美国山核桃的组织培养
如何种植美国山核桃
怎么种植美国山核桃一、育苗建园l、育苗：美国山核桃的育苗用实生、嫁接、扦插和压条均可，但现在多以实生繁殖为主，而优良品种则必须用嫁接繁殖。
实生繁殖，应选适宜当地气候环境的优良品种的果实做种，种果要充分成熟，发育充实饱满，采收后连种壳一起播入苗床，用其在湿润土壤中完成后熟和解除休眠，次春即可出苗。
春播必须在播种前100天用湿砂层积，待种壳开裂时播种。
苗床的整理与育其他果苗相同。
宜用条播，播种沟深7一10cm，行距30cm，株距5cm。
播时种子的缝合线与地面垂直，不能平放，也不能种尖朝下或朝上，以利胚根朝下和胚芽朝上生长，覆土厚6-7cm，土上再盖6-8cm厚稻草或杂草、松毛，浇透底水，经常保持湿润。
如有条件，畦上再盖塑料小拱棚，可提高土壤保湿能力、空气湿度和土温，有利用促进提早出苗和出苗整齐。
出苗后应覆黑色遮阳网遮阴，并做好浇水、追肥、防治病虫等管理。
一般两年即可出圃定植。
嫁接苗除比实生苗提早6-7年结果外，还可保持母本的优良性状，但嫁接的成活率低，一般只有20％左右，至今还没有攻破这个难关。
砧木用本砧或小果种，砧木苗的培育与实生苗相同。
嫁接方法，春天用劈接或切接，夏秋用T字芽接和贴芽。
2、建园：根据美国山核桃对外界环境条件的要求选择最适宜的地区建园，不在不适宜和次适宜地区种植。
栽植时期，从10月至次年3月均可，但以10月中旬至11月底的秋末冬初最佳。
栽植密度，平地7m×8m，缓坡地6．5m×7．5m，斜坡地6m×7m，陡坡地5．5m×6．5m，因是雌雄同株异花和雌雄异熟，白花授粉结实率低，所以栽植时应配置适宜的授粉树；因花粉轻，随风可传播900m，所以授粉树可为主栽树1：10的比例，用中心式配置。
栽时要塘大肥足，苗壮根好，深度适宜；栽后要做好看护和保湿。
二、种植管理1、土肥管理：美国山核桃喜疏松肥沃有机质多的砂质壤土和砾质壤土，幼树期树体小，行间宽，空地多，土壤管理宜用合理问作来抑制杂草，改良土壤，防止水土流失，增加早期收入；大树宜用免耕加覆盖。
美国山核桃栽培技术
时 去 除树 上 部 枯死 枝 ， 便培 养 健 壮 枝 复萌 新 枝 ， 以
复 壮 树 势 和 延 长 结果 年 限 。 同 时还 应 注 意 松 土 施 肥 ，让 根 系 也 得 以 同 时 复 壮 。
５． ２ 灌水施 肥
１ 实 生 苗培 育
选 粒 大 ，饱 满 ，无 病 虫 害 的 坚 果 作 为 种 子 ，
墨 西 哥 北 部 ， 由于广 泛 引种 ， 现 巳 分 布 世 界 各 地 适 生 区 ， 年 产量 达 ｌ ５ ８）－ 吨 。 我 国 引 种 美 国 山 核 桃 巳
木 和 优 良品种 的 芽 条 进 行 嫁 接 。 一 般 可 采 用 劈 接 或 切 接 。 接 后 ２ ａ左 右 捡 查 成 活 情 况 ，巳 接 活 的 ０ 要 及 时 解 绑 ，未 成 活 的 要 适 时 补 接 。 然 后 在 约 ｌ ａ
２２８ ３ ｈ，年 降 水 量 为 ５ 【 ６ ０ ｍ ， 气 湿 度 ０） 一１ ０ ｍ 空ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
％ 以 上 。
期 要 适 当 疏 缩 大 枝 ，以 免 树 冠 下 部 荫 蔽 ， 光 不 透 足 和 结 果 部 位 上 升 或 外 移 。进 入 衰 老 期后 还 应 适
