抗体反应的因素。
4.掌握免疫学检测技术的类型。
授课方式：讲授第三章免疫原和抗体的制备（2学时）教学内容：3.1 免疫原的制备3.2 免疫血清的制备3.3 单克隆抗体的制备3.4 基因工程抗体的制备教学要求：1.掌握颗粒性抗原的制备和半抗原的制备；了解可溶性抗原的制备。
2.掌握免疫血清的制备。
3.掌握单克隆抗体的概念；掌握B细胞杂交瘤技术的基本原理。
4.掌握基因工程抗体的概念；了解基因工程抗体的制备。
授课方式：讲授第四章凝集反应（2学时）教学内容：4.1直接凝集反应4.2间接凝集反应4.3抗球蛋白试验教学要求：1.掌握直接凝集反应的原理和应用。
2024年主管检验技师考试临床免疫学和免疫检验讲义第三章免疫原和抗血清的制备
1.免疫原的定义和分类2.免疫原的制备方法(1)分离纯化法：通过分离、提取和纯化病原体或其他免疫原物质，得到纯净的免疫原。
(2)生物合成法：通过重组DNA技术或合成化学方法，产生具有免疫原性的物质。
(3)化学修饰法：通过对免疫原物质进行化学修饰，使其具有较强的免疫原性。
(4)特异抗原表达法：将目标抗原的基因导入表达宿主中，使宿主细胞内产生该抗原，并通过表达产物进行免疫。
3.抗血清的制备方法(1)动物免疫法：将免疫原注射给动物，刺激其产生抗体，收集动物体内的抗体血清作为抗血清。
(2)体外免疫法：将免疫原与体外培养的淋巴细胞或骨髓细胞等进行细胞融合，产生混合细胞瘤细胞，该细胞具有免疫能力，可大量产生抗体。
(3)重组技术法：通过将重组DNA导入真核细胞，使细胞表达抗原表位，收集细胞培养上清液得到抗血清。
4.抗血清的性质与应用(1)抗血清的性质：抗血清含有一种或多种单克隆抗体或多克隆抗体，具有特定性和亚型特异性。
(2)抗血清的应用：抗血清可用于免疫组化检测、免疫印迹、免疫染色、酶联免疫吸附分析、流式细胞术等临床检验技术中。
同时，抗血清还可以用于治疗疾病、研究疾病发生机制以及制备诊断试剂等。
5.免疫原和抗血清的质量控制(1)免疫原的质量控制：免疫原的质量控制应包括其纯度、活性、稳定性和安全性等方面的检验。
(2)抗血清的质量控制：抗血清的质量控制包括对其纯度、特异性、活性、稳定性等方面的检验，同时还需进行反应特异性和特异性等的检测。
6.免疫原和抗血清的保存和保管(1)免疫原的保存：免疫原需要在低温和干燥的条件下保存，以保持其稳定性和活性。
(2)抗血清的保管：抗血清需储存在冷库中，以确保其长期保存时不发生抗体失活和细菌污染，同时还需注意避免光照和震荡等不良影响。
本章介绍了免疫原和抗血清的制备方法、性质与应用，以及质量控制与保存保管的要点。
了解免疫原和抗血清的制备与使用对临床检验工作具有重要意义，有助于提高免疫学和免疫检验技术的应用水平。
临床检验技师临床免疫学和免疫检验免疫原和抗血清的制备练习题
临床检验技师临床免疫学和免疫检验免疫原和抗血清的
制备练习题
一、问答题（每题10分，共计50分）
1.什么是免疫原？如何制备免疫原？
2.什么是抗血清？如何制备抗血清？
3.免疫原与抗血清的制备有哪些常见问题？如何防止和解决这些问题？
4.请简要介绍多克隆抗体的制备方法。
5.在实验室中，为了免疫原和抗血清的保存和贮存，有哪些注意事项？
二、案例分析题（每题20分，共计40分）
1.研究人员希望制备一种特异性抗体来检测乙型肝炎病毒（HBV）感染。
请设计一个实验方案，包括免疫原的制备和抗血清的制备步骤。
2.实验室需要制备一种可用于检测甲型流感病毒（IAV）的特异性抗体。
请设计一个实验方案，包括免疫原的制备和抗血清的制备步骤。
三、综合分析题（40分）
近年来，随着免疫学和免疫检验技术的不断发展，越来越多的免疫治
疗方法被应用于临床。
请结合你的学习和实践经验，分析免疫原和抗血清
的制备对于免疫治疗的重要性，并提出你的观点和建议。
写作要求：
1.文档需要包含以上所有问题的答案，并按照每个问题给出相应的分值。
2.对于每个问题，要提供详细的解释和相关实例，确保文档内容完整。
3.综合分析题需要具备一定的学术深度和逻辑性，可以引用相关研究
和资料支持观点和建议。
4.文档字数要求不少于1500字，结构清晰，语言准确，无语法和拼
写错误。
第三章免疫原和抗血清的制备-临床免疫学检验教案
临床免疫学检验教案
第次课授课时间：2007.9-12
第一节免疫原的制备
一、颗粒性抗原的制备
二、可溶性抗原的制备和纯化
三、半抗原性免疫原的制备
第二节免疫佐剂
一、佐剂的种类
二、佐剂的作用机制
第三节抗血清的制备
一、免疫动物的选择
二、免疫程序
三、动物采血法
第四节抗血清的鉴定和保存
一、抗血清的鉴定
二、抗血清的保存
第五节抗血清的纯化
一、特异性IgG抗体
二、单价特异性抗血清
简图简
表示意
图设问
讨论
讲解免疫原的制备20 min