现 将 美 国 山核 桃 栽培 技 术 简介 如 下 ：
纺 锤形 为 主 。 幼 树 期 修 剪 宜 轻 ，全 树 需 留 ｌ —１ ２ ５个 主 枝 ， 并 用 撑 ，拉 ， 等 方 法 开 张 主 枝 角 度 。 进 入 盛 果 拽
布 干 土 壤 表 层 ４ －８ ｃ 之 间 ；宜 生 区 的 年 积 温 ０ ０ｍ 在 ３ ０ －５ ０ Ｃ ，无 霜 期 ２ ０ ２ ０ 年 日 ０ ０Ｃ ｏ ４ ０＂ ２ － ８ ａ，
美国山核桃组织培养研究
美国山核桃组织培养研究作者：张文学印迈续晨贲爱玲蔡小宁来源：《安徽农学通报》2019年第11期摘; 要：以美国薄壳山核桃嫩茎为外植体，研究了硝态氮和不同外源激素组合对其芽诱导和生长的影响。
结果表明，硝态氮为美国薄壳山核桃组织培养所必需的，较高含量的细胞分裂素有利于芽的诱导和生长，硝态氮和细胞分裂素BA可增加愈伤组织的数量;适合的芽诱导培养基配方为1/2 B5+NAA 0.1mg/L+BA 2.0mg/L。
关键词：美国山核桃;组织培养;基本培养基;硝态氮中图分类号; S79 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2019）11-0022-2美国山核桃（Carya illinoensis），又名薄壳山核桃、美国薄壳山核桃、碧根果，其果实是一种老少咸宜的坚果食品，深受消费者的欢迎;因其木质坚硬，在家具制作和军工等方面也有一定的应用。
开展组织培养技术的研究，可以加快繁殖，更快地推广应用，同时也可以为育种研究提供新的途径。
当前，国内外有一些对美国山核桃组织培养的报道[1-4]，但仍然存在诸多问题，需要从更多方面开展研究。
为此，笔者开展了基本培养基的硝态氮和外源生长素、细胞分裂素组合对美国薄壳山核桃芽的诱导和生长的影响研究。
1 材料与方法1.1 材料美国薄壳山核桃嫩茎。
1.2 培育种子苗选取大小相对一致的碧根果种子，用37℃自来水浸泡7d左右。
待种壳裂开移至沙盆，在28℃恒温培养箱中催芽，在较湿润的条件下培养14d左右，待裂口处伸出白色小芽，然后在装有田间土壤的花盆里播种，3～4d左右小芽出土。
1.3 消毒灭菌从野外大树上摘取嫩枝，修剪至适当大小后放进烧杯，在自来水下冲洗干净，备用。
消毒时先用70%的酒精浸泡20s，倒掉酒精，立即加入灭菌剂。
共设置4个处理，分别为：0.1%升汞灭菌5min;0.1%升汞灭菌10min;0.1%升汞灭菌15min;84消毒液灭菌10min。
灭菌时间到了后，倒掉灭菌剂，用无菌水冲洗4次，接种于改良WPM添加BA0.5mg/L的培养基上，置25℃，光照时间12h，黑暗时间12h周期下培养。
美国山核桃育苗技术
挖 入 沟 底 与 土 壤 拌 均 。 已拌 混 入 土 的 播 种 沟 里 按 株 距 在 １ ～ ５ｃ 点播 种子 ， 种 时 ， 核桃 种 子 的缝 合线 与 地面 垂 ０ １ ｍ 播 以
３３ 播 种 量 ．
一
般 核桃 种 子 的播 种量 为 １ ． 粒／ｍ ， 粒 种子 （６ ６５万 ｈ 大 ６
苗 圃地选 择 是 育 苗成 败 的基 础 。 选 择 不 当 ， 影 响 苗 若 会
木 的产 量和 质 量 ， 长 出圃 期 ， 加 成 本 。 桃 属温 带 树 种 ， 延 增 核
直 ， 尖 向 一 侧 为 好 ， 子 不 宜 向 上 或 向 下 ， 便 于 种 子 的 种 种 以
的愈合 环境 ｆ 定植 后 ， 过精 心 的管理 ， 接成 活 率达 ４ ％～ ” 。 通 嫁 ０ ６ ％。 将 其栽培 技 术 介绍如 下 。 ０ 现
１ 选 地
胚 根 和胚 芽发 育成 直 立型 顺 利生长 。
在封 闭性 较 好 的室 内靠墙 壁 网 周安 置特 制 的 ４张 双 层 结构木架床作温床 ， 也可 用 ８张 普 通单 木制 床 上下 重 叠 安
此， 不能 在 低 洼 易 涝 处 建 圃 育 苗 。 圃 地 需 有 良 好 的排 灌 苗 条件 ， 求为地 势平 坦 、 照 足 、 要 光 水源 条 件好 的背风 地 。
４２ 接 穗 采 集 及 贮 藏 ．
核 桃 幼 苗 的主 根很 深 ， 耕 有 利 于幼 苗根 系 的生 长 。 深 秋
多须根薄壳山核桃容器育苗栽培技术
多须根薄壳山核桃容器育苗栽培技术多须根薄壳山核桃容器育苗栽培技术薄壳山核桃又名美国山核桃、长山核桃，为胡桃科山核桃属的坚果类经济树种，落叶乔木，是世界著名的木本油料树种之一，原产于美国中南部和墨西哥北部，现以美国为中心产区。
薄壳山核桃在我国引种已有百年历史，表现良好，可大面积引种作经济林，出仁率高达50％-60％，壳薄易取仁，营养价值丰富，具有广阔的市场前景。
但是，由于薄壳山核桃其特有的生态习性，不仅使其自然分布有很大的局限性，而且育苗也存在着出苗差、生长慢、保存低等诸多问题。
目前，薄壳山核桃良种育苗首先要以种子培育实生砧木，再进行良种嫁接繁殖，由于实生苗的直根性及侧根再生较难，造成移栽后成活率较低、缓苗期长。
因此，如何培育根系结构良好，侧根系发达的良种苗木是薄壳山核桃推广过程中的重要技术环节。
针对现有技术中存在的上述问题，提出了一种根系结构良好、须根系发达、移栽后成活率高、没有缓苗期的薄壳山核桃容器育苗栽培技术。
薄壳山核桃容器根苗主要包括播籽、培育、移植和嫁接；1.移植为将培育得到的苗进行断根处理，并移植到容器中培育，容器中的育苗介质包括泥土、覆盖材料和有机肥，所述泥土、覆盖材料和有机肥的体积比为( 5-10 ):(1-3 ):1。
2.培育得到的未经移植的实生苗以主根为主，侧根极少，断根处理是指保留15-20厘米的主根，并移植至容器中培育，目的就是促进侧根的大量生长，提高上山造林的成活率。
而且，本发明容器中含有泥土、覆盖材料和有机肥按比例混合而成的培育介质，可促进移植后苗的根系的生长，使苗的根系发达，侧根众多，可在容器内形成根团，使苗长势旺盛，上山造林时可带容器直接种植，故造林成活率大幅度提升，且无缓苗期，种下后可继续直接生长，可提前1-2年进入盛产期。
3.薄壳山核桃容器富根苗的培育方法中，所述泥土、覆盖材料和有机肥的体积比为7:2:1。
4.覆盖材料为木屑、松鳞、陶粒、卵石、粗砂中的一种或多种。
美国山核桃高效栽培技术，碧根果的种植技术
美国山核桃高效栽培技术，碧根果的种植技术美国山核桃也称为美国薄壳山核桃、长山核桃等，是胡桃科山核桃属植物，美国山核桃的果实就是我们俗称的碧根果、长寿果，是市场上非常受欢迎的坚果之一。
美国山核桃不仅可以长出美味营养的果实，而且树木也是上等的木材，因为形状漂亮，也可以做为环境绿化的行道树，综合价值非常的高。
现农村致富网的编辑将美国山核桃高效栽培技术介绍如下：1、育苗美国美国山核桃种苗的培育有实生、根繁和嫁接三种方式。
实生苗和根繁苗可直接用于营造材用林和城镇园林绿化。
营建美国山核桃果园，则必须采用良种嫁接苗。