讲解免疫佐剂20 min
讲解抗血清的制备20 min
讲解抗血清的鉴定和保存20 min
讲解抗血清的纯化20 min
免疫原(immunogen)是能诱导机体产生抗体并能与抗体发生反应的物质颗粒性
抗原-细胞、细菌、寄生虫可溶性抗原一
蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、核酸
免疫佐剂(immunoadjuvant):预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗
原的免疫应答或改变免疫应答的类型的物
质称为免疫佐剂，简称佐剂
(adjuvant )。
临床检验技师-临床免疫学和免疫检验讲义第三章免疫原和抗血清的制备
临床检验技师-临床免疫学和免疫检验讲义第三章免疫原和抗血清的制备1.免疫原的制备免疫原是诱导免疫反应的物质，常用的免疫原有细菌、病毒、细胞组分、蛋白质等。
免疫原的制备需要经过以下几个步骤：(1)选择合适的免疫原：根据实验目的选择合适的免疫原，使其能够诱导出所需的免疫反应。
(2)免疫原的提取和纯化：根据免疫原的性质选择合适的提取和纯化方法，常见的方法有渗透法、离心法、电泳法等。
(3)免疫原的灭活：对一些病原体免疫原进行灭活，以避免使用活病原体引起感染。
(4)免疫原的标记：为了方便检测免疫原是否存在或定量测定其浓度，常常需要对免疫原进行标记，常见的标记方法有荧光标记、酶标记等。
抗血清是由动物接种免疫原后产生的抗体混合物，用于检测和分离相应的抗原。
抗血清的制备需要经过以下几个步骤：(1)动物的选择和免疫程序的制定：根据实验目的选择合适的动物种类和免疫程序，并对免疫程序进行优化。
(2)免疫原的接种：将免疫原注射到动物体内，激发其免疫系统产生抗体。
(3)血清的采集：在免疫原接种后一定时间内采集动物的血清，其中含有抗体。
(4)抗体的纯化和储存：从血清中提取抗体，常见的方法有硫酸铵沉淀、蛋白A/G纯化等。
提取的抗体要进行储存，常用的储存方法有冷冻保存、低温干燥等。
3.免疫原和抗血清的应用免疫原和抗血清在临床免疫学和免疫检验中有广泛的应用。
其中包括：(1)免疫学研究：利用免疫原和抗血清可以研究机体对抗原的免疫反应过程，探索免疫机制和疾病的发生发展规律。
(2)临床诊断：利用抗血清可以检测人体液中的抗原，从而判断是否感染其中一种病原体或患有其中一种疾病。
(3)药物研发和药物监测：利用免疫原和抗血清可以筛选药物靶点，研发新药或进行药物治疗监测。
(4)食品安全监测：利用抗血清可以检测食品中的有害物质或致病微生物，确保食品安全。
总结：免疫原和抗血清的制备是临床检验技师在开展免疫学和免疫检验工作中的基础性工作之一、免疫原的制备需要选择合适的免疫原、提取纯化并标记，而抗血清的制备需要选择合适的动物、制定免疫程序并采集血清，然后对抗体进行纯化和储存。
第3章免疫原和抗血清的制备
二、免疫程序
免疫原的剂量
中间剂量范围内，免疫原剂量增加可获得高效价抗体 特异性要求高，应小量短程，可溶性抗原加用佐剂。对效价 要求高，则可大量长程加佐剂。
免疫间隔时间
第一次和第二次间隔10～20天，三次及以后间隔7～10天
免疫途径
皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结
一、特异性IgG抗体
盐析法：硫酸铵盐析法、硫酸钠盐析法 凝胶过滤法：常结合盐析法 离子交换层析法：DEAE纤维素、QAE-sephadex、QAE纤维 素 亲和层析法：纯化抗原或SPA交联Sepharose 4B制成亲和层 析柱
二、单价特异性抗血清
亲和层析法：杂抗原交联Sepharose 4B柱 吸附剂方法：借助双功能试剂用不含特异抗原的抗
使包膜的渗透压改变而溶解。
优点是: 作用温和 适用于:破碎细菌、破碎细胞（提取核酸)
3、免疫球蛋白片段的制备： 非共价键解离法－改变pH 、利用强变 性剂 共价键解离法－氧化法和还原法 溴化氰裂解法 酶解法－木瓜酶 、胃蛋白酶
IgG片段的制备
1.酶裂解法：
IgG
木瓜酶
Fc+2Fab
Fc段可用于制备抗重链血清。
透析除去未反应
的半抗原
得人工免疫原 （半抗原+载体）
2.戊二醛法：
半抗 原氨 基
N-CH-(CH2)3-CH-N
载体 氨基
第二节 免疫佐剂
免疫佐剂（immunoadjuvant）：预先或与 抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原 的免疫应答或改变免疫应答的类型的物质 称为免疫佐剂,简称佐剂（adjuvant）。
小结
免疫原是诱导机体产生抗体并能与抗体发生反应的 物质。半抗原是指仅有抗原性而无免疫原性的物质， 与载体结合后可具有免疫原性。