然而，嫁接育苗所用的砧木，仍应采用本砧即美国山核桃实生苗或根繁苗。
目前国内美国山核桃坚果（种子）数量少，不能满足育苗需求，采用种根繁育（根繁）则是一种好办法。
与实生苗相比，根繁苗不但苗木健壮，而且侧根系发达，移栽成活率高。
播种用的美国美国山核桃种子要求充分成熟。
播种前最好做冷藏层积或坑埋层积处理。
层积温度2℃～3℃，时间60～90天。
育苗播种密度一般为行距50厘米（农村致富网：）、株距30厘米，每亩4500株左右。
播种深度5～7厘米。
北方播种期为4月5～10日，南方可适当提前。
美国美国山核桃根繁育苗用种根宜选用1～5年生幼树的根，成活率非常高（据报道可达90%以上）；8～10年生树的根成活率较低。
种根埋播时间可在初冬或早春进行。
种根长度通常为10～15厘米（粗根可短些，细根应长些）。
每亩圃地约需种根4500条。
在整好的圃地中开沟，沟距50厘米左右，沟深10～15厘米。
将种根呈45度斜放在沟中（注意上、下端不要倒置），根与根之间的距离15厘米左右。
覆土后，根上端距地面为2～3厘米。
种根埋好后，用植物秸秆覆盖，并及时浇一次透水。
其他管理措施与播种育苗相同。
果用美国山核桃嫁接苗地下部分2～3年，地上部分1～2年，育苗周期3～5年。
绿化用美国山核桃树，可采用实生育苗。
当以收获坚果为主要目的时，必须采用良种嫁接苗。
美国薄壳山核桃
国家职业资格全国统一鉴定营林试验工技师论文（国这职业资格二级）论文题目：美国薄壳山核桃栽培技术姓名：身份证号：准考证号：所在省市：所在单位：美国薄壳山核桃栽培技术摘要：美国薄壳山核桃（Carya illinoinensis Koch.），简称薄壳山核桃，又名美国长山核桃，为胡桃科山核桃属落叶乔木。
薄壳山核桃不仅能生产美味营养的坚果，还能生产上等木材，同时又可用作绿化美化的行道树，是一种综合价值很高的优良树种。
本文介绍了薄壳山核桃的形态特征与生物学特性，从种子的采收和贮藏、育苗、植树造林、抚育管理、病虫害防治等方面介绍了山核桃的栽培技术，以为其优质栽培提供参考。
关键词：山核桃生物学特性栽培技术一、美国薄壳山核桃概述薄壳山核桃(Carya illoinensis K.Koch),又称美国薄壳山核桃、长山核桃,是国外引进的果材兼用的优良树种[1]，原产美国南部及墨西哥的北部，是印第安人经营的一种经济林木树种。
坚果壳薄易剥,核仁肥厚,富含脂肪,味香甜,为干果食用及榨油的原料。
薄壳山核桃于1900年引入我国,先后在江苏江阴、南京、浙江杭州、福建莆田等地栽植。
目前引种范围较广,北至北京,南达海南岛都有引种,但以江苏、浙江、福建等地较多。
此外,长沙、南昌、上海、成都等地也有少量栽种[2-3]。
近年来引种地区逐渐增多,目前云南省林业科学院漾濞研究站对美国薄壳山核桃进行了引种，生长良好, 已经收到了良好的经济效益和生态效益。
1形态特征与生物学特性山核桃树属落叶乔木,在原产地树高达50 m,胸径250cm。
树皮灰褐色，纵裂呈片状脱落。
冬芽黄褐色，奇数羽状复叶，互生，小叶11至17片，椭圆状披针形或微弯成镰形,锯齿粗钝。
花期5月,雄葇荑花序三出,下垂,雌花序生于新枝顶端。
10月上旬至11月上旬果熟,核果光滑,长椭圆形,外果皮近木质,裂成4瓣,果核长卵形或长圆形。
山核桃树种寿命长达百年以上,树干通直,生长迅速,材质坚固强韧,纹理致密,富有弹性,不易翘裂,是优良的用材树种。
美国山核桃育苗技术
美国山核桃育苗技术摘要从选地、整地做床、播种育苗、嫁接前准备、嫁接、苗圃地管理、病虫害防治等方面总结美国山核桃育苗技术，以促进美国山核桃的推广栽培。
关键词美国山核桃；嫁接；育苗核桃是经济、营养价值很高的木本油料和用材树种，是山区农村植树造林和开展多种经营的优良树种。
采用温室嫁接育苗进行核桃嫁接，可为砧木与穗条提供稳定和良好的愈合环境[1]。
定植后，通过精心的管理，嫁接成活率达40%~60%。
现将其栽培技术介绍如下。
1选地苗圃地选择是育苗成败的基础。
若选择不当，会影响苗木的产量和质量，延长出圃期，增加成本。
核桃属温带树种，喜光，不耐干旱瘠薄，适生于微酸性土、中性土及弱碱性的钙质土，pH值为5.5~8.0，在盐碱土或排水不良的黏土和地下水位过高的地方不宜生长[2]。
核桃幼苗要求较充足的水分，缺水时生长量很小，但水分过多也不利于苗木生长。
因此，不能在低洼易涝处建圃育苗。
苗圃地需有良好的排灌条件，要求为地势平坦、光照足、水源条件好的背风地。
2整地做床2.1深耕核桃幼苗的主根很深，深耕有利于幼苗根系的生长。
秋耕宜深（20~25 cm），春耕宜浅（15～20 cm）。
2.2做床床道长度依地形而定，多为10~２0 m，长床虽可提高土地利用率，但灌溉不便。
做床分高床、低床2种。
高床适于南方多雨地区，床面一般高于步道沟15~20 cm，宽1 m左右，步道宽50~60 cm。
北方水源缺乏地区适于用低床，床面低于步道沟15~25 cm，宽度1.0~1.5 m，步道宽40 cm。
如果留种越冬、供春播，则需将核桃果实剥离外皮后进行干藏或湿藏，贮藏期间应保持一定的低温（1~10 ℃，以 5 ℃左右为好）、适宜的湿度（空气相对湿度宜在50%~60%）和适当通气（不应过密闭），以利于种子较长时间保存。
3播种育苗3.1播种时间核桃播种分为秋播和春播。
秋播，随采随播，无需进行播前种子处理，宜在土壤结冻前（10月下旬至11月上旬）进行，但操作困难，易受气候及鸟、兽、鼠类危害；春播，宜在3月中下旬进行，平均气温12 ℃左右，有利于苗木健壮生长，提高抗性。
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1 引言美国山核桃(Carya illinoensisK·Koch)又名薄壳山核桃、长山核桃，为胡桃科山核桃属落叶乔木。
原产美国南部和墨西哥北部,树高可达20～70m,其海拔要求在800～1600m;年平均气温15～20℃,冬季平均气温1～10℃;生长季4～10月份降雨量至少5000mm,无霜期250天以上;要求土层深厚(2m以上)潮湿且排水良好,土壤的PH值为5.8～7.0的砂质土和沙壤土以及粘土。
美国山核桃壳薄,仁饱满,并具有特别香润而爽口的食味,是世界上著名的油料干果树种。
美国山核桃于1900年左右引入我国,先后在江苏的江阴、南京,浙江的杭州,福建的莆田等地栽植。
引种范围较广,北到北京,南至海南岛,但以江苏、浙江、福建和安徽等地引种较多。
美国山核桃树形高大,树姿优美,树冠开展,根系发达,少病虫害,生长速度快,是良好的行道树和庭园绿化树种。
7年生树平均胸径为16.95cm,平均冠幅为36.32㎡,10年生树平均胸径为21.67cm,平均冠幅为82.1㎡。
木材坚韧,纹理致密,不易伸缩和翘裂,可作雕刻、家具等用材。
树体寿命长,可达百年以上,盛果期持续时间长,果实采收容易,坚果耐贮藏。
坚果外壳薄而光滑美观,取仁容易,仁肥大,出仁率高达50%以上,仁香略带甜味,口感好。
果仁营养丰富,含油量高,含脂肪高,是高档的营养保健品。
美国山核桃的经济效益高，在试验基地内通过连续几年调查其产量,10年生树产量可达18～40kg,15～25年生树产量可达25～60kg,以市场价60元/kg计算,株产产值可达1080～3600元,以目前按美国山核桃丰产栽培技术规范每667㎡最少栽10株,单产值可达10800～36000元。
若大规模推广后,价格下降为20元/kg,产值也可达10000元/667㎡以上。
美国山核桃壳薄,仁饱满,并具有特别香润而爽口的食味,是世界上著名的油料干果树种。
目前,全球美国山核桃年产量为12万t,其中美国年产量为10万t,年销售量达9万t,每1t约1.7万美元,是干果中价格最高的,但仅能出口约700t。
在我国国内年产量不足10 t,现在只有在北京、上海、广东、浙江一带的大型超市里才见有上市商品,价格非常昂贵。
随着我国人民生活水平的提高,对高档果品的消费需求日益旺盛,加之美国山核桃在我国还是一种比较新颖的商品,今后相当长一段时间内,都会很受人们欢迎,非常畅销,将供不应求。
美国山核桃传统的繁殖方法以播种繁殖为主,播种繁殖的成本比较高，而且实生苗种植15年后才能正常结果,由播种至结果苗龄所需的时间漫长,给栽培者造成很大压力,从而影响了人们栽植山核桃的积极性。
而且实生繁殖不易保持其品种的优良特性。
对于嫁接扦插等无性繁殖虽然进行了多种有益的实践和探讨,但始终未能有效应用于生产。
传统的繁殖方法是采用实生繁殖，由于自然杂交，核桃种子繁殖必然发生变异，而不能保持母本优良性状，使得种性良莠不齐，造成产量低、结果晚、品质差，降低了核桃的经济价值；采用嫁接繁殖，存在繁殖系数低，速度慢，成活率不稳定，受穗条数量限制等不利因素；采用扦插繁殖方法，由于核桃体内存在有大量单宁抑制物质，扦插不易生根。
上述种种不利因素均严重制约核桃生产的迅速发展。
本实验采用组织培养的方法进行无性繁殖，旨在通过无性快繁殖的研究，建立无性快繁技术体系，大量快速培育苗木，利用于生产，促进山核桃的生产发展。
2 材料与方法2.1实验材料实验材料采取中南林业科技大学株洲校区夕阳红花圃的美国山核桃幼树。
2.2化学药品MS培养基母液：大量元素（50ml/L）、微量元素（5ml/L）、铁盐（5ml/L）、有机元素（5ml/L）、蔗糖（40g/L）和琼脂粉（10g/L）.DWK培养基母液：大量元素（50ml/L）、微量元素（5ml/L）、铁盐（5ml/L）、有机元素（5ml/L）、蔗糖（40g/L）和琼脂粉（10g/L）.75%酒精，0.1%升汞，无菌水，蒸馏水,NaOH(1mol/L), NAA（0.5mg/ml）, 2,4-D(1mg/ml),6-BA(1mg/ml).2.3实验仪器电子天平，超净工作台，自动高压灭菌锅，冰箱，恒温培养室，加热器。
2.4实验器皿和工具200ml、100ml三角瓶，培养皿，50ml、5ml量筒，5ml、2ml、1ml移液管烧杯，药匙，牛皮纸，橡皮筋，酒精灯，酒精棉，打火机，剪刀，秒表，镊子，滤纸，解剖刀，签字笔，PH试纸。
2.5实验方法2.5.1外植体材料的选取实验材料采取中南林业科技大学株洲校区夕阳红花圃的美国山核桃幼树，选取叶及茎作为外植体进行组培。
2.5.2外植体清洗与消毒本实验采用同一外植体茎段对灭菌药剂的种类、药剂浓度、处理时间以及处理程序等进行设计并设置了4组不同的灭菌措施。
首先将外植体用洗衣粉饱和溶液上清液精刷一遍,再用流动清水冲洗12 h,用滤纸吸干外植体表面水分后,采用不同方法对外植体进行灭菌处理。
美国山核桃外植体灭菌措施与程序为:第1组：70%酒精浓度浸泡30s，2%次氯酸钠10 min,0.1%升汞浸泡10 min。
第2组：70%酒精浓度浸泡30s，0.1%升汞15min.第3组：70%酒精浓度浸泡30s，0.2%升汞10min。
第4组：70%酒精浓度浸泡30s，0.2%升汞15 min,培养基中加入0.2%活性碳,前1周暗培养。
2.5.3茎、叶同一培养基的组培本实验选用不同外植体叶和茎在同一DKW培养基上进行培养观察，同时在培养基中添加1mlNAA+2ml2、4-D等激素。
2.5.4叶片不同培养基的组培本实验叶片组培所用基本培养基为DKW和MS两种培养基，PH值都为5.8，分别添加不同的激素，其激素配比组合见表1：表1叶片DWK和MS培养基激素组合(ml)Table 1 and leaves DWK MS medium hormones单位:ml、瓶生长素0.5mg/ml DKW MSNAA 1 1 1 12、4-D 2 0 2 06-BA 0 2 0 2 接种瓶数41 31 34 352.5.5茎段不同培养基的组培2.5.5.1本实验同样采用两种培养基：第一种为DKW4ml6-BA+0.5ml NAA+1g KT,为减少褐变，配置DKW+3mgVC，中途转接;第二种培养基MS+4ml6-BA+0.5mlNAA +1ml KT,同样配置MS+ 3mgVC，中途转接。
表2茎段DWK培养基和MS培养基Table 2 stems DWK medium and medium MS单位：ml、瓶生长素0.5mg/ml DKW MS6-BA 4 4NAA 0.5 0.5KT 1 1 接种瓶数37 392.5.5.2为了进一步研究组培效果，同时配置培养基DKW,同时添加4ml6-BA和0.5mlNAA以及2gKT3 结果与分析3.1灭菌措施对外植体灭菌效果的影响由表3可知经过不同的灭菌措施处理的接种材料,其灭菌效果差异明显，其中灭菌效果最好的是第4组,材料无菌率达到95%,其方法是:先将外植体用70%酒精浸30s,再将其用0.2%升汞液浸15min,无菌水冲洗10次后接种;并且在培养基中添加0.2%的活性炭,前1周进行暗培养。
其次是第2组，材料无菌率为68%，其方法是:先将外植体在70%酒精浸30 s，在0.1%升汞里浸泡15min无菌水冲洗10次后接种。
效果最差的为第1组，无菌率只有9%。
表3不同灭菌措施对美国山核桃外植体灭菌效果的影响Table 3 different sterilization measures on the United States Pecan explants effects of sterilization组别接种材料/个无污染材料/个材料无菌率/%第1组22 2 9第2组28 19 68第3组20 7 35第4组20 19 953.2 外植体同一培养基的组培本实验采用最佳的消毒方法，对不同外植体叶和茎在同一DKW培养基上进行组培，观察结果如表4：表4 叶片和茎段组培效果Table 4 leaf and stem tissue culture results外植体叶片茎段接种瓶数41 35第1天 3 0第2天12 2第3天15 5第4天 5 3第5天 1 1剩余瓶数 5 24从表4可以看出茎段的无菌为69.6%，而叶片的无菌率为12.2%，茎段的无菌率明显大于叶片的无菌率，所以选用茎段作为组培的最佳外植体；由于采用同样的消毒的方法但是无菌率相差很大，分析原因为，在切除叶片时使叶片在空气中停留的时间过长，由于要切成正方形，当切完最后一边时，其他三边很容易在这段时间感染；而茎段切口在空气中停留时间较短，所以茎段更容易操作。
3.3叶片不同培养基的组培叶片组培选用不同DKW和MS两种培养基，分别添加不同的激素，PH值都为5.8，其培养结果如表5：表5叶片培养基培养结果Table 5 leaves medium culture培养基DKW+2.4-D+NAA MS+2.4-D+NAA DKW+6-BA+NAA MS+6-BA+NAA 总数量41 34 31 35长菌 3 2 2 2第1天褐化 1 1 0 1长菌7 5 7 6第2天褐化 2 2 1 2长菌15 13 13 14第3天褐化 1 3 1 2长菌 5 4 2 3第4天褐化 1 2 3 3长菌 1 0 0 1第5天褐化 5 2 2 1 剩余数量0 0 0 0由表5中可以看出，叶片在同一培养基不同激素的培养效果不同：在DKW培养基中，添加2、4-D和NAA激素的褐化率为24.4%，而添加6-BA和NAA激素的褐化率为22.6%，相比较在DKW培养基添加6-BA和NAA激素褐化率要低；在MS 培养基中，添加2、4-D和NAA激素的褐化率为29.4%，而添加6-BA和NAA激素的褐化率为25.7%，可以看出在MS培养基上添加6-BA和NAA激素褐化率要低。
由表中可以看出叶片在添加同一种激素的不同培养基培养效果不同：在添加同一激素2、4-D和NAA的DKW培养基中褐化率为24.4%，而在MS培养基的褐化率为29.4%；在添加同一激素6-BA和NAA的DKW培养基中的褐化率为22.6%，而在MS培养基中的褐化率为25.7%；相比较而言，在DKW培养基中的褐化率要低于在MS中的褐化率。
综上所述，可以看出叶片在DKW培养基培养的效果好于在MS培养基中培养，同时添加6-BA和NAA激素的效果要比添加2.4-D和NAA激素的效果好；但是叶片的染菌率比较高，不利于实验的进行，需要更有效的降低叶片组培中的染菌率。
3.4茎段不同培养基的组培3.4.1茎段组培所用培养基为DKW和MS两种，同时添加激素6-BA和NAA并添加活性炭，PH值为5.8，并接种的第3天进行转接，减少褐变，培养效果如表6：表6茎段不同培养基培养效果Table 6 stems of different media training results培养基DKW MS 培养基数量37 40 第1天长菌0 0褐变0 0 第2天长菌0 0褐变7 0 第3天长菌0 2褐变转接培养基转接培养基第4天长菌 5 0褐变0 0 第5天长菌14 9褐变0 7 第6天长菌 1 5褐变0 9 第7天长菌 2 1褐变 3 7 第8天长菌0 0褐变0 0 第9天长菌0 0褐变0 0 第10天长菌0 0褐变 3 0 第11天长菌0 0褐变0 0 第12天长菌0 0褐变0 0 第13天长菌0 0褐变 2 0 剩余数量0 0 从表6中可以看出，茎段的长菌率明显低于叶片的长菌率，为减缓茎段培养基的褐化率，中途进行转接，从上表可以看出，MS培养基的褐化速率明显比DKW培养基的褐化速率快，不能有效的抑制褐化；同时转接后两种培养基的长菌率明显提高，对于转接的技术方法有待提高。